虽然免疫治疗现已成为对抗恶性肿瘤的革命性策略, 但应答率不高, 易产生耐受仍是制约肿瘤免疫治疗临床深入应用的瓶颈。不少研究表明, 免疫抑制型肿瘤微环境和复杂的免疫逃逸机制是影响免疫检查点治疗效果和应答率的重要因素。因此, 逆转肿瘤微环境障碍是提高免疫治疗应答率的关键。在肿瘤微环境中, 胞外腺苷高水平的积累对免疫应答的抑制作用受到人们越来越多的关注。靶向腺苷受体, 尤其是A_2AR亚型, 可能是激活免疫应答、提高免疫治疗效果的有效策略。靶向腺苷-A_2AR通路可以增加免疫浸润, 增强免疫细胞功能, 将对免疫治疗不敏感的“冷肿瘤”部分逆转为“热肿瘤”, 以增强治疗应答率并提高当前免疫治疗的疗效。目前, 有不少的腺苷受体抑制剂已经在临床试验中显示出良好的效果, 特别是与免疫检查点抑制剂、化疗和获得性细胞疗法的药物联用, 有望为肿瘤免疫治疗带来新的突破。本文综述了肿瘤微环境中腺苷积累的方式、腺苷A_2A受体的作用和调控机制、腺苷A_2A受体抑制剂的临床试验进展和用药策略、靶向腺苷A_2A受体的潜在风险及其应用前景。

在氧气充足时, 肿瘤细胞会增加葡萄糖的摄取并将大量丙酮转化为乳酸。这种有氧糖酵解现象被称为Warburg效应(Warburg effect)。而产物乳酸作为癌细胞改造微环境的重要工具, 促进肿瘤侵袭与转移, 并通过诱导和招募免疫抑制相关细胞和分子, 有利于肿瘤发生发展。乳酸通过单羧酸转运蛋白从癌细胞流出并防止胞内酸化, 可抑制T淋巴细胞和NK (natural killer) 细胞的细胞毒活性, 并促进树突细胞(dendritic cells, DCs) 向分泌白介素10的耐受性DCs分化。此外, 通过组蛋白赖氨酸残基的乳酸化修饰, 乳酸可促进巨噬细胞向M2样表型极化, 从而抑制肿瘤微环境内的免疫反应。本综述从乳酸代谢过程、乳酸对免疫细胞的影响等方面系统地阐释了乳酸作为免疫抑制分子的作用。此外, 揭示了组蛋白乳酸化修饰在乳酸调节细胞代谢和功能中发挥的重要作用, 并探索了靶向乳酸代谢过程中的潜在靶点用于癌症治疗的可能性, 最终提出通过抑制糖酵解途径和乳酸生成与转运的相关蛋白的肿瘤免疫联合治疗策略。

色氨酸(tryptophan, Trp) 作为人体必需氨基酸, 生理功能多样, 在肿瘤的代谢过程中具有重要意义。在人体中, 色氨酸主要经犬尿氨酸代谢, 既促进肿瘤细胞固有的恶性特性, 又限制肿瘤免疫, 因此它是癌症免疫治疗的重要药物开发靶点。肿瘤中色氨酸代谢的改变常伴随色氨酸相关酶基因表达的异常, 其中以吲哚胺2, 3-双加氧酶(indoleamine 2, 3-bioxygenase, IDO) 相关基因表达和色氨酸2, 3-双加氧酶(tryptophan 2, 3-dioxygenase, TDO) 相关基因改变最为常见。基于此, IDO抑制剂、TDO抑制剂及联合治疗被应用于大量的临床试验中。本文从色氨酸代谢出发, 阐述肿瘤中犬尿氨酸代谢途径、肿瘤细胞IDO、TDO、犬尿氨酸(kynurenine, KYN) 相关基因的表达调控, 并概述色氨酸相关肿瘤治疗方案的新进展, 为肿瘤治疗方案的进一步探索提供新思路。

液体活检的概念在十多年前被提出后, 很快就扩展到了循环肿瘤细胞(CTC) 领域。CTC作为一种新型的生物标志物, 具有无创、敏感、操作简易等传统影像学检测和活体检测无法比拟的优点, 正成为日渐重要的肿瘤诊疗技术。CTC除了可以提供基因组层面的分析, 还可以由此得到转录组、蛋白组及表观遗传组等层面的信息。相比其他液体活检技术, CTC检测能够提供更为完整的肿瘤遗传信息, 以及展示出更为详细的肿瘤发展轨迹。针对微卫星不稳定型(MSI) 结直肠癌, 免疫疗法的预后最佳。CTC的检测对结直肠癌预后评估、个性化用药与制定免疫治疗方案有着重要的临床应用价值。本综述系统总结了CTC分离方法和在肿瘤中的应用, 影响结直肠癌免疫疗效的预后因素, 以及对如何利用CTC检测表征来制定治疗方案, 动态检测疾病进展、判断预后、评价免疫疗效和精准治疗等展开了讨论和展望。

骨髓微环境亦称骨髓龛, 在造血干细胞维持正常造血功能中发挥关键作用。正常生理条件下, 骨髓多种细胞相互调控、共同维持造血稳态; 特殊病理情况下, 骨髓中的细胞种类、比例、功能发生变化进而促发白血病的发生、发展及耐药。白血病不断恶化不仅由于肿瘤细胞增殖分化异常所致, 同时白血病特有的骨髓微环境诱导细胞间黏附, 引发细胞因子、趋化因子等分泌异常, 促发免疫耐受进而加速疾病进展。本综述重点阐述骨髓微环境中CXC趋化因子配体12/CXC趋化因子受体4等关键促发白血病的信号通路, 关注白血病骨髓微环境所致细胞耐药形成机制, 展望靶向骨髓微环境治疗白血病、提高患者预后和生存的新策略。

越来越多的研究表明, NOD样受体蛋白3 (NOD-like receptor protein 3, NLRP3) 炎性小体已成为炎症反应和保护性免疫的调节因子, 其组装和激活与抗肿瘤免疫的效果密切相关。由于细胞类型和所受刺激的不同, NLRP3炎性小体的激活可诱导免疫细胞处于极化、过度活跃状态或发生焦亡, 释放白细胞介素(interleukin, IL)-1β和IL-18, 导致级联免疫或炎症反应, 其在肿瘤免疫中的作用受到了广泛关注。本综述汇总了NLRP3炎性小体通过诱导肿瘤细胞焦亡、树突状细胞(dendritic cells, DCs) 发生焦亡或过度活跃状态, 以及诱导巨噬细胞发生焦亡和极化, 增强CD8⁺ T细胞介导的抗肿瘤免疫作用的机制。NLRP3炎性小体的激活在肿瘤细胞和免疫细胞中的不同抗肿瘤免疫作用为未来研究提供了新方向, 并且可能影响下一代免疫治疗的发展。

固有免疫是与生俱来的非特异防御体系, 是机体抵御外来病原体入侵的第一道防线。固有免疫在肿瘤免疫应答中扮演重要角色。随着肿瘤免疫的治疗潜力在临床得到证实, 固有免疫细胞在肿瘤免疫应答中的功能及调控机制成为肿瘤免疫研究的热点领域。近年来的研究认识到, 细胞的代谢通路在固有免疫应答中发挥重要的调控作用, 特别是肿瘤微环境独特的代谢重塑的特点, 在赋予免疫细胞更加复杂的代谢特征同时, 也提供了新的治疗机会。本文总结了固有免疫细胞的代谢调控领域的最新进展, 概述了糖、脂、氨基酸、核酸代谢中的关键代谢物调控固有免疫应答的新机制, 特别关注了肿瘤微环境中免疫细胞之间及肿瘤-免疫细胞代谢互动的机制, 旨在加深代谢调控固有免疫应答的机制认识, 为通过干预代谢的免疫治疗策略提供理论依据。

海洋是近年来极具潜力的抗肿瘤新药开发和筛选的重要来源, 每年约有56%的海洋生物活性化合物被发现具有抗肿瘤作用。本文对已发现的在抗肿瘤方面具有治疗作用的海洋来源药物进行了分类归纳, 以肿瘤免疫治疗为主要方向, 首先对免疫系统在癌症发病中的作用简短回顾并探讨了肿瘤免疫治疗当前的困境, 同时总结了海洋药物在其中的主要特点及作用机制。进一步地, 对目前已批准药物以物种来源进行了分组、归纳并概述了其被发现的历史、药物的结构特征、相关的作用通路、临床应用及治疗的特点。最后, 总结了目前海洋药物研究的不足, 展望了新药开发的未来前景及趋势。

巨噬细胞在维持机体稳态过程中起着重要作用。巨噬细胞是肿瘤微环境中最丰富的免疫细胞之一, 通常被称作肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs), 其在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用, 也是肿瘤治疗的重要靶点。研究表明, 通过调控巨噬细胞功能可实现抑制肿瘤生长、转移等, 但其治疗药物往往存在缺乏靶向性、溶解度较差、生物利用度低、不良反应大等问题。本文在介绍巨噬细胞与肿瘤治疗相关背景的基础上, 重点关注纳米药物递送系统在调控巨噬细胞功能增强肿瘤免疫治疗的研究进展。纳米药物递送系统结构丰富、功能多样, 可通过多种途径调控巨噬细胞功能, 提高抗肿瘤治疗效果。本文将分别从靶向清除TAMs、重极化TAMs、促进TAMs吞噬, 以及联合调控TAMs功能等方面, 综述近年来基于纳米药物递送系统的调控策略及典型例子, 同时对这一领域的未来研究方向进行了展望。

胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM) 是最常见的原发性恶性脑肿瘤, 易复发转移, 预后差。放化疗等传统治疗手段对于GBM的疗效不够理想, 近年来, 免疫治疗可使部分GBM患者的生存期延长, 为治疗GBM提供了一种新的选择。对于免疫治疗而言, 靶点的选择至关重要。部分患者的GBM细胞表面异常高表达表皮生长因子受体变异体Ⅲ (epidermal growth factor receptor variant Ⅲ, EGFRvⅢ), 且EGFRvⅢ在正常组织中不表达。EGFRvⅢ在GBM的发生发展中起重要作用, 将其作为包括免疫治疗在内的各项治疗策略的靶点有望提高疗效。目前, 靶向EGFRvⅢ的免疫疗法种类繁多, 包括人源化的单克隆抗体、过继性细胞疗法和治疗性疫苗。本文就靶向EGFRvⅢ的免疫治疗新策略和新方法在GBM治疗的基础研究和临床应用等方面的前沿进展进行综述。

氨基甲酰磷酸合成酶1 (CPS1) 参与尿素循环中的第一步反应, 为细胞嘧啶和精氨酸的合成提供前提分子, 促进肿瘤细胞的增殖与生长。研究发现CPS1在多种肿瘤中高表达, 包括结直肠癌、肺癌等, 且其过表达与肿瘤的不良预后有关。因此, 小分子靶向抑制肿瘤中CPS1的功能, 可能为过表达CPS1的癌症患者提供治疗益处。本研究对CPS1的功能进行体外研究, 发现过表达CPS1能够增强结直肠癌细胞HCT15的迁移能力。此外, 基于CPS1已有的晶体结构联合高通量虚拟筛选方法, 筛选得到8个候选小分子化合物, 经体外抗增殖活性评价, 发现化合物3对结直肠癌HCT15、HCT116细胞系都有较好的抗增殖活性[HCT15的半数抑制浓度(IC₅₀) 为7.69 ± 1.10 μmol‧L^-1, HCT116的IC₅₀为13.53 ± 0.46 μmol‧L^-1], 分子对接和动力学模拟研究表明化合物3能够靶向抑制CPS1活性。通过体外研究发现化合物3能够显著减弱结直肠癌细胞系的迁移能力, 同时还发现化合物3能够阻断结直肠癌细胞的S期进程和诱导凋亡。总而言之, 本研究发现化合物3是靶向CPS1的潜在小分子抑制剂, 为靶向干预小分子治疗药物的开发提供实验依据和理论基础, 以化合物3为母核进一步优化其抗肿瘤活性和治疗潜力, 为CPS1相关肿瘤患者提供广阔的治疗前景。

慢性肾病(chronic kidney disease, CKD) 是一种伴随着多种并发症(心血管疾病、代谢性酸中毒和贫血等) 的进行性疾病, 在人群中有着较高的发病率和死亡率。目前的主要治疗药物包括肾素-血管紧张素-醛固酮通路抑制剂及钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂, 都只能延缓CKD向终末期肾病的进展, 而不能彻底治疗CKD。随着更多在CKD进展中起到关键作用的通路被发现, 新的有前景的治疗方法也有望被研发出来。本文对CKD和其并发症的主要疗法及新兴疗法进行了总结, 以期为CKD新疗法的研发提供支持。

CDKs蛋白是一种细胞周期蛋白依赖性激酶, 它们在控制细胞分裂及转录阶段发挥着重要的作用。其中, CDK9作为一种负责细胞转录延伸阶段的关键调控因子, 驱动着各种恶性肿瘤细胞的发生, 被认为是抗肿瘤药物研发领域的重要靶标。然而, 由于CDK家族蛋白结构的高度保守性及相似性, 导致传统小分子CDK9抑制剂的选择性较差, 存在严重的不良反应而限制了其临床应用。鉴于此, 当前迫切需要一种全新策略来研究CDK9靶点。蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC) 技术是一种新兴的药物研发策略, 通过靶蛋白与泛素连接酶的间接性链接, 特异性地识别靶蛋白并通过降解系统来消除目标蛋白。本文对CDK9蛋白的结构功能、与临床疾病预后不良产生的关系及明星小分子抑制剂进行简要概述, 重点讨论了近几年基于PROTAC技术靶向降解CDK9蛋白的最新研究进展, 并对该靶点蛋白在这一新型技术领域内的发展前景进行了总结和展望, 旨在为该方向的抗肿瘤药物研发提供参考。

在过去的30年里, 越来越多的反义药物获批上市或进入临床, 反义技术凭借其在治疗疾病方面独特的优势和在临床上较强的发展潜力, 已成为新药研究领域的焦点。与传统的化药小分子及大分子蛋白生物药物存在较大差异, 是一种非常独立的药物形式, 起源于用于治疗单基因突变的疾病, 但近期逐渐开始用于常见病的治疗。因此, 基于遗传学的基础合理进行反义药物设计对于疾病的治疗至关重要。本文针对当前反义药物的作用机制、化学修饰、递送策略领域的最新进展进行了阐述, 并对目前存在的瓶颈问题进行了分析, 相信伴随着这些问题的解决, 反义药物的研究可以到达一个新的高度。

SUMOylation是一种重要的蛋白质翻译后修饰。与ubiquitylation类似, SUMOylation是指将小类泛素化修饰物(SUMO) 蛋白特异性地共价连接到底物蛋白中的赖氨酸残基上的过程。SUMOylation通过调节底物蛋白的生物活性来调节细胞的生理功能及病理过程, 在多种肿瘤的发生和发展中异常活化。因此, 靶向SUMOylation已成为抗肿瘤药物研发的重要策略。本文总结了近年来靶向SUMOylation通路的小分子抑制剂研究的最新进展及其独特的抗肿瘤机制, 其中包括SUMO活化酶E1 (SAE) 抑制剂、SUMO结合酶E2 (UBC12) 抑制剂及SUMO1降解剂。

随着稳定同位素示踪代谢组学技术的广泛应用, 对数据的全面分析和深入挖掘显得尤为重要, 代谢流分析是主要的技术手段之一, 特别是在葡萄糖代谢研究中受到高度关注。代谢流分析技术将同位素示踪与数学模型结合, 推导计算出代谢物间的代谢通量, 为研究提供了更多的信息, 更清晰、具体地反映了一个动态的代谢过程。本文对代谢流分析在葡萄糖代谢研究中的基本流程、注意事项、应用实例等进行综述, 为基于稳定同位素示踪代谢组学的代谢流分析技术研究葡萄糖代谢提供科学依据。

比较奥拉西坦及其手性异构体对神经损伤和动物记忆障碍模型的药效。体外利用谷氨酸和钙离子建立原代神经元损伤模型, 评价奥拉西坦异构体对原代神经元的保护作用。体内利用手术结扎大鼠的双侧颈总动脉, 分为假手术组、模型组、加兰他敏3 mg‧kg^-1组、消旋奥拉西坦(30、100和200 mg‧kg^-1)、左旋奥拉西坦(30、100和200 mg‧kg^-1) 和右旋奥拉西坦200 mg‧kg^-1组。本研究中的动物实验是按照北京协和医学院福利伦理审查委员会的伦理指导方针进行的。利用跳台和Morris水迷宫实验评价奥拉西坦异构体对大鼠脑低灌注诱导的认知功能障碍的改善作用。研究结果显示, 左旋、右旋和消旋奥拉西坦对不同诱导剂所致的原代神经元损伤均有一定的保护作用, 其中左旋和消旋体的作用较强。在双侧颈总动脉结扎诱导的痴呆大鼠模型上, 左旋、消旋和右旋奥拉西坦均显示改善脑低灌注诱导的大鼠学习和记忆缺失。综上所述, 奥拉西坦对原代神经元损伤及动物痴呆模型均有一定的治疗作用, 左旋奥拉西坦效果最明显。

二黄祛脂方是袁今奇等老中医在长期临床实践中总结出的“护肝抑毒系列方”之一, 治疗非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD) 颇有成效, 但其作用机制尚不明确。本研究探讨了二黄祛脂颗粒(Erhuang quzhi granules, EQG) 治疗NAFLD的作用机制。动物福利和实验过程均遵循石河子大学第一附属医院动物伦理委员会的规定。通过蛋氨酸胆碱缺乏饲料(methionine and choline deficient diet, MCDD) 饮食诱导5周建立NAFLD小鼠模型, 治疗组喂养MCDD的同时分别灌胃给予EQG (16.25 g·kg^-1·d^-1)、阿托伐他汀(atorvastatin, ATO, 7.20 mg·kg^-1·d^-1)。考察EQG对NAFLD小鼠相关血清生化指标、肝脏病理变化和炎症因子的影响, 并应用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR, qPCR) 法、免疫组织化学(immunocytochemistry, ICH) 法和Western blot法检测肝组织核因子-κB/Nod样受体蛋白3 (nuclear factor kappa B/Nod-like receptor protein 3, NF-κB/NLRP3) 信号通路相关mRNA和蛋白的水平。结果显示, EQG显著降低小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase, ALT) 含量, 提高低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C) 水平。苏木素-伊红染色结果表明EQG减轻小鼠肝脏的脂质沉积。此外, EQG显著降低小鼠肝组织中白介素(interleukin, IL)-1β、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 的含量和NF-κB、NLRP3、IL-1β、TNF-α的mRNA水平, 下调F4/80、IκB激酶β (IκB kinase β, IKKβ)、NLRP3、含有CARD且与凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC) 的表达, 抑制NF-κB和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 (cysteinyl aspartate specific proteinase-1, caspase-1) 蛋白的活化。以上研究揭示了EQG治疗NAFLD的作用机制可能与其抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关, 这为EQG在临床上的进一步开发与利用提供了理论依据。

本研究探讨了隐丹参酮(cryptotanshinone, CPT) 对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF7-TAMR的抑制作用及机制。采用MTT法检测CPT对MCF7-TAMR细胞的生长抑制作用, 发现CPT剂量与时间依赖性抑制MCF7-TAMR细胞的生长, 24 h半数抑制浓度(IC₅₀) 为15.14 ± 2.82 μmol·L^-1。CPT可阻滞细胞周期于G0/G1期, 并通过上调细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS) 水平促进细胞凋亡。Transwell结果显示CPT对MCF7-TAMR细胞的迁移有显著抑制作用。此外, CPT降低了MCF7-TAMR细胞来源微球体中CD24^-/lowCD44⁺细胞群。Western blot结果证明, CPT有效抑制雌激素受体-α (estrogen receptor α, ER-α) 磷酸化, 抑制磷酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K-p85) 与丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine protein kinase, Akt) 蛋白的表达, 同时降低了多重药物转运蛋白ABCG2 (ATP-binding cassette superfamily G member 2) 的表达。本研究结果表明, CPT通过诱导细胞凋亡, 引起细胞周期阻滞, 抑制细胞迁移、ER-α磷酸化及PI3K/Akt信号通路, 降低CD24^-/lowCD44⁺细胞群数量及ABCG2的表达, 并可克服细胞耐药性。

本文设计合成了一系列他克林-苯酚-联苯双酯杂合物(7a~7e, 8a~8e) 作为胆碱酯酶抑制剂, 并对其进行了肝毒性活性评价。结果表明, 这些化合物具有较强的胆碱酯酶抑制活性, 半数抑制浓度(IC₅₀) 值达到纳摩级, 部分化合物优于对照药物他克林, 其中8d对乙酰胆碱酯酶(AChE) 的抑制活性最强, IC₅₀值为156.39 nmol·L^-1, 7b对丁酰胆碱酯酶的活性最强, IC₅₀值为16.33 nmol·L^-1。酶动力学及分子对接表明化合物8d能够同时作用于AChE的催化活性位点和外周结合位点。另外, 这些化合物对肝细胞的体外毒性较低, 8d没有明显增加HepG2细胞内活性氧水平。

采用硅胶柱色谱、反相C18色谱柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱及中压半制备液相色谱等分离技术对纤枝金丝桃中的化学成分进行分离纯化, 通过MS、NMR等波谱数据结合理化性质鉴定化合物结构。从纤枝金丝桃80%乙醇提取物中分离得到11个化合物, 分别鉴定为hyperlagarone A (1)、hyperpatulone E (2)、hyperbeanol G (3)、uralione D (4)、tomoeone F (5)、pyramidatone A (6)、tomoeone A (7)、tomoeone B (8)、hyperbeanol C (9)、hyperbeanol A (10)、hypercohone G (11)。其中化合物1是未见报道的新化合物, 化合物2~11是首次从该植物中分离得到。对11个化合物进行基于L6骨骼细胞的促葡萄糖摄取实验, 结果显示化合物7、8均显示较强的促葡萄糖摄取活性。

采用硅胶柱色谱、MCI柱色谱、半制备高效液相色谱等技术从毛大丁草(Gerbera piloselloides) 全草95%乙醇提取物中分离纯化得到10个化合物。根据其理化性质、波谱数据(UV、IR、MS、NMR)、圆二色谱(CD) 和单晶X射线衍射等技术鉴定化合物结构, 分别为3′R-毛大丁香豆素A (1a)、3′S-毛大丁香豆素A (1b)、gymnastone (2)、大丁苷(3)、divaricataester C (4)、木犀草素(5)、咖啡酸甲酯(6)、绿原酸乙酯(7)、6-(β-D-glucopyranosyloxy)-7-methoxy-5-benzoranpropanoic acid methyl ester (8) 和glucozaluzanin C (9)。其中化合物1a和1b为新化合物且为光学对映异构体, 通过手性拆分得到, 并经量子化学计算ECD确定了其绝对构型。化合物1和1a/1b能显著提高LPS损伤后的大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6的存活率。

采用硅胶柱色谱、MCI柱色谱、制备薄层色谱和半制备高效液相色谱等分离手段, 从黄边灵芝Ganoderma luteomarginatum乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位中分离得到4个羊毛脂烷型三萜化合物, 根据NMR、MS、IR数据和X-ray单晶衍射分析, 分别鉴定为(24S, 25R)-ganodermanontriol-25-ethyl ether (1)、ganodermanontriol (2)、ganodermanondiol (3)、hainanaldehyde A (4), 其中化合物1为新化合物, 所有化合物均为首次从黄边灵芝中分离得到。采用MTT法测定化合物1~3对人肺癌细胞A549、胃癌细胞HGC-27、肝癌细胞SMMC-7721、宫颈癌细胞HeLa的细胞毒活性, 结果显示化合物1~3对4种肿瘤细胞具有不同程度的抑制增殖作用, 尤其化合物1对A549和HGC-27细胞表现出了显著的细胞毒活性, IC₅₀分别为4.29 ± 0.89和5.63 ± 0.90 μmol·L^-1。

运用MCI Gel、Sephadex LH-20、ODS和硅胶等柱色谱, 结合半制备液相、TLC等分离方法, 从思茅松松脂的95%乙醇部位分离纯化得到7个化合物。运用现代波谱学方法(1D、2D NMR、UV、IR、MS等) 对所分离得到的化合物进行结构鉴定, 并运用计算ECD的方法确定了新化合物的绝对构型。其中, 化合物1为新化合物, 化合物2、5~7为首次从思茅松中分离得到。

白头翁皂苷B4 (anemoside B4, B4) 是清热解毒中药白头翁的主要抗炎活性成分, 具有治疗肺部炎症的潜力。本文通过比较研究B4经气管和静脉给药后的肺部药代动力学与抗炎作用, 评价了B4经肺部给药的可行性。所有动物实验经中国医学科学院药用植物研究所伦理委员会批准(批准号: SLXD-20181113046)。体外气溶胶液滴粒径分布及其空气动力学特性评价结果显示, B4溶液经商品化雾化器雾化后形成的气溶胶具有良好的肺部沉积性能。药代动力学研究结果表明, B4经全身给药后药物肺组织渗透性差, 而经肺部给药后可以在肺内充分滞留, 肺组织局部生物利用度是静脉给药的1 000倍以上, 且药物在肺部的抗炎药物浓度可维持长达48 h。脂多糖(LPS) 诱导小鼠肺损伤模型的抗炎结果显示, B4经气管给药后的肺部抗炎作用具有剂量依赖性, 其最大抗炎强度强于10倍剂量静脉给药效果, 肺部给药后抗炎作用持续至少24 h。总体而言, 吸入给药是B4治疗肺部炎症的理想给药途径。

本实验建立了一种液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS) 法快速、灵敏测定Sprague-Dawley (SD) 大鼠血浆中紫杉醇前药(Pro-PTX) 及紫杉醇(PTX) 的浓度。血浆样本以乙腈(0.1%甲酸) 沉淀蛋白后, 选用Ultimate AQ-C18色谱柱(50 mm × 3.0 mm, 3 μm), 以乙腈-1 mmol·L^-1甲酸铵(含0.1%甲酸) 为流动相, 选用三重四极杆串联质谱仪的多重反应监测(MRM) 扫描方式进行监测, 选择监测离子反应分别为m/z 983.4→415.2 (Pro-PTX)、m/z 854.4→286.1 (PTX) 和m/z 808.3→527.2 (多西他赛, 内标)。方法验证结果表明, 血浆中Pro-PTX和PTX的线性范围分别为2.00~500 ng·mL^-1 (r > 0.99) 和4.00~1 000 ng·mL^-1 (r > 0.99), 定量下限分别为2.00和4.00 ng·mL^-1; Pro-PTX和PTX低、中、高三浓度的质控样本批内、批间相对标准差(RSD) 均小于9%; 相对偏差(RE) 均在±9%的范围以内; 稳定性实验中, 血浆中Pro-PTX和PTX在各种贮存条件下均稳定。本方法灵敏度高, 专属性、重现性好, 成功用于Pro-PTX在大鼠中的药代动力学研究。本研究中实验动物的使用已获得中国医学科学院药物研究所实验动物管理与动物福利伦理委员会批准(批号: 00003552)。

本研究建立高效液相色谱法, 用于肾上腺素注射液中肾上腺素磺化物(杂质F) 的测定。采用AQUASIL C18色谱柱(100 mm × 4.6 mm, 3 μm), 流动相A为磷酸二氢钾溶液, 流动相B为乙腈, 梯度洗脱, 进样量40 μL, 检测波长为210 nm, 柱温25 ℃, 分析时间40 min。结果表明, 肾上腺素磺化物(杂质F) 在0.520~12.480 μg·mL^-1质量浓度内与峰面积呈良好的线性关系, R² = 0.999 8; 平均回收率为103.04%, RSD为2.00%; 肾上腺素磺化物的最小检测限为0.104 μg·mL^-1, 定量限为0.520 μg·mL^-1。该检测方法准确度和精密度高, 灵敏度好, 可用于肾上腺素注射液中肾上腺素磺化物的分析测定, 提高肾上腺素相关产品的质量标准。

采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography coupled with quadrupole/ time-of-flight tandem mass spectrometry, UPLC-Q/TOF-MS/MS) 技术, 对夏佛塔苷口服给药后在小鼠体内的原形成分及其代谢产物进行定性分析。动物福利和实验过程获得徐州医科大学伦理委员会的批准(批准号: XZMULL201612024)。通过分析各成分的精确分子质量、一级、二级质谱信息, 并与相应的对照品及文献比对, 从小鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中共鉴定出1个原形成分和29个代谢产物。这些成分在小鼠体内代谢的主要途径有去羟基化、羟基化、脱糖化、糖化、氢化、甲基化、乙酰化、硫酸化、葡糖醛酸化等。研究结果可为进一步阐明夏佛塔苷的药效物质基础提供有价值的依据。

采用超高效液相色谱-串联线性离子阱-轨道阱组合高分辨质谱(UHPLC-LTQ-orbitrap-MS) 技术对藏药洪连(中国药典收载基原短管兔耳草) 中黄酮类和苯乙醇苷类成分进行定性分析。采用与动态排除相结合的数据依赖性扫描, 在电喷雾离子源正、负离子模式下分别分析黄酮类和苯乙醇苷类成分的精确分子量、碎片离子及保留时间等信息, 并结合相关文献系统全面地鉴别藏药洪连中这两类成分。最终共鉴定了167个化合物, 其中黄酮类成分84个, 苯乙醇苷类成分83个, 极大地丰富了洪连及兔耳草属植物中黄酮和苯乙醇苷类成分的数量和种类, 特别是首次从兔耳草属植物中发现了黄酮化合物宝藿苷I、脱氧己糖与葡萄糖醛酸组合的二糖氧苷黄酮4个、碳苷黄酮9个、四糖苯乙醇苷15个以及β位有取代基的苯乙醇苷5个, 为阐明洪连物质基础并整体提升其质量控制水平以及进一步规范相关基原品种的临床应用提供数据基础和科学依据。

本研究采用超高效液相-四级杆-飞行时间高分辨质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS/MS) 结合分子网络技术快速分析鉴定两种芦笋茎皮中的化学成分。通过化合物精确分子量、MS/MS裂解规律和文献报道数据等信息对两种芦笋茎皮中的化学成分进行鉴定, 并根据MS/MS碎片的相似性创建分子网络。两种芦笋茎皮共鉴定107个化合物, 包括皂苷类化合物46个、黄酮类化合物13个, 有机酸类、氨基酸类和糖类等其他类成分48个。两种芦笋茎皮成分种类差异明显, 白笋茎皮中富含皂苷类成分, 而绿笋茎皮中富含黄酮类成分。本研究运用液质联用结合分子网络技术对芦笋茎皮中的化学成分进行快速分析, 利用HIT 2.0中草药成分靶点数据库结合文献报道确定了芦笋茎皮中10个皂苷和黄酮类成分对乳腺癌的45个作用靶点, 为芦笋资源的开发利用奠定了理论基础。

本文通过饱和水溶液法制备卟硒啉-2, 6-二甲基-β-环糊精包合物, 以提高卟硒啉的溶解度, 从而得到其注射液。通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC) 法对包合物中的卟硒啉含量进行检测, 再以包合率为指标, 正交设计优化制备工艺。采用X射线衍射(X-ray diffraction, XRD)、傅里叶变换红外光谱(Fourier-transform infrared spectroscopy, FTIR)、扫描电子显微镜(scanning electron microscope, SEM) 对包合物结构进行验证, 同时考察包合物对卟硒啉溶解度及其稳定性的影响。结果显示, 优化的制备工艺条件质量比为1:340、包合时间为3 h、包合温度为70 ℃, 制得的包合物的包合率为(91.24 ± 0.42) %, XRD、FTIR、SEM结果均证明了包合物形成。卟硒啉-2, 6-二甲基-β-环糊精包合技术能显著提高卟硒啉溶解度且所建立的HPLC法对卟硒啉含量的检测快速简便、准确、适用性强、专属性高、重复性好, 可用于卟硒啉环糊精包合物中的卟硒啉的含量检测, 为卟硒啉新剂型的开发及临床应用奠定基础和提供技术支持。

本研究通过制备亚麻酸修饰的壳聚糖胶束(linolenic acid-modified chitosan, CS-LA), 以多柔比星(doxorubicin, DOX) 为模型药物, 构建了CS-LA@DOX胶束给药系统以提高DOX口服生物利用度, 并研究其大鼠在体肠吸收情况。透析法制备CS-LA@DOX, 通过核磁共振氢谱、傅里叶红外光谱等对聚合物进行表征; 测定载药胶束的粒径、zeta电位、包封率(entrapment efficiency, EE)、载药量(drug loading, DL) 和临界胶束浓度(critical micelle concentration, CMC) 等理化参数, 并考察胶束粒子的微观形态及载药的多晶型现象; 透析法考察胶束的体外释放; 以盐酸多柔比星水溶液为对照, 通过大鼠在体肠循环实验考察胶束的促吸收作用。动物福利和实验过程均遵循桂林医学院动物伦理委员会的规定。结果表明, CS与LA通过酰胺键共价结合, DOX以无定型态包载于胶束内核, CS-LA@DOX胶束zeta电位为+12.1 mV, 平均粒径为(119.2 ± 2.1) nm, 聚合物分散指数(polymer dispersity index, PDI) 为0.190 ± 0.08; CS-LA的CMC为51.75 μg·mL^-1; EE和DL分别为(70.23 ± 0.74) %、(8.77 ± 0.02) %; 本胶束体外释放较市售的盐酸多柔比星有明显的缓释作用; CS-LA@DOX胶束对DOX在大鼠小肠的吸收具有明显的促进作用。

WRKY转录因子是植物中一类保守的转录因子, 在植物生长发育和次生代谢过程中发挥重要的调控作用。本研究对马蓝(Baphicacanthus cusia) 不同组织(根、茎和叶) 的转录组数据进行分析, 共鉴定了65个马蓝WRKY (BcWRKY) 家族成员。其编码氨基酸长度约为221~706 aa, 等电点为4.68~9.68, 分子质量为25 711.8~75 475 Da, 二级结构主要为无规则卷曲, 亚细胞定位预测显示多数BcWRKYs定位在细胞核中。系统进化分析将其分为3大族, 其中第二大族(Group II) 又可分为5个亚族(Group IIa、Group IIb、Group IIc、Group IId和Group IIe)。结构域分析显示BcWRKY均含有高度保守的WRKYGQK基序。利用实时荧光定量PCR (RT-PCR) 对马蓝根、茎和叶中高表达的10个WRKY基因进行检测, 发现均可响应脱落酸(abscisic acid, ABA)、茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA) 和水杨酸(salicylic acid, SA) 的诱导。本研究为进一步阐明马蓝中吲哚生物碱生物合成中WRKY转录因子的分子机制提供基础。

4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶[4-(cytidine-5′-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol kinase, CMK] 是生成萜类化合物MEP途径的关键酶之一。本研究以茅苍术转录组数据为依据, 克隆获得CMK基因序列, 命名为AlCMK (GenBank登录号为OM283293)。研究结果表明, AlCMK包含一个全长为1 230 bp的开放阅读框(ORF), 编码409个氨基酸, 推测其相对分子质量为44 752.53, 蛋白理论等电点为6.67; 跨膜结构分析表明其无跨膜结构, 二级结构显示其主要由无规则卷曲(48.17%) 结构组成; 同源氨基酸序列分析表明, 茅苍术与除虫菊、桂花、杜仲、忍冬、丹参CMK基因编码的氨基酸序列具有较高同源性; 系统进化树分析表明, 茅苍术AlCMK与菊科植物CMK蛋白亲缘关系较近; 构建pET-32a-AlCMK原核表达载体, 并转化至大肠杆菌BL21 (DE3) 表达感受态, 蛋白表达结果显示其分子质量约为65 kDa; 利用qRT-PCR分析AlCMK基因在不同组织和茉莉酸甲酯(MeJA) 处理后的表达模式, 同时采用ELISA试剂盒法测定茅苍术CMK酶活性, 结果表明, 不同产地茅苍术AlCMK基因具有组织表达差异性, 且受外源MeJA诱导表达, 酶活结果显示不同产地茅苍术CMK酶活性均在叶中较高; 亚细胞定位显示该基因位于叶绿体中。本研究为进一步阐明茅苍术中萜类化合物合成途径AlCMK基因的生物学功能提供参考。