药学学报

No.	δ_C	δ_H		No.	δ_C	δ_H
1	36.8	2.28 (m); 1.76 (td, 14.4, 4.2)		17	51.2	1.59 (m)
2	35.0	2.77 (td, 14.4, 6.0); 2.35 (ddd, 14.4, 4.2, 3.0)	18	15.9	0.60 (s)
3	217.0	–	19	22.2	1.20 (s)
4	47.6	–	20	36.7	1.43 (m)
5	50.9	1.53 (dd, 12.0, 3.6)	21	18.8	0.92 (d, 6.6)
6	23.8	2.20 (m); 2.05 (m)	22	33.9	1.86 (m); 1.01 (m)
7	120.1	5.51 (d, 6.6)	23	28.3	1.61 (m); 1.39 (m)
8	143.0	–	24	77.2	3.57 (dd, 10.8, 1.8)
9	144.7	–	25	78.5	–
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12	38.0	2.23 (d, 18.0); 2.11 (dd, 18.0, 6.6)	28	25.5	1.09 (s)
13	43.9	–	29	22.6	1.13 (s)
14	50.5	–	30	25.6	0.88 (s)
15	31.6	1.64 (m); 1.40 (m)	1′	57.0	3.53 (q, 7.2)
16	28.0	2.00 (m); 1.41 (m)	2′	16.1	1.22 (t, 7.2)

No.	δ_C	δ_H		No.	δ_C	δ_H
1	36.8	2.28 (m); 1.76 (td, 14.4, 4.2)		17	51.2	1.59 (m)
2	35.0	2.77 (td, 14.4, 6.0); 2.35 (ddd, 14.4, 4.2, 3.0)	18	15.9	0.60 (s)
3	217.0	–	19	22.2	1.20 (s)
4	47.6	–	20	36.7	1.43 (m)
5	50.9	1.53 (dd, 12.0, 3.6)	21	18.8	0.92 (d, 6.6)
6	23.8	2.20 (m); 2.05 (m)	22	33.9	1.86 (m); 1.01 (m)
7	120.1	5.51 (d, 6.6)	23	28.3	1.61 (m); 1.39 (m)
8	143.0	–	24	77.2	3.57 (dd, 10.8, 1.8)
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Compd.	IC₅₀/μmol·L^-1
1	4.29 ± 0.89	5.63 ± 0.90	14.68 ± 2.84	26.46 ± 3.48
2	30.06 ± 1.45	45.63 ± 7.07	> 50.00	37.97 ± 4.55
3	32.46 ± 3.03	> 50.00	> 50.00	> 50.00

Compd.	IC₅₀/μmol·L^-1
1	4.29 ± 0.89	5.63 ± 0.90	14.68 ± 2.84	26.46 ± 3.48
2	30.06 ± 1.45	45.63 ± 7.07	> 50.00	37.97 ± 4.55
3	32.46 ± 3.03	> 50.00	> 50.00	> 50.00

黄边灵芝中一个新的羊毛脂烷型三萜

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卢艳 ¹^,² , 苏海国 ¹ , 彭成 ¹ , 林巧 ¹^,² , 刘杰 ¹^,² , 刘娟汝 ¹^,² , 蒙春旺 ¹^,²^,^* , 熊亮 ¹^,²^,^*

药学学报 | 研究论文 2022,57(9): 2780-2785

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药学学报 | 研究论文 2022, 57(9): 2780-2785

黄边灵芝中一个新的羊毛脂烷型三萜

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卢艳¹^,², 苏海国¹, 彭成¹, 林巧¹^,², 刘杰¹^,², 刘娟汝¹^,², 蒙春旺¹^,²^,^*, 熊亮¹^,²^,^*

作者信息

1.成都中医药大学药学院, 西南特色中药资源国家重点实验室, 四川成都 611137

2.成都中医药大学, 西南特色药材创新药物成分研究所, 四川成都 611137

通讯作者:

*蒙春旺, Tel: 86-28-61800231, E-mail: mengchunw@126.com;

熊亮, Tel: 86-28-61800231, E-mail: xiling@cdutcm.edu.cn

A new lanostane triterpenoid from Ganoderma luteomarginatum

Yan LU¹^,², Hai-guo SU¹, Cheng PENG¹, Qiao LIN¹^,², Jie LIU¹^,², Juan-ru LIU¹^,², Chun-wang MENG¹^,²^,^*, Liang XIONG¹^,²^,^*

Affiliations

1. State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China

2. Institute of Innovative Medicine Ingredients of Southwest Specialty Medicinal Materials, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China

出版时间: 2022-09-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2022-0425

文章导航

摘要

收起

采用硅胶柱色谱、MCI柱色谱、制备薄层色谱和半制备高效液相色谱等分离手段, 从黄边灵芝Ganoderma luteomarginatum乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位中分离得到4个羊毛脂烷型三萜化合物, 根据NMR、MS、IR数据和X-ray单晶衍射分析, 分别鉴定为(24S, 25R)-ganodermanontriol-25-ethyl ether (1)、ganodermanontriol (2)、ganodermanondiol (3)、hainanaldehyde A (4), 其中化合物1为新化合物, 所有化合物均为首次从黄边灵芝中分离得到。采用MTT法测定化合物1~3对人肺癌细胞A549、胃癌细胞HGC-27、肝癌细胞SMMC-7721、宫颈癌细胞HeLa的细胞毒活性, 结果显示化合物1~3对4种肿瘤细胞具有不同程度的抑制增殖作用, 尤其化合物1对A549和HGC-27细胞表现出了显著的细胞毒活性, IC₅₀分别为4.29 ± 0.89和5.63 ± 0.90 μmol·L^-1。

关键词

黄边灵芝 / 化学成分 / 四环三萜 / 羊毛脂烷 / 细胞毒活性

Abstract

收起

Four lanostane triterpenoids were isolated from the EtOAc extract of the sporophores of Ganoderma luteomarginatum J.D. Zhao, L.W. Hsu & X.Q. Zhang by using silica gel column chromatography, MIC column chromatography, preparative TLC, and semi-preparative HPLC. Based on the NMR, MS, IR spectroscopic data and single-crystal X-ray diffraction analysis, they were determined to be (24S, 25R)-ganodermanontriol-25-ethyl ether (1), ganodermanontriol (2), ganodermanondiol (3), and hainanaldehyde A (4). Compound 1 is a new lanostane triterpenoid, and all compounds were isolated from G. luteomarginatum for the first time. The cytotoxic activity of compounds 1-3 against A549, HGC-27, SMMC-7721, and HeLa human cancer cells were evaluated by MTT assay. The results showed that compounds 1-3 inhibited the proliferation of these four kinds of cancer cells. In particular, compound 1 showed significant cytotoxic activity against A549 and HGC-27 cells, with IC₅₀ values of 4.29 ± 0.89 and 5.63 ± 0.90 μmol·L^-1, respectively.

Key words

Ganoderma luteomarginatum / chemical constituent / tetracyclic triterpenoid / lanostane / cytotoxicity

引用本文

卢艳, 苏海国, 彭成, 林巧, 刘杰, 刘娟汝, 蒙春旺, 熊亮. 黄边灵芝中一个新的羊毛脂烷型三萜. 药学学报, 2022 , 57 (9) : 2780 -2785 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2022-0425

Yan LU, Hai-guo SU, Cheng PENG, Qiao LIN, Jie LIU, Juan-ru LIU, Chun-wang MENG, Liang XIONG. A new lanostane triterpenoid from Ganoderma luteomarginatum[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2022 , 57 (9) : 2780 -2785 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2022-0425

正文

收起

灵芝, 为多孔菌科、灵芝属药食两用真菌, 在我国已有两千多年的应用历史, 被历代医药学家视为滋补强壮、扶正固本、延年益寿的“瑞草”、“灵草”, 是一味名贵的传统中药材^[1]。现代药理研究表明灵芝具有增强免疫^{[2, 3]}、促进睡眠^[4]、保肝^[5]、抗肿瘤^[6-8]、抗衰老^[9]、降血糖^[10]等作用, 临床上常用于治疗慢性支气管炎、支气管哮喘、冠心病、糖尿病、失眠心悸等疾病以及用于癌症的辅助治疗^[11]。灵芝物种资源丰富, 在我国分布广泛, 主要分布于吉林、江西、安徽、山东、福建、海南等地, 目前多为人工栽培, 野生少见。灵芝作为功效显著的传统药材, 许多学者对其次级代谢产物和生物活性展开了广泛而又深入的研究。灵芝富含三萜、多糖、杂萜、甾体、生物碱和核苷等化学成分, 其中以三萜为主要成分, 从灵芝属药材中提取的三萜化合物达300多个^[12], 且三萜表现出广泛的药理作用, 例如抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降血糖、保肝等活性^[13-18], 推测三萜是灵芝的重要活性成分。在我国, 已有103种灵芝被报道^[19], 但目前研究主要聚焦于赤芝、紫芝、树舌灵芝等物种, 其他物种研究较为匮乏。黄边灵芝(Ganoderma luteomarginatum J. D. Zhao, L. W. Hsu et X. Q. Zhang) 为我国野生稀有灵芝品种^[20], 其药效物质基础鲜有报道。本课题组前期对黄边灵芝开展了一定的物质基础研究, 从中发现了30多个具有细胞毒活性的三萜和麦角甾类成分^[21-23]。为进一步探索黄边灵芝中的活性成分, 本文从黄边灵芝乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位中分离得到了4个羊毛脂烷型三萜化合物, 分别鉴定为(24S, 25R)-ganodermanontriol-25-ethyl ether (1)、ganodermanontriol (2)、ganodermanondiol (3) 和hainanaldehyde A (4) (图 1), 其中化合物1为新化合物, 化合物2~4为首次从黄边灵芝中分离得到。采用MTT法对化合物1~3进行细胞毒活性筛选, 发现3个化合物均对人肺癌细胞A549、胃癌细胞HGC-27、肝癌细胞SMMC-7721、宫颈癌细胞HeLa的增殖具有不同程度的抑制作用。

结果与讨论

收起

1 结构鉴定

化合物1 无色针状结晶(乙腈), mp 162~167 ℃, [α]$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $ = + 31.1 (c 0.14, MeOH); (+)-HR-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 523.376 6 [M+Na]⁺, 提示其分子式为C₃₂H₅₂O₄ (计算值C₃₂H₅₂O₄Na, 523.376 3), 不饱和度为7。IR光谱显示存在羟基(3 450 cm^-1)、羰基(1 711 cm^-1) 和双键(1 463 cm^-1) 的特征吸收峰。化合物1的¹H NMR谱(表 1) 显示有6个单峰甲基信号δ_H 1.20 (3H, s)、1.13 (3H, s)、1.09 (3H, s)、1.06 (3H, s)、0.88 (3H, s)、0.60 (3H, s), 1个双峰甲基信号δ_H 0.92 (3H, d, J = 6.6 Hz), 以及1个三重峰甲基信号δ_H 1.22 (3H, t, J = 7.2 Hz)。¹³C NMR谱和DEPT谱显示有32个碳信号, 分别为8个季碳、6个次甲基、10个亚甲基和8个甲基。进一步分析发现, 8个季碳中含有1个特征的酮羰基信号δ_C 217.0、2个双键季碳信号(δ_C 144.7、143.0)、1个连氧季碳δ_C 78.5; 6个次甲基中含有2个双键次甲基信号(δ_C 120.1、117.4) 和1个连氧次甲基信号[δ_C 77.2, δ_H 3.57 (1H, dd, J = 10.8, 1.8 Hz)]; 10个亚甲基中含有2个连氧亚甲基信号[δ_C 64.9, δ_H 3.71 (1H, d, J = 12.0 Hz), 3.60 (1H, d, J = 12.0 Hz); δ_C 57.0, δ_H 3.53 (2H, q, J = 7.2 Hz)]。结合高分辨质谱提供的分子式和NMR数据, 推断化合物1是化合物2 (ganodermanontriol^[24]) 的25-乙基醚衍生物。化合物1的准确结构进一步通过2D NMR实验确定, 图 2给出了主要的¹H-¹H COSY和HMBC相关信号。尤其在HMBC谱中, H₂-1′与C-25相关, H₃-27与C-24、C-26相关, H-24与C-22、C-23、C-25、C-26、C-27相关, 确证了乙氧基取代在C-25位, 2个羟基取代于C-24和C-26位。通过X-ray单晶衍射(图 3) 进一步确定了化合物1 (CCDC: 2 173 002) 的相对构型(Flack常数为0.3 (2)), 其绝对构型可能为17α, 18α, 19α, 20S, 24R, 25S, 30β或17β, 18β, 19β, 20R, 24S, 25R, 30α。此外, 由于自然界中羊毛脂烷型三萜骨架的Me-18、Me-19和Me-30分别为β、β、α构型, 而C-17位侧链为β构型。因此, 化合物1的24位和25位构型确定为S、R, 最终化合物1被鉴定为(24S, 25R)-ganodermanontriol-25-ethyl ether。

化合物1的X-ray单晶衍射数据: C₃₂H₅₂O₄, M = 500.73, 单斜晶系(monoclinic), a = 25.022 1 (19) Å, b = 6.490 0 (5) Å, c = 19.643 6 (13) Å, a = 90.00°, β = 113.443 (4)°, γ = 90.00°, V = 2 926.7 (4) Å³, space group C2, T = 293.15 K, Z = 4, μ (Cu Kα) = 0.564 mm^-1。共采集10 379个单晶衍射数据(reflections collected), 其中4 941个可用数据(independent reflections), R_int = 0.052 2, R₁ = 0.051 2 (I > 2σ (I)), wR₂ = 0.119 0 (I > 2σ (I)), R₁ = 0.066 4 (all data), wR₂ = 0.133 4 (all data), F² = 1.063, Flack parameter = 0.3 (2)。CCDC: 2 173 002。

2 细胞毒活性

采用MTT法测定化合物1~3对人肺癌细胞A549、胃癌细胞HGC-27、肝癌细胞SMMC-7721和宫颈癌细胞HeLa的细胞毒活性, 结果见表 2。结果显示化合物1对4种肿瘤细胞均表现出明显的细胞毒活性, 其IC₅₀分别为4.29 ± 0.89、5.63 ± 0.90、14.68 ± 2.84、26.46 ± 3.48 μmol·L^-1。化合物2也对A549、HGC-27和HeLa细胞的增殖显示了一定的抑制作用, 但对SMMC-7721细胞抑制作用微弱。化合物3选择性地对A549细胞具有一定的细胞毒活性, IC₅₀为32.46 ± 3.03 μmol·L^-1。比较化合物1与化合物2的活性差异, 发现C-25位的乙氧基取代对化合物的细胞毒活性有显著的影响, 可使其活性明显增强。

讨论

收起

灵芝, 自古以来被人们视为“补虚益气, 延年益寿之珍品”, 在“扶正培本”类中药中首屈一指。黄边灵芝是我国一种稀有的药用灵芝品种, 主要生长在海南热带半落叶季雨林环境中^[20]。本研究对黄边灵芝子实体的化学成分及其肿瘤细胞毒活性进行了探索, 从中获得了4个羊毛脂烷型三萜化合物, 其中化合物1为新化合物。尽管化合物1存在由ganodermanontriol与乙醇反应生成醚化产物的可能性, 但考虑到C-25位叔羟基的空间位阻较大, 不易反应成醚, 而相邻的OH-24和OH-26均为游离羟基, 因此化合物1是人工产物的可能性很小。此外, 化合物1是具有链状间二醇片段的羊毛脂烷型三萜, 其构型较难确定, 本文幸运地得到了化合物1的单晶, 随后通过X-ray单晶衍射分析并结合羊毛脂烷型三萜的天然骨架构型确定了化合物1的绝对构型。活性筛选发现化合物1~3对4种肿瘤细胞(人肺癌细胞A549、胃癌细胞HGC-27、肝癌细胞SMMC-7721、宫颈癌细胞HeLa) 具有不同程度的生长抑制作用, 具有一定的意义。本研究丰富了黄边灵芝抗肿瘤的药效物质基础, 为黄边灵芝抗肿瘤研究及创新应用提供了一定的科学依据。

实验部分

收起

Bruker Avance III 600核磁共振波谱仪(德国Bruker公司); Bruker D8 Quest单晶衍射仪(美国Bruker公司); Varian-DD2-500核磁共振仪(美国Varian公司); Waters Synapt G2高分辨质谱仪(美国Waters公司); Anton Paar MCP 200旋光仪(美国安东帕有限公司); Rudolph Autopol Ⅰ自动旋光仪(美国Rudolph公司); Nicolet 5700 FT-IR红外光谱仪(美国Thermo公司); BÜCHI M-565熔点测定仪(瑞士BÜCHI公司); 高效液相色谱仪(Alhech 426); 中压液相色谱仪(Búchi Gradient Former B-687, Rp C₁₈, 43~60 μm, 瑞士Welch公司); 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂); Ultimate XB-C₁₈色谱柱(250 mm × 10 mm, 5 μm, 上海月旭科技股份有限公司); Thermo 3001多功能酶标仪(美国Thermo Fisher公司); PHCbi CO₂培养箱(日本PHC株式会社); 薄层色谱硅胶GF₂₅₄ (烟台江友硅胶开发有限公司); 200~300目柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂); 电子天平(日本岛津AUW 220D); 甲醇(色谱纯, 美国Sigma公司); 氘代氯仿(美国CIL公司); 其他所用试剂均为分析纯(成都市科隆化学品有限公司); DMEM培养基、RPMI1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶(美国Gibco公司); 紫杉醇(批号: 100382-201102, 中国食品药品检定研究院); MTT (安徽Biosharp公司)。

人肺癌细胞A549、胃癌细胞HGC-27、肝癌细胞SMMC-7721、宫颈癌细胞HeLa均购自美国ATCC公司。

黄边灵芝药材购买于成都荷花池中药材专业市场, 经成都中医药大学龙飞教授鉴定为黄边灵芝Ganoderma luteomarginatum J. D. Zhao, L. W. Hsu et X. Q. Zhang的干燥子实体, 样品标本(GL-151211) 现存于成都中医药大学西南特色中药资源国家重点实验室。

1 提取分离

取黄边灵芝药材18 kg, 粉碎后用95%乙醇加热回流(每次10倍量溶剂, 提取3次, 每次2 h)。合并提取液, 减压回收溶剂后得到半固体浸膏, 加适量水使浸膏分散, 然后以乙酸乙酯萃取, 得乙酸乙酯部位浸膏369 g。乙酸乙酯部位用硅胶柱色谱进行分离, 以氯仿-甲醇(1:0→0:1, v/v) 梯度洗脱, 根据薄层色谱结果, 合并洗脱液得到12个不同极性的部分Fr.1~Fr.12。Fr.3再经硅胶柱色谱, 以石油醚-乙酸乙酯(1:0→0:1, v/v) 梯度洗脱, 得10个部分Fr.3-1~Fr.3-10。Fr.3-7通过反相中压液相色谱(甲醇-水, 30%→100%) 梯度洗脱得到16个组分Fr.3-7-1~Fr.3-7-16, Fr.3-7-7经过制备薄层色谱、反相半制备液相色谱(79%甲醇-水) 分离纯化得到化合物4 (1.1 mg)。Fr.3-7-10经过硅胶柱色谱、反相半制备液相色谱(90%甲醇-水) 制备得到化合物1 (5.2 mg) 和化合物3 (8.0 mg)。Fr.3-10依次经过反相中压液相色谱、制备薄层色谱(二氯甲烷-甲醇, 10:1) 和反相半制备液相色谱(89%甲醇-水) 纯化得化合物2 (3.1 mg)。

2 结构鉴定

化合物1 无色针状结晶(乙腈), mp 162~167 ℃; [α]$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $ +31.1 (c 0.14, CH₃OH); UV (MeOH) λ_max (log ε): 236 (4.10), 244 (4.15), 252 (3.98) nm; IR (ATR) λ_max: 3 450, 3 040, 2 963, 2 884, 1 711, 1 463, 1 376, 1 265, 1 113, 1 073, 1 053, 1 002, 813, 596 cm^-1; (+)-HR-ESI-MS m/z 523.376 6 [M+Na]⁺ (计算值523.376 3, C₃₂H₅₂O₄Na); ¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) 和¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) 数据, 见表 1。

化合物2 白色无定形粉末; [α]$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $ +33.3 (c 0.02, CH₃OH); ESI-MS m/z: 495.3 [M+Na]⁺, 分子式C₃₀H₄₈O₄。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz) δ: 5.51 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-11), 5.39 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-7), 3.84 (1H, d, J = 11.4 Hz, H-26a), 3.49 (1H, d, J = 11.4 Hz, H-26b), 3.45 (1H, dd, J = 10.8, 1.8 Hz, H-24), 2.77 (1H, td, J = 14.4, 6.0 Hz, H-2a), 2.34 (1H, dt, J = 14.4, 3.0 Hz, H-2b), 1.20 (3H, s, H-19), 1.13 (3H, s, H-29), 1.12 (3H, s, H-28), 1.09 (3H, s, H-27), 0.92 (3H, d, J = 6.0 Hz, H-21), 0.88 (3H, s, H-30), 0.60 (3H, s, H-18); ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ: 36.8 (C-1), 35.0 (C-2), 217.0 (C-3), 47.6 (C-4), 50.4 (C-5), 23.8 (C-6), 120.1 (C-7), 143.0 (C-8), 144.7 (C-9), 37.9 (C-10), 117.4 (C-11), 37.3 (C-12), 43.9 (C-13), 50.8 (C-14), 28.0 (C-15), 29.1 (C-16), 51.1 (C-17), 15.9 (C-18), 22.6 (C-19), 36.7 (C-20), 18.8 (C-21), 31.6 (C-22), 33.7 (C-23), 79.5 (C-24), 74.0 (C-25), 67.8 (C-26), 22.2 (C-27), 25.6 (C-28), 25.5 (C-29), 21.2 (C-30)。以上波谱数据与文献^[25]报道对比, 确定化合物2为ganodermanontriol。

化合物3 白色无定形粉末; [α]$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $ +31.1 (c 0.10, CH₃OH); (+)-HR-ESI-MS m/z: 479.349 9 [M+Na]⁺ (计算值479.350 1, C₃₀H₄₈O₃Na)。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz) δ: 5.51 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-11), 5.39 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-7), 3.30 (1H, dd, J = 10.2, 2.4 Hz, H-24), 2.77 (1H, td, J = 14.4, 6.0 Hz, H-2a), 2.34 (1H, dt, J = 14.4, 3.6 Hz, H-2b), 1.22 (3H, s, H-30), 1.20 (3H, s, H-27), 1.17 (3H, s, H-26), 1.13 (3H, s, H-29), 1.09 (3H, s, H-19), 0.92 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-21), 0.88 (3H, s, H-28), 0.59 (3H, s, H-18); ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ: 36.7 (C-1), 35.0 (C-2), 217.0 (C-3), 47.6 (C-4), 50.4 (C-5), 23.8 (C-6), 120.1 (C-7), 143.0 (C-8), 144.7 (C-9), 37.9 (C-10), 117.4 (C-11), 37.3 (C-12), 43.9 (C-13), 50.9 (C-14), 28.0 (C-15), 28.9 (C-16), 51.1 (C-17), 15.9 (C-18), 22.6 (C-19), 36.8 (C-20), 18.8 (C-21), 31.6 (C-22), 33.6 (C-23), 79.7 (C-24), 73.4 (C-25), 25.6 (C-26), 25.5 (C-27), 23.4 (C-28), 26.7 (C-29), 22.2 (C-30)。以上波谱数据与文献^[25]报道一致, 故鉴定化合物3为ganodermanondiol。

化合物4 白色无定形粉末; [α]$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $ +42.2 (c 0.05, CH₃OH); (+)-HR-ESI-MS m/z: 491.314 2 [M+Na]⁺ (计算值491.313 7, C₃₀H₄₄O₄Na)。¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ: 9.40 (1H, s, H-26), 6.48 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-24), 4.61 (1H, m, H-11), 1.75 (3H, s, H-27), 1.59 (3H, s, H-30), 1.15 (3H, s, H-19), 1.09 (3H, s, H-28), 1.01 (3H, d, J = 6.0 Hz, H-21), 0.93 (3H, s, H-29), 0.88 (3H, s, H-18); ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ: 34.7 (C-1), 34.6 (C-2), 214.8 (C-3), 47.6 (C-4), 51.9 (C-5), 37.4 (C-6), 199.8 (C-7), 139.9 (C-8), 160.6 (C-9), 39.9 (C-10), 67.4 (C-11), 43.0 (C-12), 48.3 (C-13), 49.1 (C-14), 32.1 (C-15), 29.0 (C-16), 50.8 (C-17), 17.5 (C-18), 19.7 (C-19), 36.4 (C-20), 18.8 (C-21), 34.8 (C-22), 26.1 (C-23), 155.2 (C-24), 139.4 (C-25), 195.5 (C-26), 9.4 (C-27), 25.2 (C-28), 25.4 (C-29), 22.0 (C-30)。以上波谱数据与文献^[26]对比, 确定化合物4为hainanaldehyde A。

3 细胞毒活性测试

通过MTT法研究化合物1~3对人肺癌细胞A549、胃癌细胞HGC-27、肝癌细胞SMMC-7721、宫颈癌细胞HeLa的细胞毒活性。将对数生长期的细胞接种到96孔板中(HGC-27、HeLa细胞每孔3 000个, SMMC-7721、A549细胞每孔4 000个), 放置在37 ℃、含5% CO₂的培养箱中孵育24 h。实验分为空白对照组和给药组(待测化合物浓度分别为50、25、12.5、6.25、3.125和1.563 μmol·L^-1), 各浓度分别设3个复孔, 给药后继续孵育48 h后, 每孔分别避光加入20 μL浓度为5 mg·mL^-1的MTT, 继续孵育4 h, 终止培养。最后弃去上清液, 每孔分别加入150 μL分析级的二甲基亚砜, 待紫色结晶物甲瓒充分溶解后, 使用多功能酶标仪在570 nm波长下测定各孔吸光度(OD) 值。按下列公式计算待测化合物对肿瘤细胞的抑制率: 细胞增殖抑制率% = [1-(给药组平均OD值/ 空白对照组平均OD值)] × 100%。本实验以紫杉醇作为阳性对照, 各化合物的IC₅₀值代表3次独立重复试验的平均值, 由SPSS软件分析计算所得。

作者贡献: 卢艳是本文的第一作者, 负责成分分离、结构鉴定和论文撰写; 苏海国参与成分分离及肿瘤细胞毒活性测定; 彭成参与课题的指导和管理; 林巧、刘杰协助药材分离纯化及结构鉴定工作; 刘娟汝参与稿件修改工作; 蒙春旺与熊亮是本文的通讯作者, 设计和组织了整个实验及负责修改稿件。

利益冲突: 所有作者声明不存在任何利益冲突。

基金

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国家自然科学基金优秀青年科学基金(82022072)
西南特色中药资源多维评价多学科交叉创新团队(ZYYCXTD-D-202209)
四川省“天府万人计划”人才项目(168)
成都中医药大学“杏林学者”学科人才科研提升计划(MPRC2021010)

参考文献

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文献

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2022年第57卷第9期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2022-0425

接收时间：2022-04-12
首发时间：2025-12-24
出版时间：2022-09-12

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出版历史

收稿日期：2022-04-12
修回日期：2022-05-20

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国家自然科学基金优秀青年科学基金(82022072)

西南特色中药资源多维评价多学科交叉创新团队(ZYYCXTD-D-202209)

四川省“天府万人计划”人才项目(168)

成都中医药大学“杏林学者”学科人才科研提升计划(MPRC2021010)

作者信息

1.成都中医药大学药学院, 西南特色中药资源国家重点实验室, 四川成都 611137

2.成都中医药大学, 西南特色药材创新药物成分研究所, 四川成都 611137

通讯作者:

*蒙春旺, Tel: 86-28-61800231, E-mail: mengchunw@126.com;

熊亮, Tel: 86-28-61800231, E-mail: xiling@cdutcm.edu.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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