细胞自噬(autophagy) 是一种可以降解细胞自身成分、维持细胞稳态的重要生理过程。在癌症发生发展过程中, 自噬因其具有双重作用而起到促进或是抑制的作用, 靶向自噬被认为是治疗癌症的重要手段。中医理论认为自噬在机体内具有调节“阴阳平衡、正邪平衡”的作用, 基于“扶正祛邪”的理论使用中药活性成分靶向自噬来治疗癌症已被证明有效。此外, 自噬细胞死亡作为Ⅱ型程序性细胞死亡方式, 肿瘤细胞发生自噬性死亡往往伴随着自噬特征, 调控自噬性细胞死亡是自噬发挥抗肿瘤作用的关键途径。近年来, 越来越多的研究发现中药活性成分在癌症治疗中具有良好效果。其中, 调控自噬性细胞死亡是中药活性成分实现其抗肿瘤药效的重要途径, 如姜黄素、槲皮素等通过此途径发挥抗肿瘤作用。本文概述了中医理论对癌症和自噬的认识, 并基于化合物的结构分类系统性总结了靶向自噬性细胞死亡的中药小分子化合物及其作用机制。最后, 对开发中药来源化合物靶向自噬细胞死亡治疗肿瘤进行了总结和展望, 希望可以为后续抗肿瘤中药小分子药物的全新发现提供线索。

人工智能(artificial intelligence, AI) 技术在各领域的应用日益广泛, 特别是在处理和解析海量数据方面, 其强大的能力为许多科学研究带来了突破。在中医药研究中, AI通过其卓越的学习和数据处理能力, 在提升研究的系统性、高效性和准确性方面展现出显著优势。中医药作为具有悠久历史和丰富理论体系的学科, 其研究过程中需要整合大量复杂的信息, 而AI的引入则为此提供了重要支持。AI技术尤其是机器学习(machine learning, ML) 和深度学习(deep learning, DL) 技术, 可以解析复杂的生物和化学数据, 推动中药药理学的新发现。通过这些技术, 研究者能够系统分析中药成分的多靶点机制, 并优化配方疗效。AI与多组学数据结合, 以及在细胞表型分析中的应用, 有助于精准识别药物靶点并探索新机制。此外, 融合AI的网络药理学整合实验、计算和临床数据, 解析药物多靶点机制, 增强中药配方疗效。AI加速了活性化合物靶点识别及效果分析。大语言模型的发展也在中医药知识图谱构建和文献分析中发挥重要作用, 利用自然语言处理技术, 从海量文献中提取有价值信息, 构建系统知识结构。AI技术的引入推动了中医药研究的现代化, 还在国际化和精准医疗的发展中发挥着关键作用。AI技术不仅提升了中医药研究的整体水平, 还为多学科的交叉合作与创新提供了坚实的基础。在未来的发展中, 随着AI技术的不断进步, 可以预见中医药将在全球范围内发挥更大的作用。这一过程不仅是中医药现代化的重要标志, 更是科学与传统智慧结合的体现, 必将推动整个医学领域的进步和发展。

结直肠癌是威胁世界人民生命健康的主要癌种, 随着现代医学模式的转变, 以中药为代表的多靶点治疗策略已成为结直肠癌治疗的新研究方向。对于中药的研究, 除了本着还原论的思想解构中药成分靶点外, 更应注重中医药基础理论中的整体观念, 从整体上分析和理解中药治疗的作用机制。中药复方是单味药的集合, 单味药又由多种中药单体构成, 从不同层次去看待中药, 将不同单味药、不同单体看作整体, 有助于研究者更好地理解中药与中医。中药具有多靶点的特点, 除了直接作用于肿瘤细胞本身外, 还可以影响肠道菌群, 改善肿瘤微环境, 从整体上调节肿瘤患者的身体机能, 全方位多维度地治疗肿瘤, 全面改善患者的健康状况。本综述旨在从中药复方、单味药和中药单体3个层面出发, 基于临床试验和临床前研究成果, 系统性地阐述中药在结直肠癌治疗中的疗效及多靶点作用机制。同时, 本文将结合系统生物学与中医整体观, 对中药治疗结直肠癌的相关研究进行深入分析。

具有异戊烯基取代的芳香族天然产物(prenylated aromatic natural products, PANPs) 广泛存在于自然界中。由于核心骨架的变化(香豆素、木脂素、苯甲酸/苯甲醇、黄酮、氧杂蒽酮、蒽醌和芳香生物碱等) 以及异戊烯基的类型、取代位置和是否环合的差别, PANPs展现出丰富的结构多样性。多样的结构也赋予了PANPs多样的活性, 例如抗菌、抗氧化、抗肿瘤和消炎镇痛等作用。因此, PANPs具有很好的药物开发价值。对于当归、前胡及补骨脂等中药材, PANPs是其重要的药效物质。值得注意的是, 异戊烯基往往是关键药效团。根据亲缘关系以及结构特征, PANPs生物合成途径中的芳香族异戊烯基转移酶(aromatic prenyltransferases, aPTs) 可分为膜结合(membrane-bound) aPTs (UbiA型)、具有PT桶状(PT barrel) 结构的可溶性aPTs (ABBA型和DMATS型) 以及类似萜合酶的aPTs。本文综述了近10年发现的94个不同类型的aPTs, 重点总结了它们的底物选择性、区域选择性、进化关系及结构特征, 为新颖aPTs的发现、改造, 以及活性PANPs的结构修饰和生物制造提供思路。

松萝胺A (usenamine A, UA) 为本课题组从中药长松萝中分离得到的一个二苯并呋喃类化合物, 前期研究显示UA具有良好的体内外抗肝癌活性, 且其能够诱导人肝癌细胞凋亡和自噬, 本研究对其抗肝癌分子作用机制进行了进一步探究。基于前期基因芯片检测数据提示以及实时荧光定量PCR和免疫印迹法结果显示, UA能够抑制人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞中polo样激酶1 (polo-like kinase 1, PLK1) 的表达。PLK1抑制剂BI 6727给药能够显著削弱UA对人肝癌细胞活力的抑制作用。利用RNA干扰技术敲低PLK1的表达能够显著抑制人肝癌细胞的增殖能力, 而且敲低PLK1能够削弱UA对人肝癌细胞活力的抑制作用。此外, 敲低PLK1表达能够明显上调人肝癌细胞的凋亡率, 而且可以显著削弱UA对人肝癌细胞的凋亡诱导作用。借助自噬抑制剂3-MA抑制自噬能够削弱UA对人肝癌细胞的增殖抑制作用。借助PLK1抑制剂BI 6727或RNA干扰技术, 本课题组还发现在人肝癌细胞中PLK1能够负向调节自噬, 而且抑制PLK1能够削弱UA对人肝癌细胞自噬的诱导作用。因此, PLK1在UA抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡中发挥了重要作用, 而且UA能够通过抑制PLK1激活自噬, 进而发挥抑制人肝癌细胞生长的作用。

阿江榄仁酸(arjunic acid, AR) 是从橡子中提取的一个主要的三萜类活性成分, 具有显著的抗炎活性, 但其机制并没有被报道。本研究利用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导的RAW264.7细胞炎症模型探究了AR的抗炎活性, 并通过网络药理学预测了AR治疗炎症相关疾病的潜在靶标和通路。进一步利用Griess试剂法、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、qRT-PCR和Western blot检测了促炎因子和促炎介质的表达, 并同时测定了NF-κB、MAPK、Nrf2/HO-1、PI3K/Akt/mTOR和自噬通路相关蛋白的表达。结果显示, 在LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型中, AR抑制了一氧化氮、炎症因子和炎症介质的表达, 抑制了NF-κB蛋白的磷酸化和核转录, 并降低了JNK和ERK的磷酸化水平。AR通过下调Keap1蛋白激活Nrf2/HO-1通路并抑制活性氧的产生发挥抗炎活性。此外, AR还通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路活化了自噬流。综上所述, AR是一种潜在的治疗炎症相关疾病的天然产物。

急性肾损伤(acute kidney injury, AKI) 是一种常见的临床综合征, 其特征为肾功能骤然恶化。柚皮苷(naringin) 是一种广泛存在于芸香科的天然黄酮类化合物, 有报道显示其对肾损伤具有保护作用, 但作用机制尚未完全阐明。本研究在体内单次腹腔注射20 mg·kg^-1顺铂建立小鼠AKI模型, 体外通过顺铂诱导肾小管上皮细胞(human kidney-2, HK-2) 损伤。试剂盒检测小鼠血清尿素氮(blood urea nitrogen, BUN) 和肌酐(creatinine, Cre) 水平。H&E及PAS染色观察各组小鼠肾组织病理学改变。ELISA检测小鼠血清中白细胞介素6 (interleukin 6, IL-6) 和肿瘤坏死因子α (tumour necrosis factor-α, TNF-α) 水平。显微镜观察HK-2细胞形态变化。试剂盒检测HK-2细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS) 水平。Western blot检测肾组织和HK-2细胞中p-MAPK/MAPK、p-JNK/JNK、p-ERK/ERK、p-NF-κB/NF-κB、p-IκBα/IκBα、IL-6及TNF-α蛋白表达水平。结果显示, 与对照组相比, 模型组小鼠血清BUN、Cre、IL-6及TNF-α水平升高, 肾组织结构遭到破坏, 而柚皮苷可明显改善上述病理变化。此外, 柚皮苷显著减少了顺铂诱导的HK-2细胞ROS的产生。Western blot结果显示柚皮苷在体内外均显著减少了p-MAPK、p-JNK、p-ERK、p-NF-κB、p-IκBα、IL-6及TNF-α蛋白表达水平。综上, 柚皮苷可能通过抑制MAPK/NF-κB通路活化和减少ROS的产生, 进而改善顺铂诱导的AKI。所有动物实验均经过湖北中医药大学动物管理与使用委员会的审查批准(批准号: HUCMS202204001)。

本研究旨在探究补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction, BYHWD) 通过抑制焦亡缓解脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury, CIRI) 的作用机制及有效成分。首先通过网络药理学分析预测BYHWD治疗CIRI的关键成分及靶点, 并通过Autodock软件和Pymol软件进行分子对接, 再通过体内外实验验证BYHWD及相关有效成分的作用。体内利用小鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO) 建立模型, 评估不同条件下小鼠神经功能; 体外利用小鼠脑组织星形胶质细胞, 建立氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R) 模型, 并利用分子生物学实验, 验证预测的关键靶点。发现BYHWD的主要成分为黄芩素、β-谷甾醇, 通过分析BYHWD与CIRI疾病相关基因以及焦亡相关基因, 交集的基因共20个, 结合分子对接结合能, 选取其中TP53和TNF关键核心靶点进行后续验证。分子实验明确BYHWD可有效减轻损伤, 并降低P53的表达。上述结果提示, 补阳还五汤主要活性成分黄芩素、β-谷甾醇等通过TNF和TP53等靶点抑制焦亡, 发挥保护CIRI的作用。本实验已由浙江省中医药研究院实验动物福利伦理委员会批准(批准号: KTSC2020037、KTSC2023030)。

为了探究补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction, BHD) 抗缺血性脑卒中(ischemic stroke, IS) 药效作用及机制, 本研究建立了大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R) 大鼠模型, 初步评价了BHD在MCAO/R动物模型中的抗IS药效作用, 然后将补阳还五汤的活性成分与FDA批准临床治疗IS的药物进行无监督聚类, 并结合网络药理学预测活性成分的作用机制, 最后建立脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导的BV-2细胞模型, 采用Griess法和MTT法对BHD成分的抗炎活性及对细胞存活率的影响进行分析。结果显示, BHD能显著改善MCAO/R大鼠的神经功能评分, 延长转棒停留时间, 降低脑梗死体积及脑含水量, 无监督聚类算法筛选得到BHD发挥药效的活性成分共7个, 结合网络药理学预测分析活性成分的作用机制可能与炎症相关, 使用LPS诱导BV-2细胞模型验证BHD活性成分的抗炎药效, 并通过建立液相色谱-质谱联用法(LC-MS) 考察不同活性成分在BHD中的含量。综上所述, 本研究明确了补阳还五汤治疗IS的关键活性成分及其潜在的药效机制, 对传统中药的现代化研究具有重要意义。所有动物实验均通过东北大学生物与医学伦理委员会审核批准(批准号: NEU-EC-2023A052S)。

本研究旨在探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide, ASP) 作为潜在疫苗佐剂对巨噬细胞RAW264.7免疫激活作用及其释放细胞因子的影响, 同时阐明其潜在的信号通路作用机制。采用细胞计数试剂(cell counting kit-8, CCK-8) 法检测细胞活力, 流式细胞术检测5个浓度梯度的ASP对RAW264.7细胞表面分子白细胞分化抗原(cluster of differentiation, CD) 80、CD86和主要组织相容性复合物Ⅱ (major histocompatibility complex Ⅱ, MHC Ⅱ) 表达的影响, ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 等细胞因子的含量; quantitative polymerase chain reaction (qPCR) 检测Toll样受体4 (Toll-like receptor 4, TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88, MyD88)、TNF受体相关因子6 (TNF receptor associated factor 6, TRAF6)、核因子κB (nuclear factor kappa-B, NF-κB) 信号通路的mRNA表达水平, Western blot检测TRAF6、IκB激酶(IκB kinase, IKK) 和p65蛋白磷酸化水平。结果显示, 不同浓度的ASP对RAW264.7无细胞毒性。ASP均能浓度依赖性地促进RAW264.7细胞表面分子CD80、CD86和MHC Ⅱ的表达上调(P < 0.05)。不同浓度的ASP组均使得IL-6和TNF-α等的分泌水平有显著的提升(P < 0.05), 且在一定范围内存在量-效关系。qPCR结果显示, 不同浓度的ASP均使得TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB的mRNA表达水平上调。不同浓度的ASP均能提高TRAF6、p-IKK和p-p65的表达水平。TLR4受体抑制剂TAK-242能显著降低ASP诱导的细胞因子分泌量(P < 0.05)。本研究揭示了ASP可通过TLR4等信号通路显著增强共刺激分子和细胞因子的表达, 显示出作为疫苗佐剂的潜力。

采用硅胶柱色谱、LH-20葡聚糖凝胶柱色谱及半制备液相等色谱分离技术, 从云南野独活(Miliusa tenuistipitata W. T. Wang) 枝叶的95%乙醇提取物中分离得到20个化合物。通过多种现代波谱学方法鉴定化合物结构, 分别为tenuistone L (1)、tenuistone K (2)、樱花素(3)、藿香黄酮醇(4)、雷杜辛黄酮醇(5)、垂叶黄素(6)、蔓荆子黄素(7)、3, 7-二甲氧基-5, 3′, 4′-三羟基黄酮(8)、泽兰黄醇(9)、(+) -miliusol (10)、miliusane XIX (11)、miliusane XVIII (12)、miliusolide (13)、19, 20-dihydromiliusolide (14)、debilisone C (15)、goniothalamusin (16)、2, 10-dihydroxy-3, 9-dimethoxy-8-oxo-protoberberine (17)、consanguine B (18)、6-羟基豆甾-4, 22-二烯-3-酮(19) 和6-羟基豆甾-4-烯-3-酮(20), 其中化合物1和2为新化合物, 化合物6、9、18和20为首次从番荔枝科植物中分离得到, 化合物5、7、17和19为首次从野独活属植物中分离得到。采用MTT法进行抗肿瘤活性测试, 结果发现化合物10和11可以显著抑制MDA-MB-231和BT-549细胞增殖, 其半数抑制浓度(IC₅₀) 为0.98~4.85 μmol·L^-1。

本研究运用非靶向代谢组学结合16S rRNA高通量测序技术筛选栀子苷潜在的肠道菌群介导的抗抑郁活性效应物质。首先采用慢性不可预见性温和刺激(chronic unpredictable mild stimulation, CUMS) 联合孤养方式构建大鼠抑郁模型。再利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q/TOF-MS) 技术, 对大鼠盲肠内容物进行非靶向代谢组学分析, 筛选其差异代谢物。通过16S rRNA高通量测序找出盲肠内容物中差异显著的菌属, 然后对差异代谢物与肠道菌属进行相关分析。对比正常对照组、抑郁模型组以及栀子苷治疗组的代谢轮廓, 发现与正常组相比, 模型组中有147种代谢物下调, 381种代谢物上调; 与模型组相比, 栀子苷治疗组中212种代谢物上调, 288种代谢物下调。然后结合差异倍数(fold change, FC) > 2、P < 0.05及变量投影重要性(variable importance in the projection, VIP) > 1的筛选条件、二级图谱及数据库比对, 最终确定55种在三组之间差异显著的代谢物。代谢通路富集分析结果显示, 筛选的差异代谢物主要涉及5条代谢途径, 包括色氨酸代谢、精氨酸生物合成、苯丙氨酸与酪氨酸及色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢和精氨酸与脯氨酸的代谢。16S rRNA测序结果, 进一步揭示了栀子苷可能通过影响肠道菌群介导的色氨酸代谢途径发挥抗抑郁作用, 为肠-脑轴在抑郁症的治疗策略的研究提供了新的依据。所有动物实验经海军军医大学生物医学研究伦理委员会批准。

铂类配合物, 尤其是二价铂[platinum(Ⅱ), Pt(Ⅱ)] 化合物, 已经成为治疗恶性肿瘤的经典化疗方案。由于其稳定性不足、容易诱发获得性耐药和强烈的细胞毒性, 限制了其在临床中的广泛应用。尽管干扰程序性死亡蛋白1 (programmed cell death protein 1, PD-1)/程序性死亡配体1 (programmed cell death protein 1, PD-1) 相互作用的抗体与铂类配合物联合免疫疗法在抗癌治疗中取得了显著的临床进展, 但其高效性往往伴随显著的毒性和免疫相关不良反应, 限制了其长期应用。相比之下, 四价铂[platinum(Ⅳ), Pt(Ⅳ)] 配合物凭借其独特的八面体几何结构, 展现出较好的抗癌潜力。通过修饰其轴向配体, Pt(Ⅳ) 配合物不仅具有更高的惰性和更好的肿瘤选择性, 还能够在靶向肿瘤微环境时以特定方式释放轴向配体。这一机制赋予其克服耐药性、减少毒性并增强免疫系统激活的能力, 使其成为当下抗癌领域的研究热点。更重要的是, Pt(Ⅳ) 配合物能够通过多种途径实现抗肿瘤效果, 包括通过触发DNA损伤诱导肿瘤细胞发生凋亡、自噬和铁死亡。该多重作用机制不仅增强了抗肿瘤效力, 还显著减少了传统铂类配合物的不良反应。本文总结了铂类配合物, 特别是Pt(Ⅳ) 配合物在化疗-免疫联合治疗中的抗肿瘤作用机制, 探讨了其在抗肿瘤治疗中的潜力, 为开发高效、低毒、靶向性强的Pt(Ⅳ) 配合物提供了理论支持。

瞬时受体电位香草酸(TRPV) 作为一类重要的非选择性阳离子通道, 与多种生理和病理过程密切相关。辛味是中药五味学说中的重要性味之一, 具有解表、行气、活血等作用, 主治病证多样。现代研究表明, 众多辛味中药中的活性成分具有调节TRPV离子通道的功能。本文旨在从TRPV通道的生物学特性, 辛味中药现代研究进程及其在炎症、疼痛等病理过程中的作用机制来探讨基于TRPV通道的辛味中药药理作用研究进展, 以期揭示辛味中药的科学内涵, 亦为中药药性的现代研究提供新的研究思路和模式。

结直肠癌(colorectal cancer, CRC) 是消化系统常见的恶性肿瘤之一, 具有较高的发病率和病死率。复发转移是结直肠癌患者死亡的最根本原因。目前, 结直肠癌主要采取手术治疗、术后放化疗及免疫治疗等方式。然而, 这些治疗方式所伴随的不良反应以及较高的复发转移率, 给患者造成了沉重的身心负担, 严重影响了患者的生活质量。大量的临床与实验研究表明, 中药能缓解结直肠癌患者临床症状、缓解患者的痛苦、减轻放化疗所带来的不良反应、提高其生活质量、预防结直肠癌根治术后的复发和转移、延长患者生存期、提高患者生存率等。本文将从中医药防治结直肠癌的中医理论、中医药防治结直肠癌复发转移的优势以及中医药可通过调节肠道菌群防治结直肠癌3个方面进行如下综述。

雷西莫特(resiquimod, R848) 属于咪唑喹啉类小分子化合物, 是Toll样受体(Toll-like receptor, TLR) 7/8的高效激动剂。R848有很强的免疫激动活性, 可以激发多种免疫细胞, 调节天然免疫和适应性免疫, 是一种极具潜力的免疫佐剂。近年来, 研究发现R848自身对多种肿瘤具有直接的抗肿瘤疗效, 同时还可与化疗、光热治疗等联用表现出良好的协同作用, 因此备受广大研究者关注。然而R848没有肿瘤靶向性, 大剂量重复给药可产生全身炎症和自身免疫反应, 限制了其临床应用。而纳米给药系统可能是解决这些问题的有效途径, 包括脂质体、聚合物纳米粒、生物载体、包合物、有机金属骨架和无机纳米材料, 以及基于R848前药或R848衍生物的纳米给药系统。本文对R848的理化性质、免疫调控机制、纳米给药系统进行综述, 以期为R848的抗肿瘤研究发展及新药开发提供参考和支持。

皮肤创伤和慢性疾病引起的伤口, 往往因感染而使得愈合过程变得复杂和困难。在此种情况下, 伤口的愈合不仅是一个漫长持续的过程, 而且易产生疤痕性修复。常规的敷料及抗生素治疗存在药物递送效率低下及药物系统毒性的问题。近年来, 微针技术在减轻感染和促进伤口愈合方面得到了广泛的应用。微针不仅可以穿破皮肤角质层及生物被膜增强药物给药效率、减轻药物不良反应, 而且可以与多种材料结合实现对伤口的多重治疗及监测。本文将讨论感染伤口愈合机制、微针的分类以及它们在感染性伤口治疗中的应用。

植物来源的细胞外囊泡(plant-derived extracellular vesicles, PDEVs) 是由植物细胞分泌的具有脂质双分子层结构的纳米级囊泡, 具有安全性高、稳定性好、易于修饰等优势, 是良好的药物载体。作为一种新兴药物递送载体, PDEVs越来越受到人们的关注。本文综述了PDEVs的制备、表征、工程改造、药物装载方式和PDEVs作为药物载体应用及优势的最新研究进展, 展望了PDEVs应用于药物载体的未来发展方向。

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC) 是肺癌的主要病理类型, 奥希替尼作为第三代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKI) 靶向药物, 能有效延长EGFR突变NSCLC患者的无进展生存期。然而, 耐药性限制了奥希替尼的疗效, 而中医药能有效延缓EGFR-TKIs的耐药性。本研究以葫芦素B (cucurbitacin B, CuB) 为研究对象, 通过细胞活力检测和细胞迁移、侵袭实验分析葫芦素B在奥希替尼耐药NSCLC细胞中的药效作用; 使用公共数据库筛选葫芦素B在奥希替尼耐药NSCLC细胞中的潜在靶点, 并通过分子对接、细胞热位移实验(cellular thermal shift assay, CETSA) 和微量热泳动实验(microscale thermophoresis, MST) 验证葫芦素B与潜在靶点之间的相互作用; 免疫印迹实验检测葫芦素B对靶点下游信号通路的影响。结果显示, 葫芦素B能显著降低奥希替尼耐药NSCLC细胞的生长活力, 抑制细胞的迁移和侵袭能力; 机制上, 葫芦素B通过结合AXL进而抑制其下游细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK) 和蛋白激酶B (protein kinase B, AKT) 的激活。综上所述, 葫芦素B具有缓解NSCLC奥希替尼治疗抵抗的潜在作用, 其可通过下调AXL-ERK/AKT轴的异常激活, 抑制耐药细胞的迁移、侵袭。本研究为葫芦素B治疗NSCLC奥希替尼靶向耐药提供了临床前体外药效的依据, 也为临床联合用药开发提供了理论支持。

本研究主要探究程序性死亡配体1/转化生长因子β (PD-L1/TGF-β) 双抗药物在huHSC-NCG小鼠脑原位移植人脑胶质瘤细胞U251-luciferase荷瘤模型中的抗肿瘤作用[本实验所有动物实验均获得集萃药康实验动物伦理委员会批准, 伦理审查编号: GPTAP20230706-3]。体外采用流式细胞术检测PD-L1/TGF-β双抗药物与U251细胞表面PD-L1靶点的抗体抗原结合活性。通过人源化免疫系统的小鼠脑胶质瘤原位模型评价PD-L1/TGF-β双抗药物体内药效。小动物活体成像和脑组织重量(含肿瘤组织) 结果表明, PD-L1/TGF-β双抗药对原位脑胶质瘤的生长有抑制作用。脑组织中药物含量(ELISA法) 和药物分布(免疫组化法) 结果表明, PD-L1/TGF-β双抗药物能够进入脑胶质瘤内部发挥免疫检查点的功能, 从而对脑胶质瘤发挥抑制作用。小鼠脑组织的免疫荧光染色结果表明, 药物激活了免疫系统, 与免疫系统存在协同抗肿瘤效应。本研究结果表明, PD-L1/TGF-β双抗药物在小鼠脑原位人脑胶质瘤模型中透过血肿瘤屏障(BTB), 因此表现出较强抑瘤作用。综上所述, PD-L1/TGF-β双抗药物对人脑胶质瘤的抑制作用为人脑胶质瘤的治疗提供新策略。

阻断程序性死亡受体1/程序性死亡配体1 (programmed cell death protein 1/programmed cell death ligand 1, PD-1/PD-L1) 为代表的肿瘤免疫疗法在肺癌治疗上获得较好的治疗效果, 研发小分子药物阻断PD-1/PD-L1为肺癌免疫疗法提供新策略。本研究应用体外细胞模型探讨了黄芩苷(baicalin) 对A549肺癌细胞PD-L1的表达调控及作用机制。利用CCK8实验检测黄芩苷对A549细胞活力影响; Western blot检测A549细胞PD-L1蛋白的表达情况; 利用凋亡、自噬等小分子抑制剂挖掘黄芩苷细胞毒性的机制及其对PD-L1蛋白表达的相关性; 透射电子显微镜下观察黄芩苷处理A549细胞后自噬囊泡的形成; 荧光显微镜下观察A549给药黄芩苷后酸性自噬泡的改变。CCK8实验结果显示, 黄芩苷(12.5~400 μmol·L^-1) 可呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖; 经干扰素-γ (interferon-γ, IFN-γ) 干扰后PD-L1蛋白表达的升高可随黄芩苷浓度的增加而降低; 另一方面, 自噬抑制剂wortmannin和chloroquine处理可回调黄芩苷引起的细胞毒性, 透射电子显微镜及荧光显微镜下观察黄芩苷处理A549细胞后自噬囊泡数量增加, Western blot结果显示, 黄芩苷可促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和beclin-1的表达; wortmannin干预后, 黄芩苷引起的A549细胞酸性自噬泡数量减弱, 自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达受到抑制, 对PD-L1的抑制作用得到回调。上述结果表明, 黄芩苷可能通过激活A549细胞中自噬蛋白LC3降低PD-L1的表达发挥抗肿瘤作用。本研究为黄芩苷开发为PD-1/PD-L1信号通路小分子阻断剂奠定了基础。

采用多种色谱分离技术(硅胶柱色谱、MCI柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等) 对木樨科(Oleaceae) 连翘属植物连翘(Forsythia suspensa) 的果实进行化学成分研究。从其95%乙醇提取部分中分离得到14个萜类化合物, 并通过MS、1D-和2D-NMR等波谱手段和量子化学计算方法进行了结构鉴定: 半日花烷型二萜(1~6)、克罗烷型二萜(7)、降半日花烷型二萜(8)、降克罗烷型二萜(9)、齐墩果烷型三萜(10)、乌苏烷型三萜(11, 12)、羽扇豆烷型三萜(13, 14)。其中化合物1为新化合物, 化合物3~9、11和12为首次从中药连翘中分离得到。评价了这些化合物对脂多糖(LPS) 诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7产生一氧化氮(NO) 的抑制作用, 结果显示这些化合物均未表现出明显的抑制活性。

本文建立了一种筛选阿达木单抗(adalimumab, ADM) 特异性结合肽的噬菌体展示方法, 为ADM的临床研究提供特异性识别元件, 并基于该多肽成功建立用于临床检测ADM的间接酶联免疫吸附分析方法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay, i-ELISA)。以ADM为靶分子, 利用M13噬菌体线性十二肽库展示技术, 进行五轮多肽淘选。通过对每一轮洗脱液的滴度进行测定发现, 回收率从7.28×10^-6提高到1.55×10^-3, 表明洗脱液中与ADM结合的多肽在不断富集, 且富集效果较好; 对第五轮筛选扩增液进行测序, 结果发现有5条多肽序列出现频次较高, 被认为是潜在能够与ADM特异性结合的多肽, 并进行固相合成; 分别通过表面等离子体共振技术(surface plasmon resonance, SPR) 和ELISA实验验证并鉴定了5条多肽序列与ADM的特异性结合能力, 结果表明第一条多肽序列(Pep1) 和第二条多肽序列(Pep2) 与ADM呈现特异性结合, 亲和力常数(K_D) 分别为7.91×10^-5和1.67×10^-5 mol·L^-1, 而其中Pep1与ADM同型抗体人免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG) 的亲和力常数为1.35×10^-4 mol·L^-1, 比与ADM的亲和力常数低1个数量级, 由此可判定Pep1为ADM的特异性结合肽。基于Pep1成功建立了抗体药物ADM间接ELISA分析方法。随着ADM浓度的不断增加OD₄₅₀值呈规律性变化, 该方法可用于临床ADM血药浓度的监测。本研究获得能够与ADM特异性结合的多肽, 该多肽序列可作为ADM的特异性识别元件, 不仅实现ADM的血药浓度监测, 也可为ADM体内外精确定性定量提供了有效工具, 同时为其他单克隆抗体药物识别元件的发现提供了新的策略和思路。

通过超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱技术(UPLC-Q-TOF/MS^E) 对肝豆扶木汤的化学成分进行分析鉴定; 采用ZORBAX RRHD Eclipse Plus C₁₈色谱柱(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm), 以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱, 流速为0.2 mL·min^-1, 柱温35 ℃。质谱分析采用电喷雾电离源(ESI) 的方式, 在正、负离子模式下, 通过UPLC-Q-TOF/MS^E分析鉴定肝豆扶木汤的化学成分。共鉴定出102种化合物, 其中黄酮类成分26个, 萜类成分22个, 皂苷类成分19个, 苯丙素类成分10个和其他类成分25个。本研究所建立的定性分析方法能快速、高效地对肝豆扶木汤的化学成分进行分析鉴定, 为肝豆扶木汤的质量评价和临床应用提供了科学依据。

为探索基于Nb2-11细胞增殖的重组人生长激素(rhGH) 体外生物学活性测定方法的标准化, 本研究首先检测了2批rhGH原液, 3批注射用rhGH和24批rhGH注射液的生物学活性, 初步制订了实验有效标准。进一步按照《中华人民共和国药典》2020年版通则9401进行方法学验证。随后联合7家实验室采用本方法测定来自4家不同生产企业的6批制剂及2批原液的体外生物学活性, 分别对实验室间一致性, 实验室内和实验室间精密度进行了研究。用本方法和体内动物法分别检测28批rhGH原液, 进行体内外结果一致性研究。最后检测多批不同效期rhGH样品, 进行标准限度研究。联合验证结果表明, 本方法具有良好的实验室内及实验室间重现性, 拟订实验有效标准通过率为100%。本方法与体内动物法检测结果具有良好的一致性。动物实验获得中国食品药品检定研究院实验动物福利伦理委员会批准[批准号: 中检动(福) 第2024 (B) 004号]。本方法适用于国内外不同生产厂家的rhGH原液与制剂, 可作为测定rhGH类产品生物学活性的标准化方法替代体内动物法应用于rhGH的质量控制和放行检验。

建立了UHPLC-MS/MS测定山羊角中53种禁用兽药残留的检测方法, 包括16种镇静剂类、14种β-受体激动剂类、氯霉素、4种氟喹诺酮类、7种硝基咪唑类、3种喹噁啉类化合物、8种其他类化合物。采用盐析辅助液液萃取样品, Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(1.8 μm, 3.0 mm × 150 mm, Agilent), 以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相, 梯度洗脱, 在电喷雾离子化正负离子模式下, 以多反应监测方式(MRM) 检测。53种待测物在各自浓度范围内均成良好线性关系, 相关系数均在0.99以上; 三水平平均加样回收率为70.4%~118.7%, 相对标准偏差(RSD) 为0.69%~12.07%, 检出限为0.1~50 μg·kg^-1, 定量限为0.2~100 μg·kg^-1。本方法已应用于实际样品的测定。

临界相对湿度(critical relative humidity, CRH) 是衡量固体药物吸湿性的重要指标, 水溶性药物在CRH下吸湿激增的内在机制尚不完全清楚, 作者对此展开了探索。首先, 通过模型片剂吸湿法和传统的粉末吸湿法分别测定药物的CRH值, 并确定两种方法的等效性, 采用电导率仪检测不同相对湿度条件下药物模型片剂的电导率; 然后, 基于无水硫酸铜吸水后由灰白变蓝的特性, 遂以之作为模型药物并测定其CRH值, 将之压片后置于不同相对湿度条件下并拍照记录液膜的形成过程。综合电导率及颜色变化推测吸湿平衡曲线出现拐点的可能原因。结果测得蔗糖粉末和片剂的CRH分别为85.05%和85.01%, 柠檬酸钠粉末和片剂的CRH分别为77.14%和76.93%, 双侧t检验结果显示两种方法等效。柠檬酸钠在75%相对湿度条件下电导率变化较小, 而在79%相对湿度条件下电导率突变, 蔗糖与无水硫酸铜呈现出类似趋势。同时成功记录了无水硫酸铜在吸湿中蓝色从离散色点到连续的变化过程。综上, 初步推测水溶性药物在CRH处吸湿剧增的机制可能是药物表面在吸湿过程中形成了一层连续“液膜”。

本文旨在制备黄体酮压敏胶贴剂与微针组合制剂, 优化处方, 并考察其药物释放量。采用HPLC检测制剂中黄体酮含量, 通过单因素实验和正交实验, 以感官评价、黏附性、累积释放量、累积渗透量等为评价指标, 优选出贴剂最佳处方, 并用3D打印方法制备3种不同针高的微针, 将贴剂与微针组合测定其累积渗透量, 并与单纯贴剂进行对比。正交实验结果表明, 贴剂最优处方为Duro-Tak 87-2677压敏胶(87.5%)、柠檬酸三丁酯(2%)、肉豆蔻酸异丙酯(5%)、二丁基羟基甲苯(0.5%), 黄体酮含量(5%)。工艺验证结果表明, 按照优化处方制备的贴剂成形性、黏附性良好。在经皮渗透试验中, 24 h时空白组的累积渗透量为52.35 ± 7.88 μg·cm^-2, 处方贴剂的累积渗透量为200.17 ± 6.15 μg·cm^-2, 与500、750、1 000 μm微针组合贴剂的累积渗透量分别为226.01 ± 7.46、278.78 ± 6.59、422.95 ± 16.81 μg·cm^-2。动物实验经新疆医科大学实验动物伦理委员会批准(伦理批号: IACUC-20220725-8)。通过单因素实验和正交实验, 筛选出最优贴剂处方, 且贴剂与微针组合制剂的透皮渗透效果比单用更好, 能有效增加了药物体外经皮渗透。以上研究为黄体酮透皮贴剂的应用提供了理论依据。

HIV-1衣壳蛋白(HIV-1 capsid protein, CA) 是寻找抗病毒药物的有效靶点。靶向HIV-1 CA C端结构域(C-terminal domain of HIV-1 CA, CA CTD) 中的CAI (capsid assembly inhibitor peptide) 结合口袋可用来筛选CA蛋白抑制剂。本研究基于均相时间分辨荧光技术发现小分子化合物苏拉明(suramin) 通过结合到该口袋靶向HIV-1 CA, 其抑制CA CTD-CAI相互作用的半数抑制浓度(IC₅₀) 值为2.1 μmol·L^-1。生物膜干涉法(bio-layer interferometry, BLI) 实验表明, 苏拉明直接与CA蛋白结合, 且与CA蛋白六聚体的结合亲和力(K_D = 248 nmol·L^-1) 高于与CA单体的结合亲和力(K_D = 227 μmol·L^-1)。此外, CA蛋白体外组装实验表明苏拉明促进了CA蛋白的无序多聚化。分子模拟结合模式分析结果显示, 苏拉明通过N57、Q63、Q67和Y169残基结合到CA六聚体中相邻CA单体之间的界面上, 起到增强CA蛋白多聚化的作用。综上所述, 苏拉明是一种靶向CA六聚体的CA蛋白抑制剂, 可作为发现新型CA抑制剂的起点。

根腐病是桔梗种植过程中主要的根部病害之一, 筛选对根腐病具有拮抗作用的生防菌株, 可为绿色防控桔梗病害提供优质的菌种资源。本研究采用高通量分菌技术分离并纯化了桔梗根系的内生细菌, 通过平板对峙培养法筛选出根腐病拮抗菌株R34B7, 平板对峙抑菌率为52.18%; 结合形态学特征、生理生化特性以及分子鉴定结果, 确定拮抗内生细菌R34B7菌株为普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica); 使用桔梗组培苗接种评价其对桔梗根腐病的防治效果, 发现菌株R34B7对桔梗根腐病的防效为44.44%, 同时其发酵上清液对病原菌菌丝生长和孢子萌发具有明显抑制作用; 通过检测拮抗菌株R34B7胞外水解酶和促生指标, 发现该菌株具备产生蛋白质酶、几丁质酶、固氮、解磷、合成铁载体和吲哚乙酸的能力, 具有潜在促生作用。本文筛选出的桔梗拮抗菌R34B7展现出良好的根腐病生防活性, 具有深入开发和利用的广阔前景。