2024年新药研发持续发力, 首创性药物的上市数量再创新高。美国FDA药物评价和研究中心在过去一年里共计批准了50款新药, 其中包括30款小分子药物及20款大分子药物。新药总数相比2023年的55款略有下降, 但首创性药物占比明显增加。本年度获批24款首创性药物(48%), 涵盖13款小分子首创性药物和11款大分子首创药物, 多数集中于肿瘤、内分泌及代谢疾病领域。其中, 多个首创性小分子药物具有突破性的临床价值, 例如首个M1/M4毒蕈碱受体激动剂/外周毒蕈碱受体拮抗剂呫诺美林/曲司氯铵, 首个甲状腺素受体β亚型激动剂瑞司美替罗, 首个用于高血压治疗的内皮素受体A及内皮素受体B受体双重拮抗剂阿普昔腾坦等。首创性药物具有巨大的临床价值、学术价值及商业价值, 受到来自患者、研究人员及企业的广泛关注。本文通过药物化学角度浅析本年度3个代表性首创性小分子药物的研发背景、研发过程和治疗应用, 以期为首创性药物的研发提供更多的研究方向与方法。

外泌体是一种由细胞分泌的含有核酸和蛋白质等重要生物活性分子的小囊泡。越来越多的研究表明, 外泌体作为信号分子载体在各种疾病中具有独特和关键的作用, 并且在疾病诊断和治疗方面展现出巨大潜力。最近研究表明外泌体在免疫调控中发挥着重要作用。NOD (nucleotide binding oligomerization domain) 样受体家族3 (NOD-like receptor protein 3, NLRP3) 炎症小体是固有免疫系统的重要组成部分, 在自身免疫性疾病、代谢性疾病及神经退行性疾病等多种疾病的发生、发展中发挥关键作用, 其激活和调控机制复杂多样。然而, 外泌体和NLRP3炎症小体相关的调控机制尚未完全阐明。本文综述了不同来源的外泌体对NLRP3炎症小体的调控作用, 并总结了外泌体在NLRP3炎症小体相关疾病的治疗潜力, 以期为NLRP3炎症小体相关疾病的防治提供新思路。

核药是核医学的灵魂, 靶向配体发现是核药研创的核心。多肽核药在临床实践中展示出了显著的优势, 在已获批靶向核药中占据重要地位。作为核药配体的新锐力量, 双环肽开发技术近年来发展迅速, 其相较于传统多肽配体优势明显, 具有重要的临床转化潜力。该文总结了双环肽配体的获取方式, 概述了双环肽核药的主要临床和临床前研究进展, 对双环肽靶向核药的未来发展方向做出展望。以期为药学和核医学从业者了解多肽核药前沿提供参考。

呼吸道感染与其他呼吸系统疾病如哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺病、肺癌均可采用疫苗进行预防。呼吸道感染用疫苗大多通过肌肉注射方式接种, 诱导产生血清IgG, 中和血液中的病毒。然而肌肉组织中缺乏分泌型IgA和IgG, 肌肉注射疫苗难以快速提供呼吸道保护。鼻腔或雾化吸入疫苗开始受到关注, 已被证实吸入疫苗以远低于注射疫苗的剂量诱导出相近的抗体反应, 部分产品已经获批。除了剂量大大降低, 吸入疫苗的优势还包括同时诱导体液、细胞和黏膜免疫, 为呼吸道提供三重保护。随着预防新型冠状病毒的新型吸入疫苗(如mRNA疫苗和DNA疫苗) 的诞生, 预防肺部疾病的吸入疫苗应用前景越来越广阔, 其中单剂量吸入的纳米干粉疫苗备受关注。本文综述了吸入疫苗在黏膜免疫中的作用和优势, 以及在各种疾病预防中的潜力, 展望了基于纳米技术的吸入疫苗发展方向。

人流感主要由甲型流感病毒和乙型流感病毒引起, 是影响人类健康最严重的传染病之一。目前针对流感病毒的上市药物较少, 且现有药物面临耐药性等问题。抗流感药物联用的开发与研究逐渐得到人们的重视。目前, 在抗流感药物组合发现和药物效应评价等方面已经取得了一定进展。通过发现有效的联用药物可用于提高治疗效果, 延迟或减少耐药性的发生, 是实现老药新用的理想方法。本文对抗流感药物联用的评价方法和模型以及可用的数据资源和工具进行总结和介绍, 并对当前抗流感药物联用研究的最新进展进行回顾和总结, 以期为抗流感病毒药物联合应用的研发提供参考。

人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV) 感染可导致低免疫力人群发病和/或死亡, 是全球最常见的先天性感染之一。针对HCMV疫苗的开发工作已经持续了50年, 目前处于临床试验阶段的疫苗主要包括减毒活疫苗、病毒载体疫苗、亚单位疫苗、多肽疫苗、DNA疫苗、RNA疫苗及病毒样颗粒疫苗, 并伴随使用佐剂。尽管针对HCMV的疫苗开发正被积极推进, 但由于其所具有的独特病原学特征和感染机制, 疫苗研究过程中仍面临诸多障碍和挑战。本文在汇总HCMV疫苗研究进展的基础上, 对开发过程中的挑战和潜在思路进行了分析和讨论, 为探索和开发新型疫苗提供借鉴和参考, 以期最终实现预防和控制HCMV感染。

免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors, ICIs) 是癌症免疫治疗的重要药物, 但绝大部分患者对ICIs存在耐药性或短期反应。肠道菌群作为重要的免疫调节器, 已被证明在增强ICIs疗效中起关键作用。研究表明, 通过粪菌移植或特定菌株移植, 可直接改变肠道菌群的组成, 进而提升ICIs免疫治疗效果。此外, 饮食干预、益生元和后生元等手段也能通过调控肠道菌群提高ICIs的抗肿瘤效果。尽管如此, 如何优化菌群/株的选择和治疗方案仍需进一步探索。本文综述了肠道菌群调控在ICIs治疗癌症中的关键作用及其应用, 为提升肿瘤免疫治疗效果提供了实践基础和理论依据。

我国中药资源丰富, 许多有效成分中含有易与金属离子发生配位反应的官能团, 如氨基、羧基、羟基等。这些官能团能够与金属离子络合, 产生新的化合物。这些中药金属配合物与对应单体相比, 往往表现出独特的性质和功能, 为新药开发提供了新路径。本综述从中药金属配合物的形成原理及常见配位金属离子出发, 将中药中的有效成分大致分为蒽醌、生物碱、黄酮、香豆素、氨基酸类、多糖类化合物, 对其与金属形成的配合物进行综述, 以期为中药新药的发现和开发提供新的思路, 为中药现代化和国际化提供科学依据。

脑胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发性肿瘤, 其一线治疗药物受血脑屏障阻碍, 在肿瘤部位难以达到有效剂量。中药挥发油具有高脂溶性、易穿过血脑屏障等优点, 表现出良好的抗脑胶质瘤作用。引经中药具有引药上行功效, 一些挥发油成分可通过促进化药入脑、抑制脑内药物外排、协同化药治疗等方式提高抗脑胶质瘤作用。但挥发油稳定性差, 纳米制剂如脂质体、纳米粒、自组装前药递药系统等可改善其稳定性, 并通过注射给药方式发挥治疗脑胶质瘤效果, 为挥发油治疗脑胶质瘤提供良好的应用前景。本文综述了中药挥发油及其主要成分抗脑胶质瘤的作用机制, 以及挥发油联用化疗药物及其纳米药物递送系统治疗脑胶质瘤的研究进展, 以期为中药挥发油在脑胶质瘤治疗中的应用提供参考。

疫苗往往通过肌肉注射或皮下注射等方式给药。虽然这些方式能够有效地将疫苗抗原递送到机体内, 触发免疫反应, 但也存在注射疼痛、操作复杂、运输条件严格以及疫苗自身的免疫原性和稳定性不佳等局限性。随着技术的发展, 皮肤给药成为疫苗给药的新途径。在众多皮肤给药方式中, 微针展现出独特的优势与潜力。本文简述了微针经皮免疫的机制及其优势, 列举了微针的分类, 重点介绍了仿生微针的设计理念、结构优势及制备工艺, 分析了其在疫苗中的应用潜力。同时, 简述了微针在疫苗方面的应用, 包括细菌感染、病毒感染、癌症治疗及当前的临床应用进展, 并从微针疫苗的安全性、稳定性、可接受性等方面总结了微针疫苗的挑战与前景。

结合雌激素(conjugated estrogens, CE) 广泛应用于绝经激素治疗, 能有效缓解绝经及其相关症状(如血管舒缩症状、神经精神症状、泌尿生殖道萎缩症状等), 且是预防绝经后骨质疏松症的有效方法。本文综述了CE的不同剂型(片剂、乳膏和注射剂) 的特点、药理作用及其在临床中的应用。CE片剂通过全身治疗作用有效调节体温中枢, 减轻潮热和盗汗, 促进骨形成, 增加骨密度; CE乳膏用于局部治疗, 改善更年期泌尿生殖系统综合征; CE注射剂用于治疗无器官病理的因激素失衡而引起的异常子宫出血, 但仅适合短期使用, 可以快速而暂时地增加雌激素水平。此外, CE在代谢方面具有重要作用, 能够提高胰岛素的清除率和敏感性, 并对神经系统和心血管系统有潜在的保护作用, 显示出广泛的治疗潜力。本文通过探讨CE的制剂和应用, 为药物剂型的设计和开发提供新思路。

本文概述了口服溶剂介质在解决特殊人群临时调配用药问题中的优势, 详细介绍了其在美国的研发、生产、使用和监管经验, 以及目前国内口服溶剂介质的研究进展和所面临的挑战。美国在口服溶剂介质领域已经形成一套成熟的体系, 我国可以借鉴美国的经验, 完善相关法律政策, 推动建立口服溶剂介质用于临时调配的技术指导原则及技术标准, 加快其在临床的使用。

青黛作为一种传统中药, 在治疗溃疡性结肠炎方面具有显著疗效。现代生产工艺将打靛形成的沉淀物——“粗靛”, 除杂干燥后制得青黛成品, 已成为现代药用的主流形式。“靛花”取打靛形成的顶层泡沫状物的干燥品, 其中靛蓝和靛玉红的含量高于粗靛。本研究评估了粗靛和靛花在治疗溃疡性结肠炎中的疗效并探讨其作用机制。使用3%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS) 诱导急性结肠炎小鼠模型(实验获得成都中医药大学动物伦理委员会批准, 批准号: 2024075)。同时, 小鼠灌胃给药粗靛(400、200和100 mg·kg^-1) 和靛花(400、200、100和50 mg·kg^-1) 溶液。通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 检测结肠组织中的髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6和IL-18水平来评估粗靛和靛花的抗炎活性。采用蛋白免疫印迹和免疫荧光法评估紧密连接蛋白-1 (zonula occludens 1, ZO-1) 和膜整合蛋白(occludin) 的表达。此外, 还采用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR (RT-qPCR) 分析结肠组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)、NOD样受体蛋白3 (NOD-like receptor protein 3, NLRP3) 和相关因子的表达水平。结果显示, 粗靛和靛花可有效缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎。与粗靛相比, 靛花在治疗溃疡性结肠炎中效果更显著, 尤其是在靛花200 mg·kg^-1剂量下。本研究进一步证实了粗靛和靛花具有显著抗炎和保护肠道屏障完整性的能力。此外, 粗靛和靛花治疗溃疡性结肠炎作用可以通过抑制AMPK/SIRT1通路介导的NLRP3炎症小体的形成和激活来阐明。

本文主要探讨越鞠丸挥发油(Yueju volatile oil, YJVO) 治疗高原睡眠障碍(high altitude sleep disturbance, HASD) 小鼠的药效和作用机制。采用气相色谱-质谱联用技术(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS) 对YJVO成分进行鉴定, 应用网络药理学预测YJVO治疗HASD的作用机制。将KM小鼠随机分为对照组(control)、模型组(model)、YJVO-L、M、H组(200、400、800 μL·m^-3), 地西泮组(diazepam, DZP, 2 mg·kg^-1), 除对照组外其余置于低压氧舱中诱导HASD模型。动物实验经江西中医药大学伦理委员会批准(伦理号: TEMPOR20230088)。以协同睡眠实验和负重游泳实验测试YJVO睡眠调节效果; H&E染色法观察下丘脑、海马脑组织的损伤情况; 采用酶联免疫法(ELISA) 检测脑组织中褪黑素(melatonin, MT)、γ氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)、白介素-6 (interleukin-6, IL-6)、白介素-1β (interleukin-1beta, IL-1β) 和血浆中五羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、食欲素-A (orexin-A)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 含量, 并测定丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX) 生化指标; Western blot检测NF-κB/NLRP3通路中关键蛋白的表达; 免疫组化法检测海马、下丘脑组织中五羟色胺1A受体(5-hydroxytryptamine 1A receptor, 5-HT_1A) 的表达。GC-MS结果显示, YJVO共鉴定出68个成分。网络药理学结果显示YJVO治疗HASD机制涉及AGE-RAGE、TNF、血清素、NF-κB等多条信号通路。行为学实验结果表明, YJVO可显著增加小鼠的睡眠时长, 缩短睡眠潜伏期, 并提高其体能和抗疲劳能力(P < 0.01)。H&E结果显示, HASD小鼠海马、下丘脑组织病理损伤得到明显改善。ELISA结果显示YJVO上调脑组织中促眠递质MT、GABA, 下调血浆促觉醒递质orexin-A、5-HT水平, 并减少IL-6、IL-1β、TNF-α炎症因子分泌(P < 0.01)。生化结果表明, YJVO能抑制HASD小鼠脑组织中MDA生成, 并提高SOD、GSH-PX活性(P < 0.01)。Western blot结果显示, YJVO下调HASD小鼠脑组织中磷酸化核因子-κB (phosphorylate nuclear factor-kappa B, p-NF-κB p65)/核因子κB (nuclear factor-kappa B, NF-κB p65)、Nod样受体蛋白3 (Nod-like receptor protein 3, NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1 (cysteinyl aspartate specific proteinase 1, Caspase-1)、IL-1β蛋白表达(P < 0.01)。免疫组化结果显示, YJVO下调HASD小鼠海马、下丘脑组织中5-HT_1A蛋白表达(P < 0.01)。研究结果表明, YJVO用于HASD小鼠后表现出良好的治疗效果, 其作用机制可能与调控神经递质和抑制神经炎症相关。

运用网络药理学和体内实验验证的方法, 探究枸杞子与人参配伍抗疲劳作用及其作用机制。通过TCMSP、ETCM等数据库结合文献挖掘枸杞子、人参有效成分及作用靶点; 通过OMIM、Gene Cards数据库获得疲劳靶点; 筛选出药物靶点和疾病靶点的交集靶点, 导入String数据库及Cytoscape 3.10.0构建PPI网络; 通过David数据库对核心靶点进行GO和KEGG富集分析; 建立小鼠运动型疲劳模型, 对枸杞子配伍人参抗疲劳作用及机制进行评价与探讨。结果显示, 获得枸杞子、人参有效成分55个, 对应靶点573个, 疲劳靶点数为1 137个, 筛选出共有靶点115个, 核心靶点26个。KEGG富集通路主要包括PI3K-AKT、HIF-1α、AGE-RAGE等信号通路。所有动物实验获得南京中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号: 202308A018), 结果显示枸杞子配伍人参1∶1低、中、高剂量组均可延长小鼠游泳力竭时间, 中剂量组与人参组、枸杞子组相比作用更显著; 枸杞子配伍人参中、高剂量组显著减低小鼠血清尿素氮(blood urea nitrogen, BUN), 与人参组、枸杞子组相比, 高剂量组作用更显著; 人参组、枸杞子组及配伍组均显著降低乳酸(lactic acid, LD) 水平; 与人参组相比, 枸杞子配伍人参中剂量组显著提高肝糖原(liver glycogen, Lgly) 和肌糖原(muscle glycogen, Mgly) 水平; 人参组、枸杞子配伍人参高剂量组显著降低血清中丙二醛(malondialdehyde, MDA) 含量, 提高血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD) 含量; 枸杞子配伍人参高剂量组均能显著降低谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase, ALT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase, AST) 含量。Western blot结果显示枸杞子配伍人参低剂量组可显著上调疲劳小鼠肌肉组织中P-PI3K、AKT蛋白的表达, 中剂量组显著下调P-AKT、HIF-1α蛋白表达, 与人参组和枸杞子组相比, 配伍高剂量组PI3K蛋白表达量均显著提高, 低剂量组AKT蛋白表达量显著上升。综上所述, 枸杞子配伍人参在提高小鼠运动耐力, 降低代谢产物堆积, 提高糖原储存水平优于人参组、枸杞子组, 其作用机制与调控AKT、PI3K、HIF-1α等核心靶点及PI3K/AKT/HIF-1α信号通路密切相关。

肝纤维化是慢性肝病进展的共同阶段, 然而全球范围内缺乏抗肝纤维化的临床药物。绞股蓝有“南方人参”之称, 民间常用于防治多种慢性肝病, 亦有其抗肝纤维化的报道, 但相关科学研究较少。本文采用LC-MS代谢组学分析方法, 在四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl₄) 诱导肝纤维化小鼠模型上探究绞股蓝醇提物(Gynostemma pentaphyllum ethanol extract, GPE) 的作用及潜在机制。所有动物实验经首都医科大学实验动物伦理委员会批准(批准号: DWLLGZR202202204)。结果显示, GPE能显著减轻模型小鼠肝脏的炎性细胞浸润和胶原蓄积, 显著降低小鼠血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶活力及羟脯氨酸水平, 可有效抑制胶原蛋白1A1 (collagen 1A1, COL 1A1) 和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA) 的基因转录和蛋白质表达。肝脏非靶向代谢组学分析发现, GPE主要影响了47个差异代谢物; KEGG通路富集分析表明, 差异代谢物主要富集在果糖/甘露糖代谢和芳香氨基酸代谢通路。进一步采用靶向代谢组学检测验证了D-甘露糖、6-磷酸甘露糖、D-果糖、2-磷酸果糖、D-蔗糖、海藻糖、谷氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、L-2-氨基-3-氧代丁酸、乳酸、2-羟基丁酸和牛磺酸共13个差异代谢物, 可能是GPE抗肝纤维化相关的重要代谢物, 证实GPE抗肝纤维化作用可能与调控果糖/甘露糖代谢途径和芳香氨基酸代谢途径密切相关。

建立NOD1和增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 标记的活化T细胞核因子2 (NFAT2) (EGFP-NFAT2) 共表达细胞株。将pcDNA3.1-NOD1-3×Flag-hygro重组质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞, 经潮霉素压力筛选后加入脂多糖(lipopolysaccharides, LPS) 孵育30 min, 通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度, 验证EGFP-NFAT2核转位, 筛选得到46株稳定表达NOD1的细胞株U2OS-EGFP-NFAT2-NOD1, 其中4号细胞株细胞核内绿色荧光强度最强, 故选定其为U2OS-EGFP-NFAT2-NOD1细胞株进行功能验证。采用实时定量PCR (RT-qPCR) 检测该细胞株中NOD1 mRNA水平和Western blot法检测NOD1蛋白的表达水平, 结果显示在传代5~20代内NOD1 mRNA均稳定表达, 并且该细胞株中可明显表达NOD1蛋白, 而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见NOD1蛋白表达。将U2OS-EGFP-NFAT2-NOD1细胞接种于96孔板, 加入组蛋白(histone) 孵育30 min, 通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位, 验证该细胞株NOD1功能的特异性, 发现组蛋白在不同浓度范围内使U2OS-EGFP-NFAT2-NOD1稳转细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加。将U2OS-EGFP-NFAT2-NOD1稳转细胞株分为溶媒对照组、NOD1拮抗剂nodinitib-1+组蛋白组、组蛋白组。药物孵育时间均为30 min。通过高内涵筛选系统观测EGFP-NFAT2核转位, 结果表明与组蛋白组比较, nodinitib-1+组蛋白组EGFP-NFAT2核转位较明显减弱(P < 0.05)。以上结论表明成功构建了共表达NOD1和EGFP-NFAT2的稳转细胞U2OS-EGFP-NFAT2-NOD1, 可用于靶向NOD1的病原微生物的抗性化合物筛选及其分子机制研究。

利用酵母衍生的微囊多级装载纳米乳佐剂MF59和抗原, 以解决MF59佐剂不能直接包载抗原以及诱导细胞免疫能力不足的问题。利用强酸碱法制备酵母微囊(yeast microcapsules, YC), 其具有多孔、中空的结构和较好的佐剂效应。将聚合物聚己内酯-聚乙烯亚胺(polycaprolactone-polyethyleneimine, PCL-PEI) 修饰MF59纳米乳获得正电性的乳粒, 通过静电力驱动使乳粒自发沉积到YC中, 并进一步吸附抗原鸡卵清白蛋白(ovalbumin, OVA), 得到共载抗原和佐剂的疫苗YC-MF59-OVA。YC-MF59-OVA基于囊壳上β-葡聚糖可被抗原提呈细胞(antigen presenting cells, APCs) 识别而内吞, 同时在接种部位募集抗原提呈细胞, 进而有效激活机体免疫响应, 使血清中IgG、IgG1、IgG2a抗体水平相比游离OVA升高了2~3倍; 诱导了显著高于OVA的IFN-γ⁺CD8⁺、IL-4⁺CD4⁺ T细胞免疫应答, 刺激脾组织中记忆性CD44⁺CD62L⁺ T细胞比例显著升高。本动物实验方案经遵义医科大学实验动物伦理委员会审核批准(批准号: ZMU21-2407-169)。研究结果表明, YC-MF59-OVA能够激活强效的体液免疫应答和细胞免疫应答, 证实YC能够显著弥补纳米乳佐剂的不足, 为后续疫苗递送系统的开发提供新的参考。

重症酒精性肝炎(severe alcoholic hepatitis, SAH) 是酒精性肝病中最严重的一种, 死亡率极高, 目前缺乏适合的动物模型进行相关研究。本研究旨在建立一种小鼠SAH模型为后续开展重症酒精性肝炎的相关研究提供临床前动物模型。本研究在NIAAA (National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism) 模型的基础上采用联合给予细菌内毒素构建小鼠模型[本实验所有动物实验均获得首都医科大学动物伦理委员会批准, 批准号: AEEI-2023-102]。在小鼠死亡率、肝脏组织损伤及炎症相关指标等方面模拟临床重症酒精性肝炎的病理过程。最终确立在NIAAA模型的基础上, 最后一次灌胃酒精浓度为7.5 g·kg^-1, 联合腹腔注射脂多糖剂量5 mg·kg^-1, 作用时间12 h作为SAH小鼠造模最优条件。该条件下, 小鼠模型能够较好地模拟临床上SAH的高死亡率、肝脏功能损害, 并且其病理染色结果与临床结果高度一致, 肝脏中也出现了大量中性粒细胞浸润等过度炎症反应的情况, 为SAH的临床前研究提供了理想的模型。

利用现代柱色谱技术, 如大孔吸附树脂、硅胶、凝胶及半制备液相等, 从山茱萸传统非药用部位山茱萸叶50%丙酮提取物中分离得到5个倍半萜类成分。通过现代波谱学技术以及电子圆二色谱(ECD) 技术鉴定了化合物的结构, 分别为山茱萸新萜苷A (1)、cornucadinoside B (2)、lacinilene C (3)、3, 12-dihydroxycadalene (4)、cornucadinoside C (5)。其中, 化合物1为新化合物, 化合物2~5为首次从山茱萸叶中分离得到, 并且化合物2和3具有潜在神经保护活性。

运用MCI Gel CHP-20、Sephadex LH-20和ODS等柱色谱结合半制备高效液相色谱等方法, 从姜皮正丁醇部位中分离得到3个新化合物。结合1D-NMR、2D-NMR、HR-ESI-MS、圆二色谱(CD) 和计算CD (ECD) 等方法鉴定其结构分别为dendranthemoside C (1)、zingpyranoside E (2)、zingpyranoside F (3)。

本文对加拿大一枝黄花的化学成分进行研究, 运用硅胶、微孔树脂、Rp-18、Sephadex LH-20柱色谱等技术, 从加拿大一枝黄花的甲醇提取物中分离得到一个新的蔗糖衍生物。利用一维、二维核磁共振波谱、高分辨质谱和酸水解等方法将其鉴定为2, 4, 6, 1′, 3′, 6′-O-六异戊酰基蔗糖(2, 4, 6, 1′, 3′, 6′-O-hexaisovaleryl sucrose)。并运用高分辨质谱对其质谱裂解行为进行解析, 发现化合物1容易断裂糖苷键, 产生分子量为m/z 415的碎片离子。碎片离子m/z 415继续以中性或者非中性的形式丢失异戊酰基碎片, 产生一系列子离子。化合物1在5、10和20 μmol·L^-1浓度下能够抑制脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导的小胶质细胞(BV2) 炎症损伤模型的NO生成, 表现出神经保护作用, 测得其NO半数抑制率(IC₅₀) 为13.96 ± 0.78 μmol·L^-1。

本研究采用多种色谱技术从一株香果树内生真菌Penicillium spinulosum大米发酵产物中获得7个次级代谢产物, 经核磁、质谱等波谱学方法结合文献数据对这些化合物进行了结构鉴定, 分别为spinulacid (1), ascomindone A (2), ascomindone C (3), monomethylsulochrin (4), barceloneic acid A (5), flufuran (6) 和5-hydroxymethyl-furaldehyde (7), 其中化合物1为新苯甲酸类衍生物。药理活性评价显示, 化合物1、2、5和6在20和40 μmol·L^-1浓度下对转基因斑马鱼具有显著的促血管生成活性(动物实验获得山东省科学院生物研究所实验动物福利伦理委员会批准, 批准号为SWS20240611); 化合物1和4对禾谷镰刀菌表现出中等或强的抗真菌活性, 其最小抑菌浓度(MIC) 分别为12.5和6.25 μg·mL^-1; 此外, 化合物4对金黄色葡萄球菌和欧文杆菌也显示出明显的抗菌活性, 其MIC值分别为6.25和12.5 μg·mL^-1。

采用硅胶、Sephadex LH-20和高效液相色谱等色谱分离技术, 从黄花败酱(Patrinia scabiosaefolia) 干燥根和根茎的乙酸乙酯萃取相中分离得到6个环烯醚萜类化合物。通过核磁共振、计算¹³C NMR和质谱等波谱学方法, 将它们分别鉴定为patrinin A (1)、patrinin B (2)、loganin aglycone (3)、isovillosol (4)、1, 3-dimethoxy-4, 7-dimethyl-octahyhro-cyclopenta[c]pyran-6, 7-diol (5)和viburnshosin A (6)。其中, 化合物1和2为新化合物。此外, 对6个化合物进行了抗流感病毒和抗炎活性评价。

利用各种色谱技术从宽跗陇马陆[Kronopolites svenhedini (Verhoeff)] 中分离得到了14个化合物。结合波谱学方法和文献鉴定其结构, 分别为kronoponit A (1)、kronoponit B (2)、neoechinulin A (3)、2-(1, 1-dimethyl-2-propen-1-yl)-1H-indole-3-carboxaldehyde (4)、尿嘧啶(5)、对羟基苯乙胺(6)、对羟基苯乙酸(7)、对羟基苯甲酸(8)、对乙基苯甲酸(9)、2-甲基-1, 4-苯二酚(10)、1, 2, 4-苯三酚(11)、没食子酸(12)、没食子酸-3-甲基醚(13) 和4-甲氧基-3, 5-羟基苯甲酸(14)。其中, 1和2为新化合物, 3~14为首次从马陆中分到的化合物。

合成大麻素N-(1-氨甲酰基-2, 2-二甲基丙基)-1-丁基吲唑-3-甲酰胺(ADB-BUTINACA) 作为一种新精神活性物质, 具有强烈的兴奋和致幻作用, 可引发精神、心血管、肾脏和胃肠道疾病, 严重情况下可导致死亡。然而, 目前对于ADB-BUTINACA的代谢途径、对机体的长期影响及其背后的分子机制等毒理学研究报道较少。本研究使用超高效液相色谱法结合高分辨率四极轨道阱质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap-HRMS) 揭示了低、中、高三种不同剂量ADB-BUTINACA (0.1、1和5 mg·kg^-1) 干预后大鼠血清的代谢轮廓。研究确定了L-谷氨酸和3-羟基丁酸等50种潜在标志性差异代谢物, 丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢途径、视黄醇代谢途径和TCA循环等9种代谢途径受到扰乱。研究结果为进一步探讨ADB-BUTINACA引发机体脂质代谢紊乱和能量代谢紊乱的毒性作用机制提供实验和理论基础, 为ADB-BUTINACA毒性的诊断和预防及公共健康提供支持。本研究遵循《赫尔辛基宣言》和美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》, 并经过浙江中医药大学动物实验中心批准(伦理号: 20220718-11)。

金芪降糖方源自经典方剂千金黄连丸, 是最常用的治疗糖尿病的中药复方。金芪降糖胶囊(Jinqi Jiangtang Capsule, JQJTC) 为其临床常用剂型之一, 但其体内多成分的药动学规律尚不清楚。本研究首先建立了稳定、可靠的小鼠血浆与肝脏中JQJTC多成分的超高效液相色谱–三重四级杆串联质谱法(UPLC-MS/MS) 定量分析方法; 并测定了2型糖尿病小鼠灌胃给予JQJTC后16种成分在血浆和肝脏中浓度变化, 分析了动力学规律。结果表明, 建立的UPLC-MS/MS方法符合生物样品测定的要求; 小鼠灌胃给予JQJTC后, 生物碱类成分、有机酸类成分、黄酮类及皂苷类成分均可吸收入血, 16种成分的吸收与消除速度、向肝脏的转运速度和暴露水平存在明显差异; 且生物碱类成分、毛蕊异黄酮苷及苷元、芒柄花素和环黄芪醇在肝脏中的暴露显著高于在血浆中的暴露。研究结果为JQJTC进一步的药效物质研究提供了基础。所有实验动物的使用已获得上海中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号: PZSHUTCM2401310001)。

本研究利用UHPLC-QE-MS结合非靶向代谢组学技术鉴定当归不同药用部位(归头、归身、归尾) 的差异性化合物, 通过主成分分析和正交偏最小二乘-判别分析方法筛选差异代谢物, 并分析相关代谢通路。结果在当归不同药用部位中共鉴定出18类1 072个代谢物, 主要为萜类、苯丙素类、脂质及其衍生物、生物碱、黄酮类、有机酸及其衍生物等, 其中, 归头对比归身映射530个差异代谢物、归头对比归尾映射565个差异代谢物、归身对比归尾映射474个差异代谢物, 而山柰酚、绿原酸、阿魏酸、藁本内酯、甘草素、芦丁等成分主要富集于归尾, 柚皮素、芹菜素等成分主要富集于归身, 雌二醇、川芎嗪等成分主要富集于归头; 差异代谢物主要富集在类黄酮、黄酮以及黄酮醇的生物合成、吲哚生物碱生物合成、色氨酸代谢、苯丙氨酸代谢等通路上。该研究通过非靶向代谢组学技术对当归不同药用部位的差异代谢物进行比较分析, 为临床合理、精准应用当归不同药用部位提供科学支撑。

采用Cocktail探针药物法评价葛根汤等感冒治疗药物对大鼠肝细胞色素P450 (cytochrome P450, CYP450) 酶活性的影响。优化大鼠肝微粒体体外孵育体系, 基于液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS) 建立同时测定大鼠肝微粒体CYP450酶中各亚酶探针代谢产物含量的分析方法, Cocktail探针药物法表征治疗风寒感冒的经典方葛根汤和临床上常用于治疗感冒的西药对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、无水咖啡因及盐酸那可汀等对CYP2D6、CYP2C9、CYP3A4等亚酶活性的影响, 为它们在临床联合用药安全提供参考。结果表明, 所建立的分析方法稳定可靠, 符合生物样品测定要求。经优化后, 孵育体系中大鼠肝微粒体蛋白浓度为3.00 mg·mL^-1, 孵育时间为240 min, 终止剂为乙腈, 3种CYP亚酶特异性探针底物右美沙芬、睾酮、甲苯磺丁脲的K_m值分别为21.49、87.33、354.7 μmol·L^-1, 通过阳性抑制剂验证了所建立孵育体系的有效性。与空白对照组相比, 当各西药浓度和葛根汤提取物浓度分别在100.00 μmol·L^-1和3.00 mg·mL^-1以内时, 葛根汤提取物、马来酸氯苯那敏及盐酸那可汀对大鼠肝微粒体CYP2C9、CYP2D6有抑制作用; 无水咖啡因对大鼠肝微粒体CYP2C9、CYP3A4有抑制作用; 对乙酰氨基酚无明显抑制作用; 盐酸那可汀对大鼠肝微粒体CYP3A4的诱导作用大于阳性诱导剂活性的40%, 提示与盐酸那可汀联合用药时, 可能存在一定的药物相互作用风险, 应注意药物治疗剂量。本实验按照广东药科大学实验动物福利伦理委员会指导政策严格执行(批准号: gdpulacspf2022137)。

本研究建立了冠心七味片的HPLC指纹图谱与化学计量学结合的多指标含量测定方法, 为其质量控制提供科学依据。采用Shim-pack GIST-HP C₁₈色谱柱建立18批冠心七味片的指纹图谱, 结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行全面分析; 采用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA) 和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA) 进行化学计量学研究, 并建立HPLC-MS/MS法同时测定9个成分含量。18批冠心七味片指纹图谱共标定了22个共有峰, 相似度为0.952~0.998, 9个共有峰被指认, 分别为1号峰没食子酸、3号峰原儿茶酸、8号峰鞣花酸、9号峰丹酚酸B、12号峰木犀草素、13号峰芹菜素、19号峰去氢二异丁香酚、20号峰隐丹参酮、21号峰丹参酮ⅡA; CA和PCA分析将18批冠心七味片聚为3大类: S1~S4 (A厂家) 聚为一类, S5~S8 (B厂家) 聚为一类, S9~S18 (C、D厂家) 聚为一类, 在OPLS-DA分析模式下, 以变量权重值(VIP) > 1为标准, 筛选出了14个质量差异物, 其均有不同的显著性差异; 9个成分在各自范围内线性关系良好, 线性相关系数r均≥ 0.999 0; 精密度RSD均 < 3.00%; 稳定性和重复性良好, RSD均 < 5.00%; 平均加样回收率为96.58%~106.28%, RSD为2.68%~6.45%。此方法高效稳定, 可用于冠心七味片质量控制。

本实验通过超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)、网络药理学探讨活络效灵丹治疗糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN) 的物质基础。利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术结合PeakView^TM 1.2软件、Molecule Profiler^TM软件分析活络效灵丹的体外成分及正常大鼠与高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素注射所致DPN大鼠的入血成分, 通过Swiss Target Prediction、GeneCards等数据库筛选成分对应靶点及疾病靶点, 利用Venny 2.1平台获得交集靶点, 导入STRING平台及Cytoscape 3.10.1软件构建蛋白互作网络及“成分-靶点”网络图分析其核心成分与核心靶点, 对核心靶点进行GO和KEGG富集分析。实验获得南京中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号: 202310A023)。结果共鉴定出活络效灵丹提取物83个化学成分, 包括丹参酮Ⅱ_A等52个萜类、Z-藁本内酯等11个苯酞类、阿魏酸等15个有机酸类及4个香豆素类、1个酚类成分。在正常大鼠血浆中鉴定出15个原型成分与29个代谢产物, 在DPN大鼠血浆中鉴定出17个原型成分与32个代谢产物。网络药理学结果显示, 3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸等5个核心成分可能通过TNF、IL6等27个核心靶点, 调节AGE-RAGE、PI3K/Akt等信号通路发挥治疗DPN的作用。本研究通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析了活络效灵丹的体内外化学成分及主要化合物的裂解规律, 结合网络药理学分析其治疗DPN的核心成分, 为阐明活络效灵丹治疗DPN的功效物质基础及作用机制研究提供科学依据。

针对现阶段研究片剂压制过程中微观力学行为常局限于唯象研究的问题, 准确标定二元颗粒的离散元模型参数, 是开展片剂压制建模研究的先决条件。本研究以预胶化淀粉和微晶纤维素为研究对象, 应用Edinburgh elasto-plastic adhesion (EEPA) 接触模型建立二元物料压制离散元仿真模型。以片剂压力-硬度、压力-体积减少量为响应值, 应用Plackett-Burman设计、拉丁超立方抽样、Kriging模型, 以及非支配排序遗传算法(NSGA-Ⅱ) 标定得到显著影响片剂压制的离散元(discrete element method, DEM) 参数最优值。结果表明, 预胶化淀粉的DEM参数的最佳组合, 即泊松比0.257、剪切模量1×10⁹ Pa、颗粒-颗粒间静摩擦系数0.165、单位法向刚度2.419 2×10⁹ N·m^-3、单位切向刚度7.954 6×10⁹ N·m^-3、黏附力强度-0.009 155 8 N; 微晶纤维素的DEM参数的最佳组合, 即泊松比0.381、剪切模量1.04×10⁹ Pa、颗粒-颗粒间静摩擦系数0.719、单位法向刚度3.171 5×10⁹ N·m^-3、单位切向刚度6.746 2×10⁹ N·m^-3、黏附力强度-0.038 7 N; 二元混合辅料间的DEM参数的最佳组合, 即颗粒-颗粒间碰撞恢复系数0.1, 单位法向刚度9.947 1×10⁹ N·m^-3, 单位切向刚度1.994 5×10⁹ N·m^-3, 黏附力强度-0.060 35 N。最佳参数组合下的模拟与物理实验结果相似, 表明标定得到的参数可用于离散元仿真研究, 为后续片剂的智能化与连续化生产提供理论基础和数据支撑。

本研究以中药甘草来源的外囊泡样颗粒(licorice-derived vesicle-like particles, LVLPs) 为载体, 以同一来源中药的标志性活性成分——甘草查尔酮A (licochalcone-A, LCA) 为模型药物, 构建药载一体的外囊泡样纳米给药系统LVLP@LCA, 并对其体外特性和抗炎活性进行表征和评价。使用梯度离心法提取外囊泡样纳米颗粒, 超声处理装载抗炎药物LCA, 制备LVLP@LCA纳米给药系统。制备得到的LVLP@LCA的粒径为160 nm左右, 呈茶托状双层膜结构, 具有较高的包封率和载药量。体外结果表明, LVLP@LCA进一步增强LCA抑制炎性细胞增殖并降低炎性细胞中ROS和NO水平的能力。同时ELISA和qRT-PCR结果表明, LVLP@LCA能够显著降低IL-6、IL-1β、TNF-α、CCL5、CCL17等相关炎症因子和趋化因子的分泌和mRNA表达。通过蛋白质免疫印迹实验证明, LVLP@LCA通过JAK/STAT通路降低炎症诱导因子IL-6的表达水平, 进而抑制炎症反应激活。本研究为甘草药载一体的综合抗炎作用提供理论依据, 为中药甘草抗特应性皮炎应用提供一种新思路。

JAZ蛋白作为茉莉酸途径的抑制因子, 对植物生长发育、植物次级代谢产物合成的调控具有重要作用。为研究雷公藤(Tripterygium wilfordii) JAZ基因家族的功能, 本研究系统鉴定了雷公藤JAZ基因家族成员, 分析其理化性质、基因染色体定位、系统进化树、蛋白质保守基序, 同时通过雷公藤转录组测序数据分析TwJAZs基因在不同部位的表达模式, 构建基因网络调控图谱, 最终基因克隆获得18条TwJAZs基因的全长序列。结果表明, 18个TwJAZs基因不均匀地分布在12条染色体上, 其编码的氨基酸数量为122~525个, 分子质量为13.87~54.73 kDa, 等电点为6.83~10.27。亚细胞预测显示13个TwJAZs蛋白定位在细胞核上, 5个位于细胞质和叶绿体上。系统进化树结果表明雷公藤JAZ家族蛋白可分为5个亚家族, 同一亚家族成员具有相似的保守基序。表达模式分析结果表明TwJAZs基因主要在花、叶、去皮茎中具有较高的表达, 且大部分TwJAZs基因在茉莉酸甲酯(MeJA) 诱导4 h后的表达量最高。转录因子调控网络显示TwJAZs主要与AP2/ERF-ERF、NAC、bHLH等转录因子家族呈现强相关。本研究全面鉴定获得雷公藤中所有的JAZ基因家族序列, 初步明确了TwJAZs基因家族的结构和功能特点, 为深入研究TwJAZs蛋白功能和调控机制奠定重要基础。

基于丹参(Salvia miltiorrhiza) 基因组与转录组数据, 克隆获得在丹参根周皮中高丰度表达的细胞色素P450基因, 命名为SmCYP72A395。采用多种在线分析工具对其编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位、蛋白质二级结构及保守结构域进行预测分析, 发现SmCYP72A395基因编码区全长为1 578 bp, 编码525个氨基酸残基, 蛋白质分子量为59.9 kDa, 理论等电点为8.68, 具有一个跨膜结构域。利用实时荧光定量PCR技术检测发现SmCYP72A395在丹参花、叶和根的周皮部位表达量较高。为进一步研究该基因的生物学功能, 分别构建了SmCYP72A395过表达(SmCYP72A395-OE) 和RNA干扰(SmCYP72A395-RNAi) 转基因毛状根材料, 并利用UPLC方法检测阳性株系中丹参酮类化合物的含量。与对照株系(转化空载体的毛状根株系) 相比, 发现SmCYP72A395-OE株系中, 二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA的含量均显著低于对照株系; 而在SmCYP72A395-RNAi株系中, 二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ的含量显著高于对照株系。以上结果表明SmCYP72A395在丹参酮类化合物的合成积累过程起负调控作用。本研究结果为进一步阐明丹参酮类化合物生物合成及调控途径奠定基础。