荚膜多糖与脂多糖是细菌关键毒力因子, 也是重要疫苗靶标。细菌多糖疫苗的发展已跨越一个多世纪, 对全球细菌性疾病的预防作出了巨大贡献。本文回顾了细菌多糖疫苗的起源, 以及多糖和多糖结合疫苗两个阶段的发展历程, 重点介绍了肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟球菌、流感嗜血杆菌多糖疫苗的研发进程与应用, 总结了当前细菌多糖疫苗的保护机制、面临的挑战和未来多糖疫苗研发趋势。

在肿瘤发生过程中, 糖基转移酶的表达会发生显著变化, 这导致与健康细胞相比, 肿瘤细胞表面的糖蛋白呈现出独特的糖链结构特征, 即高度截短的糖链。此类异常糖基化的产物被称为肿瘤相关糖抗原(tumor-associated carbone antigens, TACAs)。作为恶性肿瘤的重要分子标志物, TACAs不仅参与调控肿瘤的发生、发展、侵袭和转移等多个关键环节, 同时在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。基于此, 靶向肿瘤的异常糖基化蛋白质或肽段已经成为目前抗肿瘤药物研发的重要策略之一。然而, 从天然来源中分离糖蛋白较为困难, 且使用化学方法合成具有复杂结构的糖蛋白或者糖肽仍具有一定的挑战性。本文系统综述了近年来利用化学方法合成糖肽抗肿瘤疫苗的研究进展, 以期为后续糖肽抗肿瘤疫苗的研发提供理论依据和技术参考。

多糖结合疫苗是预防细菌性传染病的重要手段, 目前已上市的多糖结合疫苗均采用分步提取天然多糖抗原、纯化载体蛋白后, 体外化学交联方法生产。近年来, 合成生物学等新兴技术的快速发展, 催生了一系列创新型多糖结合疫苗生产设计策略。本文重点对蛋白多糖偶联技术和无细胞糖蛋白合成技术研究进展进行综述, 同时也简要介绍了膜抗原通用模块技术、半合成糖疫苗制备技术、非共价结合技术和基于非天然氨基酸的点击化学偶联技术在多糖结合疫苗研发中的应用。未来, 随着人工智能技术的发展, 有望在寡糖转移酶和载体蛋白的人工设计改造方面取得突破, 进一步提升多糖结合疫苗的免疫效果和生产效率。

糖疫苗及糖肽疫苗在肿瘤的预防与治疗领域展现出重要潜力, 但其面临免疫原性较低等问题。佐剂被广泛用于增强对特定抗原的免疫响应, 但外加佐剂仍存在诸多局限性, 如免疫增强能力有限, 分子扩散引发一定程度的安全性问题等。内嵌佐剂策略是将佐剂与疫苗抗原通过特定方式结合, 使佐剂在疫苗体系中能更充分发挥效用的一种方法。本文归纳了不同激动剂分子(Toll样受体激动剂、iNKT细胞激动剂、干扰素基因刺激因子激动剂、核苷酸结合寡聚结构域样受体激动剂, 以及C型凝集素受体激动剂等) 作为内嵌佐剂在提升疫苗免疫原性方面的应用和研究进展, 旨在为开发更高效、安全的糖疫苗提供参考。

本研究旨在评价20价肺炎球菌结合疫苗 (20-valent pneumococcal conjugate vaccine, PCV20) 的免疫原性和安全性。利用ICR小鼠、SD大鼠建立不同的评价模型评价免疫原性及毒性反应。结果显示, 小鼠免疫原性试验显示3批20价肺炎球菌结合疫苗免疫3针后呈现较好的免疫原性; 大鼠免疫原性试验显示, 疫苗在首次给药后2周即诱导产生针对20种肺炎球菌血清型的抗体, 并在末次给药结束后3周仍维持一定水平, 具有较好的免疫持久性。疫苗在小鼠体内采用最大给药量法给药, 未见明显毒性反应。大鼠重复给药安全性试验显示注射部位局部刺激反应, 出现了病理改变, 在恢复期有所减轻; 给药期结束和恢复期结束时, 未见明显毒性反应、免疫毒性反应。研究表明, 在小鼠、大鼠模型中, 新型20价肺炎球菌结合疫苗展现出较好的免疫原性及安全性。所有实验动物的使用已获得北京民海生物科技有限公司实验动物伦理委员会批准 (批准号: 202309、202311)。

O-抗原是细菌脂多糖最外层的组成部分, 其结构的复杂性与多样性对细菌的免疫逃逸、致病性及宿主相互作用具有重要影响。本研究开展了肠源性大肠杆菌EPEC080菌株脂多糖O-抗原的提取纯化。通过分子量测定、单糖组分分析、红外光谱分析以及核磁共振谱分析完成了该细菌脂多糖O-抗原化学结构的解析。该O-抗原的平均分子量为14.3 kDa, 由五糖重复单元→4)-[α-D-GalpNAc-(1→3)]-α-L-Rhap-(1→2)-[β-D-GalpNAc-(1→3)]-α-L-Rhap-(1→2)-α-L-Rhap-(1→构成, 其化学结构与已知的大肠杆菌各血清型O-抗原结构均不同, 表明EPEC080菌株是一种新的大肠杆菌血清型。本研究结果可为肠致病性大肠杆菌的致病机制探索, 以及相关疾病的预防和治疗方法研发提供基础。

脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis, Nm) 特异性杀菌抗体检测方法血清体外杀菌试验(serum bactericidal assay, SBA) 是世界卫生组织推荐的Nm抗体水平检测的金标准, 本文基于经典的Nm杀菌抗体检测方法, 优化加样体积、筛选补体、Nm靶菌液浓度和杀菌时间以及阳性参考血清浓度等试验因素, 建立了X群Nm杀菌抗体检测方法, 并对方法的特异性、重复性以及阳性参考血清稳定性进行验证。应用建立的方法对来自河南、江苏、安徽和山西省的508份5岁以下健康人群血清进行了杀菌抗体水平检测, 计算杀菌抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT), 并按照地区和年龄组别进行统计分析。结果显示, 95.7%的血清样本X群Nm杀菌抗体滴度低于8, GMT为2.20, 不同地区X群抗体滴度GMT差异无统计学意义(H = 6.688, P = 0.083)。不同年龄组分析结果显示, 0~11月龄中X群Nm杀菌抗体滴度≥ 8比率为6.37%, 随着年龄的增长, 人群中杀菌抗体滴度≥8比率呈现下降趋势, 在2~5岁组人群中仅为0.49%, 不同年龄组X群杀菌抗体GMT差异无统计学意义(H = 4.756, P = 0.093)。表明我国5岁以下健康人群血清X群Nm杀菌抗体滴度较低。本研究构建了特异性、稳定性、重复性良好的X群Nm杀菌抗体检测方法, 并以此方法获得不同地区5岁以下健康人群X群Nm杀菌抗体水平的背景资料, 为后续我国X群Nm的预防和控制提供科学指导。本试验所有血清均经河南省疾病预防控制中心伦理审查委员会(批准号: 2019-YM-005-02)、江苏省疾病预防控制中心伦理审查委员会(批准号: JSJK2020-A054-02) 及山西省疾病预防控制中心伦理审查委员会(批准号: SXCDCIRBPJ2020050001) 批准。

脑卒中引发的心脏并发症被称为脑卒中-心脏综合征(stroke-heart syndrome, SHS)。最新研究表明, 脑卒中可通过直接损伤或间接调控导致视交叉上核(suprachiasmatic nucleus, SCN) 功能障碍, 进而引发内源性昼夜节律系统紊乱。这种节律紊乱不仅表现为睡眠-觉醒周期失调, 更通过免疫炎症反应的节律性失调、肠道微生物菌群的稳态破坏和神经内分泌激素失调三大机制, 成为继发性心脑血管事件的关键病理基础。本文创新性地提出了“脑卒中-昼夜节律紊乱-心脏综合征”的级联反应观点, 系统阐述了包括免疫炎症通路的节律调控、肠道菌群-生物钟协同调控、褪黑素节律重塑的昼夜节律靶向治疗SHS策略和中药干预潜力, 为临床预防和治疗SHS提供了新的视角和思路。

铁死亡(ferroptosis) 作为一种非凋亡性细胞死亡方式, 主要依赖铁和活性氧(reactive oxygen species, ROS) 引发氧化-还原失衡, 导致膜脂过氧化、细胞膜受损进而引起细胞死亡。近年来, 铁死亡在胚胎发育、代谢调控、神经退行性疾病和肿瘤治疗中的关键作用逐渐被揭示。本文系统探讨了铁死亡进程中细胞膜脂质过氧化损伤的动态平衡及其修复机制, 并解析线粒体、溶酶体等细胞器在调控铁死亡中的多重功能。质膜损伤与修复的失衡是铁死亡的重要标志, 其中抗氧化系统通过调控脂质代谢与氧化还原稳态维持膜结构稳定, 而膜修复机制通过清除脂质过氧化物阻止细胞死亡进程。此外, 细胞器间通过铁代谢协同、ROS信号传递及脂质过氧化物扩散形成动态互作网络, 进一步调节铁死亡的敏感性。本文总结了铁死亡分子机制的最新进展, 还提出靶向膜修复及细胞器协同作用在疾病治疗中的潜在价值, 为相关疾病的精准干预提供新思路。

矽肺是由吸入结晶二氧化硅粉尘引发的肺部进行性疾病, 主要特征为慢性肺部炎症和纤维化, 并伴有矽肺结节。流行病学数据显示, 该病高发于采矿、建筑施工等职业暴露人群中, 已成为全球重大职业卫生问题。其病理进程涉及肺泡巨噬细胞、上皮细胞及成纤维细胞等多类细胞的复杂交互作用, 其中适应性免疫系统特别是T淋巴细胞的调控失衡近年来备受关注, 并且机制还不十分清楚。本文总结了CD4⁺辅助性T细胞和CD8⁺细胞毒性T细胞在矽肺过程中的作用, 包括不同类型T细胞间(Th1/Th2/Th17/Treg亚群) 的失衡, 相同类型的T细胞所分泌细胞因子及其不同细胞功能间的平衡失调都会加速矽肺发展, 这种动态失衡在不同病理阶段呈现不同的特异性, 并且过度的免疫紊乱会导致呼吸困难和自身免疫性疾病等多种并发症。因此, 维持肺部T细胞免疫平衡对于矽肺防治至关重要。与此同时, 现阶段临床干预仍局限于粉尘暴露控制、糖皮质激素对症治疗及终末期肺移植, 缺乏针对致病机制的特异性疗法。基于T细胞亚群再平衡的新型治疗策略也显示出潜在价值, 可能为矽肺提供了新的治疗思路。总的来说, 本文系统综述T细胞在矽肺中的双重调控机制, 并探讨通过免疫稳态重建实现疾病控制的治疗前景。

肿瘤治疗药物包括传统化疗药物、靶向治疗药物、单克隆抗体及新型抗体药物偶联物(antibody-drug conjugates, ADCs) 和多肽药物偶联物(peptide-drug conjugates, PDCs) 等。PDCs在肿瘤治疗中展现出显著的临床优势, 但其仍存在稳定性欠佳、靶向特异性不足等局限性。近年来, 多价靶向肽策略和双重靶向肽策略的应用显著提升了PDCs的靶向精准性。同时, 通过多肽环化、非天然氨基酸替换及脂肪链修饰等分子工程手段, 有效改善了PDCs的体内稳定性。这些创新策略显著增强了PDCs的药理活性和肿瘤的治疗效果。本文基于PDCs的结构特征及其研究进展, 综述了提高PDCs靶向性、稳定性及细胞膜穿透效率的最新策略, 旨在为开发具有更优药效学特性的PDC类抗肿瘤药物提供理论依据和研究思路。

多吡啶系衍生物是配位化学中一类重要的配体, 因其稳定的配位能力和对生物体系的低毒性, 成为构建抗癌配合物的理想选择, 其金属配合物对乳腺癌、前列腺癌、髓性白血病、胰腺癌等具有潜在的抗癌活性。而铁系元素(铁、钴、镍) 因具有独特的氧化还原活性和生物化学性质受到研究者的广泛关注。为克服现有抗癌药物的耐药性问题, 研究者开始探索铁系元素在抗癌领域的应用, 并对多吡啶配体进行大量的结构修饰, 获得了一系列结构新颖、活性优良的金属配合物。本文综述了近10年来多吡啶类铁系元素配合物的合成、细胞毒性、作用机制及应用潜力, 为开发新型抗癌药物提供理论依据和思路。

目前已发现的海洋来源1,6-萘啶类天然产物均来自海绵类生物。研究表明这类化合物在抗肿瘤、抗氧化和抗菌等多个领域表现出显著的生物活性, 展现出广阔的药物开发潜力。本文系统综述了42个海洋来源1,6-萘啶类天然产物的来源、化学结构、生物活性及其作用机制。本文旨在通过对这些天然产物的生物活性系统归纳总结, 为新药研发梳理结构新颖、活性显著的先导化合物。同时, 这些研究将为开发高效、低毒的新型药物奠定基础, 进而为人类健康事业作出重要贡献。

海洋生物多糖为糖类创新药物研发的重要源泉。海参、海星、海胆、海蛇尾等棘皮动物资源丰富, 其含有的多糖结构独特、具有广泛且强效的药理活性, 为潜在的糖类药物先导化合物。虽然近些年海洋棘皮动物多糖的分离纯化、结构解析及活性评价等研究取得了一些重要进展, 如精细结构的阐明以及具有纳摩尔级活性的新颖化合物的发现等, 但在结构解析、构效关系及机制等方面, 仍存在一些问题和不足之处。本文系统综述了海洋棘皮动物多糖研究的进展和突破, 并提出了新的见解和建议, 旨在为低毒高效的海洋糖类创新药物研发提供重要参考。

随着人工智能(artificial intelligence, AI) 技术的飞速发展, 大语言模型(large language model, LLM) 在生物医药和临床领域中的应用逐渐深化。药物相互作用(drug-drug interaction, DDI) 预测是药物研发和应用中具有复杂特性的一种安全性研究, 传统方法依赖于实验验证或基于规则的计算模型, 具有耗时和更新滞后的缺点。大语言模型通过语义建模与整合多形态数据知识推理为药物相互作用预测提供了新范式。本文系统叙述了深度学习与大语言模型在DDI预测中的技术进展, 应用案例和技术难点。基于ChatGPT-4、DouBao、ERNIE Bot、Kimi Chat和DeepSeek-R1五种主流大语言模型在可验证的药物组合DDI分析任务中的表现, 探索大语言模型在药物相互作用预测中的应用价值并对未来发展趋势提出展望, 为系统开发、个体化预测优化以及标准化DDI预测框架构建提供参考, 以期推动LLM从实验室向临床的转化进程。

传统的化疗手段缺乏肿瘤靶向性, 且会造成明显的全身毒副反应。纳米药物递送系统开启了癌症精准治疗的新篇章, 由于肿瘤内血管异常造成的增强渗透滞留效应, 纳米药物被动地靶向肿瘤组织。然而, 大多数纳米颗粒被单核吞噬系统迅速清除, 限制了其抗肿瘤疗效。近年来, 细胞膜纳米药物(cell membrane-coated nanoparticles, CNPs) 在肿瘤治疗方面展现出广阔的应用潜力。CNPs是被细胞膜包裹的纳米药物颗粒, 不仅具有良好的生物相容性, 还能保留原细胞膜的生物特性: 红细胞膜CNPs能延长药物体内循环时间; 血小板膜CNPs、免疫细胞膜CNPs、干细胞膜CNPs均表现出趋向肿瘤的能力, 免疫细胞膜CNPs还能调节抗肿瘤免疫; 肿瘤细胞膜CNPs因其良好的同源靶向性得到广泛研究。本文概述了CNPs的构建过程, 分别介绍了基于各类细胞膜的CNPs在肿瘤治疗中的作用, 并讨论了其未来应用前景和挑战。

皮肤黑色素瘤是一种高度侵袭性和致命性的恶性肿瘤, 近年来发病率不断上升。尽管针对皮肤黑色素瘤的各种治疗方法取得了一定成果, 但基于药物的理化性质、复杂的肿瘤微环境和手术部位感染等因素, 使用传统治疗策略实现理想治疗效果仍然是一个巨大挑战。在过去的几十年里, 药物递送系统在癌症治疗方面显示出了巨大的潜能, 纳米颗粒展现了高度可调控的能力, 而水凝胶和微针在药物储存库、伤口敷料和透皮给药方面表现出色。本文介绍了这3种给药系统在皮肤黑色素瘤治疗中的最新研究进展, 根据不同治疗阶段的需求对这些递送系统进行功能定位, 并进一步分析其临床转化前景, 旨在为该领域创新药物开发提供参考。

甘草在古今方剂配伍中应用广泛, 可调和诸药, 增效减毒。探究甘草配伍理论的科学内涵, 对于指导甘草配伍的临床应用及方药开发具有重要意义。本文在概述甘草配伍应用与研究概况的基础上, 着重从分子自组装的角度综述甘草配伍增效、缓性、减毒及配伍禁忌机制的研究进展, 同时阐述基于分子自组装的甘草组分创新制剂设计与应用研究进展, 以期为进一步阐释和丰富甘草配伍理论的科学内涵提供借鉴和参考, 为基于甘草组分自组装的创新制剂设计与开发提供一定的理论和实践依据。

白塞综合征(Behçet's syndrome, BS) 是一种罕见的慢性免疫/炎症性疾病, 特征为复发性口腔阿弗他溃疡及其他多种全身性表现, 可导致多种严重并发症甚至死亡。BS的确切发病机制尚未完全阐明, 近年来, 多项研究发现中性粒细胞功能亢进和趋化性增强是BS发病机制的重要组成部分。本文从中性粒细胞过度活化、释放中性粒细胞胞外陷阱和产生过量活性氧3个方面对其参与BS发病机制的最新研究进展进行综述, 旨在为BS的发病机制和临床诊治提供理论依据。基于中性粒细胞在BS疾病过程中扮演的关键角色, 本文进一步综述了中性粒细胞靶向药物递送系统的研究进展, 以期为靶向调控中性粒细胞治疗BS提供参考。

线粒体作为细胞代谢与细胞凋亡调控的核心枢纽, 其动态网络(融合/分裂、自噬) 的失调与肿瘤、神经退行性疾病及代谢性疾病的发病机制密切相关。传统药物递送系统因难以克服溶酶体逃逸及跨膜递送的挑战, 由此引发的全身毒性和靶向失效问题严重制约了其临床应用。近年来, 线粒体靶向策略通过“精准递送-动态响应-协同治疗”三位一体的创新框架取得突破性进展, 递送效率与治疗精准度显著提升。然而, 膜电位异质性、载体-生物界面作用机制不明及规模化生产难题仍是临床转化的主要瓶颈。未来需融合药剂学、合成生物学与计算材料学, 开发闭环反馈型智能载体并建立标准化临床前评价体系, 以加速精准医学的落地。

C-糖基转移酶(C-glycosyltransferases, CGTs) 是生成C-糖苷的天然生物催化剂, 能够将活性核苷酸糖供体上的糖基转移至受体底物并形成C-C糖苷键。C-糖苷具有多种药理活性, 如抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒和抗肿瘤活性等, 而且因其糖苷键更耐化学和生物降解, 与O-糖苷相比表现出更好的药理性质, 所以CGT在药物研发中有着不可忽视的重要潜力。尽管针对CGT的研究已有很大进展, 但在已鉴定蛋白的数量以及催化反应机制等方面, 与已有广泛研究的O-糖基转移酶(OGT) 相比还存在很大差距。CGT相关晶体结构对糖供体的识别进行了较好阐释, 但有限的受体结合结构限制了对其催化机制的全面理解, 进而影响CGT在生物工程医药领域的应用。本文总结了已被鉴定的天然产物CGT的底物类型、蛋白结构、催化机制以及相关的工程改造和应用, 希望为未来的研究和工作提供一些思路。

本研究通过一种复合诱导方法结合神经行为学以及中医证候评价, 建立并确证小鼠心脾两虚证抑郁模型。采用改良足底电击和负重游泳法进行构建, 并与慢性不可预知刺激诱导的小鼠抑郁症模型进行对比, 再经由方剂反证所建立模型的证候。抑郁症评价结果显示, 与空白组相比, 复合诱导模型小鼠表现为典型的抑郁样行为, 且脑与血清中五羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、多巴胺(dopamine, DA) 含量明显降低(P < 0.01, P < 0.05), 皮质酮(corticosterone, Cor) 含量显著增加(P < 0.01)。证候评价结果显示, 与空白组小鼠相比, 复合诱导模型小鼠精神倦怠、反应迟缓, 失眠且食欲明显下降(P < 0.01); 舌象红色度显著降低(P < 0.01); 心脑血管功能及消化道功能明显不足(P < 0.01, P < 0.05); 脾脏指数明显降低(P < 0.01)。验证实验显示, 帕罗西汀改善了复合诱导模型小鼠的抑郁样行为, 心脾两虚经典方归脾汤能显著回调其抑郁及相关证候各项指标。通过改良足底电击结合负重游泳法造模可成功制备心脾两虚型抑郁症动物模型。动物实验获得江西中医药大学动物伦理实验委员会的批准和监督(伦理编号: 2023031303)。

本研究旨在探讨大鼠青春期给予尼古丁, 对其成年期可卡因成瘾性行为的影响, 同时探究相关机制。将出生30日的雄性Wistar大鼠分为生理盐水组和尼古丁组, 连续15天每天3次皮下注射(sc) 0.3 mg·kg^-1尼古丁溶液或者相应体积生理盐水。出生第60日眼眶采血, 得到血清备用。出生第62日进行颈静脉插管手术及可卡因自身给药(self-administration, SA) 训练, 连续训练10天, 逐渐增加鼻触数与大鼠获得可卡因有效注射次数的固定比率(fixed ratio, FR), 训练完成后, 实验动物形成稳定的鼻触觅药行为。进行剂量反应测试(dose response test, DR) 和递进比率测试(progressive ratio test, PR), 探究大鼠青春期给予尼古丁是否影响其成年期对可卡因的成瘾性。本实验已获得中国医学科学院药物研究所动物伦理委员会批准(批准号: 00004401)。在DR测试中, 在0.03、0.1和0.3 mg·kg^-1可卡因剂量下, 尼古丁组大鼠获得可卡因有效注射次数明显高于生理盐水组, 提示尼古丁组动物对可卡因的渴求度尤为显著; 在PR测试中, 0.75 mg·kg^-1可卡因剂量下, 尼古丁组大鼠的断点(breakpoint, BP) 具有高于生理盐水组的趋势。对大鼠血清进行细胞因子抗体芯片检测和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 验证, 发现在29种常见大鼠细胞因子、趋化因子和急性期蛋白中, 尼古丁组大鼠血清中只有趋化因子配体5 (C-C motif chemokine ligand 5, CCL5) 含量显著高于生理盐水组, 且在DR测试中, 0和0.3 mg·kg^-1可卡因剂量下, 大鼠获得可卡因有效注射次数与CCL5含量呈显著正相关。综上, 大鼠青春期给予尼古丁可以显著增加其在成年期对可卡因的嗜好性和自身给药行为, 表现出明显的药物依赖特征。大鼠血清CCL5含量与可卡因成瘾性行为呈正相关。

抗肿瘤活体微生物药物研发是当前肿瘤免疫治疗的一个新热点。减毒沙门氏菌VNP20009是研究和应用较多的一株溶瘤菌株。该菌株具有显著的肿瘤靶向性, 其在肿瘤组织分布滴度高于正常组织10³~10⁴倍, 同时具有较好的抗肿瘤活性。迄今为止, 其肿瘤靶向性和抗肿瘤活性的分子机制尚为未知, 因而阻碍了该菌株的进一步改造和提升。芳香族氨基酸是细菌生长的必需营养底物, 其合成在沙门氏菌中主要由aroC基因调控。为了探讨芳香族氨基酸合成途径在减毒沙门氏菌VNP20009抗肿瘤活性中的作用, 本研究借助CRISPR/Cas9技术构建了aroC基因缺失的VNP20009 ΔaroC菌株(VNP ΔaroC), 并检测了aroC基因缺失对VNP20009在体外对不同胁迫条件(pH、H₂O₂) 的耐受能力、侵袭黑色素瘤B16F10肿瘤细胞的能力及其在肿瘤细胞的增殖能力, 以及在黑色素瘤B16F10肿瘤模型上的抗肿瘤药效及组织分布的影响。实验结果表明, VNP ΔaroC菌株在不同pH、H₂O₂浓度下的生长曲线与野生型菌株VNP20009相比无显著差异, 但其在不同pH、H₂O₂浓度固体培养基中的菌落生长速率较VNP20009显著降低。此外, VNP ΔaroC对黑色素瘤B16F10细胞的侵袭及增殖能力较VNP20009显著减弱。小鼠肿瘤模型中, VNP ΔaroC菌株的体内毒性显著降低, 但其抗肿瘤能力和肿瘤靶向性也显著减弱。结果表明, aroC是减毒沙门氏菌VNP20009的抗肿瘤疗效和肿瘤靶向性的关键基因。本研究为溶瘤菌VNP20009的进一步合成生物改造做了有益的探索。所有动物实验均经过南京大学动物管理与使用委员会的审查批准(批准号: IACUC-2003167)。

利用急性应激小鼠模型系统研究和探讨片仔癀(Pien Tze Huang, PTH) 对急性应激小鼠髓系和淋巴系免疫功能细胞的调节作用。将C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、急性拘束应激组, 急性拘束应激+片仔癀高低剂量组。除空白对照组外, 其余各组小鼠于实验前连续7天灌胃给药, 并于第7天给药后进行拘束应激, 应激18 h后继续给药2天后处死小鼠, 测定脾脏和胸腺重量并计算脏器指数, 采用流式细胞术检测小鼠脾脏和外周血中髓系和淋巴系免疫细胞的数目、百分比, 测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。结果显示, 急性拘束应激能够让小鼠外周血和脾脏中髓系细胞(嗜酸性粒细胞、巨噬细胞) 的百分比升高, 同时使小鼠外周血和脾脏中淋巴系免疫细胞(CD3⁺CD4⁺ T细胞、CD3⁺CD8⁺ T细胞、自然杀伤T细胞、B细胞) 的百分比降低, 且小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能下降。经片仔癀处理后, 急性拘束应激小鼠外周血和脾脏中髓系细胞(嗜酸性粒细胞) 的百分比降低, 淋巴系免疫细胞(CD3⁺CD4⁺ T细胞、CD3⁺CD8⁺ T细胞、自然杀伤T细胞、B细胞) 的百分比升高, 同时腹腔巨噬细胞的吞噬功能有所改善。本文研究证实片仔癀能够缓解急性应激导致的免疫紊乱, 为其在防治情志应激相关疾病中的临床应用提供了实验依据。本实验获得暨南大学动物伦理委员会的批准(批准号: IACUC-20240220-14)。

评价坦度螺酮(tandospirone, TS) 对芬太尼(fentanyl, FEN) 致呼吸抑制的改善作用及对其镇痛镇静效应影响。以芬太尼建立大鼠呼吸抑制模型, 检测呼吸频率(respiratory frequency, F)、潮气量(tidal volume, TV)、呼气量(expired volume, EV)、气道阻力(enhanced pause, PENH) 与检测血氧饱和度(oxygen saturation, SaO₂); 选择醋酸扭体、热板和自发活动模型检测小鼠扭体次数、反应时间及运动距离; 翻正反射实验检测大鼠消失率及制动时间(本实验获得军事医学研究院实验动物管理与使用委员会批准, 批准号: IACUC-2023-001C)。结果显示与呼吸抑制模型组比较, 坦度螺酮预防及治疗给药显著改善F值、TV值、EV值、PENH值变化幅度与SaO₂的降低, 表明TS改善FEN致呼吸抑制。TS单用及与FEN联用后显著减少扭体次数与运动总距离, 增加最大镇痛百分率(maximmal possible effect, MPE), 表明TS本身镇痛镇静并增加FEN的镇痛镇静作用; 翻正反射消失半数有效量(median effect concentration, EC₅₀) 增加和制动时间减少, 进一步证实TS预处理对FEN中毒具有较明显的保护效应。以上结论表明, 坦度螺酮能有效改善芬太尼所致呼吸抑制, 其本身具有镇静镇痛作用, 与芬太尼联用可以增强芬太尼的镇痛镇静作用, 作为非阿片类药物改善阿片类药物致呼吸抑制值得进一步开发研究。

二甲双胍降糖效果显著, 但胃肠道不良反应的发生限制了其临床应用, 从调节肠道菌群角度切入进行中西药联合用药为二甲双胍不耐受提供解决思路。动物实验已获得首都医科大学附属北京友谊医院动物伦理委员会批准(批准号: 23-2043)。选用C57BL/6J小鼠, 在高脂饮食(high-fat diet, HFD) 喂养4周后, 连续7天灌胃大剂量二甲双胍(metformin, 250 mg·kg^-1, bid) 构建腹泻小鼠模型(HFDM), 另设置正常对照组(normal chow diet, NCD)、高脂饮食组(HFD)、联合用药组(构建腹泻小鼠模型时同步灌胃黄芩苷, baicalin, 100 mg·kg^-1, bid, HFDMB), 通过观察小鼠粪便形态、监测腹泻评分、检测粪便含水量, 发现黄芩苷可缓解大剂量二甲双胍诱导的小鼠早期腹泻。对小鼠粪便进行全长16S rRNA测序, 发现联用黄芩苷显著降低与腹泻正相关的索氏志贺氏菌Shigella sonnei、鸡肠球菌Enterococcus gallinarum、海氏肠球菌Enterococcus hirae的相对丰度、升高有益菌约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii、鼠乳杆菌Ligilactobacillus murinus、罗伊氏黏液乳杆菌Limosilactobacillus reuteri的相对丰度。对小鼠结肠内容物进行胆汁酸靶向定量分析, 发现二甲双胍升高HFD小鼠结肠内容物初级胆汁酸牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid, TCDCA)、牛磺胆酸(taurocholic acid, TCA) 等, 与HFDM相比, 联用黄芩苷可降低初级胆汁酸。对小鼠结肠组织切片进行H&E染色、免疫组化标记紧密连接蛋白闭合带蛋白-1 (zonula occludens-1, ZO-1) 和闭合蛋白(occludin), 发现黄芩苷联合二甲双胍可减轻大剂量二甲双胍引起的小鼠结肠损伤、增强结肠紧密连接蛋白的表达。综上, 本研究揭示黄芩苷可通过调控肠道菌群-胆汁酸-肠屏障缓解大剂量二甲双胍诱导的小鼠早期腹泻, 为解决二甲双胍不耐受的临床问题提供了具有科学内涵的中西药联合用药解决方案。

为了阐明抗污损活性菌株Aspergillus terreus GXIMD00546的活性成分, 采用硅胶柱色谱、高效液相色谱(HPLC) 等色谱技术对菌株Aspergillus terreus GXIMD00546大米培养基的发酵产物进行分离纯化, 并通过核磁共振波谱、高分辨质谱和结构衍生化等方法鉴定为1个新化合物asperterrestide C (1) 和12个已知化合物territrem B (2)、methyl-3, 4, 5-trimethoxy-2-(2-(nicotinamido) benzamido) benzoate (3)、butyrolactone Ⅰ (4)、terrien (5)、(1R, 2S)-2-hydroxy-5-oxo-3-((E)-prop-1-en-1-yl) cyclopent-3-en-1-yl acetate (6)、(1S, 5R)-5-hydroxy-4-oxo-2-((E)-prop-1-en-1-yl) cyclopent-2-en-1-yl acetate (7)、4-hydroxykigelin (8)、monacolin K (9)、methyl ester of lactone ring-opened monacolin K (10)、butyrolactone Ⅶ (11)、aspernolide A (12)、epi-aszonalenin C (13)。新化合物asperterrestide C (1) 为环肽类成分, 具有少见的氨基甲基化修饰。化合物1~3、6、7、9、11、12具有明确的抗海洋污损生物藤壶附着活性, 抑制纹藤壶金星幼虫附着半数有效浓度(EC₅₀) 为0.12~12.5 μg·mL^-1, 且毒性较小。化合物1、2、4、9~12具有乙酰胆碱酯酶抑制活性, EC₅₀为17.16~55.77 μg·mL^-1。化合物4和11具有广谱抑菌活性, 对测试的人类致病菌和污损细菌均有明显抑制作用。

采用D101大孔吸附树脂、硅胶、ODS、Sephadex LH-20等柱色谱以及半制备液相等现代色谱分离技术对黑果枸杞果实水提物进行系统的分离纯化, 得到9个黄酮苷类化合物。运用现代波谱学方法(1D NMR、2D NMR、MS等) 鉴定结构分别为laricetrin-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-[(4′′′′-反式对羟基肉桂酰基)-α-L-鼠李糖(1′′′′→6′′′)]-β-D-葡萄糖苷(1)、(2S)-柚皮素-5-O-α-L-鼠李糖(1′′′→6′′)-β-D-葡萄糖苷(2)、山柰酚-3-O-洋槐糖苷(3)、槲皮素-3-O-芸香糖苷(4)、异鼠李素-3-O-芸香糖苷(5)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖-(1→4)-α-L-鼠李糖苷(6)、柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(7)、(2S)-helichrysin A (8)、2′-O-β-D-glucopyranoside (9)。化合物1和2为两个新的黄酮苷, 分别命名为枸杞黄酮苷A和枸杞黄酮苷B, 化合物6和9为首次从黑果枸杞中分离得到。对部分化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选, 结果显示, 化合物9对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制活性, IC₅₀为(76.14 ± 4.64) μmol·L^-1。

应用代谢组学技术解读钩藤类方平肝潜阳-肝阳上亢的方证相应, 构建钩藤类方的功效评价方法。以自发性高血压大鼠灌服附子汤制备高血压肝阳上亢证大鼠模型, 分别给予天麻钩藤饮、羚角钩藤汤和清脑降压片, 观测大鼠血压、外观、痛阈、面温、易激惹程度以及24 h饮水量, 使用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱和代谢组学技术分析钩藤类方大鼠血清中差异代谢标志物, 并进行代谢通路分析, 动物实验经山东中医药大学动物伦理委员会批准(伦理号: SDZYY20240304033); 同时根据差异代谢物离子强度变化结合宏观数据判断钩藤类方干预效果, 利用偏最小二乘(partial least squares, PLS) 回归分析筛选出具有显著性差异的代谢标志物。以发现的共同差异代谢物作为肝阳上亢证的核心代谢表型, 整合宏观数据和代谢表型构建钩藤类方的证候功效评价方法。本实验筛选出35个共同差异代谢标志物, 24个差异代谢物在模型组中含量下降, 钩藤类方干预后上升, 11个差异代谢物趋势相反; 代谢通路富集分析表明, 钩藤类方干预通路主要涉及花生四烯酸代谢、不饱和脂肪酸的生物合成、初级胆汁酸生物合成、甘油磷脂代谢; PLS回归分析得到显著性差异代谢物14个, 主要涉及花生四烯酸代谢、不饱和脂肪酸的生物合成、甘油磷脂代谢三条代谢通路; 构建的功效评价方法显示, 天麻钩藤饮干预效果最为明显, 与中医药理论一致。本研究发现了钩藤类方干预肝阳上亢证的共性因子, 揭示了钩藤类方-肝阳上亢方证相关的代谢基础, 构建了钩藤类方的客观化功效评价方法, 为钩藤类方的临床研究提供证据。

本研究根据促黄体激素(luteinizing hormone, LH) 与受体结合后激活cAMP信号通路, 构建了LHCGR(-Ex10)-CRE-luc-HEK293细胞系, 并用实验室已建立的LHCGR-CRE-luc-HEK293细胞系, 分别建立了检测LH生物活性的报告基因法。对该方法条件进行优化, 对方法的专属性、相对准确度、精密度和线性进行验证。结果显示, LH浓度与报告基因表达量存在量效关系, 且符合四参数曲线。经优化后, 条件确定为LH起始浓度为200 nmol·mL^-1, 6倍连续稀释, 10个浓度, 细胞数为每孔30 000个, 孵育时间为6 h。经证实该方法专属性强, 准确度、精密度、线性良好。本研究成功建立并验证了检测LH生物学活性的报告基因法, 可以用于LH生物活性检测和质量控制。

连翘是大宗药材之一, 目前对于连翘的活性成分研究主要集中于连翘苷、连翘脂苷、连翘脂素等方面。而多糖越来越显现出其重要的药理功能, 这可能与连翘清热解毒、疏风散热的功效相关, 因此开展青翘多糖和老翘多糖的研究具有重要意义。本文通过凝胶色谱对青翘多糖和老翘多糖进行了分离纯化并对比分析了二者的结构, 通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞过度炎症模型, 对青翘多糖和老翘多糖的抗炎活性进行了比较, 并通过细胞代谢组学初步探究了抗炎活性较强多糖的作用机制。实验结果发现, 青翘多糖的重均分子量大于老翘多糖, 青翘多糖和老翘多糖单糖组成中占比最多的单糖类型均为半乳糖醛酸(galacturonic acid, Gal-UA), 其次是葡萄糖(glucose, Glc)。甲基化结果表明两种多糖的主要连接方式均为4-Gal(p)-UA; 抗炎活性研究结果表明, 两种多糖均具有抗炎活性, 青翘多糖抗炎活性更强。代谢组学研究发现, 与对照组比较, 青翘多糖活性成分作用于RAW264.7细胞后, 细胞内共发现18种差异代谢物, 主要涉及精氨酸生物合成、丙氨酸代谢等途径, 这些途径与氧化应激、炎症反应密切相关。本文对青翘和老翘药效物质基础之一多糖进行了结构与活性比较, 为连翘资源开发奠定了基础。

基于血清移行成分、网络药理学与实验验证策略探究土茯苓七味散(Tufuling Qiwei powder, TFLQW) 治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC) 的活性成分及作用机制。利用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS) 构建UC小鼠模型, 灌胃给予不同浓度的TFLQW, 采用ELISA法检测小鼠血清中的炎症因子水平, 并对小鼠结肠组织进行HE染色及病理学组织评分, 确定了TFLQW能够减轻UC小鼠的炎症表型。随后, 利用高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS) 技术对TFLQW血清移行成分进行鉴定, 经谱库检索、质谱识别流程, 辨识获得20种血清移行成分。利用Swiss Target Prediction数据库对血清移行成分进行作用靶点预测; 在疾病数据库GeneCards、OMIM、DisGeNet中检索UC疾病靶点; 用Venny 2.1.0软件绘制韦恩图得到交集靶点113个。利用Cytoscape 3.8.0软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络, 使用Centiscape 2.2插件筛选核心成分, TFLQW中的巴马汀、表小檗碱、药根碱、小檗碱、漆黄素、白藜芦醇等成分可能是发挥药效的活性物质。利用String数据库分析蛋白相互作用(protein-protein interaction, PPI), 并筛选得到关键靶点, TFLQW通过干预STAT3、PIK3R1、SRC、PIK3CA、MAPK1和AKT1等靶点发挥治疗UC的作用。David数据库对交集靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析, 发现TFLQW治疗UC的通路主要涉及癌症、PI3K/AKT、C型凝集素受体等信号通路。对关键靶点和核心成分进行分子对接, 发现PIK3CA与各活性成分结合较好。利用Western blot法检测小鼠结肠组织中PI3K/AKT信号通路蛋白表达情况。本研究初步确证了TFLQW改善UC的作用, 并初步鉴定了TFLQW治疗UC的潜在药效成分及其作用通路, 并完成了体内实验验证。本研究为该复方的药效物质基础及作用机制深入研究提供参考, 也为TFLQW的临床用药提供理论支撑。动物福利和实验过程获得内蒙古医科大学医学伦理委员会批准(伦理审批号: YKD202302093)。

为了有效测定进口血竭与国产龙血竭中特征成分的含量, 本研究基于超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱技术, 构建了多重反应监测方法, 采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm), 在30 ℃柱温下以0.1%甲酸水-乙腈为流动相、0.3 mL·min^-1的流速进行梯度洗脱, 在22 min内同时实现了血竭中6个特征成分与龙血竭中11个特征成分的分离与含量测定。该方法专属性好, 可以快速、高效地测定血竭和龙血竭中共17种特征成分的含量, 各成分均呈现良好的线性关系(R² > 0.99), 平均加样回收率为93.58%~105.82%。结果表明, 进口血竭中血竭素、(2S)-7-羟基-5-甲氧基黄烷和(2S)-7-羟基-5-甲氧基-6-甲基黄烷等成分含量较高, 国产龙血竭中龙血素B、龙血素D和紫檀芪等成分含量显著, 但不同批次间存在较大差异。这些结果可为血竭和龙血竭药材的质量控制和标准制定提供参考, 同时也可为区分其他相近中药的质量控制研究提供思路。

本文以异型双功能交联剂3-(2-吡啶二硫代) 丙酸N-琥珀酰亚胺酯为偶联剂, 采用化学交联法将多柔比星(doxorubicin, DOX) 与帕米膦酸钠偶联, 制备双磷酸盐修饰多柔比星(bisphosphonate-modified doxorubicin, P-DOX)。利用傅里叶变换红外光谱及紫外可见光谱对药物基团进行表征, 测定磷酸钙与改性前后药物的结合量, 表征药物的体外骨靶向性, 同时评估药物在不同pH值和半胱氨酸调控下的体外释放行为。最后, 将药物与成骨前体细胞、前列腺癌细胞和骨肉瘤细胞共培养, 评价P-DOX对正常骨组织细胞活性的影响及对肿瘤细胞生长的抑制能力。红外光谱分析表明, 成功合成了DOX/双磷酸盐复合物。磷酸钙吸附实验显示, 修饰后的DOX与羟基磷灰石的吸附率增加了约1倍, 并能实现在半胱氨酸富集环境及酸性环境下的有效释放。细胞共培养实验表明, 与传统DOX相比, P-DOX在成骨前体细胞中累积较少, 有效减少了化疗药物对正常骨组织细胞的毒性。并且, P-DOX能被肿瘤细胞有效摄取, 能够有效抑制肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力, 并促进肿瘤细胞凋亡、坏死。P-DOX的合成为治疗恶性骨肿瘤提供了一种新的方案, 为开发更具靶向性的抗肿瘤药物提供了重要参考。

探讨不同固化方式对桂皮醛(trans-cinnamaldehyde, CA) 的体外释放和药动学的影响。采用多孔二氧化硅吸附和β-环糊精包合对CA进行固化和表征, 测定释放度, 并对SD大鼠进行药动学研究。通过差示扫描量热法、X射线衍射分析和傅里叶变换红外光谱等分析技术验证了两种固化物的成功制备。在pH值为1.2、4.5和6.8的条件下, 两种固化方式均能显著提高CA的累积释放度, 多孔二氧化硅吸附加速了CA的初期体外释放, 大鼠的C_max有所提高, AUC_0-∞显著增加, β-环糊精包合可以延缓CA的初期体外释放, 大鼠体内C_max明显降低, AUC_0-∞显著增加。所有动物实验经江苏省中西医结合医院动物伦理委员会批准(伦理号: AEWC-20220815-230)。上述结果表明, 相对于CA, 多孔二氧化硅吸附可以提高CA的初期释放和AUC_0-∞, β-环糊精包合CA则在一定程度上延缓了CA的初期释放, 降低了C_max, 提高了AUC_0-∞。

中药汤剂是由多重相态构成的多分散体系。在相态拆分基础上开展化学成分解析和药效评价, 有助于明晰中药药效物质的传变规律。本研究以经典方剂苓桂术甘汤为对象, 追踪了煎煮过程中汤液粒径的实时变化; 采用离心和超滤法分离不同相态, 并对其各类型化学成分进行分析; 通过建立小鼠梗阻肾模型, 评价了汤剂及其代表相态的治疗活性。结果显示, 苓桂术甘汤煎煮过程中粒径分布的混杂度下降, 最终稳定在200 nm附近; 经相态分离后, 小分子、多糖、蛋白、脂质、RNA等成分主要分布在胶体相中; 全方和胶体相在减轻梗阻肾纤维化进程方面表现出几乎相当的活性。本研究进一步证实, 苓桂术甘汤煎煮过程中不同药味的化学成分重新分布并聚集于胶体相, 成为全方发挥药效的主要作用形式, 为从相态角度认识和研究中药提供了依据。动物实验获得南京中医药大学动物实验伦理委员会批准(No: 202501A012)。

三七药材质量影响其临床治疗效果。目前三七质量参差不齐, 其质量控制主要依赖于皂苷类化合物, 无法系统地反映三七药材品质。本研究基于不同产区三七药材的收集, 采用微量法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法定量分析影响三七功效及剂型的多维度指标。结果表明, 三七中大分子物质(淀粉、纤维素、木质素) 含量较高的产区为云南曲靖沾益炎方乡, 总多糖含量较高的产区为云南文山州麻栗坡麻栗镇, 总黄酮含量较高的产地为云南省玉溪华宁青龙镇, 三七素含量较高的产地为云南昆明寻甸甸沙乡, 总皂苷含量较高的产地为云南文山州麻栗坡麻栗镇。基于层次聚类和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discrimination analysis, OPLS-DA), 确定了三七素、总多糖、支链淀粉、纤维素可以作为区分不同产区三七药材的潜在生物标志物。利用药用植物全球产地生态适宜性区划信息系统获取三七产区的19个生态因子, 结合相关性分析确定了生态因子对三七各成分积累的影响。其中, 年降水量、等温性、平均月温差、最冷月份最低温度、最暖季度平均温度、最湿季度降水量以及最暖季度降水量是影响三七质量的关键生态因子。综上, 本研究全面评价了不同产地三七质量, 揭示了影响三七道地性品质的关键生态因子, 为后续三七质量控制和合理选址提供了参考依据。