作为一种新型铁依赖性细胞死亡方式, 铁死亡特定过程就是含有多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA) 的磷脂在胞膜上过度积累发生过氧化。脂滴时刻处于生成和分解的动态转换, 在调节脂质代谢中起着核心作用, 并时刻处于生成和分解的动态转换。脂滴代谢与铁死亡的发生密切相关, 在铁死亡异常导致疾病中发挥重要作用。本综述首先着重介绍脂滴代谢过程及其对PUFA存储和释放的影响, 并进一步阐明脂滴代谢对铁死亡调控机制及关键调节蛋白, 以期揭示脂滴与铁死亡间的内在联系, 为铁死亡相关疾病的临床治疗提供新思路。

印记位点调节子的弟兄(brother of regulator of imprinted sites, BORIS) 或者类CCCTC结合因子(CCCTC binding factor-like, CTCFL) 是一个相对发现不久的癌症睾丸抗原。与之相关的药物研发已经在小分子、小RNA、多肽药、疫苗以及细胞等多个方向展开。因独特的干扰基因组空间高级结构的能力, BORIS可能代表着一类全新药物靶点。本综述系统梳理BORIS相关分子生物学研究结果, 包括BORIS基因产物的多样性, 由其介导的分子间互作, 受到影响的信号传导通路, 以及现有相关药物研发策略, 以期明了BORIS的上下游调控分子机制及可能进一步突破的研究方向。

抗病毒药物研发是当前及未来生物医药领域的重要研究方向。抗病毒药物研发不仅需要新策略与新技术的应用, 更需要项目团队优势互补、密切配合。本文根据该领域的最新进展, 结合笔者的药物研究实践, 总结了抗病毒药物化学的底层逻辑、创新思维与研究范式。

目前, 脑部疾病已经成为大健康领域的“一大杀手”, 血脑屏障限制药物递送入脑已成为脑部疾病治疗的难点之一。研究表明细胞膜包被技术可以赋予纳米粒免疫逃逸、长循环、靶向递送等优势, 因此膜仿生纳米制剂在药物递送和疾病治疗领域得到广泛运用。其中, 免疫细胞、肿瘤细胞及干细胞来源的细胞膜因其可以通过跨细胞途径和细胞旁路途径穿越血脑屏障, 被用于制备膜仿生纳米制剂以突破血脑屏障实现脑部疾病的治疗。而对细胞膜进行多肽修饰等方式进一步增强了膜仿生纳米制剂的脑靶向递送能力。本文对膜仿生纳米制剂的制备方法进行介绍, 详细阐述了细胞膜包被纳米粒突破血脑屏障, 实现药物高效脑内递送的途径, 并总结这一新型药物递送系统在脑部疾病治疗中的前景与挑战, 为膜仿生纳米制剂治疗脑部疾病的研究提供参考。

抗肿瘤纳米药物从给药位置进入体内后, 还需跨越一系列生理病理障碍, 到达目标作用位置才能有效发挥抗肿瘤疗效。配基修饰策略是提升纳米药物体内递送效率的经典方法, 但具有单一性和阶段性特点的单配基修饰策略与具有多变性和全过程性特点的体内递送进程之间的矛盾, 决定了仅使用单一配基修饰的纳米药物不能满足目标药效需求。所以凭借纳米药物表面积优势使用多配基组合修饰策略是推进新一代智能纳米药物的关键, 本文在对应体内递送进程总结分类了常用功能配基的基础上, 重点讨论了多配基组合修饰抗肿瘤纳米药物的优势及研究进展, 并依据配基组合方式将多配基组合修饰分为协同型及互补型, 这对于保障抗肿瘤纳米药物顺利克服多重生理病理障碍实现精准递送具有重要意义。

目前罕见病仍缺乏有效的治疗方法, 罕见病药物(称孤儿药) 的研发是亟需解决的医学难题。一些生物大分子药物作为生物体内的天然活性成分, 具有良好的生物相容性、低免疫原性、高靶向性, 已成为21世纪药物研发中极具前景的领域之一, 但在体内递送方面仍存在诸多障碍, 鉴于由聚合物、脂质、有机仿生和无机材料等制备的纳米载体在药物递送方面的独特优势, 研究者致力于构建多功能性与协同作用的高效递送系统, 以解决罕见病治疗中生物大分子药物目前存在的瓶颈问题。因此, 本文对近10年来纳米载体递送蛋白、多肽及核酸等药物在罕见病治疗领域的研究进展进行系统综述, 为基于生物大分子药物纳米递送系统的罕见病干预研究提供思路。

无定形态固体分散体能显著提高难溶性药物的溶解度和生物利用度, 但其在制备或储存过程中容易发生结晶而削弱原有的优势。固体分散体中的无定形态药物结晶过程分为成核和晶体生长两步, 其中成核是结晶的起始环节和关键步骤, 但目前尚对无定形态药物结晶成核认识还很有限。本文对无定形态药物成核的研究方法、成核理论、添加物影响成核的机制及成核影响因素进行归纳, 期望为无定形态固体分散体处方设计和提高其物理稳定性提供理论指导。

生物大分子药物因具有高靶向性、剂量小、安全性和生物活性高等独特优势而越来越多地被用于多种疾病的治疗。但同时由于其分子质量大、亲水性强及胃肠道稳定性差等缺点, 加之胃肠道复杂的生理屏障, 导致生物大分子口服生物利用度极低。胃肠道微针作为一种新型主动药物递送技术, 因其能够直接突破胃肠道屏障而实现药物的定位递送、高效吸收而在生物大分子药物口服递送方面具有巨大的潜力。本综述围绕胃肠道微针的驱动及设计策略、制备方法及其口服递送生物大分子药物的应用等方面进行了总结归纳, 并对该技术目前存在的局限性及发展趋势进行了分析, 以促进胃肠道微针的后续研发和临床转化, 为生物大分子的口服给药提供高效、安全的新策略。

误服误用含吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloid, PA) 的中草药是导致我国临床肝窦阻塞综合征(hepatic sinusoidal obstruction syndrome, HSOS) 的主要原因, 利尿剂是目前临床上治疗PA致HSOS的常用药物之一。泽泻作为传统利尿中药, 但其利尿机制仍未完全明确, 且尚未有从利尿角度阐释泽泻改善PA致HSOS的报道。基于课题组前期研究, 本研究以泽泻三萜23-乙酰泽泻醇B (alisol B 23-acetate, AB23A) 为代表性药物, 评价其对毒性PA千里光碱致小鼠急性肝损伤的保护作用, 并进一步考察AB23A对模型小鼠水液失衡的影响。所有动物实验经上海中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号PZSHUTCM220808017), 符合实验动物伦理相关规范。小鼠单次灌胃千里光碱(50 mg·kg^-1) 造模(SEN组), 并设AB23A (40 mg·kg^-1) 干预组(AB23A+SEN组)、溶剂对照组(Ctrl组) 和AB23A对照组(AB23A组)。结果表明, AB23A可明显降低千里光碱致急性肝损伤小鼠血清肝功能生化指标水平, 缓解肝细胞凝固性坏死、肝窦淤血等病理状态; 此外, AB23A还可改善小鼠血清肾功能指标, 改善千里光碱造成的尿液排泄减少、机体电解质紊乱, 并降低千里光碱及其代谢产物的含量。进一步测定小鼠水平衡通路相关蛋白和mRNA的表达, AB23A可明显下调千里光碱模型组小鼠水通路蛋白2 (aquaporin-2, AQP2)、血管紧张素Ⅱ 1型受体的蛋白和mRNA表达水平, 抑制AQP2向顶端质膜运输, 并降低血清血管紧张素Ⅱ含量。体外研究进一步证实AB23A可调节肾脏内髓集合管细胞AQP2的表达。本研究表明, AB23A可调节千里光碱致急性肝损伤小鼠肾脏髓质AQP2, 影响其对水的重吸收, 改善水液平衡。研究结果进一步加深了对泽泻传统利尿活性的认识, 为临床利用泽泻治疗PA致HSOS提供实验基础和理论依据。

烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs) 属于配体门控离子通道受体, 其中α7 nAChR亚型广泛分布于大脑皮层、丘脑和海马体等区域。此外, 在小胶质细胞、巨噬细胞、骨髓细胞等也有分布, 研究发现其与胆碱能抗炎通路的功能密切相关, 是阿尔茨海默症和精神分裂症药物开发的重要靶标。建立稳定的体外药物筛选体系, 对于靶向α7 nAChR新药的高效筛选至关重要。在非洲爪蟾卵母细胞膜上, 重组表达nAChRs的不同亚型, 并通过电生理技术进行电流检测, 是一种先进而复杂的新药筛选模型。分子伴侣可以协助部分nAChRs亚基组装形成功能性受体, 为靶向该受体的化合物筛选提供稳定表达的模型。为此, 本研究从大鼠体内分离克隆了α7 nAChR的一个分子伴侣基因, 其名称为Tmem35a (transmembrane protein 35A), 进一步构建了该基因的重组表达载体, 再利用体外转录技术获得了该基因的cRNA, 将之与α7 nAChR的cRNA混合后同时注射到非洲爪蟾卵母细胞中进行表达。然后, 利用双电极电压钳检测该分子伴侣对α7 nAChR电流表达和通道药理活性的影响。结果显示, TMEM35A (也被称为novel acetylcholine receptor chaperone, NACHO) 可有效提高α7 nAChR蛋白在卵母细胞膜上的表达, 受体蛋白表达量提高了约1倍; 其配体乙酰胆碱(acetylcholine, ACh) 刺激诱发的峰值电流提高了约10倍。注入Tmem35a cRNA后的卵母细胞, 其表达的α7 nAChR对激动剂ACh的半数效应浓度为228.5 μmol·L^-1, 和本体223.3 μmol·L^-1基本一致, 维持了α7受体正常功能特性。研究结果表明, 分子伴侣NACHO有效协助了α7 nAChR在非洲爪蟾卵母细胞的异源表达, 稳定表达的α7 nAChR可以为靶向该受体的先导化合物活性筛选提供模型。本研究所有动物实验过程经广西大学伦理委员会审查批准(批准号: GXU-2023-0249)。

N-型电压门控钙离子(Ca²⁺) 通道(N-type voltage-gated calcium channel, N-type VGCC, Ca_V2.2) 在突触前末端响应动作电位介导Ca²⁺内流, 并在突触发生、神经递质释放和伤害性信号传递中发挥重要作用, 是神经痛(慢性痛) 等重大疾病治疗药物研发的关键靶点。由于钙离子通道体外表达困难, 通道电流检测技术复杂, 其新药筛选模型极其缺乏。因此, 本研究利用非洲爪蟾卵母细胞表达系统, 进行Ca_V2.2体外重组表达, 建立电生理学技术药物筛选模型, 并对该表达技术体系进行了优化(本研究获得广西大学伦理委员会审查批准, 批准号: GXU-2023-0249)。首先, 以大鼠Ca_V2.2的主亚基α1B及其辅助亚基α2δ1和β3的cDNA基因为模板, 分别在体外进行转录, 人工合成了Ca_V2.2 3个亚基的mRNA (cRNA), 按照2∶1∶1的质量比混合, 将3种cRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞中进行表达。随后使用双电极电压钳技术检测Ca_V2.2离子通道是否产生细胞膜内向电流, 同时对各个表达条件进行了优化, 从通道的激活、失活等方面表征了其门控功能。结果显示, 在cRNA显微注射后的第3~5天, 使用四乙基氢氧化铵(TEAOH) 和1, 2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N, N, N', N'-四乙酸四酯(BAPTA-AM) 处理, 可分别消除内源性钾离子通道和Ca²⁺激活的氯离子通道干扰, 成功检测到稳定的Ca_V2.2介导的钡离子电流。Ca_V2.2的最大激活膜电位为0 mV, 当膜电位大于+50 mV时会出现电流方向反转。通过拟合稳态激活和失活曲线获知Ca_V2.2的半激活电位和半失活电位分别为-15.9和-60.2 mV。本研究基于非洲爪蟾卵母细胞, 通过条件优化, 建立了稳定的Ca_V2.2表达系统。该体外表达系统可以为靶向Ca_V2.2活性化合物或先导药物的筛选提供新的途径。

本研究通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导RAW264.7细胞建立炎症反应模型, 探讨田蓟苷(tilianin) 对炎症反应的影响及其作用机制。通过CCK-8 (cell counting kit-8) 实验检测细胞活力, 酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA) 检测肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 和白细胞介素6 (interleukin 6, IL-6) 含量; Griess试剂法检测一氧化氮(nitric oxide, NO) 含量; 2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2', 7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCFH-DA) 荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen radical, ROS) 水平; Western blot检测Toll样受体4 (Toll-like receptor 4, TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation primary response gene 88, Myd88)、核转录因子-κB p65 (nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB (phospho-nuclear factor-κB, p-NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α (inhibitor of NF-κB α, ⅠκBα) 和磷酸化NF-κB抑制蛋白α (phospho-inhibitor of NF-κB α, p-ⅠκBα) 的蛋白表达水平; qRT-PCR法和Western blot检测Nod样受体蛋白3 (Nod-like receptor protein 3, NLRP3)、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18前体(pro-IL-18) 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1前体(pro-caspase-1) 的mRNA和蛋白水平。免疫荧光染色检测NF-κB p65核转位; 使用TLR4抑制剂resatorvid (TAK242) 进一步验证田蓟苷对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路的影响。结果显示, 田蓟苷显著降低了RAW264.7细胞上清中TNF-α、IL-6和NO水平以及细胞内ROS含量。田蓟苷降低了TLR4、Myd88、p-NF-κB p65和p-ⅠκBα蛋白表达水平, 抑制了NF-κB p65的核转位, 同时显著降低了NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18和pro-caspase-1的蛋白表达水平以及NLRP3和pro-IL-1β的mRNA水平。上述研究结果表明, 田蓟苷能明显减轻LPS诱导RAW264.7细胞产生的炎症反应, 其机制可能与下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路从而抑制NLRP3炎症小体有关。

三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC) 侵袭性强、复发率高且缺乏有效的治疗方法, 是预后最差的乳腺癌亚型, 因此寻找针对TNBC的有效靶向疗法成为当务之急。组织蛋白酶A (cathepsin A, CTSA) 是一种酸性丝氨酸羧肽酶, 在多种肿瘤组织中高表达, 但是CTSA在TNBC中的作用及机制尚不明确。本研究发现CTSA在TNBC中表达上调, 高表达的CTSA与TNBC患者不良预后呈现正相关。实验结果进一步显示, 敲低CTSA抑制TNBC细胞的增殖、侵袭和克隆形成能力, 提高其药物敏感性, 抑制TNBC疾病进展。机制研究表明, CTSA通过阻碍早幼粒细胞白血病蛋白(promyelocytic leukemia protein, PML) 与其E3泛素连接酶RNF4相互作用, 抑制PML蛋白泛素化和降解, 进而维持PML核小体(PML nuclear bodies, PML-NBs) 结构稳定性。体外结果显示, CTSA抑制剂具有抑制TNBC干细胞性状的治疗效果。综上, 本研究表明抑制CTSA促进PML的降解可能作为TNBC的潜在治疗策略。本实验所有动物实验获得中国医学科学院医药生物技术研究所伦理委员会批准(批准号: IMB-20240326D502)。

本研究旨在探讨枸杞叶对来曲唑诱导的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS) 小鼠的干预作用及其机制。采用来曲唑联合高脂饮食制备PCOS模型, 造模成功后将40只小鼠随机分为PCOS组、阳性药二甲双胍组、枸杞叶低剂量组和枸杞叶高剂量组, 灌胃给予相应药物, 持续29天。实验结束摘眼球取血并收集卵巢组织, 检测各组小鼠卵巢质量、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、睾酮(T)、抗苗勒管激素(AMH)、促黄体生成素(LH)、促卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E₂)水平。采用苏木精-伊红染色观察卵巢组织形态, 并计数卵母细胞、囊性卵泡和黄体。采集小鼠盲肠内容物进行肠道菌群组成和差异菌群等分析。动物实验过程经南京中医药大学动物伦理委员会审核通过。结果显示, PCOS小鼠动情周期紊乱。与PCOS组相比, 枸杞叶组能明显减轻小鼠卵巢损伤, 减少囊状扩张卵泡数, 使动情周期正常化。经枸杞叶干预后的FBG、FINS、T、AMH、LH、FSH、LH/FSH水平显著降低(P < 0.05), 而E₂水平显著升高(P < 0.001)。此外, 枸杞叶能调节PCOS小鼠肠道菌群多样性紊乱, 提高拟杆菌门丰度, 降低厚壁菌门、回肠杆菌属、罗姆布茨菌属、类杆菌属的丰度。综上, 枸杞叶可通过改善胰岛素抵抗、调节生殖激素紊乱及肠道菌群失调而发挥对PCOS小鼠的治疗作用, 为枸杞叶的合理利用及开发提供了科学依据和有益参考。

PI3Kγ和PI3Kδ在免疫系统中有重要的调控作用, 靶向这两个亚型有助于重塑肿瘤微环境。PI3Kγ和PI3Kδ是肿瘤免疫治疗的潜在靶点, 本研究在前期工作的基础上, 设计合成了16个新型吡唑并嘧啶类化合物并发现了PI3Kγ/δ双重抑制剂16l。体外研究表明, 化合物16l在蛋白和细胞水平具有良好的活性和选择性。在蛋白层次16l对PI3Kγ和PI3Kδ的抑制活性分别为0.11和0.79 nmol·L^-1; 在细胞层次16l抑制PI3K Akt S473的磷酸化, 对PI3Kγ和PI3Kδ的抑制活性分别为3和7 nmol·L^-1。体内研究表明, 在Sprague-Dawley (SD) 大鼠上, 化合物16l具有良好的药代动力学性质。在MC38同种移植小鼠模型上, 化合物16l能够激活小鼠的免疫系统, 并显著抑制肿瘤生长。动物实验得到了中国科学院合肥物质科学研究院动物伦理委员会的批准(批准号: DWLL-2000-06)。同时, 人类ether-a-go-go相关基因(human ether-a-go-go-related gene, hERG) 实验表明16l没有明显的潜在心脏毒性。本研究为深入了解PI3Kγ/δ的病理和生理功能提供了工具分子, 为靶向PI3Kγ/δ的小分子免疫治疗药物的研发提供了苗头化合物。

研究多裂黄檀Dalbergia rimosa Roxb.根茎的化学成分。采用硅胶、MCI和Sephadex LH-20柱色谱以及半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化, 通过波谱数据鉴定化合物结构。从多裂黄檀根茎的乙酸乙酯部位中分离得到13个化合物, 分别鉴定为多裂异黄酮A、B (1和2)、刺芒柄花素(3)、7,4′-二甲氧基异黄酮(4)、4′,6,7-trimethoxyisoflavone (5)、鹰嘴豆芽素A (6)、樱黄素(7)、7-O-methyltectorigenin (8)、3′-hydroxydaidzein (9)、orobol 7,3′-dimethyl ether (10)、2′,7-dihydroxy-4′,5′-dimethoxyisoflavone (11)、pruinosanone E (12)、caviunin (13)。其中, 化合物1和2为新化合物, 化合物3~13为首次从该植物中分离得到。化合物9和11对DPPH自由基有显著清除作用。

采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱以及高效液相色谱等技术手段从东方泽泻(Alisma orientale) 块茎50%丙酮提取物中分离得到4个呋喃α-丁烯内酯类化合物。通过现代波谱学技术和电子圆二色谱(ECD) 鉴定了化合物的结构, 分别为(5R)-5-hydroxy-3, 4-dimethylfuran-2(5H)-one (1)、5-hydroxy-3, 5-dimethylfuran-2(5H)-one (2)、5-hydroxy-4-(1-methylethyl)-2(5H)-furanone (3) 以及alismanoid A (4)。其中, 化合物1为新化合物, 化合物2~4为首次从东方泽泻中分离得到, 化合物1~4具有潜在的抗肺纤维化活性。

利用硅胶、Sephadex LH-20和Toyopearl HW-40C等柱色谱及半制备液相等分离纯化方法, 从杜仲中分离得到11个化合物。运用现代波谱学方法确定化合物的结构, 分别鉴定为neoeucommiate A (1)、(7S, 8R)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol (2)、urolignoside (3)、ficusal (4)、tiruneesiin (5)、glochidioboside (6)、forsythialansides B (7)、ecdysanol B (8)、(+)-syringaresinol-4-O-β-D-glucopyranoside (9)、(+)-pinoresinol-4-O-[6ʹʹ-O-vanilloyl]-β-D-glucopyranoside (10) 和samsesquinoside (11)。其中化合物1为新化合物, 化合物3~7、10、11为首次从杜仲中分离得到。

综合应用正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱以及半制备型液相色谱等技术, 对多伞阿魏[Ferula feruloides (Steudel) Korovin] 根80%乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行分离纯化, 得到11个化合物, 再运用现代波谱学方法 (NMR、MS、UV、IR) 鉴定化合物的结构, 分别鉴定为baigene D (1)、baigene E (2)、baigene F (3)、β-kirialovin (4)、α-kirialovin (5)、falcarindiol (6)、ammoresinol (7)、dshamirone (8)、2, 3-dihydro-7-hydroxy-2S^*, 3R^*-dimethyl-3-[4-methyl-5-(4-methy1-2-furyl)-3(E)-pentenyl]-furo[3, 2-c]coumarin (9)、2, 3-dihydro-7-hydroxy-2S^*, 3R^*-dimethyl-2-[4, 8-dimethyl-3(E), 7-nonadi-enyl]-furo[3, 2-c]coumarin (10) 和baigene C (11)。其中化合物1~3为新的香豆素类化合物, 化合物4~6为首次从多伞阿魏中分离得到。采用MTT试验对化合物5、7~11的抗人胃癌(MKN-45) 细胞增殖活性进行评价, 结果表明, 化合物7~11均表现出较强的抑制活性, 化合物5表现出较弱的抑制活性。

通过不同型号树脂、正和反相硅胶及各种凝胶柱色谱, 结合反相和手性柱HPLC技术, 从“归头”水煎提取物中分离并手性拆分得到9对木脂素类对映体, 其中3对新结构对映体[(+)-/(-)-1~(+)-/(-)-3] 以及2对首次实现手性拆分的对映体[(+)-/(-)-4和(+)-/(-)-5]。通过波谱数据分析、电子圆二色谱(ECD) 理论计算和X-单晶衍射技术, 确定了所有对映体的绝对构型。新结构和首次拆分并确定绝对构型的对映体分别命名为(+)-/(-)-当归木脂素Q~T [(+)-/(-)-1~(+)-/(-)-4] 和(+)-/(-)-滇瑞香醇[(+)-/(-)-5]。

传统饮片煎煮效率低、批次间一致性差、物理形态不规则, 难以满足现代自动化生产和临床精准快速调配等需求。因此, 本研究旨在开发一种新型颗粒饮片以满足中药产业的高质量发展需求。本文以传统的金银花饮片为参照, 基于流动性、标准汤剂的出膏率、特征图谱、糊化度、有效成分含量、转移率以及其解热抗炎功效, 评价了新型金银花颗粒饮片与传统饮片的异同。流动性实验表明, 中粒径(10~24目) 的流动性显著优于传统饮片(P < 0.01); 出膏率结果表明不同粒径与原饮片之间没有显著性差异(P > 0.05), 但小粒径(24~65目) 存在汤剂澄清度差和糊化现象; 指标性成分转移率以绿原酸和木犀草苷计算, 传统饮片和不同粒径之间转移率没有显著性差异(P > 0.05); 药理结果以大鼠肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、大鼠白细胞介素-1β (IL-1β) 及大鼠前列腺素E₂ (PGE₂) 含量、二甲苯耳肿胀抑制率和肉芽肿抑制率表明, 传统饮片和新型颗粒饮片(中粒径) 的药理效果无显著性差异(P > 0.05)。本研究通过考察金银花新型颗粒饮片的流动性、出膏率、糊化度和解热抗炎作用, 表明金银花新型颗粒饮片与市售传统饮片的基本属性、药理作用一致。新型颗粒饮片具有资源利用率高、质量均一, 便于机械化生产和智能调剂等特点, 具有良好的临床应用前景。本研究动物实验获得中国中医科学院实验动物伦理委员会的批准(批准号: 2022B214)。

采用检测血清生化指标与血浆代谢组学特征关联探索热毒宁注射液(Reduning, RDN) 与青霉素注射液(penicillin G, PG) 序贯用药风险“时间窗”, 以期降低二者联用引发不良反应发生风险。所有动物实验操作和福利均遵循河南中医药大学第一附属实验动物伦理与动物福利委员会要求(批号: YFYDW2020002)。利用ELISA检测大鼠血清中生化指标的含量变化检测相关过敏指标, 判定出RDN联用PG能引起由补体途径激活后的类过敏反应(pseudo-allergic reactions, PARs)。进一步对二者设置不同时间给药间隔(1.5、2、3.5、4、6和8 h PG+RDN) 进行考察, 发现在3.5 h以内序贯给药, 均能引起明显的PARs; 而给药间隔超过4 h后PARs则明显减轻。同时采用LC-MS进行血浆代谢组学分析, 平行比较大鼠的血清生化指标水平与血浆代谢轮廓特征, 筛选出22个差异代谢物在3.5 h前后呈现出与生化指标相似或相反的变化趋势。并富集到花生四烯酸代谢、甾体激素生物合成代谢、亚油酸代谢、甘油磷脂代谢、色氨酸代谢等10条类过敏相关通路。综上所述, RDN和PG序贯使用所导致的药物不良反应确实存在风险“时间窗”现象, 在“时间窗”之后的间隔用药能有效降低不良反应发生风险。

黄芪多糖是黄芪中免疫调节活性最强, 含量最为丰富的物质, 具有抗肿瘤、抗病毒、免疫促进等多种生物活性, 临床应用广泛。前期研究发现黄芪多糖主要由2种不同相对分子质量多糖APS-Ⅰ (> 2 000 kDa)、APS-Ⅱ (10 kDa) 组成, APS-Ⅱ (10 kDa) 为黄芪多糖中活性最强组分, 并采用α-1, 4-葡聚糖内切酶将APS-Ⅱ降解为寡糖, 通过体外免疫活性筛选发现2~9糖整体免疫活性较低, 而10~14糖具有较强的免疫活性, 且活性优于未降解的APS-Ⅱ。为了探究APS-Ⅱ降解寡糖发挥免疫活性的关键结构, 本文采用MALDI-TOF-MS生物质谱以及高分辨质谱仪器ESI-Q Exactive-MS对APS酶解寡糖进行解析, 通过对比发现10~14糖中存在1→4和1→6两种连接方式共存的支链结构, 推测1→4和1→6两种连接方式共存的支链结构为APS-Ⅱ发挥免疫活性的关键结构, 为黄芪多糖和寡糖的构效关系研究奠定理论基础。

黄柏传统评价以“肉厚色黄者”为佳, 但该性状特征的科学内涵尚未被阐释。本研究基于“辨状论质”理论, 首先采用游标卡尺和全自动测色色差仪对黄柏饮片厚度和粉末颜色进行量化, 同时采用高效液相色谱(HPLC) 法建立黄柏饮片特征图谱, 共表征12个特征峰, 将外观性状指标与水分、醇溶性浸出物以及特征成分进行Pearson相关性分析、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA) 和方差分析(ANOVA), 探讨黄柏饮片外观性状(包括厚度和粉末三色空间值L^*亮度、a^*红绿、b^*黄蓝) 与内在成分及相对含量之间的相关性。结果表明黄柏的外观性状特征(厚度和颜色) 与黄柏中的化学成分(生物碱和酚酸) 的含量呈显著相关性。基于分析结果, 对5种代表性成分进行含量测定, 5种成分含量总和在厚度≥ 4 mm (13.15% ± 2.25%) 和鲜黄色样品(12.14% ± 2.00%) 中的含量显著高于厚度 < 4 mm (10.89% ± 1.41%) 和暗黄色黄柏样品(10.32% ± 2.41%), 将外观性状与成分含量建立“性状-质量-含量”对应关系。研究结果证实黄柏饮片厚度和颜色2个主要外观性状指标可作为判断其品质的依据, 一定程度上诠释了黄柏传统评价“肉厚色黄者为佳”的科学内涵, 同时为黄柏饮片商品等级标准的建立积累了数据和基础。

本研究整合功效实验、网络药理学和HPLC探讨大黄-桃仁药对(Rhei Radix et Rhizoma-Persicae Semen combination, RRR-PS) 配伍发挥活血化瘀作用的功效物质群及分子作用机制。建立大鼠血瘀证模型, 进行血液流变指标和凝血四项综合评价, 结果显示, 与模型组相比, RRR-PS组大鼠的全血黏度、血沉、红细胞聚集指数等指标均明显回调(P < 0.01)。网络药理学发现RRR-PS通过作用于钙调蛋白1 (CALM1)、一氧化氮合酶2 (NOS2)、糖皮质激素受体(NR3C1) 等靶点, 调控血小板活化、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、血管内皮生长因子(VEGF) 等信号通路发挥活血化瘀的功效, 并发现关键成分: 番泻苷B、儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、没食子酸。运用HPLC探究关键成分的溶出率, 结果发现RRR-PS配伍后, 儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚4种主要功效物质含量均显著提高(P < 0.01)。综上所述, RRR-PS活血化瘀功效显著, 其作用机制与促进血管生成、抗凝血、抗血栓、抗炎有关; 功效发挥与RRR-PS配伍后, 溶剂系统改变, 儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚大量溶出相关。研究结果可进一步为后续RRR-PS配伍活血化瘀功效物质及作用机制研究提供参考。动物实验已获得陕西中医药大学实验动物委员会批准(批准号: SUCMDL20210309002)。

鲟鱼软骨因为富含硫酸软骨素和蛋白质等生物活性物质而具有广阔的应用前景。本研究进行了鲟鱼软骨肽在NIH/3T3和C2C12细胞中的安全性评价, 研究结果表明, 相比空白对照, 鲟鱼软骨肽不会引起NIH/3T3、C2C12细胞的凋亡和坏死, 为鲟鱼软骨肽的经皮给药递送提供体外实验依据。进一步评价鲟鱼软骨肽对2′-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的清除活性, 发现鲟鱼软骨肽具有较好的抗氧化活性。本研究制备得到了一种稳定性好、皮肤刺激性小、鲟鱼软骨肽含量为7%的鲟鱼软骨肽软膏, 并分析了其在小鼠皮肤上的透皮吸收能力(本实验获得中国医学科学院药物研究所动物伦理委员会批准, 批准号: 00007684)。结果发现, 鲟鱼软骨肽软膏12 h累积释放量达到92%。本研究进一步分析了鲟鱼软骨肽软膏抑制二甲苯致炎后小鼠耳肿胀的能力, 相比于基质组和对照组, 鲟鱼软骨肽软膏具有显著抗炎活性。综上, 本研究发现鲟鱼软骨肽具有良好的安全性和抗氧化活性, 制备的鲟鱼软骨肽软膏为鲟鱼软骨肽的进一步应用及经皮给药递送研究提供实验依据。

鉴于血管在实体肿瘤中的关键作用, 血管破坏疗法在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC) 中的应用潜力令人期待。本研究制备负载血管破坏剂康普瑞汀磷酸二钠(combretastatin A4 phosphate disodium, CA4P) 和抗血管生成药物雷帕霉素(rapamycin, Rap) 的酸敏感脂质体PPD/CA4P/Lip-Rap, 探索血管破坏策略在TNBC中的应用潜力。采用¹H NMR、动态光散射法及透射电镜对PPD/CA4P/Lip-Rap进行表征, 并检测其载药量、酸敏感性。PPD/CA4P/Lip-Rap的粒径为161.53 ± 1.89 nm, zeta电位为-20.03 ± 0.9 mV, 具有良好的酸敏感释药能力。通过体外CCK-8实验证明Rap能够增强CA4P的血管破坏能力。Rap能够杀伤边缘残留肿瘤细胞, 抑制肿瘤复发。纳米载体能够进一步增强疗效。通过蛋白质免疫印迹(Western blot, WB) 实验证明，Rap通过mTOR/p70S6K和mTOR/4E-BP1通路降低缺氧诱导因子-1α (hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α) 的表达水平, 进而抑制肿瘤缺氧反应激活和血管再生。PPD/CA4P/Lip-Rap能够有效破坏肿瘤血管, 抑制肿瘤血管再生和复发, 以肿瘤血管破坏作为治疗靶标, 为TNBC的治疗提供一种新思路。

光动力治疗是一种具有临床前景的新兴癌症治疗方法, 可以特异地在肿瘤部位发挥作用并且对人体的伤害较小, 但是疏水性光敏剂小分子的毒性、肿瘤的乏氧微环境及纳米载药系统的生物降解性等影响了其抗肿瘤疗效和体内代谢清除。本文利用六氯铂酸作为新型氧化剂成功引发吡咯/氨基吡咯的氧化聚合, 实现了其表面氨基功能化; 进一步通过还原剂硼氢化钠还原纳米结构中铂酸阴离子为铂纳米簇, 制得铂纳米簇掺杂的聚吡咯纳米粒子(platinum nanocluster-doped polypyrrole nanoparticles, PtPPy); 最后通过酰胺键偶连光敏剂四(4-羧基苯基)卟吩[meso-tetra (4-carboxyphenyl)porphine, TCPP], 获得递送TCPP的功能性纳米药物(PtPPy@T)。该纳米药物为球型结构, 形态均匀, 粒径为91.93 ± 13.45 nm, zeta电位为-18.39 ± 1.4 mV。实验证明, PtPPy@T可与肿瘤过表达的过氧化氢发生反应, 产生大量的氧气, 改善肿瘤乏氧微环境, 同时为随后的光动力治疗提供充足的反应基板; 使用658 nm激光照射肿瘤组织, 激活PtPPy@T的光动力效应, 催化氧气转化为单线态氧, 从而引发肿瘤细胞的氧化损伤并诱导其凋亡; 实验研究表明该PtPPy@T纳米药物在体内和体外都有较好的肿瘤抑制效果。所有动物实验均经中国医学科学院、北京协和医学院放射医学研究所机构动物护理和使用委员会批准(IRM/2-IACUC-2312-006)。

从致病性放线菌Nocardia brasiliensis IFM 0406中得到的二萜糖苷brasilicardin A, 因免疫抑制活性显著、毒性较低且作用机制独特而成为新型免疫抑制剂的候选分子。由于原菌株中产率低, 且结构复杂、化学合成困难, brasilicardin A及其类似物的获得成为该类新型免疫抑制剂的研究热点。根据目前报道的brasilicardin A可能的生物合成途径, 通过生物信息学分析生物合成相关二萜合酶, 定向从致病菌株N. brasiliensis IFM 0406中扩增可能合成brasilicardin A骨架的基因bra1~5, 在白色链霉菌Streptomyces albus R1中成功实现异源表达。通过液体发酵培养, 利用硅胶柱色谱及半制备液相色谱等方法进行化合物的分离纯化, 共分离到6个新brasilicardins化合物, 命名为brasilicardin H~M。利用脂多糖(LPS) 活化的小鼠原代巨噬细胞炎症模型对分离鉴定的brasilicardins进行了体外活性筛选, 结果显示, brasilicardin H~M具有较强抑制巨噬细胞释放一氧化氮(NO) 的作用, IC₅₀分别为28.24 ± 3.70、37.44 ± 2.00、39.85 ± 4.02、26.77 ± 4.40、65.25 ± 1.48、15.24 ± 2.72 μmol·L^-1 (阳性对照吲哚美辛IC₅₀为34.28 ± 4.10 μmol·L^-1), 表明6个化合物具有潜在的抗炎活性。本研究为brasilicardin A生物合成途径的彻底阐明提供了条件, 也为研究该类化合物的构效关系、药物研发等奠定了基础。

刺五加Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim.) Harms是我国东北道地药材之一, 本研究根据之前的叶绿体基因组测序结果, 选取atpI和atpB_rbcL基因片段对市售刺五加样品进行种质资源鉴定, 并利用HPLC对其紫丁香苷含量进行测定, 以期确定市售刺五加的主流种质和质量。本研究从24省47市收集80份刺五加样品并提取DNA, 通过PCR扩增atpI和atpB_rbcL基因片段, 分析结果表明, 2个基因片段联合分析形成7个单倍型(H2、H5、H8、H10、H12、H14、H23), 其中来自黑龙江伊春、哈尔滨尚志、黑龙江绥化、辽宁抚顺、辽宁本溪、吉林长白和吉林靖宇的单倍型H2是主流单倍型, 占总样本量的58.75%。H14和H23为产地独有单倍型, 分别来自黑龙江省双鸭山市饶河县和黑龙江省绥化市明水县。通过HPLC检测市售刺五加样品中的紫丁香苷含量, 结果表明73.96%样品紫丁香苷含量符合药典标准。样品间的紫丁香苷含量差异显著, 在0.003 7%~0.524 5%之间, 相差0.520 8%, 说明刺五加市场样品质量参差不齐, 但是不同单倍型之间市售刺五加紫丁香苷含量没有显著性差异。市场样品中单倍型H23中的紫丁香苷含量比较高, 因此可能是质量比较好的种质。本文对刺五加市场样品的种质资源和药材质量进行研究, 有利于指导刺五加市场样品流通、临床合理用药和后续优良品种筛选。