人体多个系统的非感染性慢性疾病如糖尿病、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、动脉粥样硬化(AS)、神经退行性疾病、骨质疏松和恶性肿瘤等具有一些共同的发病机制, 如非可控性炎症(NRI)、肠道菌群紊乱、内质网应激、线粒体功能紊乱、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 通路异常等, 是临床“异病同治”的基础; 一些临床常用的慢病治疗药物如二甲双胍、小檗碱、阿司匹林、他汀类和雷帕霉素, 通过抗炎、调控肠道菌群、抑制内质网应激、改善线粒体功能、抑制mTOR等机制同时对多种慢性疾病具有改善作用, 发挥“异病同治”的效果。而对于病毒性感染的疾病, 因为有些病毒需要一些共性的病毒复制酶, 这类酶的抑制剂也就成了临床抗病毒“异病同治”的运用范例(如同时抗艾滋病和乙肝的替诺福韦); 尤其是在针对突发的病毒传染病时, 这些病毒酶抑制剂在抗疫过程中快速地发挥出“异病同治”的重要作用, 如阿兹夫定和索非布韦等。本文对“异病同治”的生物基础以及这些药物的可能作用机制的研究进展进行综述, 以期为新药研发提供科学依据和新的参考。

富含脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 的外膜是绝大多数革兰阴性(Gram-negative, G^-) 菌生存必需的生物学屏障。LPS转运蛋白(lipopolysaccharide transport protein, Lpt) 复合体LptDE负责LPS转运和外膜组装的最后关键一步, 在G^-菌中普遍存在且结构-功能较为保守, 哺乳动物细胞中缺乏同源蛋白, 是颇具开发前景的抗菌新靶标。近10年, LptDE蛋白三维结构的破译为基于此类“非酶”蛋白靶标的药物发现奠定了基础, 首个作用于LptD的拟肽类化合物murepavadin开启了一类新作用机制的抗菌药物研究。本文将总结LptDE的分子特征、结构-功能, 梳理murepavadin等新型拟肽类抗菌药物的研究进展, 以期为相关研究提供参考。

脓毒症是由感染引起的全身炎症反应导致的器官功能障碍, 过度炎症和免疫抑制交织存在, 严重者甚至可发展为多器官功能衰竭。研究表明, 吲哚胺-2, 3-双加氧酶1 (indoleamine 2, 3-dioxygenase 1, IDO1) 介导的色氨酸代谢参与了脓毒症的发生发展过程, 血浆犬尿氨酸水平和犬尿氨酸/色氨酸(kynurenine/tryptophan, Kyn/Trp) 比值升高是败血症发展的早期指标。本文系统总结了IDO1在脓毒症急性炎症期、后期免疫抑制及器官损害过程中所发挥的作用, 主要包括对炎症状态、免疫细胞功能、血压及其他环节的调节, 同时对靶向IDO1药物临床前研究进行了分析。深入了解和研究IDO1可能有助于从全新的角度认识脓毒症和多器官损害的发病机制及临床意义, 并为探索其防治方法提供新的研究思路。

严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2) 引起的新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019, COVID-19) 对全球公共卫生和经济造成了前所未有的影响。SARS-CoV-2通过其表面的刺突蛋白与宿主细胞膜上的血管紧张素转换酶2相结合是入侵宿主细胞的关键步骤, 以刺突蛋白为靶标的小分子药物成为抗SARS-CoV-2研究的热点。活性筛选是小分子药物研发的关键步骤。鉴于此, 本文综述了SARS-CoV-2刺突蛋白小分子抑制剂的活性筛选方法, 以期为靶向刺突蛋白的抗病毒药物研发提供参考。

倍半萜类化合物是基本骨架含15个碳原子的天然萜类化合物, 主要存在于植物挥发油中, 具有重要的生理作用和药用价值。细胞色素P450 (cytochrome P450, CYP450) 是一类超基因家族编码的单加氧酶, 是植物中最大的基因家族之一, 参与萜类、生物碱等多种次生代谢产物的合成与代谢。在萜类生物合成过程中, CYP450酶通过引入羟基、羧基、羰基等官能团参与萜类化合物的后修饰阶段, 为丰富萜类化合物多样性起到了重要作用。参与倍半萜合成的CYP450酶及底物催化特异性机制已有一些研究, 本文简要介绍了植物倍半萜类化合物的生物合成途径、P450酶的结构和分类, 对参与倍半萜生物合成的CYP450酶进行了总结, 以期为更深入探究CYP450酶在合成倍半萜类化合物中的作用提供参考。

近年来, 多糖因其安全性高、免疫活性好受到广泛关注。多糖体内过程的研究是多糖药物开发亟待解决的关键科学问题。目前在多糖药代动力学和免疫调节领域研究取得了一定进展。然而, 由于多糖既缺少生色基团, 又无光吸收基团, 且多糖本身分子结构复杂, 致使多糖体内过程和免疫调节作用机制的研究进展缓慢。有效地结合多种技术手段可以突破多糖体内难示踪、免疫调节机制不明的瓶颈, 促进多糖的开发与利用。本文系统归纳总结了近年来在多糖体内过程及其免疫调节作用机制研究中的关键技术, 以期为多糖的体内过程及免疫调节机制的研究提供技术借鉴和研究思路。

小分子酚类物质在动植物中广泛存在, 具有一些共同的生物活性。人体内的苯丙氨酸和酪氨酸代谢, 特别是儿茶酚胺类神经递质代谢会产生内源性小分子酚类物质。内源性的小分子酚类物质与人及一些动物的重要生理过程、精神类疾病的发生密切相关, 本文对此做了系统的整理分析。结合课题组前期对天然小分子酚的实验研究和文献分析, 深化了对“小分子酚是一种药理学信号载体”假说的认识, 在此基础上进一步提出“酚组学”的概念, 分析了在“酚组学”的知识框架下将来可以开展的研究方向和研究内容, 为阐释药物作用机制、发现新药物靶点、寻找精神疾病标志物等方面提供了新的研究视角。

由于与人体皮肤角质细胞间的脂质层高度相似性的特点, 包载天然活性物质的液晶乳化技术制备的层状液晶结构的功能化妆品成为近年的研究热点。该类化妆品往往具备水润清爽的涂抹肤感、优异的皮肤屏障修复功能和高效的保湿作用等特点, 极具应用前景。目前, 关于液晶乳化技术应用于功能化妆品的研究尚处于初始阶段, 具有参考价值的相关报道较少。基于此, 本论文拟从人体皮肤结构、液晶尤其是层状液晶的结构组成、层状液晶包载天然活性物质用于功能化妆品的优势、含有层状液晶结构功能化妆品的制备工艺及相关上市功能化妆品等进行了全面的综述。最后, 对液晶乳化技术在功能化妆品中的应用前景进行了展望, 以期为从事液晶乳化技术相关功能化妆品的研究提供有益的参考。

本文探讨杨梅素(myricetin, MYR) 对单侧输尿管结扎(unilateral uretera obstruction, UUO) 和胆管结扎(common bile duct ligation, CBDL) 诱导的小鼠肾脏纤维化的影响及其作用机制。动物实验已获得中国药科大学伦理委员会批准, 项目伦理号为2022-10-020。选取35只ICR小鼠, 分为control组、UUO组、UUO+MYR组、CBDL组、CBDL+MYR组。H&E和Masson染色检测肾脏组织病理变化, 蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB) 检测肾组织中纤维化相关蛋白的表达; 总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD) 活性检测试剂盒(WST-8法) 检测CBDL小鼠肾脏组织中的总SOD变化。体外实验采用HK-2细胞, 细胞转化生长因子-β1 (transforming growth factor beta 1, TGF-β1) (10 ng·mL^-1) 造纤维化模型, 高糖(30 mmol·L^-1) 造氧化应激模型, 随后使用不同浓度的MYR处理, WB检测纤维化及氧化应激相关蛋白的表达; 使用不同浓度的MYR处理NIH/3T3细胞, 5-溴-2′-脱氧尿苷(5-bromo-2′-deoxyuridine, Brdu) 标记法检测其对细胞增殖的影响。结果显示, UUO组和CBDL组的肾脏病变严重, 胶原沉积明显, Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ, COL-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin, FN)、波动蛋白(vimentin)、纤溶酶原激活物抑制物1 (plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1) 蛋白表达上调, CBDL组小鼠肾脏SOD酶活力明显下降, MYR给药治疗后逆转了上述变化。MYR给药抑制NIH/3T3细胞的增殖活力而对HK-2细胞没有影响, 降低了TGF-β1诱导HK-2细胞后PAI-1、FN、vimentin的上调。MYR给药也能上调高糖诱导HK-2细胞后核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)、血红素加氧酶1 (heme oxygenase-1, HO-1) 的下调。综上所述, MYR在体内外都可发挥改善肾脏纤维化的作用, 可能是通过抑制成纤维细胞的增殖, 同时激活Nrf2/HO-1信号通路抑制氧化应激发挥作用。

探讨常山酮(halofuginone) 抑制肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC) 细胞活性的作用及机制。以肝癌HepG2细胞为主要研究对象, 使用CCK-8法、Transwell法、流式细胞术检测不同浓度和时间处理下, 常山酮对HepG2细胞活性、细胞迁移、细胞周期和细胞凋亡的影响。通过实时荧光定量PCR (qPCR) 和Western blot检测常山酮处理后细胞中柠檬酸合酶(citrate synthase, CS)、酮戊二酸脱氢酶(ketoglutarate dehydrogenase, OGDH) 和异柠檬酸脱氧酶(isocitrate deoxygenase, IDH) 的表达水平。与空白组相比, 常山酮显著抑制HepG2细胞活性(P < 0.01), 降低HepG2细胞迁移率(P < 0.01), 诱导肝癌HepG2细胞凋亡(P < 0.01), 促使HepG2细胞周期停滞在S期(P < 0.01)。常山酮处理后肝癌HepG2细胞中三羧酸循环关键酶CS、IDH3和OGDH表达量上调, 异柠檬酸脱氢酶同工酶IDH1和IDH2表达量下调。常山酮可抑制肝癌HepG2细胞增殖和迁移, 促进细胞凋亡并存在明显的剂量依赖性效应, 这可能与促进细胞有氧代谢有关。

本研究旨在探讨丹参的有效成分丹酚酸B (salvianolic acid B, Sal B) 通过调控线粒体分裂融合对氧糖剥夺/再复(oxygen and glucose deprivation/reperfusion, OGD/R) 损伤的H9C2心肌细胞的保护作用。通过建立OGD/R模型模拟心肌缺血再灌注损伤过程。细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8) 检测细胞活力; 试剂盒法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)、总谷胱甘肽(total glutamyl cysteinyl glycine, t-GSH)、一氧化氮(nitric oxide, NO) 含量, 蛋白质印迹法检测线粒体分裂融合、细胞凋亡相关蛋白表达水平, 线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore, MPTP) 检测试剂盒与Hoechst 33342荧光观察MPTP开放水平, 分子对接技术确定丹酚酸B分子靶点。结果表明, 与对照组相比, OGD/R损伤降低H9C2细胞活力, ROS含量增加, t-GSH、NO含量减少, 线粒体动力相关蛋白1 (dynamin-related protein 1, Drp1)、线粒体融合蛋白有线粒体融合蛋白2 (mitofusions 2, Mfn2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、半胱氨酸蛋白水解酶3 (cysteinyl aspartate specific proteinase 3, caspase 3) 的蛋白表达水平升高, Mfn1的蛋白表达水平降低, MPTP开放水平增加。与OGD/R组相比, 丹酚酸B各组在6.25~100 μmol·L^-1具有保护作用, 丹酚酸B降低ROS含量, 增加t-GSH、NO含量, 降低Drp1、Mfn2、Bax、caspase 3的蛋白表达水平, 增加Mfn1的蛋白表达水平, 降低MPTP开放水平。综上所述, 丹酚酸B可能通过调节氧化与抗氧化平衡、线粒体分裂融合平衡, 抑制MPTP开放, 减少细胞凋亡进而使H9C2细胞减少OGD/R损伤, 可为丹酚酸B治疗心肌缺血再灌注损伤提供有价值的科学依据。

本研究基于代谢组学结合生物信息学的策略分析热毒宁注射液与青霉素注射液联用引发类过敏反应(pseudo-allergic reactions, PARs) 的潜在致敏原及作用机制。所有动物实验操作和福利均遵循河南中医药大学第一附属实验动物伦理与动物福利委员会要求(批号: YFYDW2020002)。基于UPLC-Q-TOF/MS技术结合UNIFI软件在热毒宁与青霉素混合注射液中共鉴定得到21种化合物。进一步基于分子对接技术筛选出其10种与类过敏原受体MrgprX2激动剂位点具有强烈结合活性的潜在致敏原。采用UPLC-Q-TOF/MS技术进行代谢组学分析发现花生四烯酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、前列腺素类以及白三烯类等34个内源性代谢物为热毒宁注射液与青霉素注射液联用引发PARs的差异代谢物。通过对“潜在致敏原-靶标-差异代谢物”交互网络分析获得二者联用时药液中的绿原酸类(绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A等) 以及β-内酰胺类致敏原可能主要通过调控PLD1、PLA2G12A和CYP1A1这三种上游信号靶标, 主要激活花生四烯酸代谢通路, 促使肥大细胞的脱颗粒, 释放下游的内源性炎性介质, 继而诱发PARs。

本研究设计合成了5种不同结构类型共18个石蒜碱衍生物, 在感染HCoV-OC43的H460细胞模型上考察了其抗病毒活性。构效关系结果表明在石蒜碱的6N原子上引入适当的取代基有利于活性的提高。其中, 化合物6a表现出较好的活性, 半数有效浓度(EC₅₀) 和选择指数(SI) 值分别为2.36 μmol·L^-1和16.52。表面等离子共振实验显示6a可能靶向SARS-CoV-2的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp) 的非结构蛋白12 (NSP12) 亚基, 解离常数(K_D) 值为1.36 μmol·L^-1。分子对接结果提示6a可能作用于NSP12的类囊病毒RdRp相关核苷酸转移酶(NiRAN) 催化中心, 与瑞德西韦等拟核苷类药物的作用机制不同。该研究为将石蒜碱类衍生物发展成为一类全新的抗SARS-CoV-2小分子抑制剂提供了科学数据。

本研究设计合成了不同母核结构的12个全新苦豆碱衍生物, 其中十元大环骨架苦豆碱衍生物3通过季铵盐γ-H的霍夫曼消除后扩环获得, 结构经X-单晶确证。进而采用CCK-8法评价了目标物对抗人类β-冠状病毒HCoV-OC43的活性。结果显示, 季铵盐苦豆碱2a与化合物3均具有良好活性, 2a表现出最好抗病毒活性, EC₅₀值为3.77 μmol·L^-1, SI值大于53.1。Schrödinger分子对接结果显示, 化合物2a与3均可能通过直接靶向宿主TMPRSS2和SR-B1发挥抗冠状病毒作用。研究结果拓展了桥环骨架苦豆碱的结构类型及其抗冠状病毒用途, 为发展一类新型抗冠状病毒化合物提供了有益科学数据。

从短柱肖菝葜(Heterosmilax yunnanensis Gagnep.) 中分离得到3个2,3-二酮喹喔啉类生物碱, 通过一维和二维核磁共振、高分辨质谱、紫外光谱和红外光谱确定其化学结构, 分别鉴定为1-[5′-(3″-羟基-3″-甲基) 戊二酸单酰基] 核糖醇基-2,3-二酮-1,2,3,4-四氢-6,7-二甲基喹喔啉(1)、1-[2′-(3″-羟基-3″-甲基) 戊二酸单酰基] 核糖醇基-2,3-二酮-1,2,3,4-四氢-6,7-二甲基喹喔啉(2) 和1-核糖醇基-2,3-二酮-1,2,3,4-四氢-6,7-二甲基喹喔啉(3)。其中化合物1和2是新化合物, 化合物3是首次从短柱肖菝葜中分离得到, 通过肝保护活性筛选, 发现化合物3具有良好的肝保护活性。

运用硅胶、MCI、Sephadex LH-20等柱色谱, 结合半制备液相分离技术对多裂黄檀80%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离纯化得到12个化合物。通过UV、IR、MS、1D/2D NMR等波谱数据与结合文献确定化合物的结构, 分别鉴定为多裂黄檀酚A (1)、多裂黄檀酚B (2)、R-(-)-3′-hydroxy-2,4,5-trimethoxydalbergiquinol (3)、neokhriol A (4)、mucronulatol (5)、(3R)-7,2′,3′-三羟基-4′-甲氧基异黄烷(6)、异短尖剑豆酚(7)、(3S)-violanone (8)、3′-O-methylviolanone (9)、eryvarin M (10)、(±)-α, 3,4,2′,4′-pentahydroxydihydrochalcone (11) 和(-)-butin (12)。其中, 化合物1和2为新化合物, 化合物3~12为首次从该植物中分离得到。化合物1、2、4、6、8、11、12对DPPH自由基有良好清除作用。

本研究建立了气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS) 和高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS) 对常见烷基磺酸酯类和芳基磺酸酯类基因毒性杂质进行检测。4种烷基磺酸酯和苯磺酸甲酯以甲磺酸丁酯做内标通过GC-MS/MS法测定, 色谱柱为HP-5MS UI (30 mm × 0.25 mm, 0.25 µm), 载气为氦气, 流速为1.0 mL·min^-1, 进样口温度设为250 ℃, 分流比为10∶1, 升温程序的初始温度为80 ℃, 保持1 min, 然后以30 ℃·min^-1的升温速率上升到240 ℃保持2 min。质谱检测器为电子轰击离子源(EI源), 数据采集条件为多反应监测模式(MRM), 以临床药物氯沙坦钾和甲磺酸加贝酯的原料药为样品进行验证。结果显示, 线性范围在3~50 ng·mL^-1和9~150 ng·mL^-1, 相关系数r > 0.999, 加标回收率在80%~120%之间, 检测限分别是1和3 ng·mL^-1; 10种芳基磺酸酯通过LC-MS/MS法测定, 色谱柱为CSH Fluoro-phenyl (100 mm × 2.1 mm, 1.7 µm), 流动相为甲醇(B)-5 mmol·L^-1甲酸铵(D), 流速为0.2 mL·min^-1, 进行梯度洗脱, 梯度程序(T/% B) 设置为0/20、25/90、35/90、42/20。质谱检测器为电喷雾电离, 电离模式为正模式(ESI⁺), 数据采集为动态多反应监测模式(dMRM), 以临床药物氢溴酸西酞普兰的原料药为样品进行方法验证。结果显示, 线性范围分别在9~2 000 ng·mL^-1、3~100 ng·mL^-1和0.9~30 ng·mL^-1, 相关系数r > 0.999, 加标回收率在80%~120%之间, 检测限分别是30、1和0.3 ng·mL^-1。两种检测方法在上述原料药中均未检出潜在的磺酸酯类基因毒性杂质, 建立的分析方法可靠有效, 可为药物质量控制和检测提供参考依据。

本研究根据人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, hCG) 与受体结合后激活cAMP信号通路, 构建一种LHCGR-CRE-luc-HEK293转基因细胞系, 采用荧光素酶检测系统对hCG进行生物活性检测, 利用四参数拟合分析计算样品相对效价。并且对该方法条件进行优化, 对方法的专属性、相对准确度、精密度和线性进行验证。结果显示, hCG浓度与报告基因表达量存在量效关系, 且符合四参数曲线。经优化后, 条件确定为hCG初始浓度为2.5 μg·mL^-1, 稀释倍数为1∶4, 细胞数为每孔10 000~15 000个, 诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性, 相对准确度的相对偏倚范围在-8.9%~3.4%, 线性回归方程相关系数为0.996, 中间精密度几何变异系数范围为3.3%~15.0%, 线性范围为50%~200%。本研究成功建立并验证了一种报告基因法检测hCG生物学活性, 可以用于hCG生物活性检测和质量控制。

本研究旨在制备马来酸氟伏沙明微丸缓释片, 并评估其在体外的释药行为。采用离心-滚圆法制备马来酸氟伏沙明载药丸芯, 流化床包衣技术制得缓释微丸, 并将多单元缓释微丸与处方量的辅料混合压制成片。通过L8(2⁴) 田口试验, 筛选并确定载药微丸最佳处方; 使用Minitab将物料温度、风机转速、雾化压力、喷液速率设计成2⁴部分因子的DOE试验以优化底喷包衣工艺; 将24~40目粒径的单硬脂酸甘油酯作为主要稀释剂进行压片以缓解压片时微丸与辅料分层现象并降低包衣膜的机械损伤; 对混合颗粒的休止角、堆密度、振实密度、豪斯纳比等粉体流动性指标进行考察发现其流动性和可压性适合直接压片; 评价缓释片基本性能, 考察体外释放行为, 并研究其释放机制。结果表明, 马来酸氟伏沙明微丸缓释片可以在pH 6.8的磷酸盐缓冲液中崩解成独立的微丸小单元, 并达到24 h缓释的效果, 其释药行为符合一级释药模型。制备的马来酸氟伏沙明微丸缓释片, 符合制剂设计的释放要求, 具有良好的商业前景。

中药在煎煮过程中化学成分会发生分子识别形成自组装纳米粒(self-assembled nanoparticles, SAN) 业已成为行业共识。煎煮液中难溶性成分多以纳米颗粒的形式存在, 在一定程度上改善低溶解度的问题, 但难溶性成分在煎煮液中的转移率依旧很低, 限制了药效的发挥。本研究对传统中药煎煮自组装现象进行改良, 将波棱瓜子的水煎液和醇提液以微沉淀的方式构建自组装纳米粒(micro-precipitation self-assembled nanoparticles, MP-SAN), 开展形貌学表征, 利用现代光谱和热分析技术检验MP-SAN的形成及其理化性质的变化, 用高效液相色谱法研究MP-SAN中木脂素类成分的量值传递规律。MP-SAN呈现类球状结构, 形态均匀, 粒径为(245.3 ± 3.2) nm, 多分散性指数为(0.13 ± 0.03), zeta电位为(-48.9 ± 5.9) mV, 稳定系数为(86.05% ± 2.27%); 综合紫外-可见光谱、傅里叶变换红外光谱、差示扫描量热法等技术研究表明, 水煎液和醇提液间发生分子识别, 在非共价键的作用下发生电子云的重排, 所形成的MP-SAN具有更好的热稳定性; 经高效液相色谱仪测定, MP-SAN中去氢双松柏醇、波棱内酯A、波棱甲素包封率分别为77.00%、78.57%、94.53%, 转移率分别为96.01%、67.86%、65.55%, 相较于传统水煎液的转移率分别提高了1.34、1.38、4.81倍。综上, 本研究基于微沉淀法成功构建MP-SAN, 实现中药汤剂中难溶性成分的高转移率和高包封率, 为中药药效物质基础的高效利用提供了制剂学思路。

血栓是导致心肌梗塞、脑卒中等心血管疾病的主要因素之一。纤维蛋白溶酶类抗血栓药物虽然已被广泛应用于临床, 但依然受到治疗窗口狭窄、半衰期短、易失活和因非靶向性造成的异常出血等不良反应的限制。因此, 有效地将溶栓物质靶向输送到血栓部位并将不良反应降至最低至关重要。基于人血清白蛋白(human serum albumin, HSA) 在血液中的长循环效果和优异的载药特性, 本研究运用基因工程技术在HSA的N末端融合一段能靶向血栓部位的功能肽(P-selectin binding peptide, PBP), 经毕赤酵母表达并纯化得到具有血栓靶向功能的白蛋白融合蛋白。该融合蛋白包载金纳米粒子(gold nanoparticles, Au NPs) 后能够形成均一稳定的纳米粒(PBP-HSA@Au), 粒径为17.7 ± 1.0 nm, zeta电位为-11.3 ± 0.2 mV。细胞毒性和溶血实验证明PBP-HSA@Au生物相容性好, 血小板靶向实验表明PBP的引入赋予了PBP-HSA@Au血栓靶向能力, 近红外光(near infrared ray, NIR) 照射后, PBP-HSA@Au能将光能快速转化为热能进而破坏纤维蛋白, 表现出优异的溶栓效果。本研究设计的白蛋白融合蛋白递送系统为血栓治疗提供了一种精准、快速、非药物的治疗策略, 该体系设计简单、生物相容性高, 具有较强的临床应用性。研究涉及的所有动物实验均按照江南大学动物实验伦理委员会批准的方案执行[JN.No20230915S0301015(423)]。

基于中药超分子与肠道菌相互作用过程探讨大黄-黄连配伍和合的物质基础。采用扫描电子显微镜和动态光散射法表征大黄单煎液、黄连单煎液与配伍共煎液的形态学差异, 通过建立体外抑菌模型(大肠杆菌E. coli, 屎肠球菌E. faecium与枯草杆菌B. subtilis) 初步评价大黄黄连配伍对肠道菌的损伤作用; 通过超高效液相色谱-串联质谱技术分析单煎与共煎的化学组分变化规律。大黄黄连共煎煮后呈浑浊状, 电镜下可见300~400 nm的类球形颗粒, 且较单煎液相比其汤剂相态更均一稳定; 并直接观察到二者配伍后形成的超分子和肠道菌的相互作用与单煎液相比明显不同, 超分子与肠道菌相互作用过程中维持类球形状态, 封闭着黄连或大黄中的药效成分, 可有效缓和对肠道菌的损伤, 为后续大黄-黄连配伍“和合”调控肠道菌群稳态研究提供参考。

围绕金银花新品种“华金6号”长蕾期表型, 以“华金6号”及“大毛花”为材料, 探究其表型形成机制。检测内源茉莉酸类植物激素(jasmonic acid hormones, JAs) 含量; 对忍冬进行转录组分析, 确定与茉莉酸(jasmonic acid, JA) 合成相关基因; 采集不同时期“华金6号”及“大毛花”的花蕾及花, 利用qRT-PCR (quantitative real-time PCR) 技术, 分析合成相关酶基因在金银花花蕾期表达量的变化趋势。研究发现“华金6号”金银花中JAs含量显著低于“大毛花”; 对“华金6号”喷施外源茉莉酸甲酯(methyl-jasmonate, MeJA) 可以恢复其开花表型, 使其趋近于“大毛花”; 2个丙二烯氧化物合酶基因(allene oxide synthase, AOS)、3个脂氧合酶基因(lipoxygenase, LOX) 及2个丙二烯环氧化酶基因(allene oxide cyclase, AOC) 在“华金6号”和“大毛花”不同时期花及花蕾中的表达量具有显著差异。推测JA合成相关酶基因在“华金6号”中的低表达导致JA合成受阻, 从而引起长蕾期表型的形成。本研究为忍冬的遗传育种奠定了一定的基础, 为忍冬品种改良提供新思路, 为JAs在植物花器官方面的研究提供参考。

基于天麻转录组数据, 设计特异引物, 克隆天麻DRP1E (dynamin-related protein 1E) 基因, 命名为GeDRP1E (GenBase登录号为C_AA018577.1), 借助ExPASy、ClustalW、MEGA等软件对基因进行生物信息学分析, 利用拟南芥、马铃薯遗传转化体系获得转基因植株, 并对转基因拟南芥株高、结实率, 转基因马铃薯微型薯的块茎长、宽、重量和淀粉含量等农艺性状进行检测和分析, 初步解析GeDRP1E基因的功能。结果显示, GeDRP1E基因ORF全长1 899 bp、编码632个氨基酸残基, 相对分子质量为69.90 kDa, 分子式为C₃₀₇₉H₄₉₇₃N₈₈₃O₉₃₃S₁₉; 理论等电点为7.27, 不稳定系数为43.34, 亲水性平均指数为-0.259, 预测属于不稳定亲水性蛋白。GeDRP1E不存在跨膜结构, 无信号肽, 定位于细胞质。系统进化树显示, GeDRP1E与其他种类植物DRP1E蛋白之间具有较高的同源性, 其中与铁皮石斛DcDRP1E (XP_020689662.1) 同源性最高, 为90.05%。运用双酶切法构建植物表达载体pCambia1300-35Spro-GeDRP1E, 并通过农杆菌介导转化法获得了GeDRP1E基因的拟南芥互补突变体、马铃薯过表达株系。与拟南芥AtDRP1E基因突变体相比, GeDRP1E基因互补突变体株高、结实率表型得以恢复。与野生型马铃薯相比, GeDRP1E基因过表达株系微型薯体积、重量显著增大, 淀粉含量显著增高。初步推测GeDRP1E很可能参与调节线粒体的形态, 从而影响拟南芥植株、马铃薯微型薯的生长发育。上述研究结果为深入阐明天麻块茎生长发育的分子机制奠定了基础。