合成有机硒化合物可用作抗氧化剂、酶抑制剂、神经保护剂、抗肿瘤剂、抗感染剂及免疫调节剂。二苯基二硒醚(diphenyl diselenide, DPDS) 是结构简单又稳定的合成有机硒化合物, 毒性比无机硒和大多数有机硒化合物小。DPDS具有很强的谷胱甘肽过氧化物酶模拟活性, 参与硫氧还蛋白还原酶催化反应, 并激活核因子E2相关因子2 (nuclear factor E2 associated factor 2, Nrf2)/Kelch样ECH关联蛋白1 (Kelch like epichlorohydrin associated protein-1, Keap1) 信号通路, 因此具有强抗氧化性。DPDS已在多种动物模型和细胞模型中被证实具有抗炎、抗糖尿病、抗真菌、神经保护、抗肿瘤、护肝、肾脏保护和心血管保护作用等多种药理活性。本文通过梳理相关研究成果, 将DPDS的理化性质、主要药理作用及其机制的研究进展进行综述, 以期为今后DPDS的研究与合理开发应用提供参考。

肝脏是机体重要器官, 具有代谢、解毒等多种功能。由于生活方式的急剧改变和公共卫生水平的提高, 非感染性疾病发病率显著上升, 从根本上改变了世界大多数地区的疾病特点。目前, 全球非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD) 的患病率大约为25%, 约59.10%的NAFLD患者在5年内进展为非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH), 约41%的NASH患者进展为纤维化。NAFLD已成为全球最主要的肝脏疾病之一, 并可能在未来几十年内成为终末期肝病的主要原因。NAFLD和相关肝硬化会给患者、医疗保健系统和社会带来巨大经济负担。由于目前尚无获得美国食品和药品管理局(Food and Drug Administration, FDA) 批准治疗的药物, NAFLD的治疗主要仍依靠运动和饮食等生活方式的改变。氧化应激和炎症是肝脏疾病发生和发展过程中最重要的病理过程。核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid-2-related factor 2, Nrf2) 是机体抗氧化应激系统的关键调节因子, 具有抗炎、抗氧化等多种功能。多项研究表明Nrf2通路显著影响NAFLD的进展。本综述旨在总结Kelch样ECH-关联蛋白1-Nrf2-抗氧化反应元件(Keap1-Nrf2-ARE) 信号通路在NAFLD发病机制中的调节作用, 并揭示Nrf2作为NAFLD治疗靶点的潜力。

利奈唑胺是第一个由FDA批准上市的噁唑烷酮类抗菌药, 能有效地治疗各类革兰阳性菌感染, 适应症包括血液感染、皮肤及软组织感染、社区及医院获得性肺炎等, 已逐渐成为临床上常用的抗菌药物之一。除了随后上市的磷酸泰地唑胺(tedizolid phosphate, TR701) 和康泰唑胺(contezolid, MRX-I), 目前还有多个噁唑烷酮类抗感染候选药物处于临床研究。本文对已上市和处于临床试验的噁唑烷酮抗菌药物做了简要的介绍, 并对近期噁唑烷酮类药物的结构优化研究进展进行了总结。

天然产物来源丰富、结构多样, 是新药研发的重要源泉。从复杂的天然产物基质中高效筛选出有生物活性的成分是天然产物研究的重要方向之一。传统的研究方法从提取分离开始, 然后进行结构鉴定和活性评价, 耗时长、工作量大且带有很大的随机性, 因此亟需发展高效的生物活性成分发现方法。非变性质谱(native MS) 是一种基于靶标和配体相互作用的研究方法, 能够根据两者之间的亲和力快速发现复杂基质中潜在的活性成分, 具有特异、高效、简便的特点。本文简单介绍了非变性质谱的基本原理和影响因素, 并综述了该方法近年来在天然产物研究领域中的应用, 讨论了该方法的优势与局限性, 以期为相关领域的研究者提供借鉴和参考。

中药挥发油作为芳香类中药中的主要化学成分, 具有显著的抗菌、抗炎、抗氧化等药理作用。然而, 中药挥发油易挥发、易氧化变质等不稳定性问题严重限制了其制剂应用。多孔材料作为一种网格结构材料, 具有高比表面积、孔体积大、孔径可调、吸附能力强及表面化学性能可控等特点, 已被广泛应用于吸附分离、生物医学、工业催化、废水处理等领域。近年来利用多孔材料吸附挥发油, 为改善中药挥发油的稳定性提供了新的策略方法, 同时可实现中药挥发油的固化稳定与制剂应用。本文重点对介孔二氧化硅、介孔碳、介孔纳米羟基磷灰石、多孔金属有机框架、多孔淀粉等多孔材料的发展、特点及其在改善中药挥发油稳定性能的应用研究进行综述, 并探讨了影响多孔介质对中药挥发油吸附稳定性能的研究策略, 以期为中药挥发油的稳定化控制与应用提供参考与借鉴。

T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(TIGIT) 通过多种机制抑制固有和适应性免疫, 是肿瘤免疫治疗的新型靶点。本研究利用重组人源TIGIT胞外区蛋白免疫BALB/c小鼠(本研究中的小鼠按照国际实验动物护理和使用准则进行使用, 并经委托单位京天成生物技术(北京) 有限公司实验动物伦理委员会批准), 分离并提取小鼠脾淋巴细胞常规融合, 成功筛选得到抗TIGIT单克隆抗体c7D3, 并初步研究了其生物学活性。结果表明, 抗体c7D3能高亲和地结合TIGIT, 并能有效阻断TIGIT与配体的结合。细胞功能实验证实, c7D3能激活T细胞, 在TIGIT/CD155报告基因实验中促进荧光素酶表达, 提高人外周血单个核细胞分泌细胞因子的能力。本研究表明, 抗体c7D3具有高亲和力和良好的生物学活性, 有望开发成为新的肿瘤免疫治疗的抗体药物。

ω6脂肪酸代谢产物白三烯B4 (LTB4) 的受体白三烯B4受体1 (LTB4R1) 属于G蛋白耦联受体(GPCR) 家族, 是胰岛素抵抗、慢性炎症和2型糖尿病的潜在药物作用靶点。本文根据GPCR家族蛋白激活后可以引起细胞质内钙离子升高的原理, 建立了96孔板体系LTB4R1抑制剂筛选模型。胞质内钙离子探针Fluo-8可以表征细胞质内的钙离子变化, 当共转染LTB4R1和G蛋白α亚基16 (Gα16) 的仓鼠卵巢癌细胞(CHO) 受到LTB4刺激后, 胞浆钙离子浓度升高, Fluo-8的荧光信号随之增强。LTB4R1抑制剂处理细胞后, Fluo-8的荧光信号减弱。本文以0.2% DMSO为阴性对照, LTB4R1抑制剂cp-105696为阳性对照建立筛选模型。经LTB4刺激后, 0.2% DMSO处理的细胞Fluo-8信号上升约2倍后缓慢回落, 而cp-105696处理组则抑制LTB4的作用。LTB4和抑制剂cp-105696浓度梯度实验表明, Fluo-8的荧光信号升高幅度和抑制剂的浓度成反比, 可以作为评价待测化合物的抑制效果的指标。多次重复实验计算所得阳性与阴性对照Z'因子为0.777, 证明该筛选模型稳定可靠。本文采用蛋白过表达方式在CHO细胞中构建了LTB4R1-内质网钙的信号通路, 并在此基础上建立了通过检测钙信号强度来筛选化合物对LTB4R1抑制活性的体系。本方法可用于LTB4R1抑制剂先导化合物的体外初步筛选, 为后续体内研究奠定基础。

本文以食管癌Eca109、KYSE150细胞为研究对象, 探讨铁死亡通路激活在雄黄抑制食管癌增殖和转移中的作用。采用CCK-8法检测抑制率及半数抑制浓度(IC₅₀); 克隆形成实验检测克隆形成能力; 流式细胞检测细胞活性氧自由基(ROS) 变化; 透射电镜观察细胞超微结构; 普鲁士蓝染色观察细胞内铁颗粒分布; 免疫荧光染色检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4) 表达; 划痕实验检测细胞迁移能力; Transwell小室实验检测细胞侵袭能力; Western blot检测细胞中E-cadherin、Slug、N-cadherin蛋白表达。结果显示, 雄黄以时间及浓度依赖性方式抑制Eca109、KYSE150细胞增殖, 作用Eca109、KYSE150细胞的IC₅₀分别为64.297、51.337 μmol‧L^-1; 与空白组相比, 雄黄2IC₅₀组Eca109、KYSE150细胞胞浆内大量线粒体发生肿胀并发现大小各异、多少不等的蓝染颗粒, 且ROS荧光强度明显升高, GPX4蛋白表达明显降低(P < 0.01); 与雄黄组相比, 雄黄+ZVAD-FMK组Eca109、KYSE150细胞增殖、迁移能力、穿膜数及Slug、N-cadherin蛋白表达明显升高, 细胞抑制率及E-cadherin蛋白表达明显降低(P < 0.05); 雄黄+erastin组Eca109、KYSE150细胞增殖、迁移能力、穿膜数及Slug、N-cadherin蛋白表达明显降低, 细胞抑制率及E-cadherin蛋白表达明显升高(P < 0.05)。以上研究结果表明, 雄黄可抑制Eca109、KYSE150细胞增殖, 诱导细胞发生铁死亡现象, 雄黄对食管癌细胞的增殖和转移作用可能通过部分铁死亡通路激活发挥作用。

肿瘤新生血管为肿瘤的发生发展提供足够氧气和营养物质, 支持肿瘤的生长和转移。胰腺癌微环境中基质细胞衍生因子-1 (stromal cell derived factor 1, SDF-1, 又称CXCL12) 及其受体C-X-C趋化因子受体4 (C-X-C motif chemokine receptor 4, CXCR4) 参与了肿瘤细胞的增殖、迁移和新血管生成等多个生理过程, 可作为胰腺癌治疗的靶点。本研究利用大肠杆菌系统表达了靶向CXCR4分子的纳米抗体, 镍柱亲和层析纯化获得anti-CXCR4纳米抗体(CXCR4 Nb) 和anti-PD-L1 (programmed cell death ligand 1) & CXCR4双特异性纳米抗体(PX4 BsNb), 通过体外实验探究CXCR4 Nb拮抗肿瘤新生血管的作用及机制, 体内验证CXCR4 Nb和PX4 BsNb对胰腺癌荷瘤小鼠的抗肿瘤活性。人外周血单个核细胞分离实验获得上海交通大学地方伦理委员会批准, 动物福利和实验过程均遵循上海交通大学动物伦理委员会的规定。体外实验结果表明, 0.1 μmol·L^-1 CXCR4 Nb能有效抑制SDF-1诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC) 迁移, 拮抗胰腺星状细胞对HUVEC增殖和迁移的促进作用。在NOD/SCID小鼠皮下胰腺癌移植瘤模型中, 腹腔给予0.3 mg·kg^-1 CXCR4 Nb, 抑瘤率为28.8%, 0.3 mg·kg^-1 PX4 BsNb抑瘤率为36.1%, 且免疫荧光显示治疗组肿瘤部位血管生成均减少。CXCR4 Nb具有良好的安全性和有效性, 为胰腺癌的抗血管生成治疗和纳米抗体的应用提供了理论基础。

本研究主要评价复方利血平氨苯蝶啶片及其组分氨苯蝶啶对离体大鼠胸主动脉血管环的舒张作用, 并探讨其作用机制。采用离体大鼠胸主动脉血管环模型, 分别用高浓度KCl和去甲肾上腺素(norepinephrine, NE) 预刺激, 评价药物的舒张血管活性。通过各种工具药干预, 观察药物舒张血管作用的内皮相关机制、钾通道相关机制和钙离子相关机制。动物福利和实验过程均遵循中国医学科学院药物研究所实验动物管理与动物福利伦理委员会审查要求。结果显示复方利血平氨苯蝶啶片和氨苯蝶啶均可以浓度依赖性舒张高钾和NE预收缩的血管环; 氨苯蝶啶呈现出一定的内皮依赖性, N-硝基-L-精氨酸甲基酯(N-nitro-L-argininemethyl ester hydrochloride, L-NAME) 在一定程度上影响其舒张作用, 另外还可能与开放钙激活钾离子通道有关; 复方利血平氨苯蝶啶片明显抑制由细胞内钙释放和外钙内流引起的血管收缩。总之, 复方利血平氨苯蝶啶片和氨苯蝶啶在体外具有一定的舒张血管作用, 复方利血平氨苯蝶啶片的舒张血管机制可能与内钙释放和外钙内流有关, 氨苯蝶啶的舒张血管作用可能依赖于血管内皮功能, 另外还可能与开放钙激活钾离子通道相关。

应用网络药理学方法预测砂仁抗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC) 的活性成分和作用机制。首先通过体内动物实验验证中药砂仁的抗UC活性, 动物福利和实验过程均遵循中国医学科学院药物研究所实验动物伦理委员会的规定。进一步应用TCMSP、PubChem数据库及文献调研获取砂仁的活性成分, 采用SwissTargetPrediction、GeneCards和TTD数据库预测活性成分抗UC的潜在作用靶点。使用String数据库构建蛋白互作关系网络; Cytoscape软件将成分-作用靶点网络可视化并进行拓扑学分析; Metascape平台进行GO功能和KEGG通路富集分析; Sybyl-X软件将砂仁关键活性成分与部分核心靶蛋白进行分子对接。筛选共获得12种活性成分、189个砂仁抗UC靶点, 富集分析后得到227个GO相关条目、168条相关信号通路。分子对接结果证明, 砂仁主要活性成分与JAK受体家族具有较好的亲和力, 体内验证结果表明砂仁能调控JAK/STAT信号通路。以上结果证明, 砂仁及其提取物可能通过JAK/STAT信号通路发挥抗UC作用。

从南海一种海星样品中分离获得共附生真菌菌株WXF1904。经ITS区序列分析, 鉴定该菌株属于曲霉属, 命名为Aspergillus sp. WXF1904。采用正相硅胶柱色谱、ODS柱色谱和高效液相色谱等方法从Aspergillussp. WXF1904发酵液粗浸膏中分离出7个化合物, 根据各种波谱数据及结合文献分析, 将其中1个鉴定为新的含卤素的异香豆素6-chloro-5, 7-dihydroxy-3, 8-dimethylisocoumarin (1), 6个鉴定为已知化合物, 分别为pilobolusate (2)、对羟基苯甲醛(3)、methyl orsellinate (4)、catechol (5)、vanillic acid (6)和wasabidienone E(7)。生物活性检测结果表明, 化合物1和2具有微弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性。

采用硅胶、凝胶和高效液相色谱等色谱分离技术, 从广藿香[Pogostemon cablin (Blanco) Benth.]干燥地上部分的石油醚萃取部位中分离得到两个caryolane型倍半萜。通过核磁共振和质谱等波谱学方法, 化合物1和2的结构分别被鉴定为caryolanol A(1)和1α-ethoxy-9α-hydroxy-senecrassane(2), 其中化合物1为新化合物, 与化合物2互为C₅差向异构体。此外, 对化合物1和2进行了体外抗流感病毒活性评价。

建立符合中药使用特点的重金属及有害元素概率风险评估方法, 以期为中药的安全使用提供指导, 采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对21批车前草中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)和铜(Cu)的残留量进行测定; 结合中药消费模式调查, 基于蒙特卡洛模拟技术分别采用风险熵(HQ)和致癌风险(CR)对车前草中重金属及有害元素导致的非致癌性和致癌性健康风险进行概率评估; 通过敏感性分析筛选出风险贡献最为显著的因素。结果车前草中铅、镉、砷、汞、铜的均值分别为9.01、0.28、3.83、0.01和12.82mg·kg^-1。男性HQ_AS的P95分位值、P99分位值和最大值分别为1.41、2.83和10.97;女性HQ_AS的P95分位值、P99分位值和最大值分别为1.27、2.63、9.80。男性HI的P95分位值、P99分位值和最大值分别为1.44、2.85、11.0;女性HI的P95分位值、P99分位值和最大值分别为1.29、2.66、10.0。无论男性还是女性, CR_As和总致癌风险(TCR)的P99分位值、最大值均大于10^-4。风险评估结果说明砷暴露引起的高端暴露人群非致癌性和致癌性健康风险均需要被关注。敏感性分析结果显示, 中药服用频率和车前草中砷的浓度是最主要的风险影响因素。本研究基于蒙特卡洛模拟技术, 并考虑中药服用特点, 首次提出中草药重金属及有害元素健康风险概率风险评估范例, 为中药重金属及有害元素健康风险评估提供新视角。

基于高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴别丹参-红花药对在离体大鼠肠道菌群中的代谢产物。通过在离体大鼠的肠菌孵育液以及灭活的肠菌孵育液中, 分别加入丹参-红花药对提取液, 厌氧条件下共孵育。动物实验和方案经陕西中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准文号: TCM-2020-030-E05)。结果发现在离体大鼠肠道孵育液中共检测鉴定出14种化合物, 其中包括了5种原形成分以及9种代谢产物。而在灭活的肠菌液中除了原形成分外并未检测出代谢产物。结果表明丹参-红花药对中的主要成分丹参素、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸、羟基红花黄色素A均可被肠道菌群代谢, 且这些有效成分在大鼠离体肠道菌群中主要发生羟基化反应、脱羧反应、去氧、脱羧以及脱水反应等Ⅰ相代谢、硫酸酯化反应和甲基化反应Ⅱ相代谢。从而证明丹参-红花药对能够在大鼠肠道菌群作用下转化为多种代谢产物, 进一步明确肠道菌群在中药有效成分代谢转化过程中的作用, 为完善该药对药效物质奠定了基础。

本研究采用代谢组学技术探究蒙药加味塔布森-2(modified tabusen-2, MT-2)对肾阳虚(kidney yang deficiency, KYD)大鼠改善作用。所有动物实验均在内蒙古医科大学医学伦理委员会的指导和标准下进行。随机将SD大鼠分为空白组、模型组、金匮肾气丸组(1.26 g·kg^-1)和MT-2高、中、低剂量组(1.512、0.756和0.378 g·kg^-1), 每组6只。采用肌肉注射氢化可的松(hydrocortisone, HC)建立KYD大鼠模型, 通过生化指标以及观察其临床表征认定造模成功后, 各组进行ig给药, 空白组与模型组ig同样体积生理盐水, 连续给药8周。给药结束后采集各组血清, 进行血清生化指标与UPLC-Q-exactive-MS分析。通过代谢组学分析挖掘MT-2药物干预的生物标志物, 并对MT-2调控KYD的代谢通路进行分析。结果显示MT-2可显著降低KYD大鼠血清肌酐(creatinine, Cr) 的含量; 显著升高促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)以及黄体生成素(luteinizing hormone, LH)的含量(P < 0.05)。血清样本中, 筛选出KYD大鼠疾病发展的生物标志物皮质酮、L-苯丙氨酸、DL-色氨酸等38个, MT-2通过回调其中的皮质酮、去氧皮质酮、L-苯丙氨酸等18个生物标志物及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢、类固醇激素生物合成等13条相关代谢通路发挥改善KYD作用。蒙药MT-2主要通过调节氨基酸类、类固醇类以及脂类等代谢物发挥改善KYD大鼠的作用。

本实验旨在从下丘脑代谢组学角度探讨三子养亲汤(Sanzi Yangqin decoction, SYD)干预正常高值血压痰湿壅盛证大鼠的作用机制。将WKY大鼠随机分为正常组、模型组和SYD组。采用高脂+ 高盐方式制备正常高值血压痰湿壅盛证大鼠模型, 不同剂量SYD干预模型大鼠8周, 测量各组大鼠饮食量、体重、身长、血脂及血压, 利用液质联用技术分析筛选各组大鼠下丘脑中差异代谢物, 并进行代谢通路分析。结果显示, 与模型组相比较, SYD组大鼠饮食量减少, 体重降低, 血脂血压显著下降。同时下丘脑14个差异代谢物发生回调, 主要与氨基酸代谢、谷胱甘肽代谢、鞘脂代谢和甘油酯代谢有关, 提示SYD可能通过调节下丘脑饮食行为, 进而影响氨基酸代谢与能量代谢来发挥干预作用。本研究已获得山东中医药大学动物伦理审查委员会批准(批准号: SDUTCM20211103001)。

筛选海南、广西的民间药材降真香的抗炎质量标志物(quality marker, Q-marker)。采用质谱分析、鉴定降真香的化学成分。通过网络药理学分析降真香抗炎活性成分、作用靶点和信号通路, 筛选降真香抗炎的潜在质量标志物。用高效液相色谱法验证潜在质量标志物, 体外实验验证潜在质量标志物的抗炎活性、作用靶点。实验方案经由广西中医药大学实验动物福利伦理委员会审查通过。结果从降真香提取物中分析、鉴定出31个化学成分。通过网络药理学筛选得到成分靶点727个、疾病靶点422个以及包括前列腺素G/H合酶2(prostaglandin G/H synthase 2, PTGS2)在内的作用靶点110个, 靶点主要富集在炎症反应、对脂多糖的反应等498个生物过程, TNF信号通路、Toll样受体信号通路等101条信号通路。通过高效液相色谱法可检测出降真香提取物中含有异鼠李素、芒柄花素、柚皮素、黄豆黄素、熊果酸和齐墩果酸。降真香含药血清以及6个成分可显著降低脂多糖诱导的RAW264.7炎症细胞的一氧化氮、白介素-6(interleukin 6, IL-6)和肿瘤坏死因子-α的含量(P < 0.01或P < 0.05)。异鼠李素等6个成分可视为潜在质量标志物。通过分子对接和体外环氧合酶2(cyclooxygenase-2, COX-2)活性实验, 从6个潜在质量标志物中筛选、验证异鼠李素是PTGS2的抑制剂, 半数抑制浓度为9.55 μmol·L^-1。综上, 降真香提取物具有显著体外抗炎作用, 其机制可能与调控IL-6、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1、PTGS2等靶点介导的TNF信号通路、Toll样受体信号通路有关。异鼠李素、芒柄花素、柚皮素、黄豆黄素、熊果酸和齐墩果酸可作为降真香的质量标志物, 其中异鼠李素可能是COX-2的抑制剂。

建立同时测定祛痰止咳颗粒中芹菜素-7-葡萄糖醛酸、槲皮苷、芫根苷、木犀草素、芹菜素、羟基芫花素、芫花素7种成分含量的一测多评法。采用AgilentEC-C18(150mm×4.6mm, 4μm)色谱柱, 以甲醇-0.15%磷酸(梯度洗脱)为流动相, 检测波长为338nm, 以芹菜素为内参物, 分别建立6种成分的相对校正因子, 并采用两点校正法结合相对保留时间法对各成分进行色谱峰定位。分别按一测多评法和外标法检测7种成分的含量, 并进行比较。上述6种成分的相对校正因子分别为芹菜素-7-葡萄糖醛酸1.7628、槲皮苷2.3104、芫根苷1.8984、木犀草素1.2828、羟基芫花素1.1913、芫花素1.0669, 在不同色谱条件下其相对校正因子的RSD均小于3%。采用两点校正法结合相对保留时间法能准确定位各成分色谱峰, 预测保留时间与实际保留时间非常接近。10批样品一测多评计算结果与外标法测定结果之间的相对误差在-5%~5%。一测多评法操作简便, 经济实用, 结果准确, 可应用于祛痰止咳颗粒中7个成分的含量测定。

建立一种基于定量水试的青黛质控快检新方法, 用于青黛的质量优劣评价。采用稳定性分析仪测定26批青黛粉末的Turbiscan稳定性参数(Turbiscan stability index, TSI), 系统优化加样方式、加样粒径、加样量、检测温度等参数, 并对重复性、稳定性等方法学指标进行考察。采用高效液相法测定26批青黛中靛蓝、靛玉红的含量, 并测定总灰分含量。运用SPSS 26.0、Origin 2021软件对青黛有效成分、总灰分含量与TSI值进行相关性分析。研究表明, 青黛供试品的最佳加样方式为: 取过七号筛不过九号筛的青黛粉末0.2g, 以漏斗加样方式装入含20mL纯水的玻璃瓶, 用稳定性分析仪在25℃下扫描。一致性分析表明, 靛蓝、靛玉红的含量排序与TSI值总体上呈相反趋势, 总灰分含量排序与TSI值总体上一致。相关性分析表明, 靛蓝、靛玉红含量与TSI值呈负相关, 相关系数分别为-0.850、-0.801, R²分别为0.72、0.64。总灰分值与TSI值存在正相关, 相关系数为0.724, R²为0.52。根据青黛粉末入水后的TSI值变化, 该研究构建了青黛饮片等级划分的范围及其对应成分含量, 可以判断青黛真伪以及对青黛进行分级评价, 为青黛快速鉴别方法提供参考依据。

鸡内金是临床常用的消食类中药, 属于药食同源品种, 但腥臭气味强, 影响儿童服药的顺应性。传统炮制方法采用清炒、醋制等加热炮制方法去腥除臭, 影响其消化酶活力, 亟需寻找新的去腥存效方法。本研究提出并验证超临界CO₂低温流体萃取法用于鸡内金去腥存效的技术可行性。首先, 采用顶空-固相微萃取-气相色谱-三重四极杆质谱法(HS-SPME/GC-QQQ-MS/MS)结合气味活度值(OVA)法初步确定超临界CO₂萃取分离前后鸡内金腥臭气成分差异; 然后, 基于志愿者感官评价结合挥发性成分分析对比鸡内金生品、清炒品、醋炙品和超临界CO₂萃取品腥臭气强度和腥臭气物质种类及含量差异, 采用胃蛋白酶、淀粉酶活力效价测定法对比分析4种鸡内金消化酶活力差异, 采用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)对比研究4种鸡内金的物质结构差异, 氨基酸含量测定对比总氨基酸、促消化类氨基酸及苦味氨基酸含量差异, 采用基于酚红指示剂的大豆油致小鼠胃排空延迟动物模型实验验证体内促胃排空药效差异。研究结果表明, 鸡内金粉末腥臭气突出, 超临界萃取后腥臭气显著降低, 腥臭气成分含量仅为生品中的12.8%;FT-IR分析结果表明鸡内金超临界萃取品较生品物质结构未发生改变, 消化酶活力效价测定结果显示生品中淀粉酶、胃蛋白酶活力效价约是清炒品和醋炙品的3.9、1.4倍, 超临界CO₂萃取品中淀粉酶、胃蛋白酶活力效价约为清炒品和醋炙品的2.7、1.3倍; 氨基酸含量测定结果表明4种鸡内金中促消化类氨基酸含量没有明显差异。体内验证实验结果显示, 生品组、超临界萃取品组、清炒品组和醋炙品组小鼠平均胃排空率分别为69%、59%、40%和51%, 超临界CO₂流体萃取法相较清炒法和醋炙法能够有效保留鸡内金促胃排空药效。总体而言, 超临界CO₂流体低温萃取法较传统的清炒法和醋炙法, 可有效去除鸡内金腥臭气, 保留鸡内金中生物活性成分与消食化积药效, 能有效实现鸡内金的去腥存效。

急性肺损伤(acute lung injure, ALI)是一种严重的弥漫性肺部疾病, 可由病原体感染、刺激性物质吸入等原因造成, 严重者会发展成急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)。龙油(Long oil, LO)是一种从多种药用动植物中提取的油脂类混合物, 临床已用于创伤修复。本研究制备了一种O/W型龙油乳剂(Long oil emulsions, LOE), 由LO、Tween-80、丙二醇、黄原胶、水组成, 乳滴大小为671.63±7.21nm, zeta电位为-17.8±1.26mV, 粒径小且均一, 稳定性好, 经振动筛雾化器雾化后的气溶胶空气动力学粒径为2.25±0.05μm, 1~5μm的粒子占81.40%, 可有效沉积到肺深部, 适合肺吸入给药。对于人胚肺成纤维细胞(MRC-5), LOE的安全剂量高达12.50μg·mL^-1, 在0.02~2.50μg·mL^-1内可促进小鼠成纤维L929细胞增殖和迁移。所有动物实验经军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所伦理委员会批准且实验均按照相关指导原则和规定进行。小鼠经气管喷入LO(3.25 mg·kg^-1) 未见明显毒性。小鼠气管喷入LOE可显著减轻脂多糖致ALI, 降低肺组织促炎细胞因子(肿瘤坏死因子-α、白介素-6)和总蛋白的释放。LOE有望成为治疗ALI的有临床应用价值的肺吸入制剂。

赖氨酸脱羧酶是石杉碱甲等石松生物碱上游生物合成步骤中催化赖氨酸脱羧生成1, 5-戊二胺(尸胺)的关键酶。通过对蛇足石杉(Huperzia serrata)转录组数据的挖掘分析, 并结合RT-PCR技术从蛇足石杉中成功克隆出3个赖氨酸脱羧酶基因(HsLDC-L1、HsLDC-L2、HsLDC-L3); 利用在线生物信息学分析软件以及DNAMAN、MEGA 7.0等对上述3个基因编码蛋白的性质、二级和三级结构、序列同源性、进化关系等进行了预测分析, 发现3个基因编码蛋白均具有植物赖氨酸脱羧酶的保守结构域和活性位点, 且与文献报道的产石杉碱甲植物中的赖氨酸脱羧酶具有较近的亲缘关系。进一步尝试利用不同载体在大肠杆菌中对上述3个基因进行表达, 结果仅HsLDC-L1与载体pCold TF构建的重组质粒在大肠杆菌E. coli BL21 (DE3)中成功实现可溶性表达, 利用Ni²⁺亲和色谱柱分离纯化得到重组蛋白HsLDC-L1;HsLDC-L1全长由469个氨基酸组成, 理论分子质量为50.50 kDa。体外酶活性分析证明HsLDC-L1可以催化赖氨酸脱羧生成尸胺。底物适应性实验发现HsLDC-L1还可以催化鸟氨酸脱羧生成腐胺, 但不能催化酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸脱羧。上述结果为进一步研究包括石杉碱甲在内的石松类生物碱的生物合成提供参考, 为利用合成生物学策略构建产Δ¹-哌啶、石榴碱等石松类生物碱生物合成关键前体的工程菌提供重要的基因元件。