哺乳动物细胞核是高度结构化的, 并组织成称为核体的各种无膜核隔室。核体是高度动态的结构, 内部聚集着多种物质以促进某些生物反应更加高效地进行, 在肿瘤发生、细胞凋亡、抗病毒防御等不同生物学过程和应激条件下动态地产生应答, 在调控细胞稳态方面发挥重要的作用。肿瘤作为公共健康的重大问题, 寻找新的可用靶点是肿瘤治疗的关键。核体如何参与肿瘤的发生还鲜有报道。本综述以期为核体如何调控肿瘤进展提供新的认识, 并为肿瘤的防治提供新的有效策略。

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM) 是以高血糖、高血脂和胰岛素抵抗为主要特征的代谢性疾病。内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS) 是机体细胞的一种适应性调节反应。在T2DM发展过程中, 长期高血糖会导致机体多种组织细胞持续发生ERS, 进而引起蛋白质合成功能紊乱。其中, 具有激素分泌功能的上皮细胞或内分泌细胞, 更易受ERS影响而发生功能紊乱。肠-胰轴在调控机体代谢及T2DM发展过程中具有重要作用。肠道上皮L细胞作为肠道屏障的一部分, 负责分泌肠道激素胰高血糖素样肽1 (glucagon-like peptide-1, GLP-1), 其促胰岛β细胞分泌的胰岛素对糖代谢稳态维持具有重要意义。近年研究表明, ERS与肠-胰轴激素分泌及功能稳态密切相关。ERS通过影响肠道激素分泌、肠道屏障完整性以及β细胞的分泌功能和数量, 参与T2DM的发生与发展。因此, 本文将以肠-胰轴功能稳态为切入点, 探讨ERS对肠-胰轴激素分泌功能与肠道屏障完整性的影响, 并概述当前几类抗糖尿病药物通过调节肠-胰轴中ERS状态, 进而改善糖脂代谢的作用及机制研究进展。

血脑屏障限制了大部分药物的脑部递送, 影响了中枢神经系统疾病的治疗。经鼻给药可通过嗅觉和三叉神经等通路让药物绕过血脑屏障直接到达脑部, 从而在减轻药物降解和避免肝首过效应的同时提高药物治疗效果。随着纳米技术的兴起, 将纳米制剂结合经鼻给药途径有望实现更好的脑靶向与脑部疾病治疗效果。本综述归纳了经鼻入脑各通路的特点, 总结了外泌体、液晶等近年来新型经鼻入脑纳米制剂的研究情况, 讨论了聚焦超声技术等提高入脑效率的新策略, 回顾了近年来经鼻入脑纳米制剂在治疗脑部疾病方面的研究, 分析了现阶段的研究困境并展望了其未来临床应用的前景。

本综述介绍了共价修饰策略在局部麻醉剂药物递送系统中的研究进展。局部麻醉剂作为一种常用的多模式镇痛药物, 在临床应用中存在作用时间有限和潜在毒性的限制。为了达到延长镇痛效果、减轻全身毒性的目的, 研究者们致力于开发具有持久剂量控释功能的局部麻醉剂缓释制剂。在局部麻醉剂的递送方面, 共价修饰策略是一种关键的方法。通过药物与大分子载体的共价键结合, 能够提高药物的稳定性、靶向性和递送效率。大分子前药可以调节药物的动力学过程, 使药物以活性成分形式释放, 并实现更好的治疗效果。近年来, 刺激响应性大分子前药成为研究热点, 对于局部麻醉剂药物递送系统, 大分子前药的刺激响应性能可以在内外刺激条件下迅速释放药物, 并在血液循环和正常组织中维持低毒和高效性。这些新兴的研究方向为延长局部麻醉剂的镇痛效果、减轻全身毒性提供了重要的指导, 并为开发更有效的药物递送系统提供了新的思路。

血脑屏障(blood brain barrier, BBB) 在维持大脑内环境稳态的同时, 也给中枢神经系统疾病的治疗带来困难。药物载体可以帮助药物穿过血脑屏障发挥药效。本文对药物跨血脑屏障的途径、药物载体入脑后的命运调控及药物载体分类进行了介绍, 重点阐述了脂质体、外泌体、凋亡小体、细胞穿透肽和细胞靶向肽的特点及应用, 并对跨血脑屏障药物递送领域的研究前景及所面临的挑战进行了分析。

口腔黏膜给药具有病患接受度高、见效快、给药方便等优点, 可避免药物在肝脏的首过效应。然而, 某些药物由于其独特的理化性质和口腔内特殊的生理环境, 使口腔黏膜给药系统的设计变得具有挑战性。壳聚糖基材料具有无毒或低毒、生物可降解等优良特性, 能有效抑制菌群的生长繁殖, 实现药物的缓释、控释和黏膜黏附。因此, 壳聚糖基材料在口腔黏膜给药系统中得到了广泛研究。本文系统阐述了口腔黏膜的生理结构特点及其给药优势, 总结了壳聚糖基材料在该系统中的相关研究, 并展望了其未来应用前景。

微球载药系统具有药物缓释和控释功能, 可提高药物稳定性, 临床应用前景广阔, 已成为创新制剂开发的前沿和热点领域。近年来, 科研人员发展了基于乳化溶剂挥发、高压均质、膜乳化和微流控等技术平台的载药微球制备方法, 并将微球载药系统应用于恶性肿瘤、精神分裂症、神经退行性疾病等重大疾病的临床治疗, 取得了良好的经济和社会效益。本文系统总结了微球载药系统的制备方法和临床应用情况, 同时讨论了新型微球载药系统临床转化方面的挑战, 希望进一步推动微球载药系统的开发和临床转化。

肝脏大小受生物钟控制并具有昼夜节律。孕烷X受体(pregnane X receptor, PXR) 和过氧化物酶体增殖物激活受体α (peroxisome proliferator-activated receptor α, PPARα) 是核受体超家族的重要成员。本课题组前期发现, 鼠源激动剂孕烯醇酮16α-腈(pregnenolone 16α-carbonitrile, PCN) 激动PXR、匹立尼酸(pirinixic acid, WY-14643) 激动PPARα后均显著促进小鼠生理性肝增大及部分肝切除术后肝再生。但是, PXR、PPARα激动所致肝增大的昼夜变化尚不清楚。因此, 本研究考察连续3天不同时辰给予雄性C57BL/6小鼠玉米油、PCN或WY-14643后肝脏大小及生物钟相关基因等的变化。本动物实验方案经中山大学实验动物伦理委员会审核批准(批准号: SYSU-IACUC-2023-001613、SYSU-IACUC-2023-001783)。结果表明, 连续3天不同时辰给予PXR、PPARα激动剂均显著促进小鼠肝增大, 其所致肝增大与肝脏大小本身的昼夜节律基本一致, 且基本不影响生物钟相关基因的表达, 提示PXR、PPARα激动可能不影响肝脏大小本身的昼夜节律。本研究阐明了PXR、PPARα激动所致肝增大的昼夜节律, 为核受体促进肝增大及肝脏大小昼夜节律的研究提供新数据和参考。

基于八面体的可修饰结构和动力学惰性, Pt(Ⅳ) 配合物成为逆转Pt(Ⅱ) 类药物耐药性和毒性的抗癌前药候选药物。硝基苯并恶二唑衍生物(NBDHEX) 能够抑制谷胱甘肽S转移酶(GSTs) 活性, 将NBDHEX与Pt(Ⅱ) 配合物DN603、DN604接合获得两个Pt(Ⅳ) 配合物DN603-NBD和DN604-NBD。体外实验表明, DN603/DN604-NBD能够有效抑制顺铂敏感A549细胞和耐药A549/cDDP细胞增殖, 对细胞的铂摄取量均高于顺铂, 诱导较高细胞凋亡率和Bax/Bcl-2比值, 激活caspase-3并裂解DNA修复酶(PARP), 诱导线粒体依赖性的细胞凋亡通路。DN603/DN604-NBD能够产生较高活性氧(ROS) 水平, 增强磷酸化H2AX (γ-H2AX) 的荧光强度, 引发严重DNA双链损伤。研究发现, GSTs激酶GSTP1在耐药肿瘤细胞中高表达, DN603/DN604-NBD能够靶向GSTP1并抑制其表达水平。提前给予ROS和c-Jun氨基末端激酶(JNK) 抑制剂后发现, 药物能够显著增加活细胞数量并降低JNK及c-Jun磷酸化水平。结果表明, DN603/DN604-NBD通过上调ROS来激活JNK相关信号通路而诱导细胞凋亡, 产生逆转顺铂耐药作用。动物福利和实验过程均遵循东南大学动物伦理委员会的规定(批准号: 20210303025)。体内研究表明, DN603/DN604-NBD能够抑制A549异种移植瘤生长且无明显毒副作用。所有结果表明, DN603-NBD和DN604-NBD是两种潜在的新型Pt(Ⅳ) 抗肿瘤前药候选药物。

跨膜丝氨酸蛋白酶2 (transmembrane serine protease 2, TMPRSS2) 是人体中广泛存在的细胞表面蛋白, 参与严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2) 等多种病毒的感染和前列腺癌细胞侵袭、肿瘤生长和转移过程等。本研究使用Boc-Gln-Ala-Arg-AMC作为表征TMPRSS2切割活性的底物, 在过表达TMPRSS2的Vero E6细胞(Vero E6/TMPRSS2) 中建立了TMPRSS2抑制剂细胞筛选模型, 通过对国家新药(微生物) 筛选实验室天然与合成化合物纯品库进行高通量筛选, 得到了7个具有TMPRSS2抑制活性的低毒化合物。表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR) 检测证明所得抑制剂均可与TMPRSS2发生中等强度的结合, 且呈现浓度依赖性; 细胞-细胞融合实验表明, 所得抑制剂可通过抑制TMPRSS2切割SARS-CoV-2 S蛋白, 抑制SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合的发生, 呈现浓度依赖性; 假病毒活性评价结果显示, 小分子抑制剂对野生型SARS-CoV-2假病毒感染Opti-HEK-293T-ACE2受体细胞表现出不同程度的抑制活性。本研究成功建立了细胞模型用于TMPRSS2抑制剂的高通量筛选, 并初步证实筛选所得的抑制剂具有体外抗TMPRSS2活性的作用, 为抗SARS-CoV-2的新药研发提供了新结构骨架。

侵袭性真菌感染威胁人类尤其是免疫缺陷患者或者是患有严重潜在疾病的住院患者生命健康, 给社会带来沉重的经济负担。耐药菌的出现、生物被膜的形成以及现有抗真菌药物的有限性和不良反应, 增加了临床真菌感染治疗难度, 亟需开发新型抗真菌药物。因此, 本文基于前期的激酶化合物库抗真菌活性筛选研究, 进一步考察了间变性淋巴瘤激酶(anaplasticlymphoma kinase, ALK) 抑制剂3-[5-氯-2-({2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)六氢吡啶-1-基]苯基}氨基)嘧啶-4-基]-1H-吲哚(HG-14-10-04, HG) 对真菌的生长抑制活性及作用机制。通过微量液基稀释法、菌丝形成、生物被膜形成等实验系统评价HG的体外抗真菌活性。结果显示: 化合物HG对敏感和耐药白念珠菌、克柔念珠菌、新生隐球菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和近平滑念珠菌均表现真菌生长抑制和杀菌活性(MIC值为8~16 μg·mL^-1); HG能明显抑制真菌菌丝和生物被膜的形成, 并破坏成熟生物被膜; 且与两性霉素B合用表现协同抗真菌作用。通过转录组测序技术、流式细胞术、透射电镜等研究了HG的抗真菌机制。测序分析显示差异表达基因共有1 041个, 其中上调的差异基因有666个, 下调的差异基因有375个。根据GO功能分类结果显示: 上调基因主要涉及核糖体生成、氧化还原等功能, 下调基因主要涉及糖类、糖蛋白、糖脂的合成及其代谢, GPI锚合成, 细胞骨架等功能。此外, HG能明显增加真菌内活性氧(reactive oxygen species, ROS) 水平; 诱导细胞坏死; 将细胞周期阻滞于G0/G1期; 改变真菌细胞的超微结构尤其是细胞壁结构。因此, HG对真菌表现较好的生长抑制和杀菌活性, 其机制可能与上调ROS, 改变细胞超微结构尤其是细胞壁结构, 使真菌细胞阻滞于G0/G1期有关, 后期对其进一步的结构优化, 有望为新型抗真菌先导化合物或候选药物的发现提供基础。

本文旨在探讨甘草查尔酮A (licochalcone A, LCA) 缓解2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM) 引起的异常糖异生及内质网应激的分子机制。体内研究采用8周龄雄性C57BL/6J小鼠, 高脂高糖饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) 构建T2DM动物模型。腹腔注射LCA (5、10 mg·kg^-1) 治疗, 以二甲双胍(metformin, MET) (200 mg·kg^-1) 为阳性对照, 间隔3天给药, 持续3周, 动物实验方案经北京中医药大学实验动物伦理委员会审核并批准(批准号: BUCM-4-2021061701-2060)。体外实验以人肝癌细胞HepG2为实验细胞系, 采用棕榈酸钠(sodium palmitate, SP) 诱导胰岛素抵抗细胞模型, 采用衣霉素(tunicamycin, TM) 诱导内质网应激细胞模型。采用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)、酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 和蛋白质印迹法(Western blot, WB) 检测糖异生和内质网应激相关靶点的转录和蛋白水平; 利用分子对接和分子动力学模拟对LCA和关键靶点的相互作用进行验证。结果表明, LCA可通过抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase, PEPCK) 和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase, G6P) 的转录和酶活, 抑制丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase, PC) 的酶活, 提高6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2, 6-二磷酸酶3 (6-phosphofructokinase-2/fructose-2, 6-bisphosphatase 3, PFKFB3) 的转录和蛋白水平, 抑制糖异生。同时, LCA可通过下调真核翻译起始因子2α (eukaryotic initiation factor 2 subunit α, eIF2α)、肌醇依赖酶1α (inositol-requiring enzyme 1α, IRE1α)、X-框结合蛋白1 (X-box binding protein 1, XBP1)、c-Jun氨基末端激酶1 (c-Jun N-terminal kinase 1, JNK1) 和活化转录因子6α (activating transcription factor 6α, ATF6α) 的转录水平, 降低葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78, GRP78) 的转录和蛋白水平, 抑制蛋白质激酶RNA样端激活因子(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase, PERK) 的转录和磷酸化, 抑制内质网应激。综上, LCA可缓解T2DM所致异常糖异生和内质网应激, 从而改善代谢紊乱。

十味乳香胶囊(SWRXC) 是一种广泛用于治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA) 的经典配方, 研究采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS) 非靶向代谢组学和16S rRNA高通量基因测序法关联分析, 以阐释SWRXC治疗弗氏完全佐剂诱导的RA的作用机制。结果显示, SWRXC能显著改善RA大鼠症状, 降低大鼠血清中细胞因子水平。基于LC-MS/MS技术, 在代谢组学中发现了色氨酸代谢、核苷酸代谢和嘌呤代谢是治疗最相关的途径。此外, 16S rRNA测序结果显示, SWRXC可以改善RA引起的大鼠肠道微生物紊乱。综上, SWRXC可以改善RA关节组织形态结构、降低血清因子含量, 通过调控色氨酸代谢、核苷酸代谢和嘌呤代谢等相关代谢通路、改变肠道菌群组成从而发挥改善RA的作用。动物实验经青海师范大学大学动物伦理委员会批准(批准号: 2021041203)。

磺胺类化合物作为重要的人工合成抗菌药, 在抗感染领域发挥重要作用。本文基于磺胺类药物研发现状, 突破磺胺经典结构, 设计合成一系列乙酰基取代的磺胺叔胺巯基唑类和磺胺叔胺氨基唑类化合物, 结构经 ¹H NMR、¹³C NMR和HRMS确认。测试了新化合物的体外抗微生物活性, 氨基三唑化合物7a的抗铜绿假单胞菌活性强于阳性对照药物诺氟沙星, 且其对金黄色葡萄球菌的抑制活性接近于诺氟沙星。初步研究了化合物7a与小牛胸腺DNA的相互作用, 并进行了化合物与DNA的对接实验研究。

采用ODS、MCI gel CHP20以及硅胶等柱色谱技术并结合半制备液相对茯苓95%乙醇提物进行分离纯化, 运用NMR、MS、IR、计算NMR等方法, 对分离得到的化合物进行结构鉴定。从茯苓中共分离得到7个化合物, 分别鉴定为20S-2β, 3α, 15α, 19, 20-羟基-孕甾-7-烯(1)、去氢齿孔酸乙酰酯(2)、齿孔酸乙酰酯(3)、去氢齿孔酸(4)、齿孔酸(5)、去氢茯苓酸(6)、茯苓酸(7)。化合物1为新孕甾烷类化合物。

采用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱、高效液相色谱等多种色谱技术, 从芦苇内生真菌Alternaria tenuissima Pas85固体发酵提取物中分离得到1个新的生物碱类化合物(1) 和6个已知化合物(2~7)。通过高分辨质谱、核磁共振和红外等波谱学方法及文献比对确定其结构, 并测试了化合物1~5的抗MRSA (methicillin-resistant Staphylococcus aureus) 活性。化合物1~4表现出一定的抑制活性, MIC值分别为64、4、32、32 μg·mL^-1, 化合物5无明显抑制活性。

采用硅胶柱色谱、MCI柱色谱、聚酰胺柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及ODS柱色谱, 结合半制备高效液相色谱等技术手段, 从穿心草(Canscora lucidissima) 全草95%乙醇提取物中分离纯化得到12个化合物。依据其理化性质和波谱数据(UV、IR、MS、NMR) 等对所分离得到的化合物进行结构鉴定, 分别为穿心草二苯醚A (1)、穿心草二苯醚B (2)、穿心草二苯甲酮A (3)、(-)-松脂素(4)、间羟基苯甲酸(5)、ω-羟基大黄素(6)、二氢山柰酚(7)、6, 7-二羟基香豆素(8)、4-羟基-3, 5-二甲氧基苯甲酸(9)、4-羟基-3, 5-二甲氧基肉桂酸(10)、2-羟基-3-甲氧基苯甲酸(11)、(-)-丁香树脂酚(12)。其中, 化合物1和2为新化合物, 化合物3为新天然产物。化合物8通过抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞NO的生成, 表现出一定的抗炎活性。

采用ODS反相硅胶、AB-8大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、氧化铝柱层析和半制备液相制备色谱等方法, 对千层塔甲醇提取物进行较为系统的分离纯化, 通过MS、IR、NMR等方法, 对分离到的化合物进行结构鉴定。从千层塔中共分离鉴定了4个生物碱化合物, 分别为serratinine C (1), lycobeline C (2), diphaladin A (3) 和crenatine (4)。其中, 化合物1为新的生物碱类化合物, 化合物2~4是首次从千层塔中分离。体外生物活性实验表明, 化合物1能够明显降低脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导的神经胶质细胞中一氧化氮(nitric oxide, NO) 和活性氧(reactive oxygen species, ROS) 水平, 具有显著抗氧化生物活性。

本研究以CHO_INSR_1284转基因细胞系为靶细胞, 利用均相时间分辨荧光技术建立德谷胰岛素生物学活性检测方法。对关键参数进行优化, 并依据中国药典(2020版四部通则9401、1431) 进行验证。结果表明, 德谷胰岛素在本方法中存在良好的剂量效应关系, 符合四参数曲线。经优化, 细胞种板密度为每毫升3.5×10⁵个, 德谷胰岛素初始浓度为57.18 μg·mL^-1, 稀释倍数为4倍, 刺激时间为45 min, 孵育时间为4 h。本方法专属性强, 5个效价水平几何变异系数GCV%为4.1%~10.6%, 线性拟合的直线回归方程为y = 1.015x - 0.027 7, R² = 0.999 6, 结果证明此方法具有的较好中间精密度和线性。且回归项非常显著(P < 0.01), 偏离平行项和模型失拟项均不显著(P ≥ 0.05), 均符合中国药典要求。本研究建立了一种基于均相时间分辨荧光技术的德谷胰岛素生物学活性检测方法, 该方法可用于德谷胰岛素类产品的生物学活性评价和质量控制。

研究表明, 心血管疾病、肾脏疾病及癌症等多种疾病与氧化三甲胺(trimethylamine-oxide, TMAO) 密切相关。临床上, TMAO的异常升高已作为先于影像学的动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS) 评价指标。本研究利用高脂血症金黄地鼠模型探讨脂代谢紊乱以及药物干预对尿液中TMAO的影响。研究采用48只叙利亚金黄地鼠高脂膳食造模2周后, 连续4周进行依哲麦布、辛伐他汀、依哲麦布和辛伐他汀组联合给药及临床试验药物IMM-H007药物干预。动物实验操作均遵循中国医学科学院药物研究所实验动物管理与动物福利伦理委员会的规定[批准号: SCXK (京) 2021-0011]。取金黄地鼠的给药后第2周和第4周尿液进行2D宽带选择性异核单量子相干(band selective heteronuclear single quantum coherence, 2D bs-HSQC) 检测。分析结果表明, 与对照组相比, 给药2周和4周后, 高脂饮食使得模型组金黄地鼠尿液TMAO均显著升高(P < 0.05)。与模型组相比, 依哲麦布、辛伐他汀、联合给药以及IMM-H007给药干预2周或4周后, 尿液TMAO均显著降低(P < 0.05), 在给药2周后已显示出明显降低, 对TMAO的检测可能先于血清生化学指标检测而更早实现药效评估。本研究对临床药物及临床试验药物对TMAO的调节作用进行了评价, 为临床用药及药物研究提供了有用的信息。也为TMAO的检测提供了基于2D NMR技术的检测手段, 有助于TMAO检测指标的临床应用。

采用Dionex CaboPac^TM PA10 BioLC^TM Analyical 2 mm × 250 mm色谱柱, 配以保护柱(Dionex CaboPac^TM PA10 BioLC^TM Guard 2 mm × 50 mm); 以100 mmol·L^-1氢氧化钠溶液为淋洗液; 流速为0.25 mL·min^-1; 样品盘温度: 35 ℃。采用脉冲安培检测器, 波形为: Gold CWE, Ag-AgCl RE, Carbo, Quad。以8个浓度的糖原底物(0.31、1.25、2.5、5、10、20、30和40 mg·mL^-1) 培养样品。在5个不同时间点(T0~T4) 时测定葡萄糖浓度。T1~T4的葡萄糖浓度减去T0时的葡萄糖浓度, 在不同糖原底物浓度下, 计算反应速率。利用米氏方程, 绘制这些反应速率与底物浓度的曲线。以V_max (nmol·mg^-1·min^-1) 和K_m (mg·mL^-1) 表示动力学参数。葡萄糖标准曲线(线性范围: 1.25~500 μmol·L^-1), 葡萄糖标准曲线的系数R² (n = 6) 的RSD为0.1%, 标准曲线斜率RSD为2.2%; 定量限平均值为0.14 μmol·L^-1, 检测限平均值为0.05 μmol·L^-1; 供试品重复3次单独实验K_m的RSD为4.4%, V_max的RSD为4.6%, 方法耐用性良好。建立离子色谱法在线自动化测定注射用阿糖苷酶α糖原水解动力学的方法, 该方法精密度、重复性和耐用性良好, 可以用于注射用阿糖苷酶α糖原水解动力学的检测, 并且对重组酶替代疗法酶类的糖原动力学评价具有参考价值。

按照各监管机构的要求, 聚乙二醇(PEG) 平均修饰率是PEG化蛋白类药物表征与质量控制中的关键属性。本研究基于“PEG化蛋白的示差信号及紫外信号等于该偶联蛋白中PEG和蛋白部分各自处于未偶联状态单独存在时所产生相应信号之和”的基本假设, 通过进样20 μL的1 mg·mL^-1人生长激素(hGH) 对照品、2 mg·mL^-1 PEG对照品和1 mg·mL^-1 PEG化hGH原液样品, 经分子排阻色谱柱分离, 测定各溶液在紫外和示差检测器下产生的信号, 按照推导的公式计算, 成功建立了基于分子排阻色谱紫外示差双检测器串联技术的PEG化hGH (怡培生长激素) 平均修饰率测定方法, 该法专属性良好, 重复性良好(RSD = 0.63%, n = 9), 与同时建立的经典酸水解法结果比较, 回收率为100.0%, 准确性良好。该法操作简单, 可及性好, 适用于本品PEG平均修饰率质量控制检测。

为改善硝苯地平光稳定性差的问题, 本研究基于晶体工程原理设计共晶并采用悬浮液法制备得到硝苯地平-咪唑新共晶。利用粉末X-射线衍射法、红外光谱法、差示扫描量热法、热重分析法对新共晶进行表征, 确证共晶物质的形成。使用粉末X-射线衍射法与高效液相色谱法考察了硝苯地平原料和共晶的光稳定性。结果表明, 硝苯地平-咪唑共晶在一定程度上改善了硝苯地平的光敏性。本研究为硝苯地平共晶开发以及成药性改善提供指导。

抗真菌药物自身局限性和严重的耐药性使得药物治疗侵袭性真菌感染(invasive fungal infections, IFIs) 面临巨大挑战。伊曲康唑(itraconazole, ITZ) 作为临床一线用药, 发挥广泛抗真菌活性的同时, 依然因其水溶性差、注射剂易造成药物积蓄等引起肝肾毒性和头痛腹痛等不良反应受到限制。因此, 开发新型ITZ制剂降低不良反应对真菌感染的治疗极具现实意义。本研究通过酰胺反应和希夫碱反应制备了没食子酸-壳聚糖-肉桂醛(gallic acid-chitosan-cinnamaldehyde, GA-CS-CN) 两亲性聚合物, 采用超声法制备得到载药纳米粒(GA-CS-CN/ITZ), 考察其制剂学性质及体外抗真菌活性效果, 并通过细胞毒性实验及体外溶血实验初步评价其生物安全性。研究表明, GA-CS-CN/ITZ呈球型、均一稳定, 粒径为239.57 ± 31.37 nm, ITZ包封率为(93.41 ± 1.12)%, 48 h时的体外药物累计释放达(62.25 ± 1.88)%, 且具有良好的生物安全性。Candida albicans ATCC 10231 (C. albicans) 的抗真菌活性结果表明该纳米粒具有最优的抗白色念珠菌效果, 可显著增强游离药物的抗真菌活性。本研究设计制备的GA-CS-CN/ITZ具有优良的抗白色念珠菌效果和生物安全性, 为治疗白色念珠菌感染提供了新选择, 在治疗该真菌感染方面具有良好的应用潜力。

异常过度磷酸化Tau蛋白引起的细胞内神经纤维缠结是阿尔茨海默病主要的病理标志之一。现有研究表明, BSc3094是一种有效的Tau蛋白聚集抑制剂, 其可以与Tau蛋白结合, 抑制Tau蛋白磷酸化, 同时增强细胞活力, 在治疗阿尔茨海默病方面具有极大潜力。然而, 由于血脑屏障的存在, 药物难以入脑发挥作用, 同时, BSc3094是否可以通过抑制Tau蛋白聚集来治疗阿尔茨海默病尚未深入研究。因此, 本研究通过搅拌法制得小粒径聚乳酸-羟基乙酸[poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA] 纳米颗粒, 以其为载体, 搭载BSc3094 (PLGA@BSc), 为了进一步增加其入脑效率, 在其表面修饰了病理血脑屏障靶向肽得到PLGA@BSc@K。本研究对该纳米体系的稳定性、细胞毒性及病理靶向性进行了表征, 该纳米体系的粒径约90 nm, 呈负电性; 实验表明, 纳米粒颗粒粒径在168 h内未见明显波动, 稳定性较好; PLGA及BSc3094游离药物对细胞活力无显著影响, 细胞毒性较低; 在1及4 h都可以明显观察到病理状态下细胞对靶向修饰的纳米颗粒的摄取增加, 表明PLGA@BSc@K具有较好的病理靶向效果。本研究为BSc3094纳米颗粒靶向入脑及阿尔茨海默病的治疗提供了新思路。

本研究应用Box-Behnken设计-响应面法优化菲牛蛭多肽的提取工艺, 并考察其美白抗衰作用。在单因素实验的基础上, 以NaCl溶液浓度、提取时间、提取次数为影响因素, 多肽得率为响应值, 设计并利用响应面模型, 得到菲牛蛭多肽提取的最佳条件: NaCl溶液浓度4.3%, 超声时间4 h, 超声次数2次(2 + 2 h)。该模型显著, 与实际试验拟合良好。通过酪氨酸酶催化左旋多巴氧化速率法考察菲牛蛭多肽的酪氨酸酶抑制活性; 以秀丽隐杆线虫为模式生物, 考察菲牛蛭多肽对线虫的身体长度、运动能力、生殖能力、活性氧(reactive oxygen species, ROS) 和脂褐素的影响。结果显示, 菲牛蛭多肽对酪氨酸酶有显著的抑制作用, 其IC₅₀为0.58 mg·mL^-1, 强于阳性对照熊果苷(2.24 mg·mL^-1)。与空白组相比, 0.1、0.5和1.0 mg·mL^-1的菲牛蛭多肽对线虫体长、产卵量和头尾摆动无显著性差异; 0.5 mg·mL^-1的菲牛蛭多肽显著降低线虫体内ROS水平; 0.5和1.0 mg·mL^-1的菲牛蛭多肽显著降低线虫体内脂褐素水平。菲牛蛭多肽具有良好的美白抗衰作用, 其作用机制可能与抑制酪氨酸酶活性和抗氧化作用有关。

精氨酸酶1缺乏症(arginase 1 deficiency, ARG1-D) 是一种罕见的遗传性代谢疾病, 导致患者进行性痉挛性瘫痪、认知障碍和癫痫发作。来源于人源的重组人精氨酸酶1 (recombinant human arginase 1, rhArg1) 是其潜在的治疗药物, 但还存在活性低、半衰期短等缺陷限制了其临床应用。本研究采用定向进化的方法, 通过易错PCR构建rhArg1的随机突变文库, 经高通量筛选获得活性提高的突变体, 联合点饱和突变探讨了R21和V182位点对活性的影响。研究发现, 在反应体系中不含Mn²⁺的条件下, 突变体V182D、V182S、V182H和R21N的k_cat值相比于rhArg1提高2.0、1.9、1.7和1.3倍, 突变体V182D、V182S、R21D和R21N的k_cat/K_m分别是rhArg1的2.1、1.7、1.4和1.4倍。突变体R21D和V182L对底物的亲和力有所增强。本研究通过定向进化和点饱和突变获得了rhArg1活性提高的突变体, 从而提升了其在医疗领域的应用前景。