阅读排行生物样品成分复杂，且目标分析物的浓度范围差异显著，因此，样品前处理对后续分析显得尤为重要。随着分析技术的不断发展，对样品前处理的要求也日益提高，前处理技术正在向微量、省时、高效、在线和环保的方向发展，以适应复杂基质和痕量分析的要求。在线前处理技术将样品前处理步骤与后续分析检测过程直接集成到自动化系统中，可减少步骤和误差，提高分析效率和灵敏度，实现目标化合物的自动、快速和高效分析。本文对近10年来国内外生物样品在线前处理技术进行综述，为后续生物样品预处理技术的进一步深入研究及开发提供参考。
目的：采用超高效液相色谱-高分辨质谱联用（UPLC-HRMS）技术，对补肺健脾方的化学成分进行鉴定分析。方法：采用Hypersil GOLD（2.1 mm×100 mm，2.6 μm）色谱柱，以甲醇（A）-0.1 %甲酸水（B）为流动相，梯度洗脱，流速为0.2 mL · min-1，柱温30 ℃；质谱数据采集采用正负离子Full MS/dd-MS2扫描模式，通过其特征碎片离子峰信息，采用Compound Discoverer分析数据，结合Chemspider、mzCloud等数据库和已有的相关化学成分信息报道，利用Mass Frontier的裂解推测，结合其裂解规律推断其结构，对补肺健脾方中的化学成分进行分析。结果：从补肺健脾方中鉴定出化合物221个，主要包括黄酮类化合物65个、苯丙素类化合物40个、萜类化合物21个、生物碱类化合物16个，及其他类化合物79个。结论：UPLC-HRMS可快速鉴定补肺健脾方体化学成分，同时定性分析补肺健脾方剂中的物质基础，可用于补肺健脾方的质量控制。
目的：建立电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定碳酸镧原料药中Cd、Pb、As、Hg、Co、V、Ni、Se共8种元素杂质的含量。方法：样品经3%硝酸溶解后直接进样，采用标准加入法和氧化镧基体匹配法2种方法进行测定，结合在线内标校正消除基质效应，同时对比分析2种方法的测定结果。结果：2种方法在质量浓度0~30 ng · mL-1范围内，8种元素线性均良好（r均>0.998），检测限分别为0.003 9~0.22 ng · mL-1和0.009 1~0.72 ng · mL-1，重复性RSD分别为1.5%~4.9%和5.1%~6.9%，加标回收率分别为87.0%~98.3%和83.4%~114.4%，3批碳酸镧原料药中8种元素杂质含量测定结果无显著差异。结论：ICP-MS标准加入法和基体匹配法简单快速，灵敏度高，准确性好，可有效消除基质效应，适用于碳酸镧原料药中元素杂质的质量控制。
建立克立硼罗软膏体外透皮方法，为克立硼罗软膏生物等效性提供参考依据。
采用HPLC法测定克立硼罗软膏渗透量，采用垂直式的Franz扩散池法研究软膏体外释放特性。采用Thermo BDS Hypersil-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以0.1%磷酸溶液-乙腈（60：40）为流动相，流速1.5 mL·min-1，柱温30 ℃，检测波长254 nm，进样量10 μL。
样品色谱图中克立硼罗峰形良好；阴性样品色谱图中在克立硼罗位置未出峰，不干扰测定；克立硼罗质量浓度在0.026~21.02 μg·mL-1的范围内线性关系良好（r≥0.999）；重复性6份试验中，将自制品与参比制剂最大渗透速率（Jmax）的均值进行比较，比值为0.94；同时对Jmax进行置信区间计算，考察90%置信区间为87.9%~102.0%；各样品质量守恒百分比为94.1%~101.1%（n=12）；对照品溶液室温放置26 h，峰面积的RSD为0.44%，自制品及参比制剂分别于室温、32 ℃水浴放置26 h，峰面积的RSD为0.78%~1.1%，说明溶液稳定性较好。对3批样品检测，自制品和参比制剂的Jmax均值的比值均在0.92~0.97范围内，同时对Jmax进行置信区间计算，考察90%置信区间为84.8%~100.7%。
该方法操作简单、便捷，方法选择性高，专属性强，准确度较高。
目的：建立一种基于基因药敏和代谢通路分析的微生态活菌制品活菌计数用选择性培养基筛选方法，以解决多联活菌制品含量测定时活菌之间相互干扰，点计困难，结果不准确的问题。方法：以双歧杆菌四联活菌制品为例，通过基因组规模代谢网络分析，快速预测蜡样芽孢杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌和婴儿双歧杆菌的抗生素敏感性，筛选出在4种微生物中存在抗性差异的抗生素作为添加剂，制备选择性培养基，用于多联制品的活菌含量测定。结果：基于基因药敏技术筛选出的选择性培养基用于四联活菌制品计数时，有效消除了其他活菌对嗜酸乳杆菌和婴儿双歧杆菌的干扰，保证每种成分菌计数结果的准确性。结论：基因药敏及代谢通路分析可以快速预测多种微生物之间抗生素的抗性差异，结果准确、快速，大大地降低了工作量，在选择性培养基筛选方面有广泛的应用前景。
目的：欧洲药典“Room temperature”与《中华人民共和国药典》“室温”概念不同，贮藏温度与长期稳定性试验设计、说明书撰写密切相关，本文探讨贮藏温度差异对注射用特利加压素关键质量属性的影响，以期引起仿制药企业对此问题的关注。方法：基于不同厂家说明书贮藏温度不一致的问题，追溯原研药长期稳定性试验及贮藏温度，采用经过验证的有关物质和聚合物检查方法评价温度差异对产品关键质量属性的影响。结果：放置于30 ℃的样品，有关物质增长幅度显著高于放置于15 ℃的样品。一家企业的样品于30 ℃放置仅5个月，聚合物就已超限。企业分歧源自部分企业忽视中欧药典差异，将原研药说明书“Room temperature”简单直译为“室温”。结论：贮藏温度对注射用特利加压素的有关物质和聚合物影响显著，应将说明书中贮藏温度要求收窄至“不超过25 ℃”。
建立流池法测定ω-3脂肪酸乙酯90软胶囊的溶出度，考察不同企业样品溶出行为的差异。
考察溶出介质（表面活性剂的种类和浓度、pH、胃蛋白酶的用量）、流速和系统模式（开/闭环）对ω-3脂肪酸乙酯90软胶囊溶出行为的影响，建立HPLC法对各取样点的溶出量进行测定，并通过计算相似因子(f2)评价仿制制剂和参比制剂溶出曲线的相似性。
采用流池法的闭环模式，栓剂池，以含4.0%曲拉通X-100的0.01 mol·L-1盐酸溶液为溶出介质，流速为2.0 mL·min-1，该溶出方法对产品质量和不同处方有较好的区分力。
建立的溶出方法可用于ω-3脂肪酸乙酯90软胶囊的质量控制，能为ω-3脂肪酸乙酯90软胶囊的一致性评价及油脂类软胶囊的溶出方法开发提供参考。
目的：建立HPLC法同时测定金连驱瘟胶囊中绿原酸、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、甘草苷、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、连翘苷、和厚朴酚及厚朴酚11个成分的含量。方法：采用Waters AtlantisTM T3（150 mm×4.6 mm，3 μm）色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，体积流量1.0 mL · min-1，柱温35 ℃，进样量4 μL，检测波长为225 nm（检测连翘苷）、250 nm（检测葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷）、276 nm（检测甘草苷）、290 nm（检测和厚朴酚、厚朴酚）和325 nm（检测绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、连翘酯苷A）。结果：上述11个成分在各自检测范围内线性关系良好（r均≥0.999 5），平均加样回收率（n=6）在100.1%~108.1%，RSD 在2.8%~4.1%。3批样品中各成分含量范围分别在7.505~7.606、3.485~3.920、0.969~1.068、0.837~0.955、1.009~1.436、3.037~3.602、5.259~5.371、0.931~1.012、1.428~2.053、0.939~1.018和2.744~2.827 mg · g-1。结论：该方法简单、灵敏、准确、可靠，可为金连驱瘟胶囊质量标准的建立提供参考。
目的：建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱（UPLC-QQQ MS/MS）法测定芪玉三龙汤中14个活性成分（L-精氨酸、水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、芦丁、贝母辛、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、咖啡酸、澳洲茄碱、澳洲茄边碱、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅰ）的含量。方法：色谱分析采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）色谱柱，以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱，流速0.2 mL · min-1，进样量5 μL，柱温35 ℃。质谱分析采用电喷雾离子源（ESI），正负离子模式扫描，多反应监测模式。结果：14个活性成分在各自浓度范围内线性关系良好，r均>0.995 0；精密度和重复性RSD均<2%，稳定性RSD<3%；平均加样回收率为88.4%~108.5%，RSD为0.020%~3.6%；10批自制芪玉三龙汤中上述14个成分的含量范围分别为667.28~785.78、165.72~197.27、196.32~275.60、17.60~26.52、4.68~10.75、279.12~388.05、26.00~47.57、385.52~442.77、288.00~358.82、629.88~839.02、86.67~125.83、51.58~65.83、25.50~37.53、55.50~76.13 μg · g-1。结论：本研究基于UPLC-QQQ MS/MS建立的芪玉三龙汤多种活性成分的含量测定方法具有快速准确，灵敏度高，专属性好的特点，可为芪玉三龙汤的质量控制提供参考。
建立高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（HPLC-Q TOF MS）同时测定4种减肥类小分子及4种胰高血糖素样肽-1（GLP-1）多肽类非法添加物的分析方法。
样品以50%乙腈为提取溶剂进行超声提取，离心后取上清液，采用Agilent EC-C18 色谱柱（150 mm×3.0 mm，2.7 μm）进行分离，以乙腈（0.1%甲酸）和水（0.1%甲酸）为流动相，梯度洗脱，流速为0.3 mL·min-1，柱温40 ℃。采用正离子全扫描及目标离子二级碎片扫描方式，碎裂电压150 V。其中一级质谱扫描范围为m/z 100~3 200，二级质谱扫描范围为m/z 50~3 200，扫描速度均为每秒1张质谱图。根据对照品的色谱保留时间、一级质谱和二级质谱信息建立数据谱库，通过数据库比对进行结构的确认。
多肽类物质定性筛查的检测限为0.5 µg·mL-1，其他小分子物质为0.05 µg·mL-1。在全扫描模式下，8个化合物线性相关系数均>0.995，回收率范围为79.4%~115.8%，RSD范围为0.21%~9.7%。采用本方法对20批减肥类样品进行检测，其中1批样品中检出西布曲明，4批样品中检出司美格鲁肽。
本方法扩大了国家食品药品监督管理局补充检验方法和检验项目批件2012005的筛查范围，能同时兼顾小分子物质和大分子多肽类物质（相对分子质量<5 000）检测的需要，具有高效、准确的特点。
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