过刊目录自2019年12月发现新型冠状病毒肺炎患者起,至2020年2月21日新冠病毒肺炎疫情已扩散至27个国家,全球患者总数近8万人。此次疫情受到世界各国广泛关注,为了有效应对疫情,各国正组织科研攻关,特别是在治疗药物筛选和疫苗研发等方面加大攻关力度,这是控制疫情的重点和难点。本文收集整理了各国学术界和政府关于药物和生物制品的相关研究信息,主要围绕可能用于治疗新型冠状病毒肺炎的化学药、中药和生物制品的研究情况,供有关部门、单位和科技人员参考。
由2019年新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染所致新型冠状病毒肺炎(COVID-19)已在全国蔓延,并波及全球多个国家。抗病毒药物是治疗病毒性传染病的重要手段,但目前尚无针对冠状病毒的特效药。在突发疫情且感染人数不断增加的情况下,短时间内获得可用于临床治疗的药物是当务之急。从已上市/已进入临床研究的药物中快速发现并确认有效药物已成为抗SARS-CoV-2药物研发的主要途径。通过对中国临床试验注册中心和美国临床试验数据库(Clinicaltrials.gov)进行检索,注册用于新冠肺炎治疗临床试验的化学药物共14种,本文即通过对这些药物的原适应症、靶点、与抗冠状病毒相关的研究基础进行总结和分析,试图为应对此次新冠肺炎紧急疫情各研究与临床机构采用化学药物治疗SARS-CoV-2感染患者的循证依据,也为未来快速应对可能出现的疫情合理拓展药物适应症提供线索。
"疫毒袭肺证"是北京市中医管理局对新型冠状病毒感染肺炎的中医病证分类,本研究首次建立了与新型冠状病毒中医寒湿疫毒袭肺证相吻合的病证结合小鼠模型,并基于免疫调节及炎性损伤等环节,研究了疫区临床用药苦参碱氯化钠注射液对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺证小鼠病证结合模型的治疗作用。通过肺指数、肺指数抑制率和肺组织病理检测评价苦参碱氯化钠注射液对模型小鼠的治疗作用;RT-PCR检测肺组织病毒核酸表达量评价其抗病毒作用;流式细胞术检测CD4+T细胞、CD8+T细胞及B细胞的百分比评价其免疫调节作用;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及γ干扰素(IFN-γ)的表达量评价其抗炎作用。实验中所有操作均遵循美国国立卫生研究院(NIH)及北京市实验动物伦理委员会的规定,并经过中国中医科学院中药研究所动物伦理委员会批准。结果显示,苦参碱氯化钠注射液高剂量组(36.67 mL·kg-1·d-1)和低剂量组(18.33 mL·kg-1·d-1)腹腔注射给药显著减轻模型小鼠肺组织病理损伤,肺指数抑制率分别为86.86%和76.53%;降低肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ的含量及肺组织中病毒载量;升高外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞及B细胞的百分比。以上结果表明,苦参碱氯化钠注射液对人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺证小鼠病证结合模型具有显著的治疗作用,其机制与抑制病毒复制、调节免疫功能、抑制炎症因子释放等作用有关。本研究为苦参碱氯化钠注射液临床用药提供了实验室数据支持,研究结果显示该药在开发为防治新型冠状病毒肺炎药物方面具有很好的应用前景,对现阶段抗击新型冠状病毒肺炎具有重要意义。
利用中药网络药理学和分子对接技术初步探索"清肺排毒汤"抗新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)作用机制。结合中国药典(2015版)以及中药系统药理学数据库及分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)、OMIM(Online Mendelian Inheritance in Man)、GeneCard、STRING等在线数据库,进行一系列网络构建、核心靶点筛选以及信号通路富集分析,最后对重要化合物进行分子对接预测。结果发现,清肺排毒汤化合物-肺炎靶点网络包含292个化合物和相应靶点214个,核心靶点涉及AKT1(AKT serine/threonine kinase 1)、IL6(interleukin 6)、MAPK8(mitogen-activated protein kinase 8)、MAPK1(mitogen-activated protein kinase 1)和JUN(jun proto-oncogene)等。应用GO(Gene Ontology)数据库功能富集分析得到858个GO条目,应用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库富集筛选得到122条有关通路,其中包含低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)通路、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)通路等已报道与肺炎相关的通路,也包括T细胞受体(T-cell receptor,TCR)通路等与肺损伤保护相关的通路。分子对接结果显示,清肺排毒汤中药材部分核心化合物对新型冠状病毒(2019-nCoV)的3C类似蛋白酶(3C-like protease,3CLpro)和血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)蛋白具有一定的亲和力。本文初步探索了清肺排毒汤抗COVID-19的作用机制,且预测了其药效物质基础,期待本结果能为进一步确证清肺排毒汤抗COVID-19有效成分和作用机制提供帮助。
抑郁症是一种以心境低落、悲观厌世、认知和睡眠障碍为主要特征的慢性综合征,临床上具有高发病率、高自杀率和低就诊率、低治疗率的特点。抑郁症发病40%~50%的风险来自基因。因此,研究基因异常是研究抑郁症发病内在原因的重要部分,其中受体基因异常是导致抑郁症发病的重要因素。研究潜在的受体基因位点有望成为未来抑郁症治疗的新靶点,能够为抑郁症的早期诊断、预防和治疗提供理论依据。
去甲乌药碱(higenamine,HG)是从附子中分离出的有效强心成分。国内外学者对HG的体内代谢和药理作用做了大量的研究,证实其对心血管系统具有多方面的作用。HG有正力性和正时性的强心作用,舒张血管的功能,用于治疗心力衰竭和心动过缓,近期已将其作为心脏负荷试验诊断药物。HG的抗氧化、抗凋亡作用可以用于保护心脏,减轻心脏缺血再灌损伤。另外,HG通过抑制转录因子NF-κB的活性,抑制iNOS mRNA的表达,抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的NO产物,对血小板聚集和血栓形成也有抑制作用。从而,对动物实验性感染性休克具有改善作用。本文综述了去甲乌药碱对心血管药理作用的研究进展,有助于该药物进一步研发及临床应用。
环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)-干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)信号通路是细胞质内一条重要的免疫应答通路,通过识别胞浆DNA调节起始免疫和适应性免疫应答。研究表明,来自肿瘤自身的DNA和基因组不稳定性都能够激活cGAS-STING通路,促进或抑制肿瘤的发展及转移。本文主要从cGAS和STING的结构功能特点、通路转导调节、抑制剂/激动剂研究现状及其在肿瘤发生发展及转移中的作用等方面进行系统阐述,为临床开发靶向cGAS-STING的抗肿瘤新药提供理论依据,为肿瘤临床及肿瘤研究工作者提供参考。
近年来,中介复合体参与骨骼肌代谢的研究已成为热点。中介复合体是一种多蛋白复合物,可与转录因子和RNA聚合酶II相互作用,在基因转录过程中发挥桥梁作用。中介复合体参与调控与骨骼肌代谢及肌纤维转化的相关转录因子的表达,如PPARs、PGC1α等。中介复合体通过调节葡萄糖转运蛋白GLUT4及代谢信号通路蛋白的关键转录因子,参与调控骨骼肌中葡萄糖代谢过程。另外,中介复合体还通过调控PPARγ、UCP-1等影响骨骼肌脂质代谢及线粒体功能关键基因的表达,进而调节全身代谢性疾病。综上所述,本文就中介复合体对骨骼肌代谢功能的影响及机制做一简要综述。
脓毒症是感染引起宿主免疫应答失调导致危及生命的器官功能障碍,致死率高,缺乏有效治疗药物。脓毒症发病机制复杂,涉及感染病原微生物及其毒素对宿主机体引起的全身炎症网络效应、免疫抑制与凝血功能障碍、内皮屏障损伤等多个方面,与机体多系统失常、多器官功能障碍、多脏器衰竭的病理生理改变密切相关。近年来全球范围内脓毒症发病率不断上升,每年增幅9%。脓毒症疾病的发展并不依赖所感染的病原微生物,后期炎症风暴导致严重的病情,使得脓毒症临床治疗十分棘手。而目前单纯应用抗生素治疗脓毒症效果并不理想,大多数临床治疗手段治标不治本,所以根据脓毒症患者病理生理过程探寻分子机制并据此设计的药物受到越来越多研究学者关注。本文主要综述根据其病理生理过程设计的靶点药物。
一氧化氮(NO)广泛存在于外周和中枢神经系统中,调节多种生理功能。睡眠-觉醒是机体的高级生理活动,研究表明,NO参与机体睡眠觉醒的调控。精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的作用下转变成瓜氨酸并产生NO,NO通过作用于鸟苷酸环化酶或亚硝基化蛋白质中特定氨基酸残基的途径,影响上行网状激活系统的活性,从而实现对睡眠觉醒进程的调控。本文主要对NO的产生、在睡眠觉醒和上行网状激活系统中的作用及其机制进行综述,为睡眠觉醒的研究提供新的思路和方向。
多肽分子大多为天然的内源性配体,与受体的亲和力强,选择性好,是一类比较容易成为先导化合物及药物的分子。许多药物都是从多肽分子进行结构优化改造而得,如降压药物卡托普利、抗丙肝药物特拉匹韦等。目前多肽分子开发面临的主要问题包括稳定性差、半衰期短、血浆清除率高等低成药性缺陷;通常只能注射使用,患者的依从性较差;生产工艺复杂,生产成本较高。因此,对多肽分子进行合理的修饰和改造既可以降低肽类分子的生产成本,又可以改善肽类分子的成药性。本文从改善肽类分子成药性的角度综述了肽类分子结构修饰与改造策略,根据是否对肽链骨架进行修饰,将修饰策略分为两类:一类是针对肽链骨架的改造,包括非天然氨基酸修饰、伪肽化策略、逆肽策略、环化策略、末端结构修饰等;另一类是在多肽骨架不变的基础上,引入其他基团进行结构优化和性能改造,包括高级脂肪酸修饰、聚乙二醇修饰、蛋白融合策略、胆固醇修饰等。
蛋白水解靶向嵌合分子(protein proteolysis-targeting chimeras,PROTAC)是一种可以募集靶蛋白和靶蛋白降解酶的杂合双功能化合物,利用泛素-蛋白酶体途径特异性地降解靶蛋白。因为PROTAC有将无法成药的蛋白质作为靶蛋白的潜力以及可能在药物耐药中发挥作用的优势,近年来已赢得了广泛关注。本文总结了现有的PROTAC小分子在核蛋白、膜蛋白及胞浆蛋白等不同靶点研究中的应用。
在抗体药物的生物分析中,液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术已经成为传统配体结合分析(LBA)的一种重要的替代或补充方法。其方法开发中替代肽的选择、样品制备、灵敏度和定量准确性是值得关注的问题。本文对抗体药物LC-MS法生物分析的进展进行综述,介绍LC-MS法分析抗体药物的原理,说明LC-MS法定量抗体过程中面临的挑战与当前可用于应对这些挑战的新策略,包括:替代肽的选择、样品纯化与富集、提高酶解效率、肽段富集与应用低速LC等方面。本文最后展示了LC-MS技术在抗体药物生物分析中的应用实例,并对抗体药物LC-MS法的发展提出了展望。
"肾精"是中医学的重要物质概念,但其实质至今未明。补肾益精中药治疗肾精亏虚证的临床应用极其广泛,但其生物学物质基础及其作用机制至今未被阐明。本文拟探寻多种补肾益精中药治疗多种肾精亏虚证疾病的共同作用的重要靶点,以期阐明其作用机制,并对阐释"肾精"本质提供参考。本文首先采用网络药理学方法,依据TCMSP、DisGeNET、Uniprot等数据库及研究报道文献资料,构建3味经典补肾益精中药(熟地黄、制首乌、黄精)与5种公认的肾精亏虚证疾病(骨质疏松症、阿尔茨海默症、贫血、不孕不育症、少精症)的"(补肾益精功能)药物-成分-靶点-疾病(肾精亏虚证候)"的关联网络。从该网络中筛选出关键靶点群,利用Clue GO和DAVID数据库对其进行生物功能注释。最后采用自然衰老肾精亏虚证小鼠模型,与青年小鼠、灌胃熟地黄的模型小鼠对比,验证上述网络分析所获得的重要靶点。小鼠的饲养和使用均符合中国《实验动物管理条例》及西南大学药学院实验动物伦理委员会相关规定。网络药理学分析结果发现,"(补肾益精功能)药物-成分-靶点-疾病(肾精亏虚证)"关联网络存在175个中药与疾病的相同靶点,经分析网络拓扑参数获得71个关键靶点。这些靶点涉及转录、RNA代谢、DNA依赖的转录调控等多种生物过程;核腔、细胞器内腔、膜封闭腔等细胞成分;转录调节、转录因子活性、酶结合等分子功能,以及参与过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)和促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)等信号通路调控。动物实验验证结果显示,自然衰老肾精亏虚证模型小鼠EPO含量及其通路中HIF-1α、生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2,GRB2)、MAPK3、信号传导及转录激活蛋白5A(signal transducer and activator of transcription 5A,STAT5A)、转录因子AP-1(transcription factor AP-1,JUN)和原癌基因c-Fos(proto-oncogene c-Fos,FOS)表达量均显著降低,熟地黄能显著逆转上述各项蛋白的降低。网络药理学预测结果与模型动物验证结果均表明,补肾益精中药治疗肾精亏虚证相关疾病的作用靶点及机制,可能与调节细胞核内转录活性及EPO信号通路有关。
近年来,误服菊三七引起肝窦阻塞综合征(hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS)的案例逐年增多,引起国内外的广泛关注。菊三七含大量吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PAs),经肝脏代谢活化生成吡咯-蛋白加合物(pyrrole-protein adducts,PPAs)。本文首先利用SD雄性大鼠单次灌胃不同剂量的菊三七醇提物(0.062 5、0.25、0.5、2.0和4.0 g·kg-1)后,于2、12、24和48 h眼眶静脉丛取血,并48 h后异氟烷麻醉取肝,用于苏木精-伊红染色,进行肝组织病理分析,考察不同剂量菊三七醇提物与PPAs生成量及菊三七肝毒性的关系。此外,利用SD雄性大鼠单次灌胃0.25和0.5 g·kg-1菊三七醇提物后,于不同的时间点(10、20和30 min、1、2、4、6、12、24和48 h)眼眶静脉丛取血,进行了不同剂量的PPAs的药代动力学研究。实验方案经上海中医药大学动物实验伦理委员会批准(PZSHUTCM190912019)。采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)检测血清中PPAs含量,并用PK Solutions 2TM软件的非房室模型进行拟合求算药动学参数。结果表明,PPAs含量随菊三七给药剂量增加呈剂量依赖性,且与肝损伤程度相关;PPAs在大鼠体内的消除率随着给药剂量的增加明显减慢。PPAs可作为PAs毒性标志物,其含量的高低及清除的快慢可为PAs减毒策略的开发提供参考。
丁苯酞与阿魏酸对缺血性脑卒中都具有较好治疗效果。本研究采用分子杂交策略,以苯甲酸为原料通过亲核取代、还原、酯化及消除反应合成12个丁苯酞衍生物,经1H NMR、13C NMR、ESI-MS确证其结构。首先,采用MTT法测试所有化合物对氧糖剥夺诱导大鼠脑皮层神经元损伤的体外保护活性。其次,采用Bron比浊法测定具有最好神经细胞保护活性化合物,对花生四烯酸及二磷酸腺苷的血小板聚集的抑制活性。结果表明,化合物7b不仅表现出强效的神经细胞保护活性,还具有良好的抗血小板聚集活性,存在研发成治疗缺血性脑卒中药物的潜力。
运用Diaion HP-20、MCI Gel CHP-20、Sephadex LH-20、ODS、硅胶和半制备高效液相等多种色谱分离技术分离纯化研究姜皮中的化学成分。通过理化性质和波谱数据鉴定了7个萜类化合物:(4R,6S)-1-(羟甲基)-5,5-二甲基二环[3.1.1]庚-2-烯-4-醇(1)、4-(羟甲基)-1-异丙基环己-2-烯-3,4-二醇(2)、3,5,6-trihydroxy-7-megastigmen-9-one(3)、3-(3-hydroxybutyl)-2,4,4-trimethyl-2,5-cyclohexadien-1-one(4)、angelicoidenol(5)、grasshopper ketone(6)和dihydrophaseic acid(7),其中化合物1、2为新化合物,命名为:(4R,6S)-1-(羟甲基)-5,5-二甲基二环[3.1.1]庚-2-烯-4-醇和4-(羟甲基)-1-异丙基环己-2-烯-3,4-二醇,化合物3~7均为首次从该植物中得到。
采用硅胶、聚酰胺、Sephadex LH-20及HPLC对小花鬼针草80%乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行分离纯化,共得到11个单体化合物,根据其理化性质及波谱数据分别鉴定为(2S)-十三烷-(11E)-一烯-3,5,7,9-四炔-1,2,13-三醇(1)、吡啶-4-甲酰-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(2)、海生菊苷(3)、trichocarpine(4)、奥卡宁-4-甲醚-3'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、奥卡宁-4-甲醚-4'-O-β-D-(6''-乙酰基)-葡萄糖苷(6)、Z-6-O-(6″-O-p-香豆酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-6,7,3',4'-四羟基橙酮(7)、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷(8)、金丝桃(9)、(3S)-十四烷-(6E,12E)-二烯-8,10-二炔-1,14-二醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(10)和鬼针聚炔苷B(11)。其中化合物1和2为新的化合物,化合物4和8为首次从该属植物中分离得到,化合物5~7、10和11为首次从该植物中分离得到。
动脉粥样硬化是多种心血管疾病的诱因之一,而脂质代谢紊乱是动脉粥样硬化的重要危险因素,以脂肪酶为靶的活性筛选有助于发现潜在的降血脂、抗动脉粥样硬化药物。传统的酶靶筛选方法存在操作步骤繁琐、酶活性降低、传质效率低、筛选假阳性率高等问题。本文构建了基于中空纤维吸附脂肪酶的流体灌注系统,用于中药降血脂、抗动脉粥样硬化活性成分的筛选,并以苦丁茶总皂苷为例进行了筛选。首先搭建了流体灌注系统,并对酶靶筛选的方法学进行了考察。然后,采用优化后的筛选条件,从苦丁茶总皂苷中发现了两种具有与脂肪酶结合潜能的小分子化合物,即苦丁茶皂苷A和C。最后,通过脂肪酶抑制活性和低密度脂蛋白聚集体诱导的泡沫细胞形成模型对苦丁茶皂苷A和C的活性进行了验证,证实了筛选体系的可靠性。总之,基于中空纤维吸附靶酶的流体灌注系统具有功能集成、传质速率快、操作步骤简单、分析通量和效率更高、成本低廉等优点,特别适合中药复杂体系的快速活性筛选。
采用高效液相色谱-示差折光检测器(HPLC-RID)和高压离子色谱-电导检测器(HPIC-CD)对盐酸伊立替康脂质体注射液中蔗糖八硫酸酯进行含量测定并比较,为脂质体制剂提供科学有效的分析方法。HPLC-RID法:采用Kromasil 100-5-NH2柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.8 mol·L-1硫酸铵溶液(pH 3.5)-乙腈(83:17)为流动相,柱温30℃,检测器温度30℃,流速1.0 mL·min-1。HPIC-CD法:采用Dionex InPacTM AS11-HC阴离子交换柱(250 mm×4 mm,9 μm),流速1.5 mL·min-1,柱温30℃,检测器温度35℃,淋洗液30 mmol·L-1氢氧化钠溶液。结果表明HPLC-RID法和HPIC-CD法的专属性、检测限、定量限、线性、精密度、准确度、稳定性以及耐用性验证均符合要求。两种方法均可准确测定盐酸伊立替康脂质体注射液中蔗糖八硫酸酯的含量,经过独立样本T-检验表明两种方法测得结果无显著性差异。与HPLC-RID法相比,HPIC-CD法具有专属性强、灵敏度高、分析速度快、操作简便、成本低、环保等优点。
建立一种简便、灵敏的同时测定人血浆中维拉帕米和去甲维拉帕米浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的分析方法,并用于健康人体的药代动力学研究。血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,使用Agilent Zorbax Eclipse C18色谱柱(50 mm×4.6 mm,5 μm)分离,以0.1%甲酸-5%乙腈-10 mmol·L-1甲酸铵水溶液作为水相,甲醇-乙腈(50:50,v/v)溶液作为有机相,0.5 mL·min-1的流速进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源(ESI),多反应(MRM)正离子监测模式对维拉帕米、去甲维拉帕米及内标维拉帕米-d6进行定量检测,监测离子对分别为m/z 445.0→165.2、m/z 441.0→165.2和m/z 461.1→165.2。本文建立的同时测定人血浆中维拉帕米及去甲维拉帕米浓度的LC-MS/MS方法的定量下限(LLOQ)为0.1 ng·mL-1,且在0.1~50 ng·mL-1浓度内线性关系良好(r2>0.997)。维拉帕米及去甲维拉帕米的基质效应分别在99.2%~100%和101%~102%之间,该方法前处理简便快速,灵敏度高,能准确同时测定人血浆中维拉帕米及去甲维拉帕米浓度,方法验证后并经伦理委员会批准后应用于健康人体的药动学研究。
采用Box-Benhnken中心组合试验设计原理和响应面分析法,得到碱法提取灵芝颗粒性β-葡聚糖(Ganoderma lucidum particulate β-glucan,GLG)最佳条件:提取温度55℃、时间8 h和料液比1:20,提取得率为8.57%。本研究中动物实验获得江苏省中医药研究院伦理委员会的批准。体外免疫活性研究表明,GLG能促进巨噬细胞的激活并分泌促炎细胞因子,不仅能提高巨噬细胞的吞噬能力,还能促进巨噬细胞吞噬GLG自身,持续发挥免疫刺激作用;GLG还能促进小鼠脾淋巴细胞的增殖;此外,口服GLG能够显著抑制CT26荷瘤小鼠肿瘤的增殖,提高其脾脏中产生IFN-γ的CD4+T(Th1)细胞与CD8+T(CTL)细胞的比例,表明GLG能够促进具有杀伤肿瘤细胞作用的Th1和CTL的增殖与分化,从而增强机体抗肿瘤免疫。
为了有效地进行药用黄芪及其混伪品的分类鉴定,本实验对收集的蒙古黄芪、膜荚黄芪共32份材料进行了ITS2序列的扩增及双向测序,测序结果经CExpress软件拼接,去除两端5.8S和28S序列后,获得完整的ITS2序列;并从GenBank上下载黄芪混伪品蓝花棘豆、锦鸡儿、红芪、蜀葵的ITS2序列各3条,利用MEGA7计算种内、种间遗传距离,对各序列进行差异性分析;利用Neighbor-joining(NJ)法基于ITS2序列(一级结构)和基于联合ITS2序列及其二级结构构建系统发育树。结果表明:蒙古黄芪与膜荚黄芪平均ITS2序列长度均为216 bp,平均GC含量分别为50.00%、50.46%,两种药用黄芪与蓝花棘豆在ITS2序列的长度和GC含量的相似性最高,与蜀葵存在较大的差异;药用黄芪与蓝花棘豆的种间距离最小,与红芪、锦鸡儿、蜀葵遗传距离较大;基于ITS2序列(一级结构)和基于联合ITS2序列与其二级结构构建的系统发育树表明:两种系统发育树的拓扑关系基本一致,都可以有效地鉴别药用黄芪及其混伪品;此外二级结构信息的加入,也使得ITS2序列在构建系统发育树中末端分支变多,分辨率与支持率上也有所提高,对药用黄芪以及混伪品的亲缘关系得到了进一步的体现。为药用黄芪及其混伪品的分类与准确鉴定提供了一定的科学依据。