神经退行性疾病(neurodegenerative diseases，ND)主要包括阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症和共济失调等疾病。神经退行性疾病患者人数不断增长，但能早期诊治的患者比例不到30%，并且ND的发病原因目前仍不明确。为了尽早对疾病进行干预，研究者们致力于寻找便于早期诊断ND的生物标志物。其中，脑脊液(cerebrospinal fluid，CSF)真实反映了脑细胞外空间的组成，可能是评价ND的最灵敏的生物标记物。但取脑脊液的方法比较复杂，在治疗ND患者的初级护理或老年医疗机构中不是一个普遍的方法。影像学检查价格高昂，难以在社区人群中普及。而外周血采集方便、创伤小和费用低，是具有潜力的早期筛查和随诊手段。血液中有多种成分可供分析研究，本文就ND患者血液中载脂蛋白的变化作为标志物的研究进展进行综述。

趋化因子是一类具有趋化活性的细胞因子，参与调节机体的免疫应答和炎症反应。它们作为一种多功能介质，不仅影响免疫细胞向肿瘤浸润，在肿瘤的生长、血管生成和侵袭转移等方面也发挥重要作用，是目前肿瘤治疗的重要靶点。本文回顾了趋化因子参与调控的信号通路，分析了趋化因子在乳腺癌发生发展中的作用机制，总结了近年来趋化因子及其受体相关的乳腺癌靶向药物，并对趋化因子在抗乳腺癌治疗中的作用进行了展望。

Torpor是指在食物供应减少时期，为维持生存，动物体内代谢活性大幅降低的一种状态，表现为体温、代谢水平和运动水平大幅降低。哺乳动物拥有一套严格的体温调节系统以维持体温恒定，当能量长时间供给不足时，部分哺乳动物会进入冬眠状态，torpor与冬眠状态表现十分类似。研究torpor状态的发生机制在航空航天和军事医学等领域具有重要意义。本文主要从adcyap (adenylate cyclase activating polypeptide)神经元、瘦素、QRFP(pyroglutamylated RFamide peptide)神经元和交感神经系统等4方面就调控torpor状态发生的具体机制进行总结，旨在为torpor发生机制的进一步研究提供思路。

黄芩苷(baicalin)是从唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)中提取的主要生物活性成份，属于黄酮类化合物，黄芩苷药用价值高，具有抗菌、抗炎、抗氧化和保护神经等多种药理作用，并显示出巨大的抗肿瘤潜力。近几年研究发现，黄芩苷对人多种肿瘤具有较好的抑制作用，其作用机制包括诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤迁移侵袭、诱导肿瘤细胞周期阻滞和抑制肿瘤血管生成等。现概述国内外对黄芩苷抗肿瘤药理作用及机制的研究进展，为黄芩苷的深入研究提供依据。

特异质药物性肝损伤(idiosyncratic drug-induced liver injury，IDILI)是一种发生在少数特殊易感个体，且无法预测的严重药物不良反应。虽然对IDILI发生机制尚未完全了解，但人们提出了多种假说来解释IDILI的作用模式和具体机制，其中炎症应激假说是最重要假说之一。炎症应激条件下，药物与炎症相互作用，可通过诱导炎症细胞因子产生、激活凝血系统、影响代谢物活性、诱导胆汁淤积以及影响线粒体损伤等多种机制介导IDILI的发生。本文将就炎症应激条件下IDILI的主要发生机制和影响因素进行综述，以期为临床前药物开发和药物性肝损伤的基础研究提供参考。

传统抗肿瘤药物是指能够直接杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞生长、增殖的一类细胞毒类化疗药物。由芥子气衍生而来的氮芥于1946年用于治疗淋巴瘤，揭开了现代肿瘤化学治疗的序幕。以氮芥为起始，包括烷化剂、抗代谢、抗癌抗生素和抗肿瘤植物药等多种类抗肿瘤药物被陆续开发用于临床治疗。传统抗肿瘤药物是肿瘤化疗的基石，在恶性肿瘤的综合治疗和新辅助治疗中占有重要地位。近年来，传统抗肿瘤药物通过与分子靶向治疗、免疫治疗及放射治疗的联合应用，极大地提高了肿瘤患者的生存率。随着对肿瘤基因组和肿瘤发生发展机制研究的不断深入，精准医学和个体化治疗的理念被提出并在临床实践中取得成功。在此背景下，传统抗肿瘤药物的个性化治疗策略也有待进一步研究和优化。本文综述了近年来传统抗肿瘤药物的临床应用情况和研究进展。

RAS(rat sarcoma)基因是一种重要的致癌基因，其突变存在于约30%的人类肿瘤中。KRAS(kirsten rat sarcoma viral oncogene)是RAS的三个亚型之一，且相比于其他两种RAS亚型更易出现突变。近年来，研究的不断深入为靶向KRAS治疗肿瘤提供了新的可能性，KRAS抑制剂的研发也因此取得了显著的进展。本文根据各类抑制剂的作用模式，将KRAS抑制剂分为直接靶向于KRAS的抑制剂和间接作用于KRAS的抑制剂两类，并由此综述介绍了具有代表性的KRAS抑制剂。

局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)是一种非受体细胞内酪氨酸激酶，其同时具有激酶依赖和非激酶依赖的支架功能，在肿瘤的发生发展及转移侵袭中均起到重要作用，被认为是抗肿瘤药物研发的重要靶点。然而，传统的小分子抑制剂只能抑制其激酶活性，难以靶向非激酶依赖的支架功能。因此，迫切需要新颖的策略来研究FAK靶点，为FAK靶点的成药性及其相关药物的研发奠定基础。蛋白水解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimera，PROTAC)技术是一种新兴的药物研发策略，其能招募E3泛素连接酶，特异性泛素化靶蛋白并通过蛋白酶体系统靶向降解目的蛋白。PROTAC的独特作用机制能靶向降解FAK蛋白，从而消除FAK的支架功能，极大吸引了科研人员的兴趣。本文简述了FAK蛋白、信号通路及小分子抑制剂，系统综述了基于PROTAC技术靶向降解FAK蛋白的最新研究进展，最后总结并展望了基于PROTAC技术靶向FAK蛋白的发展前景。

肿瘤微环境(tumor microenvironment，TME)在肿瘤的发生发展过程中与肿瘤相互作用，与肿瘤生长、转移、免疫逃逸和耐药等行为密切相关，是动态且复杂的局部环境。因此，靶向肿瘤微环境是抗肿瘤治疗的热点。天然产物结构多样，来源广泛，具有多靶点、多途径、药理作用广泛等特点，是抗肿瘤药物的主要来源。近年来，研究发现天然产物不仅能直接作用于肿瘤细胞，同时也对肿瘤微环境具有积极调节作用。本文围绕肿瘤微环境中物质组成及其功能和天然产物，如萜类、黄酮类、生物碱类、醌类、多糖类和酚类等成分靶向肿瘤微环境的研究进展进行综述，以期为肿瘤治疗的药物研发提供参考。

将药物高效且安全地透过生物膜递送到治疗部位一直是药物递送领域的研究难点和热点。近年来，由于烷基糖苷类化合物(alkyl polyglycoside，APG)高效的促透性能、良好的安全性和生物降解性，成为药物递送系统的理想促透剂，引起了国内外研究者的广泛关注。本文将对APG的理化性质、特点、作用机制及在药物递送系统中的应用进行全面的综述，并对其在药物递送系统中的应用前景进行展望。

本研究应用体内、外模型探讨了绿原酸（chlorogenic acid，CGA）对食管癌中程序性死亡受体配体1（programmed cell death ligand 1，PD-L1）的表达调控作用，以及干扰素γ（interferon γ，IFN-γ）在这一调控过程中发挥的作用。遵从中国医学科学院药物研究所动物实验中心标准操作规程（SOP）建立小鼠食管癌模型，通过基因芯片检测发现小鼠食管癌组织中PD-L1的差异表达，并应用qRT-PCR、Western blot和免疫组化（immunohistochemistry，IHC）染色在小鼠食管癌组织中进行验证，然后在体外培养的食管癌细胞中进行进一步的验证和机制探讨。结果发现，CGA能够显著抑制小鼠食管癌组织中PD-L1的表达，但在体外培养的KYSE180及KYSE510食管癌细胞中，PD-L1的表达并不受CGA的调控。用IFN-γ对KYSE180和KYSE510细胞进行预处理，PD-L1的表达明显升高，再加入CGA处理，PD-L1的表达下调，并且随着CGA浓度的增加或者处理时间的延长，PD-L1表达受抑制的效果越明显。同时，通过对PD-L1上游的干扰素调节因子1（interferon regulatory factor 1，IRF1）的检测表明，在经IFN-γ预处理的KYSE180及KYSE510细胞中，IRF1的表达受到CGA的抑制，其变化趋势与PD-L1一致。上述结果表明，CGA可以通过IFN-γ信号通路下调食管癌中PD-L1的表达，为食管癌治疗的新方法提供了分子理论基础。

减毒沙门氏菌VNP20009具有较好的在肿瘤中定殖、复制并发挥一定抗肿瘤作用的特性，可作为抗癌药物载体或与其他疗法（如化疗）联用，具有较好应用前景。本文对VNP20009的生物学性质进行研究，检测了VNP20009在不同温度、pH值及H₂O₂作用下的生长曲线及细菌生物膜的形成。结果表明，VNP20009在42℃、弱酸性环境pH 6.5以及H₂O₂（1 mmol·L^-1）条件下可正常生长，弱酸性环境有益于VNP20009生物膜的形成。本实验结果对深入研究减毒沙门氏菌的生存机制和应用提供了基础。

糖尿病患者常出现高血糖性肾损伤（hyperglycemic kidney injury，HKI）并发症。本文研究了高血糖致肾脏5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）系统表达异常与HKI的关系。动物实验用高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）模型，用5-HT_2A受体（5-HT_2A receptor，5-HT_2AR）拮抗剂盐酸沙格雷酯（sarpogrelate hydrochloride，SH）及5-HT合成抑制剂卡比多巴（carbidopa，CDP）分别或联合给药治疗。细胞实验用D-葡萄糖（D-glucose，D-Glu）刺激人肾小球系膜细胞（human glomerular mesangial cells，HMC），并用SH、CDP或单胺氧化酶A（monoamine oxidase A，MAO-A）抑制剂氯吉兰分别抑制5-HT_2AR、5-HT合成及5-HT降解。实验用PAS染色法（periodic acid-Schiff stain）和Masson染色、免疫组化和Western blot、荧光探针、酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）和酶试剂分别检测组织病理学、蛋白表达、细胞内活性氧和生化指标。本文中，动物福利和实验过程均遵循中国药科大学动物伦理委员会的规定。结果表明，小鼠肾脏的肾小球基底膜、肾小管上皮细胞和HMC细胞均存在5-HT_2AR、5-HT合成酶及MAO-A表达，且在T2DM小鼠及高浓度D-Glu刺激HMC细胞时被上调；以肾功能异常、肾小球肿胀及基底膜增厚和纤维化为主要表现的HKI与肾脏5-HT_2AR表达上调、5-HT合成及5-HT降解的增加密切相关。其中，5-HT_2AR可介导细胞的5-HT合成酶及MAO-A的表达；而MAO-A通过催化5-HT降解、使线粒体活性氧（reactive oxygen species，ROS）产生增多，导致核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）的磷酸化、炎症因子产生及基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinases-2，MMP-2）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表达上调及胶原产生。用SH和CDP可有效治疗HKI，且联合用药有协同效应。

高尿酸血症不仅作为痛风发病的生化基础，还与代谢综合征、心血管疾病、慢性肾病等疾病的发生发展密切相关。黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）是体内尿酸生成的关键催化酶，也是抗高尿酸血症药物的重要靶点。本研究以XOD为靶点，设计合成化合物CC18022，经过分子对接分析观察到其与XOD具有较紧密的结合。体外实验发现CC18022可显著抑制XOD活性，半数抑制浓度达到纳摩尔数量级，与临床使用的XOD抑制剂非布索坦的体外XOD抑制程度相当。分别应用急性与慢性高尿酸血症小鼠模型检测，发现CC18022在体内具有显著降血尿酸作用，并呈良好的剂量依赖性。动物福利和实验过程均遵循中国医学科学院药物研究所动物伦理委员会的规定。结果显示CC18022可降低急性高尿酸血症小鼠的血清XOD活性，以及与嘌呤吸收、代谢相关的小肠组织、肝脏的XOD活性。因此，新结构类型化合物CC18022显示较强的XOD抑制活性和显著的抗高尿酸血症效果，具有良好的研发前景。

人免疫缺陷病毒1（human immunodeficiency virus type 1，HIV-1）蛋白酶活性的严格调控对于病毒的生存至关重要。在病毒蛋白表达及病毒颗粒装配过程中，处于病毒前体蛋白Gag-Pol中的蛋白酶必须以无活性状态存在，避免前体蛋白Gag-Pol和Gag被提前酶切加工（前体蛋白早成熟化）。干扰HIV-1蛋白酶活性的调控机制，特异性激活前体蛋白中的蛋白酶，诱导前体蛋白早成熟化，就可直接抑制病毒复制。根据这一设想，利用前期已建立的细胞水平HIV-1前体蛋白早成熟化激活剂筛选模型，对3 500个化合物进行筛选与评价，得到6个活性化合物具有激活作用，并具有一定的抗病毒活性，同时在一定程度上诱导了HIV-1感染细胞的凋亡。本研究为抗病毒药物的研发提供了思路。

探讨梓醇对非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）状态下肝细胞凋亡的保护作用及其机制。体内实验采用高脂饮食（high fat diet，HFD）诱导小鼠建立NAFLD模型，实验过程和动物福利均遵循江汉大学动物伦理委员会的规定；体外实验采用棕榈酸（palmitate，PA）诱导人肝癌细胞系HepG2建立脂毒性模型。结果显示，梓醇显著降低HFD小鼠血清中总甘油三脂（total glyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）和谷草转氨酶（aspartate transaminase，AST）含量；TUNEL染色和流式细胞术显示梓醇显著抑制了肝细胞凋亡；Western blot结果显示梓醇显著降低内质网应激标志性蛋白如结合免疫球蛋白（binding immunoglobulin protein，BiP）、磷酸化的PKR样内质网激酶（phosphorylated PKR-like endoplasmic reticulum kinase，p-PERK）、肌醇需求酶1α（inositol-requiring enzyme 1α，IRE1α）和活化转录因子6（activating transcription factor 6，ATF6）的蛋白表达水平以及应激性凋亡蛋白C/EBP同源蛋白（C/EBP homology protein，CHOP）、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase，p-JNK）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cysteinyl aspartate specific proteinase，caspase）-12、-9和-3的蛋白表达水平。此外，HepG2细胞经内质网应激激动剂衣霉素（tunicamycin，TM）处理后，显著降低了梓醇对内质网应激相关蛋白BiP、p-PERK、IRE1α、ATF6和凋亡相关蛋白CHOP、p-JNK、Bcl-2、Bax、cleaved caspase（-12、-9和-3）表达水平的抑制作用，证明梓醇通过缓解内质网应激抑制肝细胞凋亡。以上结果表明，梓醇能够通过缓解内质网应激抑制肝细胞凋亡，从而发挥保护肝损伤的作用。

本研究以体外实验探讨青藤碱通过上调配对免疫球蛋白样受体B（paired immunoglobulin-like receptor B，PIR-B）的表达水平而抑制巨噬细胞的经典活化。以脂多糖与γ干扰素联合刺激建立巨噬细胞经典活化细胞模型。分别以实时荧光逆转录-聚合酶链反应与蛋白免疫印迹方法检测细胞PIR-B的基因与蛋白表达，以酶联免疫吸附测定法检测培养上清液肿瘤坏死因子α与白细胞介素8，流式细胞术检测M1巨噬细胞，激光扫描共聚焦显微镜观察PIR-B原位表达。结果显示，青藤碱显著增加PIR-B表达，明显减少M1巨噬细胞百分比，降低培养上清液肿瘤坏死因子α、白细胞介素8水平。以上结果提示，青藤碱可显著抑制巨噬细胞经典活化，其机制可能与其增加巨噬细胞的PIR-B表达有关，此药理作用有助于解释青藤碱治疗类风湿性关节炎的药效机制。

探索复方鱼腥草合剂清热解毒功效的药效物质基础及网络调控机制。首先利用网络药理学的方法，选取复方鱼腥草合剂中25个化合物为研究对象，依据反向药效团匹配方法和TCMSP、UniProt等数据库预测化合物作用靶点，借助Omicsbean软件及KEGG数据库对获得靶点进行基因本体（gene ontology，GO）功能富集分析、信号通路分析，利用Cytoscape软件构建“化合物-靶点-通路-药理作用-功效”网络药理图。最后采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的RAW264.7细胞炎症模型，验证复方鱼腥草合剂及方中10个重要单体成分的抗炎作用。网络药理预测实验发现，25个化合物可通过211个靶点干预97条信号通路，其中RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（RAC-alpha serine/threonine-protein kinase，AKT1）、胰岛素（insulin，INS）、血管内皮生长因子α（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、细胞肿瘤抗原p53（cellular tumor antigen p53，TP53）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、转录因子AP-1（transcription factor AP-1，JUN）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3，CASP3）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP9）、白介素-8（interleukin-8，IL-8）、前列腺素G/H合酶2（prostaglandin G/H synthase 2，PTGS2）、原癌基因c-fos（proto-oncogene c-Fos，FOS）、酪氨酸蛋白激酶SRC（tyrosine-protein kinase SRC，SRC）、丝裂原活化蛋白激酶-8（mitogen-activated protein kinase 8，MAPK8）和雌激素受体1（estrogen receptor 1，ESR1）等15个核心靶点和核转录因子κB信号通路（NF-kappa B signaling pathway）、Toll样受体信号通路（Toll-like receptor signaling pathway）、丝裂原活化蛋白激酶信号通路（MAPK signaling pathway）、白介素-17信号通路（IL-17 signaling pathway）、花生四烯酸代谢（arachidonic acid metabolism）、环磷酸腺苷信号通路（cAMP signaling pathway）、T细胞受体信号通路（T cell receptor signaling pathway）、钙离子信号通路（calcium signaling pathway）、TRP通道炎性介质调节（inflammatory mediator regulation of TRP channels）、趋化因子信号通路（chemokine signaling pathway）、Th1和Th2细胞分化（Th1 and Th2 cell differentiation）、自然杀伤细胞介导的细胞毒性（natural killer cell mediated cytotoxicity）等46条信号通路与抗炎、解热、免疫调节、镇痛等过程相关，推测复方鱼腥草合剂通过干预以上过程发挥清热解毒功效，体现了其多成分、多靶点、多途径的治疗作用。体外细胞实验表明，复方鱼腥草合剂及10个单体成分（异槲皮苷、木犀草苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、连翘苷、连翘酯苷A、绿原酸、异绿原酸A、獐牙菜苷）均能显著降低LPS诱导的RAW264.7炎性细胞上清中一氧化氮（nitric oxide，NO）、TNF-α和IL-6的表达（P < 0.05），推测以上10个成分可能为复方鱼腥草合剂的关键药效物质基础。

目前临床尚无治疗COVID-19的特效药物。传统天然药物小檗碱（BBR）具有中度抗SARS-CoV-2假病毒活性。本研究以BBR为先导物，设计合成了18个全新骨架N-环化BBR衍生物，评价了它们体外抗SARS-CoV-2假病毒活性。构效关系表明9-位引入适当的杂环利于活性提高。其中，化合物3m的EC₅₀为1.61 μmol·L^-1，SI为22.2，明显优于BBR。时间添加（time-of-addition）实验结果显示，化合物3m作用于病毒入侵宿主细胞的多个阶段，包括进入、吸附及膜融合过程，提示此类化合物通过多靶点的协同作用抑制SARS-CoV-2。研究结果为寻找抗SARS-CoV-2候选物提供了一类全新的先导物。

长梗绞股蓝（Gynostemma longipes C.Y.Wu）以达玛烷型三萜皂苷为主要活性成分。本文综合使用MCI柱色谱、硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱等分离技术，从长梗绞股蓝中的大极性部位分离得到4个三萜皂苷类单体化合物，并主要利用MS和NMR等波谱学技术鉴定它们的结构为：（20S）-3β，20，21-三羟基达玛-19-醛基-24-烯-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）]-[β-D-吡喃木糖基（1→3）]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-21-O-β-D-吡喃葡萄糖基（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、（20S）-3β，20，21-三羟基达玛-19-醛基24-烯-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）]-[β-D-吡喃木糖基-（1→3）]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-21-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、（20S）-3β，19，20，21-四羟基达玛-24-烯-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）]-[β-D-吡喃木糖基（1→3）]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-21-O-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→6）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、（20S）-3β，20，21-三羟基达玛-24-烯-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）][β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃葡萄糖基}-21-O-[β-D-吡喃葡萄糖基（1→6）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）。化合物1~4是四个新达玛烷型三萜皂苷，除了C-3位含有3个糖基外，还在C-21位均含有2个糖基。

聚合物杂质研究一直是头孢菌素类抗生素质量控制中的重要内容。7位侧链中不含活性基团氨基的头孢菌素的聚合物研究还未有报道，因此本研究以临床上广泛采用的头孢唑林钠为例，采用柱切换液相色谱-高分辨质谱联用法分析头孢唑林钠原料及制剂中的聚合物，结果检测到2个聚合物杂质峰，并对聚合物的可能结构进行了推测。通过二维液相色谱法，将葡聚糖凝胶色谱法和高效凝胶色谱法中的色谱峰切入到头孢唑林钠药典方法的有关物质方法（反相高效液相色谱法）中，证明反相高效液相色谱法比葡聚糖凝胶色谱法和高效凝胶色谱法更适于聚合物检测。最终采用药典有关物质方法建立了头孢唑林钠原料和制剂的聚合物检测方法，并进行了方法学验证。

通过硫酸卡那霉素注射液中主药卡那霉素和功能性辅料枸橼酸钠的相容性研究，对制剂处方进行评价，探讨处方中枸橼酸钠添加浓度和该处方条件下灭菌工艺的合理性。采用经优化的高效液相色谱-蒸发光散射检测系统（HPLC-ELSD）分别测定原研药和国产制剂中枸橼酸钠的含量和杂质谱；采用新建的柱后衍生化-HPLC-荧光检测系统（FLD）分析某些特定杂质的量和枸橼酸钠含量的相关性；结合特定杂质的质谱（MS）裂解规律，探讨处方及灭菌工艺的合理性。结果显示：国产注射液中枸橼酸钠的含量是原研药的近40倍；通过系列加速对比实验（121℃），提示某些未知杂质和枸橼酸钠的含量相关；结合其质谱裂解规律，推测上述杂质主要为卡那霉素和枸橼酸钠的反应产物。因此，国内药品生产企业在处方筛选时应关注处方的合理性，并结合主药和辅料的理化特性选择适当的灭菌工艺，保证临床用药的安全性。同时，对于主药结构中含有伯氨基的药物，在处方设计中应关注辅料的相容性问题。

通过建立大鼠在体单向肠灌流模型，采用UPLC-TQ-MS测定不同肠段灌流液中理中汤提取物5种主要活性成分（甘草酸、异甘草素、6-姜酚、人参皂苷Rb1和白术内酯-Ⅰ）的含量。动物福利和实验过程均遵循南京中医药大学动物伦理委员会的规定。以吸收速率常数（K_a）和有效渗透系数（P_eff）为评价指标，分析以上5种成分的肠吸收特点。结果显示，甘草酸、异甘草素和6-姜酚的最佳吸收部位分别为回肠、结肠和十二指肠，差异均具有统计学意义（P < 0.05）；人参皂苷Rb1和白术内酯-Ⅰ在不同肠段的吸收参数无显著性差异（P>0.05），提示这两种活性成分在大鼠全肠段均有吸收，不受吸收部位影响。且5种指标成分在全肠段吸收均较好（P_eff>1.0×10^-3 cm·min^-1），结果提示：理中汤适宜于制备成缓控释、肠溶制剂等。

以十一酸睾酮为模型药物，制备Ⅲ型脂质制剂，利用体外脂解模型评价各处方的体外脂解速率及脂解程度，并以光学显微镜和电导率等手段进一步研究其消化机制。结果表明，在以蓖麻油为油相、Transcutol HP为助表面活性剂的十一酸睾酮Ⅲ型脂质制剂中，随着油相比例增加，脂解速率和脂解程度增加；表面活性剂比例过高，脂解过程中可观察到液晶相、脂解速率和脂解程度下降。含有不同表面活性剂的ⅢB型脂质制剂脂解速率排序为Labrasol>Tween 80>Cremophor EL，而ⅢA型的排序在快速消化期和慢速消化期有所不同，但两者脂解程度排序均为Cremophor EL>Tween 80>Labrasol。研究结果提示，处方含油量、表面活性剂比例及其结构对Ⅲ型脂质制剂体外脂解速率和脂解程度均具有较大影响且相互交织，进行处方筛选时需综合考虑各方面因素对制剂体内消化的影响。

本研究采用薄膜分散法制备负载蒿甲醚（artemether，ARM）的甘氨胆酸钠（sodium glycocholate，SGC）/大豆磷脂（soybean lecithin，SL）混合胶束（mixed micelles，MM），考察了分散介质、SL质量比及辅料总浓度对ARM增溶的影响，并对MM的稳定性进行评价。结果表明，以磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4，0.05 mol·L^-1）为分散介质制备的SGC-SL-MM粒径分布均一[平均粒径3.58 ±0.14 nm，多分散系数（PDI）0.16 ±0.04]，随着辅料总浓度从1.0%增加到30.0%（w/w），ARM的溶解度从0.64 ±0.04 mg·mL^-1显著增加到13.7 ±0.13 mg·mL^-1。阿伦尼乌斯（Arrhenius）参数及储存稳定性计算结果表明，无论37℃还是60℃，ARM在MM中的降解速率常数均小于乙腈-PBS（pH 7.4）溶液，呈现更好的稳定性。实验制备的ARM-MM在25℃储存2个月后溶液外观澄清，ARM含量降解小于7.0%。综上所述，本实验制备的SGC-SL-MM不仅可以提高ARM在水溶液中的溶解度，而且在低温时能提高其在水溶液中的化学稳定性。

甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）注射给药的半衰期短，毒副作用大。为了改善MTX注射给药的缺陷，本研究将MTX装载在交联环糊精金属有机骨架（crosslinked cyclodextrin metal-organic framework，COF）中，得到载药微粒MTX@COF，采用溶剂蒸发法将阳离子脂质材料（2，3-二油酰基-丙基）-三甲胺[（2，3-dioleyl-propyl）-trimethylamine，DOTAP]包裹在MTX@COF表面，MTX@COF@DOTAP的微粒形态没有显著改变，但具有不同的表面电荷特征。以水和磷酸盐缓冲液（pH 7.4）为释放介质考察缓释微粒的体外释放，并通过大鼠药代动力学评价其体内释放特征。体外释放结果显示，在水中MTX、MTX@COF和MTX@COF@DOTAP于6 h的累积释放量分别为92.70%、36.31%和18.19%；在磷酸盐缓冲液中MTX、MTX@COF和MTX@COF@DOTAP于4 h的累积释放量分别为90.82%、79.37%和58.30%，表明MTX@COF可显著延缓MTX的释放，经DOTAP修饰后的MTX@COF可进一步延缓MTX的释放。大鼠药代动力学研究结果显示，皮下注射MTX@COF@DOTAP组与MTX@COF组及MTX组相比，其平均滞留时间MRT_（0-t）和达峰时间T_max明显延长，且MTX@COF@DOTAP组的药时曲线下面积[AUC_（0-t）]是MTX组的1.8倍。本研究制备的MTX@COF@DOTAP微粒经皮下注射给药具有一定的缓释效果，并提高了MTX的生物利用度，为MTX的新剂型开发提供一个新的思路。

阿魏酸5-羟化酶（ferulate 5-hydroxylase，F5H）是苯丙烷代谢途径上的关键酶。本课题组前期转录组测序研究显示F5H基因在甘草酸生物合成过程中起负调控作用，因此本文拟克隆该基因，并从基因过表达和沉默两个方面对这一调控作用进行深入研究。本文克隆得到甘草F5H基因（GenBank注册号：MK882511）；以pCAMBIA1305.1为载体骨架，以Spe Ⅰ和Bgl Ⅱ为酶切位点，利用基因融合法构建过表达载体pCA-F5H；根据F5H第一外显子设计sgRNA序列，以pHSE401为载体骨架，以Bsa Ⅰ为酶切位点，构建CRISPR/Cas9基因编辑载体pHSE-F5H；使用电转法将pCA-F5H和pHSE-F5H分别转入发根农杆菌ATCC15834感受态细胞；以甘草胚轴为外植体材料，利用发根农杆菌介导法分别诱导F5H过表达及沉默甘草毛状根系。同时，构建野生型甘草毛状根以及携带空质粒的阴性对照甘草毛状根。利用UPLC法测定各甘草毛状根系中甘草酸的含量，结果显示F5H基因沉默甘草毛状根体系中甘草酸含量显著高于野生型和阴性对照组，而过表达F5H基因甘草毛状根系中甘草酸含量则显著低于野生型和阴性对照组。本文通过逆向遗传学策略，从基因过表达和沉默两个方面证实了F5H基因对甘草酸生物合成的负调控作用，为进一步构建甘草酸次生代谢分子调控网络奠定了基础。

新药研发过程中候选药物的体外代谢研究十分重要，肝微粒体等传统模型存在诸多不足，而重组人源药物代谢酶系体外模型因其来源便捷、活性稳定且成本较低等优势被认为是重要、有效的手段而获得广泛使用。本研究从人源肝脏cDNA中克隆得到6条人源葡萄糖醛酸转移酶（UDP-glucuronosyltransferases，UGTs）基因（UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9和2B7），并分别在酿酒酵母和杆状病毒侵染的昆虫细胞中进行外源表达。UGT1A1、1A3、1A6和1A9在酵母中成功表达，对多种不同结构类型的底物表现出葡萄糖醛酸化活性，但活性较低。以昆虫粉纹夜蛾Trichopolusia ni胚胎细胞系BTI-TN5B1-4（High Five）为宿主时，6条UGT基因均能成功表达，且活性明显高于前者。昆虫细胞表达的重组人源UGTs均能催化其特异性底物进行葡萄糖醛酸化，并首次实现了葡萄糖醛酸化产物的毫克级规模制备，产率为13%~66%，产物结构均经MS、¹H NMR和¹³C NMR等波谱技术确定。上述结果表明，本研究构建的重组人源UGT酿酒酵母与昆虫细胞表达系统可用于新药研发早期阶段的体外代谢评价，同时为药物葡萄糖醛酸化代谢产物的合成提供了新方法。

本文结合《化学药品仿制药口服固体制剂质量和疗效一致性评价申报资料要求（试行）》等相关技术要求，概括并拟定了口服固体仿制药体外一致性评价的决策树，论述了不同情况下体外评价考察项目的差异和常见问题，重点分析了非常规研究项目的技术要求和关注问题，并提出相应的处理建议，旨在为后续口服固体仿制药一致性评价的研究提供更多的参考。