脂滴（lipid droplets，LDs）是广泛存在的动态细胞器，它们在所有真核细胞和部分原核细胞中储存和供应脂质，用于能量代谢与脂膜合成等。越来越多的证据表明，丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）由于自身缺乏脂质生物合成途径而发生了进化，使其能够利用宿主脂质代谢途径，建立适宜自身增殖的环境而获得必要的成分，最终促进病毒组装和运输。本文主要对HCV生活周期与脂滴生物合成及代谢之间的关联做一综述，以期为HCV引起的相关疾病及其治疗的研究提供线索。

铁死亡是一种新型的细胞程序性死亡方式，其形态、生化特征及作用机制均不同于凋亡、自噬、坏死、焦亡等已知的细胞死亡形式。铁死亡的调控机制主要涉及铁代谢、氨基酸代谢及脂质代谢。已有研究发现铁死亡在神经、肿瘤、缺血再灌注损伤等疾病的发生发展中起关键作用。帕金森病（Parkinson's disease，PD）是中枢神经系统最常见的神经退行性疾病之一，其病因及发病机制尚未阐明。近期研究发现，PD患者中脑处具有高铁、低还原型谷胱甘肽及高过氧化脂质等特点，提示PD发病机制与铁死亡密切相关。在PD中，一些铁死亡抑制剂表现出缓解疾病的能力，其中一种铁离子螯合剂已进入临床试验阶段。本文系统总结铁死亡的主要调控机制并梳理其与PD的联系，为治疗PD提供新的潜在靶点。

肿瘤代谢重编程是肿瘤发生、发展过程中最关键的特征之一。许多癌症表现出对特定氨基酸的需求增加，或依赖于外源供应，或调节氨基酸代谢途径，导致相应氨基酸水平的改变以满足肿瘤发生发展的需要。因此，如能有效调节肿瘤依赖性氨基酸的水平，可在细胞代谢的角度发展全新的肿瘤治疗策略。目前本领域已经取得了令人瞩目的进展，本文概述了与肿瘤发生发展密切相关的氨基酸代谢途径，并对相应的调控机制及活性分子进行总结，最后就本领域的发展方向进行讨论与展望。

吡咯里西啶生物碱（pyrrolizidine alkaloids，PAs）是植物中较常见的一类肝毒性成分。紫草为我国常用中药之一，因具有抗炎、促进伤口愈合等作用而广泛应用于临床，但研究表明含有PAs。这类成分在体内大量暴露及代谢活化可致肝窦阻塞综合征，故被认为是许多含PAs中草药引起肝损伤作用的潜在物质基础。尽管有关紫草的临床毒害未见报道，但PAs的存在无疑为其安全用药埋下了隐患，揭示和控制其毒性风险已成为紫草研究的一个重要方向。本文拟从吡咯里西啶类成分及其代谢毒性两个方面对紫草及其相关品种的安全性研究进展及存在的主要问题做一概述，并对进一步的研究提出建议，以期为全面系统评价紫草的用药风险和指导其临床合理用药提供参考。

共价酪氨酸激酶抑制剂通过与靶蛋白中的半胱氨酸形成共价键，抑制肿瘤细胞的信号通路转导，具有高效能和持续时间长、克服耐药性的优点。本文综述了已经上市的共价酪氨酸激酶抑制剂的代谢和药动学。目前FDA批准上市的共价酪氨酸激酶抑制剂有阿法替尼、来那替尼、达克替尼、奥希替尼、依鲁替尼和阿可替尼。吡咯替尼是由中国自主研发，最近获批上市的抗肿瘤新药。共价酪氨酸激酶抑制剂能够与血浆蛋白，尤其是人血清白蛋白发生共价结合，从而影响这类药物的药动学。

作为一类新型的递送载体，多肽具有丰富的生物活性、较低的免疫原性及良好的生物相容性，近年来利用多肽递送药物或基因的研究得到广泛关注。其中，具有酸敏感性的多肽，在肿瘤微环境或溶酶体的弱酸性条件下可以产生二级结构的改变。因此，将酸敏感多肽作为递送载体，或将其修饰在其他载体上，负载药物后形成的纳米组装体可以在肿瘤组织中定点释放药物，促进药物的细胞内化，增强药物的治疗效果。目前发现酸敏感多肽种类较多，多肽的氨基酸侧链、极性氨基酸数量、氨基酸序列及肽链二级结构都可以影响其酸敏感性。本文列举了近年来文献中报道的酸敏感多肽类型，分析了多肽的结构与其酸敏感性之间的关系，并介绍了酸敏感多肽及其修饰载体在药物递送方面的作用机制和应用，为更好地开发和利用酸敏感多肽，实现药物的高效递送提供参考。

出血转化（hemorrhagic transformation，HT）是缺血性脑卒中的常见严重并发症，尤其是在溶栓治疗后，显著增加卒中的致残率及死亡率。组织纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator，t-PA）是被美国FDA批准的唯一用于脑卒中的溶栓药物，由于治疗时间窗窄和易引发出血转化，限制了其临床应用。目前HT的病理机制和治疗靶点尚不清楚，临床无有效防治药物。匹诺塞林是一种天然黄酮类化合物，对脑卒中具有显著的治疗作用，目前已经作为Ⅰ类抗脑缺血新药进入Ⅱ期临床试验。匹诺塞林对脑卒中后HT的发生尚未有研究，因此，本研究考察了匹诺塞林对t-PA溶栓治疗所致出血转化的作用。大鼠缺血6 h后，尾静脉静滴t-PA诱导出血，匹诺塞林（5、10和20 mg·kg^-1）于t-PA前5 min尾静脉注射，缺血24 h后检测梗死体积、神经功能及血红蛋白含量，Evans blue渗漏实验评价血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）完整性。动物实验遵循北京协和医学院动物伦理委员会规定。结果显示，缺血6 h后给予t-PA显著加重脑损伤，梗死体积和脑含水量分别达到39%和83.4%，促进HT的发生。预先给予匹诺塞林能够使梗死体积和脑含水量分别降至28.5%和80.3%，改善神经功能。此外，联合应用匹诺塞林能使脑组织血红蛋白含量及Evans blue含量分别降低50%和40%，表明匹诺塞林可以保护BBB完整性且降低HT的发生。其中，10 mg·kg^-1剂量最佳。这些结果表明，匹诺塞林和t-PA联用能对抗脑缺血，抑制HT的发生。因此，匹诺塞林可能是治疗t-PA溶栓所致HT的潜在药物。

SI-4650是本实验室新近发现的一种新型精胺氧化酶（spermine oxidase，SMO）小分子抑制剂，本研究的目的是进一步探究SI-4650对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移能力的影响及其分子机制。研究利用化学发光法和高效液相色谱法分析SI-4650对143B细胞中SMO活性的影响；DIOC6（3）探针染色/流式细胞术分析细胞中活性氧的堆积水平；MTT法和流式细胞术检测SI-4650对细胞增殖和周期的影响；Transwell法和Western blot分析细胞迁移相关蛋白的表达；PI/FITC-Annexin V双染、倒置荧光显微镜观察和Western blot法分析细胞凋亡和自噬。结果显示，SI-4650可显著性抑制人骨肉瘤143B细胞内SMO酶活性，高效抑制143B细胞的增殖和迁移能力，并引起S期周期阻滞，其机制可能与干扰多胺代谢、活化线粒体介导的细胞凋亡途径和引起自噬性死亡相关。上述研究结果提示，SI-4650具有用于人骨肉瘤临床治疗的潜在价值。

肿瘤线粒体结构和功能的改变，可使肿瘤细胞在其缺氧和酸性的微环境中存活并增殖。然而，正常线粒体对肿瘤发生发展的作用尚不清楚。本研究将从安乐死（颈椎快速脱臼处死）后的小鼠肝脏中分离的线粒体静脉注射到荷黑色素瘤小鼠体内（本动物实验经西南大学实验动物伦理审查委员会批准），结果证明外源线粒体可极显著抑制肿瘤细胞的生长，特别是青年小鼠肝脏中分离的线粒体比老年小鼠中分离的线粒体更具抗黑色素瘤效能，肿瘤平均体积从1.35 cm³显著降到0.34 cm³，并且肿瘤平均质量从0.63 g显著降到0.22 g。其抑瘤的机制可能与外源线粒体在黑色素瘤细胞内，诱导线粒体自噬和细胞坏死有关。由于线粒体治疗（mitotherapy）可促进体细胞存活并已应用于临床，因此本研究证明的正常外源线粒体的抗肿瘤作用，有望将外源线粒体治疗作为一种抗肿瘤的治疗方法，还能使人们更深入理解外源线粒体在抗肿瘤中的应用前景。

IMB5046是新发现的硝基苯甲酸类微管抑制剂，本文报道了IMB5046的合成过程及其体外抗血管生成活性。本研究以2-（4-吗啉基）-5-硝基苯甲酸与4-甲硫基苄醇通过两步反应生成IMB5046，终产物结构经¹H NMR和HR-MS确证。MTT法检测化合物对细胞增殖的影响；荧光法检测化合物对细胞骨架的影响；流式细胞术检测IMB5046对细胞周期的影响；划痕及Transwell实验检测细胞的运动能力；内皮小管形成实验检测IMB5046对血管生成的影响。结果显示IMB5046可诱导血管内皮细胞的收缩及微管骨架的解聚，抑制内皮细胞及肿瘤细胞的增殖。两种原料药对细胞形态、微管结构及细胞生长均没有明显影响。IMB5046将内皮细胞阻滞于G₂/M期。较低细胞毒浓度的IMB5046即可显著抑制内皮细胞的运动能力。IMB5046可抑制内皮小管的形成，使内皮小管数及节点数显著减少。以上结果表明，IMB5046有希望成为一种具有抗血管生成活性的靶向微管药物。

本研究基于"靶点+活性"双重导向快速发现技术筛选苦蘵中靶向Hsp90蛋白杀伤胰腺癌细胞的活性单体。通过将体外抗肿瘤活性筛选技术、双萤光素酶报告基因技术与多元色谱分离技术相耦合，从中药苦蘵中筛选靶向Hsp90的活性单体。研究化合物抗胰腺癌细胞BXPC-3生长活性，初步探讨化合物抑制Hsp90分子机制。结果显示从苦蘵中分离得到醉茄内酯类化合物withanolide E（WE）与4β-hydroxywithanolide E（HWE）。MTT结果显示，WE与HWE处理BXPC-3细胞48 h的半数抑制率（IC₅₀）分别为0.71±0.03和1.23±0.10 μmol·L^-1；萤光素酶报告基因实验结果显示，WE与HWE可使细胞热休克元件活性增强12.5±3.4倍与28.1±3.4倍；两者均呈现量效与时效关系。分子机制研究提示，与DMSO组相比5 μmol·L^-1 WE和HWE分别处理BXPC-3细胞48 h可诱导Hsp90二聚体蛋白表达上调6.5±1.3和11.8±2.0倍，Hsp90客户蛋白Akt表达下调至DMSO组的21.7%±2.8%和9.8%±1.4%；shRNA干扰Hsp90基因表达可阻断其抑制Akt表达与杀伤肿瘤细胞的作用。采用"靶点+活性"双重导向快速发现技术可从苦蘵中筛选得到靶向Hsp90蛋白杀伤胰腺癌细胞的活性单体WE与HWE；其分子机制可能与诱导胰腺癌细胞形成无活性Hsp90二聚体，进而抑制Hsp90客户蛋白Akt表达有关。

建立"药效成分-疾病靶标-生物学通路"之间的关系，探究固肠止泻丸治疗肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）的作用机制。首先，经ADME参数过滤与化学空间主成分分析从固肠止泻丸中筛选出96个活性成分，利用已上市药物在PharmMapper中进行抗IBS疾病靶标预测；其次，采用AutoDock Vina进行活性成分与预测疾病靶标的分子对接验证，建立"药效分子-靶标蛋白"对应关系；然后，利用Cytoscape软件构建"药效成分-疾病靶标"网络模型；最终，借助CluoGO插件将靶标元素映射到KEGG生物学通路中，进一步在通路水平上阐释关键靶标与固肠止泻丸治疗IBS作用机制的潜在联系。预测结果表明，打分靠前的11种关键药效分子大部分属于异喹啉类生物碱，分别主要作用于炎症和痛症两类靶标，对IBS均有不同程度抗炎镇痛的疗效。并且发现关键靶标39个，其中筛选出核心靶标TPH1、TNF-α、IL-6、IFN-γ、MAO-A和IL-10，将靶标映射到KEGG通路29条，其中5-HT信号通路的P值最小，因此推断其药效分子可能主要通过调节5-HT信号合成或转运通路发挥药效作用，并主要作用于6个核心靶标。本研究为进一步开展固肠止泻丸治疗IBS作用机制的研究提供了新思路和新方法。

近年来，因误服菊三七所导致的肝窦阻塞综合征（hepatic sinusoidal obstruction syndrome，HSOS）引起了国内外的广泛关注。本文研究中药复方胆宁片对菊三七所致HSOS病理症状的缓解作用，并探讨其作用机制。实验方案经上海中医药大学动物实验伦理委员会批准，所有程序均严格按照动物使用和护理的伦理原则进行。连续灌胃菊三七醇提物（1 g·kg^-1）40天造成小鼠HSOS损伤，并设胆宁片保护组（每日灌胃胆宁片3 g·kg^-1和菊三七醇提物1 g·kg^-1）和空白对照组。结果表明，胆宁片对菊三七所致HSOS有明显保护作用。胆宁片保护组血清转氨酶活性及总胆红素和胆汁酸含量均显著下降，中央静脉内皮损伤、内皮出血、肝窦出血及内皮纤维化等典型HSOS病变均有所缓解。进一步检测了纤维化相关指标，发现与HSOS小鼠比较，胆宁片保护组中肝脏羟脯氨酸含量、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、金属基质蛋白酶2和9的基因表达水平均显著降低；胆宁片保护组中肝脏磷酸化Smad3（p-Smad3）的表达及血清转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）含量亦显著低于HSOS损伤组。此外，胆宁片保护组肝脏肿瘤坏死因子-α和白介素-1β的基因表达水平也有所降低。结果表明，胆宁片对菊三七所致HSOS的保护作用与抑制TGF-β/p-Smad3信号通路及炎症信号通路的激活有关，为临床上应用胆宁片治疗HSOS提供了理论依据。

筛选瓜蒌提取物抗血栓的药效成分群并进行药效学验证与作用机制分析。建立瓜蒌提取物的HPLC指纹图谱，以阿司匹林（0.01 g·kg^-1）为阳性对照组，测定瓜蒌提取物（0.09、0.45和0.9 g·kg^-1）抗大鼠血栓药效学指标（本实验所用动物经皖南医学院医学伦理委员会批准同意），采用灰色关联度法研究瓜蒌提取物抗血栓的谱效关系并筛选药效成分群。按药效成分群中各成分的含量制备单体化合物混合溶液（0.006、0.03和0.06 g·kg^-1）并进行药效学和作用机制研究，以验证谱效关系结果的正确性。瓜蒌提取物22个成分与抗血栓药效间的关联度呈量效关系且关联度不同。胞嘧啶、尿嘧啶、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟苷和腺苷8个成分是瓜蒌提取物抗血栓的主要药效成分群，这些成分比例为3：12：10：5：2：8：13：14。药效成分群各组与模型组比较均可有效降低血栓干重（P < 0.01或P < 0.05），但与瓜蒌提取物组（0.45 g·kg^-1）比较无统计学意义。与模型组比较，药效成分群0.06 g·kg^-1组和0.03 g·kg^-1组均可有效降低TXB₂含量（P < 0.01或P < 0.05），药效成分群各组均可升高6-keto-PGF_1α含量（P < 0.01），改善TXB₂/6-keto-PGF_1α趋于正常且呈量效关系，此效果优于瓜蒌提取物组（0.45 g·kg^-1）（P < 0.01）。药效成分群有较好的抗血栓作用，其作用机制为抑制血小板聚集及改善血管内皮功能。

采用硅胶、Sephadex LH-20及半制备液相等多种色谱方法从榅桲种子中分离得到11个化合物，利用UV、1D、2D NMR、HR-ESI-MS等波谱技术分别鉴定为5，7-二羟基-2-正二十五烷基色烯-4-酮（1）、乌苏酸（2）、委陵菜酸（3）、齐墩果酸（4）、β-胡萝卜苷（5）、β-谷甾醇（6）、苦杏仁苷（7）、芦丁（8）、山柰酚（9）、槲皮素（10）和异槲皮素（11）。其中化合物1为新化合物，3和5为首次从榅桲属中分离得到，其他成分均为首次从榅桲籽中分离得到。用体外PTP1B抑制活性实验，化合物1~4和8对PTP1B有抑制活性，其IC₅₀值分别为0.465、16.14、28.96、23.78和11.70 μmol·L^-1。

本文基于procaspase-3激活剂1541系列的香豆素骨架结构，结合前期研究基础，设计合成了12个含苯并噻唑/苯基片段的香豆素衍生物，其结构经¹H NMR、¹³C NMR和ESI-MS/HR-MS确证，以procaspase-3高表达的人组织细胞淋巴瘤细胞株（U937）和procaspase-3低表达的人乳腺癌细胞株（MCF-7）为测试细胞株，采用CCK-8法对目标化合物进行了体外抗肿瘤活性测试，初步验证目标化合物的靶向性，排除脱靶效应。结果表明，所设计的含苯并噻唑片段的香豆素衍生物对procaspase-3高表达的U937表现出较好的抑制作用和选择性，而对procaspase-3低表达的MCF-7无明显抑制作用。Caspase-3激活活性测试进一步表明，含苯并噻唑片段的香豆素衍生物表现出显著的caspase-3激活活性，其中化合物5f活性最强，激活率为93%。流式细胞术进一步验证了化合物5f能通过诱导细胞凋亡的方式抑制肿瘤细胞增殖。体外procaspase-3酶活性实验表明，化合物5f表现出较强的procaspase-3激活作用。

本文建立了一种灵敏、高效的LC-MS/MS分析方法测定家兔血浆中二氟可龙的浓度，并应用于戊酸二氟可龙乳膏经皮给药后家兔体内活性代谢物二氟可龙的血浆药动学研究。以乙氧苯柳胺为内标，血浆样品经过乙酸乙酯提取后，通过Zorbax Eclipse XDB-C18（50 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱分离，以50%乙腈-甲醇溶液和5 mmol·L^-1甲酸铵-0.1%甲酸-5%甲醇水溶液作为流动相进行梯度洗脱；在电喷雾离子化源（ESI）正离子检测条件下，采用多反应离子监测模式（MRM）进行定量分析，检测的离子对分别为[M+H]⁺ m/z 395.2→m/z 355.2（二氟可龙），[M+H]⁺ m/z 258.1→m/z 120.9（内标）。二氟可龙在0.01~10 ng·mL^-1内线性良好，低、中、高浓度质控样品的准确度平均值在92.7%~97.0%之间，批内、批间精密度分别为4.33%~7.40%和2.27%~7.63%之间。采用该分析方法测定戊酸二氟可龙乳膏经皮给药0.01 g·cm^-2后兔血浆中活性代谢物二氟可龙的浓度，计算得出的主要药代学参数t_max、C_max、AUC_{0-72 h}、t_1/2分别为（6.33±1.21）h、（0.168±0.080 0）ng·mL^-1、（3.15±0.834）h·ng·mL^-1、（32.0±17.4）h。本研究中动物实验方案已获得天津药物研究院新药评价有限公司实验动物管理与使用委员会的批准。

本文旨在外部验证前期建立的0~10岁中国儿童万古霉素群体药动学（population pharmacokinetics，PPK）模型。本研究经广西医科大学第一附属医院伦理委员会批准，通过回顾性收集2013年8月至2017年5月期间在广西医科大学第一附属医院静脉应用万古霉素治疗的≤ 10岁的患者，根据前期建立的儿童万古霉素PPK模型，运用贝叶斯分析法求出给定剂量下的万古霉素浓度个体预测值，与实测值比较，评估模型的预测性能。结果共纳入191例患者371个血药浓度值。万古霉素个体预测值与实测值的平均预测误差（ME）、平均相对预测误差（ME%）、平均绝对误差（MAE）和均方根误差（RMSE）分别为-0.50 mg·L^-1、6.03%、1.84 mg·L^-1和2.86 mg·L^-1；个体预测值与实测值的相关系数为0.95；相对预测误差在±30%以内的血药浓度值约占82.75%；拟合优度（goodness-of-fit）、直观预测检验法（VPC）和Bland-Altman一致性评价显示最终模型稳定，预测结果可靠。结果表明前期建立的0~10岁儿童万古霉素PPK模型具有较高的预测性能，可用于万古霉素初始治疗方案的制定和药物暴露程度的预测。

研究黄芩花提取物（Scutellaria flower extract，SFE）体外抗氧化能力与对D-半乳糖致衰老大鼠的保护作用及机制。以羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力为指标评价SFE体外抗氧化能力。采用D-半乳糖致衰老大鼠模型，造模的同时灌胃给予不同剂量的SFE。观察大鼠自主活动能力并通过代谢组学技术结合多元统计方法对大鼠血清进行分析，探讨SFE抗衰老作用及机制，并对其主要代谢通路谷氨酰胺和谷氨酸代谢进行定量验证。动物实验所有程序均获得山西大学伦理委员会批准。结果表明，SFE具有体外抗氧化能力，能够改善衰老大鼠行为。通过代谢组学技术找到与衰老相关的9个潜在生物标志物，共涉及7条代谢通路，给予高剂量SFE干预后生物标志物均出现回调。

一氧化碳（carbon monoxide，CO）是机体内一种重要的化学气体信使分子，具有明确的抗炎活性，但作为一种气态的活性物质，如何安全、有效地递送至病灶发挥疗效有待研究。基于一氧化碳与红细胞（red blood cell，RBC）主要成分血红蛋白的天然亲和性，本文拟构建一种一氧化碳-红细胞（CO-RBC）复合体系，以脓毒症肺损伤为模型，一氧化碳释放分子（carbon monoxide releasing molecule-2，CORM-2）为对照，研究其对模型小鼠肺损伤的治疗作用。以CO-RBC中CO的释放、稳定性、安全性及体内肺靶向性对CO-RBC复合体系进行表征；以细胞间黏附分子（ICAM-1）、肺表面活性蛋白-A（SP-A）的表达评价动物模型；以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）炎症因子的分泌、小鼠存活时间及肺组织病理变化评价CO-RBC复合体系对脓毒症肺损伤的治疗作用。实验设计获得西南大学实验动物伦理审查委员会批准，符合动物实验福利伦理准则。结果表明：CO-RBC复合体系在氮气保护下储存，稳定性强，48 h内基本无释放，而在近生理条件下时，12 h内释放约70%，解决了CORM-2中CO突释的问题，同时对小鼠无毒性；体内荧光成像显示CO-RBC复合体系能在肺部有效聚集，具有一定的肺靶向作用；给药治疗后，CO-RBC组相较于其他组，TNF-α和IL-6的分泌明显降低，肺间质水肿程度减轻，白细胞浸润减少，存活率显著提高。因此，本研究制备的CO-RBC复合体系相比CORM-2对脓毒症小鼠肺部炎症反应有显著的抑制作用，有望为脓毒症的治疗提供新思路。

本研究旨在构建不同链长的聚磺酸甜菜碱甲基丙烯酸酯[poly（sulfobetaine methacrylate），pSBMA]修饰的纳米粒（pSBMAn NPs），以探究两性离子聚合物链长对纳米粒穿黏液及细胞摄取能力的影响。结合己内酯的开环聚合反应和原子转移自由基聚合反应（atom transfer radical polymerization，ATRP）合成不同链长的两嵌段聚合物——聚己内酯-聚磺酸甜菜碱甲基丙烯酸酯共聚物[poly（ε-caprolactone）-block-poly（sulfobetaine methacrylate），PCL-pSBMA]，并通过纳米沉淀法制备相应的纳米粒。采用黏蛋白吸附实验和Transwel小室实验考察纳米粒的穿黏液能力。以人源结肠癌Caco-2细胞和可分泌黏液的HT-MTX-E12细胞为模型，考察链长对纳米粒摄取及穿黏液能力的影响。研究结果表明：制得的pSBMAn NPs粒径相近，均约为100 nm，电位约为-7 mV。短链pSBMA修饰的纳米粒（pSBMA₁₀ NPs）的表观渗透系数（apparent permeability coefficient，P_app）仅是长链pSBMA纳米粒（pSBMA₈₀ NPs）的42.83%，但细胞摄取是pSBMA₈₀ NPs的2.44倍。有黏液存在时，pSBMAn NPs的摄取均降低，但pSBMA₁₀ NPs的细胞摄取能力仍最强。体内实验结果表明，pSBMA₂₀ NPs的口服生物利用度高于pSBMA₁₀ NPs（动物实验根据四川大学关于实验动物的饲养和使用准则进行，并得到四川大学实验动物伦理委员会批准）。本文为两性离子纳米粒的口服研究提供了参考。

美乐托宁（melatonin，MLT）又称褪黑素，是人体内源性物质，大剂量给药时有抗肿瘤作用，但口服生物利用度低，体内半衰期短，成药性差。本文制备了美乐托宁脂质体粉雾剂（liposomal melatonin dry powder inhalers，LMD），经肺部给药治疗大鼠原发性肺癌。用乙醇注入法制备美乐托宁脂质体（liposomal melatonin，LM），包封率为98.9%，加入甘露醇冻干得到LMD，扫描电镜显示为类球形颗粒，加水复溶后粒径为65.15 nm，zeta电位为-14.2 mV。LMD的空气动力学粒径为6.73 μm，微细粒子比例（fine particle fraction，FPF < 8.06 μm）为22.2%，适合肺部给药。在相同药物浓度时，LMD对A549肺癌细胞抑制作用显著高于MLT原料和吉西他滨，因此脂质体增强了MLT药效。大剂量LMD不影响人正常支气管细胞（BEAS-2B）生长，安全性好。用3-甲基胆蒽及N，N-二甲基亚硝胺经气管喷入大鼠肺中，45天后得到原发性肺癌模型（动物实验经单位伦理委员会批准且实验均按照相关指导原则和规定进行）。将MLT、吉西他滨、LMD经气管喷入肺癌大鼠肺中，与模型组比较，治疗组均呈现明显少的肿瘤结节和炎性细胞数量，其中LMD的药效最强。治疗组NF-κB p65减少，以及Tunel检测表明细胞凋亡；丙二醛水平降低，其中LMD组的效果最强，与其他组有显著性差异。美乐托宁脂质体粉雾剂直接将药物递送至肺部肿瘤，是一种有前景的治疗肺癌的肺吸入给药剂型。

双硫仑（disulfiram，DSF）是一种传统的戒酒药物，最近研究发现其对多种癌症类型均表现出强烈的生长抑制作用，但是水溶性差、在胃肠中不稳定及血浆半衰期短的缺点限制了其药效的发挥。本研究拟将DSF制备成纳米混悬剂（DSF-NSps）来解决此问题。采用超声条件下的反溶剂沉淀法制备DSF-NSps，以纳米粒的粒径、多分散性指数（PDI）、zeta电位和放置稳定性等为指标筛选稳定剂。采用动态光散射法测定粒径、PDI和zeta电位，透射电镜观察纳米粒形态；通过DSF-NSps在不同生理介质中的粒径变化来考察DSF-NSps在介质中稳定性。HPLC测定载药量，用透析的方法测定体外药物释放，MTT比色法测定纳米粒和游离双硫仑的体外细胞毒性，进而用4T1荷瘤小鼠研究纳米粒的体内抗肿瘤药效。所有动物实验符合动物实验伦理学标准，并获得中国医学科学院药用植物研究所实验动物伦理委员会批准。结果表明，SPC（大豆磷脂）/TPGS（生育酚琥珀酸聚乙二醇酯）组合稳定剂为DSF的优良稳定剂，药载比为DSF-SPC-TPGS=24：20：4时，制得的DSF-NSps粒径较小且放置较稳定，其载药量为（45.36 ±2.09）%，平均粒径为175.0 ±0.75 nm，PDI为0.24 ±0.07，zeta电位为-14.3 mV，外观呈球形；DSF-NSps在磷酸盐缓冲液、生理盐水、5%葡萄糖溶液、人工肠液、人工胃液和血浆中均能稳定存在，满足静脉注射及灌胃的要求；体外研究显示纳米粒装载显著提高了DSF在水相体系中的稳定性，DSF-NSps可缓慢释放包封的药物，并能提高DSF对癌细胞的生长抑制作用（纳米粒和游离DSF在48 h的IC₅₀分别为1.07和5.53 μg·mL^-1，P < 0.01）。在荷瘤小鼠药效实验中，DSF-NSps显示出良好的量效关系，高、中、低剂量的肿瘤抑制率分别为80.22%、75.14%和66.10%，均显著高于阳性药紫杉醇注射液（55.01%，P < 0.05）；组织分布实验显示DSF-NSps主要分布在肝、脾和肿瘤。综上，将双硫仑制备成纳米粒后有望成为一种高效的抗肿瘤药物用于乳腺癌的治疗。

托品酮还原酶Ⅰ（tropinone reductase Ⅰ，TRI）是托品烷生物碱（tropane alkaloids，TAs）合成途径中游分支点处的关键酶，可引导托品酮代谢流进入TAs合成，因此是TAs代谢工程重要的靶标基因。本研究从木本曼陀罗（Datura arborea）中克隆到了一条新的TRI基因，命名为DaTRI2（GenBank登录号为MH705164）。DaTRI2基因cDNA全长1 135 bp，与DaTRI序列一致性为96.8%，预测编码272个氨基酸。DaTRI2蛋白具备茄科TRI保守的结合NADPH的TGXXXGXG基序、结合底物托品酮的11个保守氨基酸残基以及发挥催化活性的N-S-Y-K四联体基序。进化关系上，DaTRI2和茄科的TRI成员聚为一支，与Datura属的TRI亲缘关系最近。对DaTRI2进行原核表达，纯化的重组蛋白能催化托品酮还原反应和托品氧化反应，最适pH值分别为8.0和9.6。DaTRI2在pH=6.4时，对托品酮的K_m和V_max分别为210.05 μmol·L^-1和69.6 nkat·mg^-1 protein，在pH=9.6时，对托品的K_m和V_max分别为188.03 μmol·L^-1和114 nkat·mg^-1 protein。qPCR检测表明DaTRI2在幼叶中表达量最高，其次是须根。DaTRI2基因的克隆和酶活力分析为深入研究木本植物中TAs的生物合成分子机制奠定了基础，同时为TAs代谢工程提供了一个更高效的候选靶基因。