过刊目录血管内皮屏障功能的受损涉及到多种病理生理状态的发生与进展,血管内皮屏障的完整性受到细胞骨架及细胞间连接的调控,而Rho-GTP酶在其中起着核心作用。目前已经发现RhoA、Rac1、Cdc42、RhoB参与调节血管内皮屏障功能。这些Rho-GTP酶在血管内皮屏障功能的调节中有着双重作用,与其亚细胞定位密切相关。当炎症因子作用于血管内皮细胞,RhoA广泛分布于细胞各处引起微丝聚集,产生急性细胞收缩破坏血管内皮屏障。在新生血管内皮细胞中,RhoA则大量聚集于细胞膜附近,参与细胞间连接的产生与成熟。Rac1及Cdc42在静息状态下能够降低丝切蛋白的活性,减少细胞膜附近细胞骨架重构,参与维持血管内皮屏障的稳定。而Cdc42在血管内皮完整性受损时能够迅速聚集于细胞皮质处,活化肌球蛋白Ⅱ,促进黏合连接的生成,参与早期血管内皮屏障完整性的恢复。本文就Rho GTP酶对血管内皮屏障完整性的调节进行概述。
化疗是肿瘤的主要治疗方法之一,在控制肿瘤进展方面发挥着重要作用。然而,化疗药物的长期应用通常会诱导肿瘤细胞对药物产生耐药性,从而导致治疗失败和疾病进展。因此,肿瘤耐药的机制及耐药预防或逆转策略一直是肿瘤治疗研究的热点问题。外泌体(exosomes)是机体细胞分泌的一种直径在40~100 nm之间的小球形囊泡,携带多种生物活性小分子(DNA、ncRNA、mRNA、蛋白质等),参与细胞微环境的调节,从而调控体内多种生理和病理活动。近年来研究表明,外泌体作为细胞-细胞间耐药信号传递的媒介,在肿瘤化疗耐药、转移及免疫逃逸等方面发挥重要作用。本文对外泌体在肿瘤耐药发生中的作用及机制进行综述,旨在为肿瘤耐药的预防或治疗提供新的思路。
Lorlatinib(PF-06463922)是一种具有高度选择性且强效的第三代ALK(anaplastic lymphoma kinase,ALK)/ROS1(c-ros oncogene 1,receptor tyrosine kinase)双重抑制剂。2018年11月,美国食品药物监督管理局批准了lorlatinib用于治疗接受crizotinib和至少一种其他ALK抑制剂治疗之后疾病恶化,或接受alectinib或ceritinib作为第一个ALK抑制剂治疗但疾病恶化的晚期ALK阳性NSCLC患者。Ⅰ/Ⅱ期临床研究结果显示,其具有优异的抗肿瘤活性、强大的颅内治疗活性、良好的耐受性和安全性。本文分别从lorlatinib的化学结构、作用机制、药效动力学、药代动力学、用法和用量、临床研究、安全性以及未来的发展方向作系统性的综述,以期为临床实践提供参考价值和借鉴意义。
人类对高原缺氧环境的适应表现、机制及相关药理学研究一直是科研探索的热点。一个世纪以来,主要集中于青藏高原、南美洲安第斯高原和埃塞俄比亚高原的高原世居人群对于慢性缺氧所具有的独特生理适应已经得到了科学验证,而近10年来的基因研究也证实高原适应具有遗传学基础,尤其与缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)通路及缺氧反应基因(hypoxia response elements,HREs)具有密切关系。但有趣的是,对高原缺氧的适应表现和遗传机制在上述三大高原世居人群中却并不完全相同,其中西藏人具有更好的高原适应表现,并且HIF通路是其最关键的适应机制。同时,由于HIF通路涉及广泛,可调节数以百计的下游基因表达,并与癌症、炎症、缺血、急性脏器损伤和感染等多种疾病密切相关,因此HIF通路的激活剂和抑制剂研究也取得了很大进展。本文就三大高原世居人群对高原环境的不同适应反应、HIF及HREs在不同种族高原适应中的遗传学作用机制、HIF通路的药理学研究进展进行了综述,以期为高原低氧遗传性适应及HIF相关性疾病的进一步研究提供参考。
蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)在人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)生命周期中的多个阶段发挥重要作用。针对这些相互作用特别是HIV与宿主细胞之间的相互作用为我们研发靶向于新结合位点和具有新作用机制的HIV抑制剂提供了新思路。因此本综述基于多种蛋白质-蛋白质相互作用的作用机制,结合具体研究实例阐述了该类抑制剂的最新研究进展。
血脑屏障能选择性阻滞外周血液中的物质进入脑内,这对于维持脑内环境稳定十分重要,但同时会阻碍治疗药物向脑内递送。被动脑靶向递药系统可以通过增强与血脑屏障细胞的亲和力及减弱P-糖基蛋白对药物的外排来提高脑内药物浓度;在被动靶向递药系统上结合特异性配体或抗体得到的主动脑靶向递药系统,能更精准地实现药物向脑内靶向递送;脑靶向联合肿瘤细胞靶向得到的双级靶向递药系统,对脑部肿瘤的治疗已显示出其独特优势。脑靶向递药系统将为阿尔茨海默病、脑肿瘤及中风等脑部疾病的治疗提供一种独特方式。在介绍被动型、主动型脑靶向及双级脑靶向递药系统的同时,本文重点对降低载体粒径、打开血脑屏障细胞间的紧密连接、于载体表面键合亲水性基团及鼻腔给药等提高药物脑内递送效率的策略进行了展望。
复合物神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)-突触后密度蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)形成的增加在缺血性脑卒中引发的神经损伤中起着重要作用,本研究以nNOS和PSD-95相互作用为靶点,建立nNOS-PSD-95解耦联剂筛选模型。模型采用转染的方式将质粒pCDH-Flag-nNOS和pcDNA3.1-PSD-95分别转染入人胚胎肾-293T(human embryonic kidney-293T,HEK-293T)细胞,通过真核表达的方式富集Flag-nNOS和PSD-95。随后,通过nNOS和PSD-95体外共孵育获得nNOS-PSD-95复合物,以ZL006为阳性药干预nNOS-PSD-95的结合,考察ZL006在该系统的解耦联效率,并对解耦联模型进行优化。结果表明,在该模型中,ZL006显示出较明显的解耦联效果,并通过戊二醛法获得抗体耦联磁珠,从而优化筛选模型,提高了筛选效率,降低了成本。最后运用该模型对另一个已知的nNOS-PSD-95解耦联化合物IC87201及候选ZL006结构类似物进行了解耦联活性评价,发现IC87201在该模型中同样具有解耦联活性,并且在候选化合物中也筛选出了潜在的解耦联化合物。
本研究建立了一种优化的高胆红素细胞模型,以模拟人体黄疸病理状态,并进行细胞水平的茵栀黄药效物质筛选。用胆红素及丙磺舒共同孵育HepaRG细胞建立细胞模型;收集给予茵栀黄注射液后大鼠含药血清,测定经此含药血清干预后细胞内总胆红素、间接胆红素及细胞外直接胆红素含量;应用LC-MS/MS的动态多反应监测技术测定茵栀黄注射液中的复杂药物成分,并检测含药血清孵育后与HepaRG细胞结合(或进入细胞内)的药物组分。本研究动物实验遵守兰州大学第一医院伦理委员会规程。结果显示,经40 μg·mL-1胆红素及50 μg·mL-1丙磺舒共同孵育可建立48 h内稳定的高胆红素HepaRG细胞模型;本研究证实,茵栀黄注射液孵育高胆红素细胞模型后,细胞内总胆红素及间接胆红素含量可分别降低52.4%及60.1%,而细胞外直接胆红素含量可升高52.5%。DMRM模式可对53种药物成分进行测定,经含药血清孵育HepaRG细胞系后可从中筛选出8种潜在药效物质。本研究发现茵栀黄注射液在高胆红素细胞模型中具有显著退黄作用,应用本方法可成功筛选出茵栀黄注射液进入靶细胞内发挥作用的潜在药效物质。该方法简单、高效、灵敏、特异,可为中药药效物质的高通量筛选提供一种新的研究思路。
研究黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠的氧化应激作用的影响,探讨其抗氧化作用机制。经中国中医科学院中药研究所伦理委员会审议同意后,运用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic,TNBS)联合乙醇造模法建立大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,将SD大鼠按体重随机分为正常组、模型组、柳氮磺砒啶组(salazosulfapyridine,SASP,0.5 g·kg-1)、黄芩汤高、中、低剂量组(20、10、5 g·kg-1)。连续给药5天后,取血清以及结肠组织,生化法检测大鼠血清中过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-px)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性,ELISA法测定大鼠血清中过氧化脂(lipid peroxide,LPO)的浓度,免疫组织化学法观察核因子E2相关因子Nrf2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2)的阳性表达,利用Western blot技术检测Nrf2下游抗氧化酶血红素氧化酶1(heme oxygenase,HO-1)、醌氧化还原酶1(NAD[P]H:quinone oxidoreductase 1,NQO-1)的蛋白表达。与正常组相比,模型组血清SOD、CAT、GSH-px活性均有显著性下降,而模型组血清MPO活性有显著性增加(P < 0.05或P < 0.01),与模型组相比,黄芩汤高、中剂量组中CAT的活性增加有显著性差异(P < 0.05或P < 0.01),黄芩汤高、中、低剂量组中GSH-px活性均显著增加(P < 0.05);与正常组相比,模型组血清中LPO的含量显著升高(P < 0.01),而与模型组相比,黄芩汤高、中剂量组均能显著降低LPO的含量(P < 0.05);免疫组化检测发现,阳性药柳氮磺胺吡啶组与黄芩汤高剂量组Nrf2表达有统计学意义(P < 0.05);Western blot结果显示,与模型组相比,黄芩汤各给药组与柳氮磺胺吡啶组均能够增加组织内HO-1和NQO1的表达,并且呈现一定的剂量依赖关系。黄芩汤具有显著的抗氧化应激作用,能明显改善UC大鼠的体征、精神状况及排便情况,其对于UC的治疗作用机制可能与激活Nrf2通路,增加HO-1、NQO-1等Ⅱ相代谢酶的表达,降低血清中LPO、MPO的含量,增强SOD、CAT、GSH-px的活性有关。
比较评价银杏酮酯-多奈哌齐(GD)不同量比对痴呆小鼠学习和记忆能力的影响,优选银杏酮酯-多奈哌齐治疗痴呆作用的最佳配比。实验方案经南京中医药大学动物实验伦理委员会批准,所有程序均严格按照动物使用和护理的伦理原则进行。本研究采用多因素神经损伤复制痴呆小鼠模型,通过Morris水迷宫行为学、脑组织病理学切片以及血浆和脑组织中的神经递质及相关酶指标的变化,观察两药不同量比对痴呆小鼠学习记忆能力的影响。采用主成分分析法和多指标综合指数法综合评价银杏酮酯-多奈哌齐不同量比抗痴呆的总效应。结果表明,基于临床常用配比(1:1)7个剂量下,两药联用1倍量(临床等效量)时效果最好;基于最佳剂量下两药联用11个配比中,以银杏酮酯-多奈哌齐1:1的总改善效果最好,这与临床1:1使用两药结论相一致,为临床更有效应用银杏酮酯和多奈哌齐提供科学依据。
研究四神丸对腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠肠道菌群的影响,探讨其改善IBS-D与肠道菌群的关系。选取SPF级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、模型组、四神丸组、二神丸组和五味子散组。以复合因素制备脾肾阳虚型IBS-D大鼠模型后给药14天,采集大鼠粪便,提取粪便样本总DNA,根据细菌16S r RNA V3~V4区设计引物进行扩增,利用Illumina Miseq平台进行高通量测序。动物实验操作过程依照中国中医科学院动物实验伦理委员会的要求执行。研究发现:四神丸能有效减小IBS-D大鼠腹泻指数(P < 0.05)及降低肠道高敏感性(P < 0.05)。主成分分析(PCA)、主坐标分析(PCoA)和基于β多样性距离的非度量多维尺度分析(NMDS)结果显示5组大鼠肠道菌群组成存在明显差异。模型组的菌群丰度、均匀度和多样性均最低。与正常组相比,模型组变形菌门、放线菌门、韦荣球菌属和支原体属显著增加(P < 0.05),普雷沃氏菌属显著减少(P < 0.05)。与模型组相比,四神丸组变形菌门和支原体属显著减少(P < 0.05),梭菌属、Turicibacter和Romboutsia显著增加(P < 0.05)。本研究表明四神丸可能是部分通过调节肠道菌群的结构而发挥治疗IBS-D的作用,且二神丸和五味子散之间有协同作用。
利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导的药物特异质肝损伤模型,评价白鲜皮水提物(Cortex Dictamni aqueous extract,AE)和醇提物(Cortex Dictamni ethanol extracts,EE)致大鼠肝损伤的作用。首先采用大鼠急性毒性实验评价了AE和EE致肝损伤作用,进一步采用SD雄性大鼠构建LPS(2.8 mg·kg-1)模型(伦理审批号:IACUC-2018-008),通过血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)等肝功能指标检测,肝脏病理变化(hematoxylin-eosin staining,HE染色)、肝组织TUNEL染色、血清细胞因子检测及网络药理学等方法分析AE和EE致肝损伤作用。结果显示,各剂量组AE和EE对大鼠主要肝功能指标ALT、AST均无显著影响(P>0.05),肝脏病理和血清细胞因子等指标也未见明显改变。而在LPS模型中,4.2 g·kg-1AE和EE均可使ALT、AST显著升高(P < 0.01),其中AE作用显著高于EE,肝脏病理显示两组肝细胞呈不同程度损伤,TUNEL染色则可见大量凋亡细胞,血清细胞因子检测则发现AE可显著促进肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达(P < 0.01)。上述结果表明,在免疫应激状态下,白鲜皮可导致特异质肝损伤,AE所致肝损伤程度较EE更重。本研究为白鲜皮及其制剂肝损伤的机制研究和临床肝损伤风险防控提供依据。
为扩展氟喹诺酮由抗菌活性向抗肿瘤活性转化的结构修饰策略,以噻唑酮为C-3羧基的生物电子排体,芳苄叉基为其功能修饰基,设计合成了1-环丙基-6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-[5-芳苄叉基-噻唑-4(5H)-酮-2-基]-喹啉-4(1H)-酮(7a~7p)目标化合物,其结构经元素分析和光谱数据确证。体外抗肿瘤实验结果表明,16个目标化合物对Hep-3B、Capan-1和HL60三种实验癌细胞株的活性显著高于母体环丙沙星,其中,卤代苯苄叉基或芳香杂环苄叉基化合物的活性强于其他取代的活性,尤其是吡啶取代化合物(6o、6p)对Capan-1的IC50与对照药多柔比星相当。为此,芳叉苄基修饰的噻唑酮替代C-3羧基有利于提高氟喹诺酮的抗肿瘤活性。
采用硅胶、MCI、半制备高效液相色谱等柱色谱方法对贵州老鹰茶乙酸乙酯部位的化学成分进行分离纯化,根据NMR数据以及理化性质鉴定了化合物的结构,分离得到2个木脂素类化合物分别鉴定为老鹰茶木脂素A(1)和cinnamophilin(2)。化合物1为新化合物,化合物2为首次从该植物中分离得到。
建立快速、灵敏的LC-MS/MS法测定人血浆中诺氟沙星的浓度,并将该方法应用于诺氟沙星在人体内的药代动力学研究。以环丙沙星为内标,血浆样品经甲醇沉淀后,通过Symmetry®C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,5 μm)进行分离,使用甲醇溶液(含0.3%甲酸)-水溶液(含0.3%甲酸和5%甲醇)作为流动相,进行梯度洗脱,流速为0.45 mL·min-1。通过电喷雾电离源(ESI),以多反应监测(MRM)模式进行正离子检测,诺氟沙星、环丙沙星的MRM离子对分别为m/z 320.3→302.1、m/z 332.3→314.1。人血浆中诺氟沙星在10~1 000 ng·mL-1浓度内线性关系良好(r2>0.99),定量下限为10 ng·mL-1;定量下限和质控样品的批内、批间精密度(RSD%)在2.64%~7.23%之间,准确度(RE%)在±5.00%以内。健康人口服诺氟沙星片100 mg后主要药代动力学参数tmax、Cmax、AUC0-t、t1/2分别为:1.28±0.364 h、627±171 ng·mL-1、2 938 ±850 h·ng·mL-1、6.01±1.36 h。本研究建立的LC-MS/MS分析方法灵敏度高且样品处理方法简单快速,满足生物分析的法规要求,经柳州市工人医院医学伦理委员会的批准,可应用于人体内诺氟沙星的药代动力学研究。
基于临床数据挖掘结论,选取常见的丹红注射液与头孢曲松钠联合用药方案,设计实验考察在雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠体内,连续7天尾静脉给予丹红注射液后,继续联合使用头孢曲松钠7天,对丹红注射液中的酚酸类成分p-香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸和丹酚酸B的药动学行为,以及抗血栓、抗凝血和抗血小板药效的影响。运用UHPLC-TQ-MS测定血药浓度后,用DAS 3.2.8计算丹红注射液中酚酸类成分在丹红注射液单用药组与联合用药组的药动学参数,并比较两组在90%置信区间最高血药浓度Cmax和药时曲线下面积AUC0-t的生物等效性。结果显示:与单用药组相比,联合用药组的p-香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸和丹酚酸B的Cmax不等效;丹酚酸D、迷迭香酸和丹酚酸B的AUC0-t不等效,而各成分的tmax没有显著性差异(P>0.05)。体内抗凝血实验结果显示:与单用药组比较,联合用药组的国际化标准比值(INR)显著升高(P < 0.01),凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)显著增加(P < 0.05或P < 0.01),而纤维蛋白原(FIB)值没有显著差异;抗血栓结果显示大鼠体内血清血栓烷素B2(TXB2)水平在联合用药组内极显著降低(P < 0.01);而抗血小板结果没有显著性差异。综上结果表明:头孢曲松钠可能通过改变丹红注射液中的酚酸类成分在大鼠体内的药动学和药效学,增强丹红注射液的抗凝血和抗血栓作用。以上动物实验均通过南京中医药大学动物伦理审查。
采用差示扫描量热分析法(differential scanning calorimetry,DSC)、扫描电子显微镜法(scanning electron microscopy,SEM)和X-射线粉末衍射法(X-ray powder diffraction,PXRD)对帕博西尼进行了结构表征,初步建立了帕博西尼A、B两种晶型的鉴定方法;通过X-射线粉末衍射单峰法(峰面积法和峰高法)对帕博西尼(palbociclib)有效晶型A中混杂的晶型B进行了定量测定。结果表明:DSC法鉴定两种晶型其结果区分不够明显,SEM法和PXRD法可快速有效鉴别两种晶型;峰面积法和峰高法所建立的标准曲线方程分别为y=0.842 75x-0.001 21和y=0.909 64x-0.002 32,两种方法的R2值分别为0.986 17和0.985 83,两组曲线均取得了较好的线性关系,其中峰面积法的线性关系更好。峰面积标准曲线计算出B晶型的检测限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantity,LOQ)分别为1.17%和3.92%,峰高标准曲线计算出B晶型的检测限和定量限分别为1.19%和3.97%,峰面积法更为灵敏。采用本实验的方法可快速的鉴定帕博西尼晶型A和晶型B并对其进行定量测定。
为研究CHMFL-FLT3-122在大鼠体内吸收、分布、代谢和排泄过程,采用SD大鼠口服给予50 mg·kg-1[14C]CHMFL-FLT3-122后收集生物样本,以放射性检测方法测定药物含量并鉴定代谢产物,本实验通过南京美新诺医药科技有限公司的实验动物伦理委员会批准。雌雄大鼠单次口服绝对生物利用度分别为50.92%和45.83%,药物吸收后主要分布于胃肠道、肝、肺中,于给药后48 h消除完全。经粪便和尿液回收药量分别占给药量的92.34%和3.99%。研究共鉴定10个Ⅰ相代谢产物和4个Ⅱ相代谢产物,主要代谢途径为N-去烃基、氧化和酰胺水解,并与硫酸和葡萄糖醛酸形成结合代谢产物。血浆中以原形为主,主要代谢产物为M553(硫酸结合产物)和M457(N-去烃基产物)。CHMFL-FLT3-122口服生物利用度良好,体内代谢广泛,组织分布无明显蓄积。
探究柴胡-白芍药对在逍遥散抗抑郁作用中的核心地位及作用机制。通过行为学指标观察柴胡-白芍药对、逍遥散、阴性对照(逍遥散除去柴胡、白芍)对慢性温和不可预知性抑郁(CUMS)模型大鼠行为学的影响,结果显示模型组大鼠体重、穿越格数和直立次数、糖水偏爱率均显著下降(P < 0.001),强迫游泳不动时间明显延长(P < 0.01)。柴胡-白芍药对有明显的抗抑郁作用,且低剂量组对大鼠穿越格数回调与逍遥散相当,高剂量组对直立次数和糖水偏爱率回调与逍遥散相当;高、低剂量组对不动时间回调均优于逍遥散。动物实验获得山西大学伦理委员会的批准。代谢组学结果提示,与抑郁症相关的15种生物标志物中,其中逍遥散回调12种,药对回调8种,阴性对照仅回调6种。通过代谢通路分析,共聚焦了4条抑郁症相关代谢通路,药对和逍遥散通过4条相同的代谢通路发挥抗抑郁作用,阴性对照仅通过其中3条通路发挥作用。综上,从行为学、代谢组学和通路分析揭示了柴胡-白芍药对在逍遥散抗抑郁中发挥重要作用。
本研究制备载黑磷量子点(BPQDs)脂质体(liposome-BPQDs),探究其理化性质及用于宫颈癌光热治疗的效果。应用超声法制备BPQDs,薄膜分散法制备liposome-BPQDs,并对其形貌、粒径、电位和拉曼光谱等进行表征。采用CCK-8法检测该纳米粒对人宫颈癌细胞(HeLa)的毒性。使用激光共聚焦显微镜(CLSM)和荧光倒置显微镜分别观察HeLa细胞摄取和细胞凋亡情况。结果表明,扫描电镜下,liposome-BPQDs呈椭球状或球状;透射电镜观察显示liposome-BPQDs粒径约90~110 nm。粒径及电位测量结果表明liposome-BPQDs粒径为(104.2±0.35)nm,zeta电位(-11.3±3.01)mV。脂质体包封率为(84.40±2.13)%。在室外通风、温度范围25℃~34℃和相对湿度80%~82%自然条件下,liposome-BPQDs光热效应良好,降解较BPQDs缓慢。Liposome-BPQDs可被HeLa细胞所摄取;近红外激光照射后,载BPQDs量达20 μg·mL-1时,HeLa细胞死亡率大幅度上升。本研究表明,liposome-BPQDs稳定性较高,且具有良好的光热效应,有望应用于宫颈癌光热治疗。
鞣花酸普遍存在于植物中,被认为是具有开发潜力的抗氧化与抗肿瘤候选药物。但鞣花酸极易沉淀,如何提高其生物利用度一直是制药行业关注的问题。本课题组偶然发现,三勒浆口服液在低温条件下储存稳定性非常优异,鞣花酸呈现"低温易溶"的反常现象。为揭示其科学原理,讨论相应的调控策略,本文将该口服液分别在高、中和低3种温度下储存3个月,采用沉淀量、上清液-沉淀HPLC化学轮廓、沉淀形貌和物理相态综合表征等分析方法系统追踪调查存放过程中口服液成分与相态的变化规律。结果显示,低温下的沉淀量仅为室温1/3,温度升高,沉淀量急剧增加。上清液-沉淀物HPLC分析发现鞣花酸沉淀来源于化学降解与物理沉降两条途径。化学降解与诃黎勒酸、柯里拉京等水解鞣质酸性条件下水解产生鞣花酸有关。物理沉降与升温后多酚胶体缔合度与黏度降低有关。该研究阐释了中药液体制剂中鞣花酸稳定机制,为含鞣花酸制剂的高效利用及澄清度改善提供了理论依据。
采用TaqMan探针实时荧光PCR方法对冬虫夏草及其混伪品进行分子鉴定研究。从100份冬虫夏草及其混伪品中提取总DNA,依据核糖体(rDNA)内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列,利用MEGA 7.0软件进行比较分析,找出冬虫夏草及其混伪品的变异位点,通过Primer Premier 6.0软件设计一对特异性引物和TaqMan探针,分别在两种实时荧光PCR仪(Genesig q16和Bio-Rad CFX96)上进行灵敏度和特异性鉴定研究。灵敏度研究表明,在Bio-Rad CFX96系统中,该方法对冬虫夏草DNA模版的检测下限为0.016 ng·μL-1;在Genesig q16系统中,该方法对冬虫夏草DNA模版的检测下限为15.527 ng·μL-1。特异性鉴定研究表明,在Genesig q16和Bio-Rad CFX96系统上,该方法对冬虫夏草均具有良好的特异性,能与混伪品下垂虫草、古尼虫草、蛹虫草、蝉花、凉山虫草、新疆虫草明显区分。TaqMan探针实时荧光PCR方法可实现对冬虫夏草及其混伪品的准确鉴定,为药材市场的管理提供技术支撑,对名贵中药材的鉴别具有较好应用前景。