中华中医药学刊

基因	正向	反向
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ROCK Ⅰ	5＇-CCTTCAGCAAATGCCAGTGAG-3＇	5＇-TTTCTGTAAACTTTCCTGCAAGC-3＇
MLC	5＇-CGACAGCAGAGCGCCAT-3＇	5＇-TCTTGTAGCTGAAGCACGGG-3＇
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基于Rho A/ROCK通路探索鬼箭羽醇提物对肝纤维化小鼠的影响

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马敏 , 曾华华 , 孙宇杰 , 胡嘉敏 , 黄德斌

中华中医药学刊 | 国家项目点击 2025,43(8): 131-136

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中华中医药学刊 |国家项目点击 2025 , 43 (8) : 131 -136

基于Rho A/ROCK通路探索鬼箭羽醇提物对肝纤维化小鼠的影响

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马敏（1994-），女（土家族），湖北恩施人，硕士在读，研究方向：中医药防治肝胆疾病。

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马敏, 曾华华, 孙宇杰, 胡嘉敏, 黄德斌

作者信息

湖北民族大学医学部，湖北恩施 445000

通讯作者:

黄德斌（1965-），男，湖北恩施人，教授，硕士研究生导师，硕士，研究方向：民族中医药。E-mail：hdb66910@163.com。

作者简介:

马敏（1994-），女（土家族），湖北恩施人，硕士在读，研究方向：中医药防治肝胆疾病。

Exploring Effects of Ethanolic Extracts of Guijianyu（Euonymus Alatus）on Hepatic Fibrosis in Mice Based on Rho A/ROCK Signaling Pathway

Min MA, Huahua ZENG, Yujie SUN, Jiamin HU, Debin HUANG

Affiliations

Medical School，Hubei Minzu University，Enshi 445000，Hubei，China

出版时间: 2025-08-10 doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.027

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摘要

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目的

基于Rho A/ROCK信号通路探究鬼箭羽醇提物（Ethanolic extracts of euonymus alatus，EEEA）对四氯化碳（CCl₄）诱导的肝纤维化（Hepatic fibrosis，HF）模型小鼠的影响。

方法

将50只C57BL/6小鼠随机分为空白组（Normal group，NG）、模型组（Model group，MG）、鬼箭羽低剂量组（EA-L）、鬼箭羽中剂量组（EA-M）、鬼箭羽高剂量组（EAH），每组10只。除NG外，其余各组小鼠腹腔注射含有25%CCl₄的橄榄油混悬液造模。造模的同时，NG、MG以双蒸水灌胃，其余3组按对应剂量灌胃：EA-L、EA-M、EA-H 3个剂量分别为2、4、8 g/kg（相当于含生药量）。6周后取材，收集小鼠血清和肝组织，采用谷草转氨酶（Glutamic oxalacetic transaminase，AST）、谷丙转氨酶（Glutamate pyruvate transaminase，ALT）测试盒检测血清中肝功能指标。ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素6（Interleukin-6，IL-6）含量，相同方式检测肝组织羟脯氨酸（Hydroxyproline，Hyp）、转换生长因子β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）的含量。HE和Masson染色分析小鼠肝脏的损伤和胶原沉积情况。Western blot法检测肝组织中α平滑肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（TypeⅠCollagen，CollagenⅠ）以及信号通路Rho A/ROCK相关蛋白的相对表达量。

结果

与MG相比，EA-M和EA-H血清ALT、AST、TNF-α、IL-6呈下降趋势；与MG相比，鬼箭羽药物组肝组织Hyp、TGF-β1的含量不同程度下降（P<0.05，P<0.01）。鬼箭羽药物组的肝形态结构、细胞炎性浸润、纤维变化及胶原沉积呈剂量依赖性优于MG；与MG相比，EA-L、EA-M和EA-H的α-SMA、CollagenⅠ及Rho A/ROCK信号通路相关蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01）。与MG相比，EA-L、EA-M和EA-H的α-SMA、CollagenⅠ及Rho A/ROCK信号通路相关蛋白mRNA表达下降（P<0.05，P<0.01）。

结论

鬼箭羽醇提物具有明显的降酶护肝、抗肝纤维化的作用，而抑制Rho A/ROCK信号通路是其抗肝纤维化的作用机制之一。

关键词

鬼箭羽醇提物 / 肝纤维化 / Rho A/ROCK信号通路

Abstract

收起

Objective

To investigate the effect of ethanol extract of Guijianyu（Euonymus Alatus）on CCl₄-induced liver fibrosis model mice based on Rho A/ROCK signaling pathway.

Methods

Fifty C57BL/6 mice were randomly divided into normal group（NG），model group（MG），low-dose group of Guijianyu（Euonymus Alatus）（EA-L），medium-dose group of Guijianyu（Euonymus Alatus）（EA-M），high-dose group of Guijianyu（Euonymus Alatus）（EA-H），10 mice in each group.The mice in all groups except NGwere modeled by intraperitoneal injection of olive oil suspension containing25%CCl₄.At the same time of modeling，NG and MG were treated with double-distilled water by gavage，and the remaining three groups were treated with Guijianyu（Euonymus Alatus）by gavage with the corresponding doses（2 g/kg，4 g/kg and 8 g/kg，equivalent to the amount of the raw drug contained），respectively.6 weeks later，the serum and liver tissues were collected，and the liver function indexes［glutamic oxalacetic transaminase（AST），glutamate pyruvate transaminase（ALT）］were detected.ELISA method detected the levels of tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin-6（L-6），hydroxyproline（HYP）and transforming growth factor-β1（TGFβ1）.HE and Masson staining were used to analyze the damage and collagen deposition in the liver of mice.The expressions of α-SMA，Collagen I and the relative protein expressions of Rho A/ROCK signaling pathway related proteins in the liver tissues were detected by Western blot.

Results

Compared with those of MG，the serum levels of ALT，AST，TNF-αand IL-6 of EA-M and EA-H showed a decreasing trend. Compared with those of MG，the contents of Hyp and TGF-β1 in liver tissues of the Guijianyu（Euonymus Alatus）groups decreased to different degrees（P<0.05，P<0.01）.The hepatic morphology and structure，cellular inflammatory infiltration，fibrous changes and collagen deposition in the Guijianyu（Euonymus Alatus）groups were dose-dependently better than that of MG.The protein expression levels ofα-SMA，CollagenⅠand Rho A/ROCK signaling pathway related proteins in the EA-L，EA-M and EA-H were decreased compared with those of MG（P<0.05，P<0.01）. Compared with those of MG，the mRNA expressions ofα-SMA，CollagenⅠand Rho A/ROCK signaling pathway related proteins were decreased in EA-L，EA-M and EA-H（P<0.05，P<0.01）.

Conclusion

Ethanol extract of Guijianyu（Euonymus Alatus）has obvious enzyme-lowering，hepatoprotective and antihepatic fibrosis effects，and inhibition of the Rho A/ROCK signaling pathway is one of the mechanisms of its anti-hepatic fibrosis action.

Key words

ethanol extract of Guijianyu（Euonymus Alatus） / liver fibrosis / Rho A/ROCK signaling pathway

引用本文

马敏, 曾华华, 孙宇杰, 胡嘉敏, 黄德斌. 基于Rho A/ROCK通路探索鬼箭羽醇提物对肝纤维化小鼠的影响. 中华中医药学刊, 2025 , 43 (8) : 131 -136 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.027

Min MA, Huahua ZENG, Yujie SUN, Jiamin HU, Debin HUANG. Exploring Effects of Ethanolic Extracts of Guijianyu（Euonymus Alatus）on Hepatic Fibrosis in Mice Based on Rho A/ROCK Signaling Pathway[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2025 , 43 (8) : 131 -136 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.027

正文

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肝纤维化（Hepatic fibrosis，HF）指由多种原因引起的复杂性纤维化炎症反应，通常表现为以氧化应激反应失衡、肝星状细胞（Hepatic stellate cells，HSCs）异常激活、细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）过度沉积等为特征的肝脏组织结构及功能异常。其中，约40%肝纤维化疾病可向肝硬化甚至肝癌等终末期肝病演变^[1]。目前，由于用于防治肝纤维化的西药作用靶点的单一性等限制，很难达到治疗的理想水平。中药具有多成分、多靶点且安全性强的优势^[2]，近年来，中药防治肝纤维化成为国内外热点。鬼箭羽是一种经现代医学研究证明具有抗肝纤维化、护肝、降血糖、抗肿瘤、抗炎抗氧化和抗病毒等作用的传统中药^[3]。本课题组前期研究发现，鬼箭羽水提物、醇提取物及相关活性成分（Beta-谷甾醇、二氢槲皮素、山柰酚、儿茶素、金丝桃苷等）均可显著减轻CCl₄小鼠急性肝损伤及改善其纤维化，其作用机制与影响肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）-NF-κB、TβR1-Smad2/3、MMp2、ERK1/2、JAK2/STAT3、PARA-1-HMGB1等多信号通路及相关通路蛋白表达有关^[4-7]，由此，我们不禁思考，是否可将鬼箭羽的两种或两种以上单体联合起来，在中医性味归经及中医辨证论治理论的指导下，达到中药复方配伍的目的？中药鬼箭羽抗肝纤维化的优势为多成分、多靶点、多层次互补，此种互补为其干预肝纤维化复杂的病理机制提供可能。鬼箭羽醇提物（Ethanolic extracts of euonymus alatus，EEEA）为鬼箭羽去除杂质之后相对纯净的鬼箭羽，即相当于将鬼箭羽各自单体部分配伍应用。鉴于此，目前国内外尚未有鬼箭羽对Rho A/ROCK信号通路（在HF发生发展中具有重要作用）影响的报道，本研究在复制肝纤维小鼠模型的基础上，探究鬼箭羽醇提物对Rho A/ROCK信号通路的影响，以期进一步明确鬼箭羽醇提物在抗肝纤维化中多成分多靶位互补机制，为临床治疗肝纤维化提供可能。现报道如下。

1　材料与方法

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1.1　主要药品与试剂

谷草转氨酶（Glutamic oxalacetic transaminase，AST）、谷丙转氨酶（Glutamate pyruvate transaminase，ALT）试剂盒（购于BIOBASE公司，货号分别为：70910、70911）；羟脯氨酸（Hydroxyproline，Hyp）试剂盒（购于南京建成公司，货号A030-2-1）；白细胞介素6（Interleukin-6，IL-6）、TNF-αELISA试剂盒（酶免生物，货号分别为MM-0163M1、MM-0132M1），苏木精-伊红（HE）（购于武汉百仟度生物科技有限公司，货号B1002），RIPA裂解液、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（购于Biosharp公司，货号分别为：BL504A、BL502B）；α平滑肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）抗体、Ⅰ型胶原蛋白（TypeⅠCollagen，CollagenⅠ）抗体（购于美国Abcam公司，货号分别为ab7817、ab260043）；MLC抗体（购于CST，货号：A12975），P-MLC抗体（购于CST，货号95777）；Rho A抗体（购于proteintech，货号：10749-1-Ap）；ROCKⅠ抗体（购于Servicebio，货号：GB111691）；HRp-Goat anti Rabbit、HRp-Goat anti Mouse（购于Searcare，货号分别为：5220-0336、5220-0341）。

1.2　动物

8周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠50只，购于辽宁长生生物技术股份有限公司，体质量（20.0±2.0）g，许可证号为SCXK（辽）2020-0001。经湖北民族大学伦理委员会正式批准［批准号：NO.（2023）039］，并遵照3R原则（Reduction、Replacement、Refinement）和湖北民族大学实验室动物管理规定进行。

1.3　主要仪器

高速离心机，济南来宝医疗器械有限公司；多功能酶标仪，美国THFrmo Scientific公司；数字显微镜，日本Nikon公司；组织全自动包埋机，湖北泰维科技有限公司。

1.4　方法

1.4.1　鬼箭羽醇提物的制备

选取采于湖北恩施的野生鬼箭羽，经过清洗和晾干处理，并由湖北民族大学中药学专家进行鉴定。将洗净的鬼箭羽粉碎，称取2 kg粉碎物，并将其浸泡于65%乙醇中，热回流提取2 h，该过程重复2次，提取完成后，过滤得到滤液，将滤液进行减压冷冻干燥，得到干提物。在密封保存之前，干提物需在-80℃的冰箱中急速冷冻。在需要使用时，将其溶解在双蒸水中。整个制备过程严谨细致，旨在确保鬼箭羽醇提物的质量和功效。

1.4.2　动物造模与给药

将小鼠随机分为空白组（NG）、模型组（MG）、鬼箭羽低剂量组（EA-L）、鬼箭羽中剂量组（EAM）、鬼箭羽高剂量组（EA-H），每组10只，采用灌胃并腹腔注射四氯化碳的方法来复制小鼠肝纤维化模型。NG小鼠与MG小鼠每日予生理盐水（0.02 mL/g）灌胃，EA-L、EA-M、EAH以同样的方法每日灌不同剂量的鬼箭羽醇提物。给予正常组小鼠腹腔内注射橄榄油溶液（1.6 mL/kg），其余各组小鼠腹腔注射含25%四氯化碳的橄榄油溶液（1.6 m L/kg），连续6周，2次/周。查阅相关文献^[4-6]最终确定EA-L、EA-M、EA-H 3组灌胃药物剂量分别为2、4、8 g/kg（相当于含生药量）。观察小鼠生理状态，如模型复制后小鼠是否出现毛发粗糙、精神萎靡等情况，初步判断模型是否成功。

1.4.3　样本采集与处理

6周后禁食不禁水24 h，予戊巴比妥钠麻醉小鼠后取眼球血，冰上静置2 h后，以3000 r/min、4℃离心15 min，取血清于Ep管并保存于4℃冰箱待测。取血完成后颈椎脱臼处死小鼠，取出肝脏拍照并称质量，分取肝右叶存放在10%的甲醛溶液EP管中，剩下肝组织置于EP管于-80℃冰箱保存。观察和检测相关指标。

1.4.4　血清学指标检测

按试剂盒方法测ALT、AST，按Elisa试剂盒说明书操作，检测炎症因子IL-6、TNF-α含量。

1.4.5　肝组织指标检测

按照Elisa试剂盒说明书操作，检测肝组织中Hyp、转换生长因子β1（Transforming growth factorβ1，TGF-β1）含量。

1.4.6　HE和Masson染色

采用10%的多聚甲醛对肝组织进行固定，予不同浓度梯度的乙醇和二甲苯脱水处理，石蜡包埋并切片，最后用Masson、HE染色，于光学显微镜下观察并拍摄照片。

1.4.7　蛋白免疫印记法检测肝组织相关蛋白表达

予RIPA裂解液对肝组织裂解，再加PMSF混匀搅碎，根据BCA说明书步骤操作测其蛋白浓度，-20℃冰箱保存。电泳，恒压转膜，快速封闭液封闭，孵育一抗，二抗等过程。检测肝组织α-SMA、CollagenⅠ、Rho A、ROCKⅠ、p-MLC的蛋白表达。

1.4.8　实时荧光定量PCR检测肝脏mRNA相对表达量

将标本匀浆，置入EP管，依次加入裂解液和Trizol，匀浆20 s，冰上静置10 min，加入200μL的三氯甲烷，4℃离心15 min，上层水相吸出放于新的无酶EP管，吸入等体积的异丙醇，4℃离心15 min，弃去上清液，将Ep管晾干水分，加入DEPC水。按试剂盒逆转录RNA，再进行40循环的PCR。引物见表1，用2^-ΔΔCt法进行结果的计算。

1.4.9　统计学方法

用Graphpad prime 9.0软件绘图，数据均以平均数±标准差（

）的形式表示，用SPSS 22.0软件对实验所得数据进行统计学分析，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用两样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有显著统计学意义。

2　结果

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2.1　鬼箭羽醇提物对HE模型小鼠生理学的影响

实验期间，小鼠死亡3只，分别为EA-L组1只、MG组2只。造模前，各组小鼠毛发、精神状态、耳鼻口腔分泌物、饮食情况、活动状态、尿色等生理状况均正常。造模后，与NG比较，其余各组小鼠出现不同程度的精神欠佳、活动量减少、毛发粗糙、食欲不振等。与MG比较，鬼箭羽醇提物各给药组小鼠的生理状态均有一定程度的改善。

2.2　鬼箭羽醇提物对HE模型小鼠肝脏外形及肝组织病理形态学影响

NG小鼠肝脏外形包膜光滑且完整，呈棕红色。MG小鼠肝脏表层呈粗糙颗粒状，呈暗灰色。EA-L、EA-M、EA-H小鼠肝脏表面均分布有大小不同的细小颗粒，但较MG小鼠明显减少，且呈现出随剂量越高小鼠肝脏表面颗粒越少的趋势。HE和Masson结果显示，NG小鼠肝组织结构基本正常，肝索排列规则紧密，肝实质内未见炎症细胞浸润及纤维化改变，未发现假小叶。与NG小鼠相比，模型组肝组织结构重度异常，大量肝细胞明显水肿并呈现大空泡，部分肝细胞坏死，坏死的肝细胞形成纤维间隔将肝实质分成大小不一的肝细胞团，并形成假小叶，提示造模成功。与模型组相比，EA-H组小鼠视野内部分肝细胞坏死，肝实质内可见少量炎症细胞浸润，胶原纤维沉积少；有炎性细胞浸润，未见典型假小叶。EA-L和EA-M小鼠肝组织病理染色结果优于MG，但较EA-H组差。见插页ⅩLⅦ图1。

2.3　鬼箭羽醇提物对HF模型小鼠肝功能的影响

与NG小鼠相比，MG小鼠ALT、AST水平明显升高（P<0.01），与MG相比，鬼箭羽醇提物各剂量组ALT均显著下降，差异具有统计学意义（P<0.01，P<0.05）。与MG相比，EAL、EA-M以及EA-H组AST显著下降，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。见图2。

2.4　鬼箭羽醇提物对HE模型小鼠血清TNF-α、IL-6的影响

与NG小鼠相比，MG小鼠TNF-α、IL-6水平明显升高（P<0.01），与MG相比，鬼箭羽醇提物各剂量组TNF-α均显著下降，差异具有统计学意义（P<0.01）。与MG相比，EA-L对IL-6的影响，差异无统计学意义（P>0.05），EA-M以及EA-L组IL-6显著下降，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。见图3。

2.5　鬼箭羽醇提物对HE模型小鼠肝组织Hyp、TGF-β1的影响

与NG小鼠相比，MG小鼠Hyp水平明显升高（P<0.01），与MG相比，EA-L组、EA-M组和EA-L的Hyp显著下降，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。见图4。

2.6　鬼箭羽醇提物对HE模型小鼠肝组织蛋白表达的影响

鬼箭羽醇提物各剂量组的CollagenⅠ蛋白表达水平均有不同程度降低，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01），EA-L、EA-M和EA-H的α-SMA蛋白表达水平均有不同程度降低，差异具有统计学意义（P<0.01）。与NG小鼠相比，MG小鼠的α-SMA、CollagenⅠ蛋白表达水平明显升高（P<0.01），且差异具有统计学意义，提示造模成功。见图5。

2.7　鬼箭羽醇提物对HF模型小鼠Rho A/ROCK信号通路相关蛋白的影响

与NG小鼠相比，MG小鼠Rho A、ROCKⅠ、MLC、p-MLC蛋白表达水平显著升高（P<0.01），差异具有统计学意义。鬼箭羽醇提物各剂量组的Rho A、ROCKⅠ、MLC、p-MLC的蛋白表达水平均有不同程度降低，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。见图6。

2.8　鬼箭羽醇提物对HF模型小鼠肝组织α-SMA、CollagenⅠmRNA影响

与NG小鼠相比，MG小鼠α-SMA、CollagenⅠ的mRNA表达显著升高（P<0.01），差异具有统计学意义。鬼箭羽醇提物各剂量组的α-SMA、CollagenⅠmRNA表达水平均有不同程度降低，差异具有统计学意义（P<0.01）。见图7。

2.9　鬼箭羽醇提物对HF模型小鼠Rho A、ROCKⅠ、MLC mRNA的影响

与NG小鼠相比，MG小鼠Rho A、ROCKⅠ、MLC mRNA表达显著升高（P<0.01），差异具有统计学意义。鬼箭羽醇提物各剂量组的Rho A、ROCKⅠ、MLCmRNA表达水平均有不同程度降低，差异具有统计学意义（P<0.01）。见图8。

3　讨论

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HF若发展到肝硬化、肝癌阶段，会出现消化道出血、肝性脑病、肝肾综合征、肝肺综合征等一系列并发症，严重影响患者生活质量和生命健康。据报道，慢性肝病影响全世界约8亿多人的健康，每年死于慢性肝病的患者约200万人，同时，全球每年超过100万人死于HF导致的终末期肝病，截至2030年国际肝病流行病学预测显示，全球逐年上升的肝硬化、肝癌等终末期肝病的死亡率将成为严重威胁人类生命健康的高危因素之一，每年死于肝硬化及并发症的患者将达到约100万人^[8-11]。因此，如何延缓甚至逆转HF成为亟待解决的世界难题。

病毒感染为HF最常见的病因^[2]。已有相关研究证明，核苷（酸）类似物或聚乙二醇α干扰素对乙型肝炎病毒（HFpatitis B virus，HBV）的有效抑制可使部分患者HF得到治愈，但仍有患者即便肝功能得到改善以及乙肝病毒得以清除，HF却仍继续发展^[12]。针对HF其他病因如酒精性肝病、脂肪性肝病、自身免疫性肝病等的治疗目前临床尚无特效药。在中医独特的辨证论治等理论体系中回顾与总结中医历来对HF的治疗，发现中药具有不良反应小、疗效显著以及靶点丰富等治疗优势^[13]。

查阅古籍，中医并无HF之病名，常根据患者的临床表现和体征将其归为“胁痛”“积聚”“肝积”等范畴。《肝纤维化中西医结合诊疗指南（2019年版）》将HF基本病机总结为为正虚邪盛，邪毒久稽，肝络受损，气滞血瘀，可归纳为“虚损生积”^[13]。血瘀既为壅塞之因，又是本病传变的核心环节，因此认为HF病因病机中血瘀尤为重要^[14-15]。血瘀日久可致瘀血，瘀血进一步阻滞脉络则血瘀加重，如此反复。由此可见，运用中医药治疗HF时，应十分重视活血化瘀类药物的运用。鬼箭羽作为我国传统中草药，药用历史源远流长，早在魏晋时期就开始被利用。鬼箭羽首次出现在《神农本草经》之中，被分类为中等药材，为卫矛科植物卫矛Euonymus alatus（Thunb.）Sieb.的具翅状物枝条或翅状附属物，性苦味寒，归肝经，具有破血通经、解毒消肿、杀虫的功效^[16]。《证类本草》曰：“主女子崩中下血……去白虫，消皮肤风毒肿，令阴中解”。《本草品汇精要》曰：“去瘀血”。凡以通利血脉、消散瘀血为主要功效的用于治疗瘀血病症的药物，统称活血化瘀药，故鬼箭羽可纳入活血化瘀类药物范畴。综上，从中医理论方面分析，鬼箭羽可运用“祛瘀通络”的治法改善肝HF的血瘀，从而达到活血化瘀、通畅脉络的功效。

CCl₄是一种能在人体肝脏内生成毒性三氯甲基（CCL₃）自由基、引起炎症反应的特异性致肝损伤的物质，并能激活HSCs导致ECM堆积，导致HF^[17-18]。从中医整体观念出发，内脏病变，必然表现于外，即所谓“有诸内，必形诸外”（《孟子·告子下》），在本项实验中我们发现MG小鼠活动量减少、精神萎靡、毛发粗糙无光泽、食欲减退等现象。同时MG小鼠肝脏表层呈粗糙颗粒状且呈暗灰色，MG小鼠肝结构被破坏，出现假小叶，小鼠的外形表现和异常的肝组织染色共同提示成功建立了小鼠HF模型。目前临床上用于检测肝功能最广泛的生化指标是AST和ALT，它们在受到外界环境因素影响时，肝细胞结构发生改变，肝细胞膜通透性增高甚至破裂，导致ALT和AST迅速从胞浆和线粒体内跨膜进入血液，ALT和AST在血清中随之显著增加^[18]。本实验证实经过鬼箭羽醇提物低中高剂量对相应HF模型小鼠灌胃后，明显改善了不同药物剂量组小鼠的血清AST、ALT水平。通过查阅文献^[19]得知，HF的发生及发展中炎症途径起着关键作用，而直接促进HSCs活化的炎症因子TNF-α和IL-6参与并推动了HF进程。本实验中，经过鬼箭羽醇提物干预后的不同药物剂量组小鼠TNFα、IL-6呈现不同程度下降。由此可见鬼箭羽醇提物参与了抗HF肝损伤的过程。Hyp是一种仅存在于蛋白质中的特殊氨基酸成分，它可以作为衡量体内胶原蛋白分解代谢基本情况的依据^[20]。与MG相比，3组不同药物浓度组（EA-L、EAM、EA-H）的Hyp都有明显下降。当肝脏受到损伤时，活化的HSCs是产生ECM的主要细胞^[21]，HSCs被激活后，转换为肌成纤维化细胞，使α-SMA高表达并迁移到组织修复部位，分泌CollagenⅠ和CollagenⅢ^[22-23]。TGFβ1是关键的促纤维化因子，它能够通过激活HSCs进而促进成纤维细胞的增殖和ECM的分泌，引发HF的发生^[24]。本实验研究结果显示，鬼箭羽醇提物能以显著且呈剂量相关的方式降低重要的促HF因子TGFβ1的含量、HSCs激活标志物α-SMA的表达以及细胞外基质CollagenⅠ的沉积，证实鬼箭羽醇提物能改善CCl₄诱导的HF模型小鼠HF水平。

RhoA/ROCK通路调节细胞的多种生物功能，包括增殖、分化、基因表达等，同时具有调控HSCs活化、增殖和收缩的功能，被视为HF的重要机制之一^[25-26]。当RhoA被各种细胞因子被激活时，与下游效应分子ROCK结合后，细胞内钙离子水平升高，分子中的多个氨基酸磷酸化而被激活，激活的ROCK使得肌球蛋白磷酸酶（Myosin phosphatase，MLCP）磷酸化而失活，失活的MLCP不能将MLC脱磷酸化从而使得胞浆磷酸化肌球蛋白轻链（Phospho-myosin light chain，p-MLC）含量增多，或直接使MLC磷酸化，p-MLC增多，促使肌动-肌球蛋白相互作用增加，肌动蛋白骨架随之聚合，大量HSCs被激活，ECM沉积，最终引发HF^[25，27-29]。ROCK主要有两种异构体（ROCK I和ROCKⅡ）。ROCK I在一些特定的部位例如肝、脑、肺、肾等含量最高^[30]，ROCK Ⅱ在脑和心脏中表达更多^[31]。TGF-β1被证实是最有效的促HF因子^[32]，同时已有相关研究证实TGF-β1也可激活Rho A/ROCK 信号通路^[33-34]，但TGF-β1与Rho/ROCKI信号通路的关系在HF进程中的作用尚未见报道。本实验研究发现，与MG相比，EA-L、EA-M、EA-H的TGF-β1含量逐渐下降，Rho A、ROCKⅠ蛋白表达呈现剂量依赖性递减，P-MLC的蛋白表达趋势与Rho A、ROCKⅠ蛋白表达趋势相同，同时Rho A、ROCKⅠ的mRNA表达趋势也与以上一致，推测TGF-β1可能激活Rho A/ROCK信号通路后，经过一系列生化反应，导致MLC磷酸化，影响肌动蛋白微丝骨架聚合，最终诱发大量HSCs活化而发生HF。

综上所述，鬼箭羽醇提物对CCl₄诱导HF模型小鼠的肝脏损伤和HF具有治疗作用，其机制与抑制Rho A/ROCK信号通路有关，提示鬼箭羽抗HF与Rho A/ROCK信号通路的抑制密切相关，这指向鬼箭羽中另一活性成分的靶向作用，这为鬼箭羽研究指明了另一研究方向。本研究团队已经探明鬼箭羽抗HF机制系其多成分分别对应多通路途径，如万星等^[4]研究发现鬼箭羽醇提物、二氢槲皮素、山柰酚、儿茶素可通过抑制TβR1-Smad2/3、TNF-α-NF-κB、PARP1-Caspase3信号通路改善HF，王咏兰等^[6]证实鬼箭羽醇提物抑制JAK2、STAT3蛋白表达从而抑制肝星状细胞激活，最终影响HF发展；ZENG H H等^[7]发现金丝桃苷可通过影响PARA-1-HMGB1信号通路延缓HF进程等，这些通路的影响证实了鬼箭羽抗HF的机制系其多成分多靶点互补共同实现的。本课题组针对鬼箭羽的系列研究表明：一方面，大量研究表明，多味中药或中药多成分在治疗多种疾病中均具有理想的疗效，但将其关键活性成分提取后的单体成分效果却并不理想，此研究表明，多成分多靶点互补效应既印证了中药在宏观上必须遵循君臣佐使传统配伍与中药引经配伍等理论基础的正确性，又将其理论向现代微观医学分子对接和分子动力学理论深化并轨，还为中医理论现代化发展指明了新方向，这应该是中医理论对微观理论早期认识的精髓所在，将从宏观的多味中药君臣佐使配伍与早期引经理论认识跨越到微观多成分君臣佐与分子引经多靶点互补效应认识。另一方面在已经明确鬼箭羽现有二氢槲皮素、山柰酚、儿茶素、金丝桃苷等成分的基础上，鉴于王咏兰等^[6]证实鬼箭羽醇提物抑制JAK2/STAT3逆转HF以及本研究再次证实鬼箭羽在抗HF中对Rho-ROCK、MLC的影响，其相关对应活性成分的明确，是本团队在今后研究中的又一新方向。

基金

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国家自然科学基金项目(82060745)

参考文献

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文献

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2025年第43卷第8期

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doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.027

首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-08-10

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出版历史

基金

国家自然科学基金项目(82060745)

作者信息

湖北民族大学医学部，湖北恩施 445000

通讯作者:

黄德斌（1965-），男，湖北恩施人，教授，硕士研究生导师，硕士，研究方向：民族中医药。E-mail：hdb66910@163.com。

参考文献

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/zhzyyxk/CN/10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.027

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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