中华中医药学刊

目的基因	上游引物序列（5’→3’）	下游引物序列（5’→3’）
HIF-1α	GGCGAAGCAAAGAGTCTGAAGT	TAGCACCATAACAAAGC CATCC
HO-1	TAAGACCGCCTTCCTGCTCAA	ACGGTCGCCAACAGGAAACT
GAPDH	CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG	GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT

目的基因	上游引物序列（5’→3’）	下游引物序列（5’→3’）
HIF-1α	GGCGAAGCAAAGAGTCTGAAGT	TAGCACCATAACAAAGC CATCC
HO-1	TAAGACCGCCTTCCTGCTCAA	ACGGTCGCCAACAGGAAACT
GAPDH	CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG	GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT

五味子合剂对糖尿病肾病大鼠氧化应激与铁死亡的影响及机制

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张术姣 ¹^,² , 张帅星 ¹^,² , 曹梓静 ¹^,² , 白雪慧 ¹^,² , 吴玲 ¹^,² , 邓媛媛 ³ , 张赛 ⁴ , 马钰 ⁴ , 刘伟敬 ¹^,² , 张勉之 ³^,⁴

中华中医药学刊 | 国家项目点击 2025,43(8): 111-115

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五味子合剂对糖尿病肾病大鼠氧化应激与铁死亡的影响及机制

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张术姣¹^,², 张帅星¹^,², 曹梓静¹^,², 白雪慧¹^,², 吴玲¹^,², 邓媛媛³, 张赛⁴, 马钰⁴, 刘伟敬¹^,², 张勉之³^,⁴

作者信息

^1.北京中医药大学东直门医院，北京 100700

^2.北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室，北京 100700

^3.北京中医药大学东方医院，北京 100078

^4.天津中医药研究院，天津 300120

通讯作者:

张勉之（1973-），男，天津人，主任医师，博士研究生导师，博士，研究方向：中西医结合防治肾脏疾病的基础和临床。E-mail：zhangmianzhi@vip.sina.com。

作者简介:

张术姣（1992-），女（土家族），湖北恩施人，博士在读，研究方向：中西医结合防治肾脏疾病。

Effect and Mechanism of Schisandrae Mixture（五味子合剂）on Oxidative Stress and Ferroptosis in Diabetic Nephropathy Rats

Shujiao ZHANG¹^,², Shuaixing ZHANG¹^,², Zijing CAO¹^,², Xuehui BAI¹^,², Ling WU¹^,², Yuanyuan DENG³, Sai ZHANG⁴, Yu MA⁴, Weijing LIU¹^,², Mianzhi ZHANG³^,⁴

Affiliations

^1.Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100700，China

^2.Key Laboratory of Chinese Internal Medicine of Ministry of Education，Beijing Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100700，China

^3.Dongfang Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100078，China

^4.Tianjin Academy of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300120，China

出版时间: 2025-08-10 doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.023

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摘要

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目的

探讨五味子合剂（Schisandrae mixture，SM）对糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）大鼠肾脏的保护作用及机制。

方法

将60只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、达格列净（Dagliquin，DA）组、SM高剂量（SMH）组、SM中剂量（SM-M）组、SM低剂量（SM-L）组，高糖高脂饲料联合链脲佐菌素（Streptozocin，STZ）诱导造模。每4周检测血糖（Glu）、24 h尿蛋白定量（24 hUTP）；给药12周后，称取肾质量，采集血清及肾组织，计算肾脏指数（Kidney index，KI）；检测血肌酐（Serum creatinine，Scr）、血尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）；苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）、六胺银（Silver hexamine，PASM）及马松（Masson）染色观察肾组织病理形态；相应试剂盒检测肾组织丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）及谷胱甘肽（Glutathione，GSH）水平；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western Blotting（WB）检测肾组织中缺氧诱导因子-1α（Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）、血红素氧合酶1（Heme Oxygenase-1，HO-1）的mRNA及蛋白表达量；免疫组化检测肾组织谷胱甘肽过氧化物酶4（Glutathione Peroxidase 4，GPX4）及酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（Acyl-CoA synthetase long-chain family member 4，ACSL4）水平。

结果

与对照组相比，模型组病理损伤明显加重；Glu、24hUTP、Scr、BUN及KI明显升高，MDA水平明显升高，SOD、GSH水平明显降低，HIF-1α和HO-1的蛋白及mRNA表达水平明显升高，GPX4表达水平明显降低，ACSL4表达水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比，DA组及SM各组病理损伤明显减轻；Glu、24hUTP、Scr、BUN和KI均降低，肾组织MDA水平降低，SOD、GSH水平增高，其中以SM-H组上述各指标变化最为明显，并且除SM-L组BUN、MDA及SOD外均有统计学意义（P<0.05）；SM-H组HIF-1α和HO-1的蛋白及mRNA水平明显升高，GPX4表达水平明显升高，ACSL4表达水平明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。

结论

SM对DN具有一定肾保护作用，可能与调控HIF-1α/HO-1通路减轻氧化应激及调控GPX4/ACSL4通路抑制铁死亡有关。

关键词

糖尿病肾病 / 五味子合剂 / 氧化应激 / 铁死亡 / HIF-1α/HO-1通路 / GPX4/ACSL4通路

Abstract

收起

Objective

To investigate the protective effect and mechanism of Schisandrae Mixture（五味子合剂，SM）on the kidneys of diabetic nephropathy（DN）rats.

Methods

Sixty male SPF SD rats were randomly divided into control group，model group，dapagliflozin（DA）group，SM high-dose（SM-H）group，SM medium-dose（SM-M）group and SM low-dose（SML）group.The model was induced by a high-sugar and high-fat diet combined with streptozotocin（STZ）.Blood glucose（Glu）and 24-hour urinary protein（24 h UTP）were measured every 4 weeks.After 12 weeks of administration，the kidney was weighed，the serum and kidney tissue were collected，and the kidney index（KI）was calculated.The levels of serum creatinine（Scr）and blood urea nitrogen（BUN）were detected.Hematoxylin-eosin（HE），silver hexamine（PASM）and Masson staining were used to observe the pathological morphology of renal tissue.The levels of malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD）and glutathione（GSH）in renal tissue were detected by corresponding kits.The mRNA and protein expression of hypoxia-inducible factor-1α（HIF-1α）and heme oxygenase-1（HO-1）in renal tissue were detected by real-time fluorescence quantitative PCR（qRT-PCR）and Western Blotting（WB）.The levels of glutathione peroxidase 4（GPX4）and acyl-CoA synthetase long-chain family member 4（ACSL4）in renal tissue were detected by immunohistochemistry.

Results

Compared with those of the control group，the pathological damage of the model group was significantly aggravated；the levels of Glu，24 h UTP，Scr，BUN and KI were significantly increased，MDA level was significantly increased，the levels of SOD and GSH were significantly decreased，HIF-1αand HO-1 protein and mRNA expression levels were significantly increased，GPX4 expression level was significantly decreased，ACSL4 expression level was significantly increased（P<0.05）. Compared with those of the model group，the pathological damage of DA group and SM group was significantly reduced；the levels of Glu，24 h UTP，Scr，BUN and KI were decreased，the level of MDA in renal tissue was decreased，and the levels of SOD and GSH were increased.Among them，the changes of the above indexes in SM-H group were the most obvious，and there was statistical significance except for BUN，MDA and SOD in SM-L group（P<0.05）.The protein and mRNA levels of HIF-1αand HO-1 in the SM-H group were significantly increased，the expression level of GPX4 was significantly increased，and the expression level of ACSL4 was significantly decreased（P<0.05）.

Conclusion

SM has a certain renal protective effect on DN，which may be related to regulating HIF-1α/HO-1 pathway to reduce oxidative stress and regulating GPX4/ACSL4 pathway to inhibit ferroptosis.

Key words

diabetic nephropathy / Schisandrae Mixture（五味子合剂） / oxidative stress / ferroptosis / HIF-1α/HO-1 pathway / GPX4/ACSL4 pathway

引用本文

张术姣, 张帅星, 曹梓静, 白雪慧, 吴玲, 邓媛媛, 张赛, 马钰, 刘伟敬, 张勉之. 五味子合剂对糖尿病肾病大鼠氧化应激与铁死亡的影响及机制. 中华中医药学刊, 2025 , 43 (8) : 111 -115 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.023

Shujiao ZHANG, Shuaixing ZHANG, Zijing CAO, Xuehui BAI, Ling WU, Yuanyuan DENG, Sai ZHANG, Yu MA, Weijing LIU, Mianzhi ZHANG. Effect and Mechanism of Schisandrae Mixture（五味子合剂）on Oxidative Stress and Ferroptosis in Diabetic Nephropathy Rats[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2025 , 43 (8) : 111 -115 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.023

正文

收起

糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）是糖尿病（Diabetes mellitus，DM）严重的微血管并发症，是终末期肾脏病（Endstage renal disease，ESRD）的主要病因^[1]。DN的主要病理特征为肾小球基底膜增厚、细胞外基质和系膜扩张、肾小球硬化并伴有不同程度的肾间质和肾小管损害^[2]。DN发病机制复杂，可能与遗传、缺氧、糖代谢紊乱、血流动力学异常、糖基化终产物、内质网应激和氧化应激等因素相关^[3]。越来越多的研究证据表明，氧化应激及其驱动的铁死亡是DN发生发展的关键因素^[4-5]。中医药治疗具有多靶点、多通路的特点。现代研究表明，一些中医临床验方可通过抑制氧化应激和铁死亡发挥肾脏保护作用^[6-7]。五味子合剂（Schisandrae mixture，SM）是在国医大师张大宁教授“补肾活血法”指导下创立的治疗DN的基础方剂，由五味子（Schisandrae Chinensis Fructus）、川芎（Chuanxiong Rhizoma）、牡蛎（Ostreae Concha）按3∶2∶1的比例组成，方中五味子为主药，功效强阴益精，滋肾补水；川芎活血行气，祛瘀通络；牡蛎味咸入肾，敛涩固精，三药共奏补肾活血之功。临床研究表明SM对DN透析前患者的临床症状及实验室检验指标均有改善作用^[8]。本研究以DN模型大鼠为研究对象，旨在探讨SM基于氧化应激及铁死亡对DN的肾保护作用及机制，为其临床应用提供科学依据。

1　材料

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1.1　动物

SPF级SD雄性大鼠60只，6～8周龄，体质量（200±20）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2021-0011。本研究已通过北京中医药大学东方医院动物保护和伦理委员会批准（DFYY202102R）。

1.2　药品与试剂

五味子、川芎、牡蛎（天津市中药饮片厂，批号：G2011040-03、9210800101、G2104019-01）；达格列净（Dagliquin，DA，阿斯利康制药有限公司，批号：LP2385）；链脲佐菌素（Streptozocin，STZ，美国Sigma公司，批号：S0130）；肌酐（Serum creatinine，Scr）测定试剂盒、尿蛋白定量测试盒、尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）试剂盒、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）测定试剂盒、总超氧化物歧化酶（T-SOD）测试盒、还原型谷胱甘肽（Glutathione，GSH）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：C011-2-1、C035-2-1、C013-2-1、A003-4、A001-3-2、A006-2-1）；苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色试剂盒、六胺银（silver hexamine，PASM）染色试剂盒、马松（Masson）染色试剂盒（武汉Servicebio公司，批号：G1003、G1059、G1006）；BCA蛋白定量试剂盒（上海雅酶生物医药科技有限公司，批号：ZJ102）；缺氧诱导因子-1α（Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）抗体（美国Cell Signaling Technology公司，批号：14179）；血红素氧合酶1（Heme Oxygenase-1，HO-1）抗体、β-actin抗体、辣根酶标记山羊抗兔IgG二抗（美国Proteintech公司，批号：10701-1-AP、66009-1、SA00001-2）；谷胱甘肽过氧化物酶4（Glutathione Peroxidase 4，GPX4）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（Acyl-CoA synthetase long-chain family member 4，ACSL4）（英国Abcam公司，批号：ab125066、ab155282）。

1.3　仪器

血糖仪、血糖试纸（罗氏血糖健康医护公司）；SCIENTZ-48高通量组织研磨器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；高压灭菌锅（日本Sanyo公司）；高速低温冷冻离心机（德国Eppendorf公司）；多功能酶标仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）；超微量分光光度计（上海析谱仪器有限公司）；电热恒温金属浴（杭州奥盛仪器有限公司）；PCR仪、SDS-PAGE电泳仪与转膜系统（美国Bio-Rad公司）；全自动化学发光图像分析仪（上海Tanon科技公司）；石蜡包埋机、轮转切片机、组织摊片机（德国Leica公司）；CX31正置显微镜（日本Olympus公司）。

2　方法

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2.1　药物制备

SM于天津药物研究所制备，采用乙醇回流提取法收集。SM中五味子、川芎及牡蛎比例为（3∶2∶1）。将90%乙醇加入药材。然后进行2次回流提取（3 h/次）。将2次醇提液混匀、过滤，除去乙醇后浓缩成最终提取物。最后将滤液浓缩至1 g/mL，并于-20℃冰箱储存备用。经超高效液相色谱-串联质谱法分析，SM中主要成分包括五味子乙素、杨梅酮、洋川芎醌和脱氧三尖杉酯碱等^[9]。

2.2　造模、分组及给药

适应性饲养7 d后，将60只大鼠随机分为对照组10只和高糖高脂饮食组50只。高糖高脂饮食组给予高糖高脂饲料至实验结束，对照组同步给予普通饲料。4周后，所有大鼠禁食12 h，高糖高脂饮食组一次性腹腔注射STZ（35 mg/kg，溶解于柠檬酸钠缓冲液中，现配现用），对照组同步腹腔注射等体积柠檬酸钠缓冲液。造模结束3 d后尾静脉采血检测血糖，连续3 d随机血糖≥16.7 mmo1/L^[10]。随后将此50只大鼠随机分为模型组、达格列净（Dagliquin，DA）组、SM高剂量（SM-H）组、SM中剂量（SM-M）组及SM低剂量（SM-L）组，每组10只。3 d后开始给药：SM组以SM溶液（溶于双蒸水）灌胃，SM-L组1.5 g·kg^-1·d^-1，SM-M组3 g·kg^-1·d^-1，SM-H组6 g·kg^-1·d^-1；DA组以DA溶液（0.9 g·kg^-1·d^-1）灌胃，其他组同步以等体积双蒸水灌胃，连续给药12周。

2.3　样本采集

在第0、4、8、12周时将大鼠放入代谢笼中收集24 h尿液，并将尿样本于4℃离心机，3000 r/min离心10 min，记录尿量后取上清，-80℃保存。12周饲养结束时，麻醉后腹主动脉取血，将血液常温静置2 h后，4℃、3500 r/min离心15 min，取上清，-80℃保存。摘取双肾，去除周围血管、脂肪及包膜，称取肾脏质量，取左肾上段1/3放于4%多聚甲醛中固定48 h后进行组织脱水、石蜡包埋、切片，剩余肾脏组织存于-80℃冰箱。

2.4　一般情况及肾功能指标的检测

在第0、4、8、12周时测定各组大鼠体质量、Glu；根据相应试剂盒说明书检测血清及尿样本，并计算比较各组大鼠24 hUTP、Scr及BUN水平。肾脏指数（Kidney index，KI）＝右肾质量/体质量。

2.5　肾脏组织病理染色

根据试剂盒说明书，将3μm厚度的肾脏石蜡切片脱蜡至水，并进行HE、PASM及Masson染色，染色切片透明后用中性胶封保存。在光镜40倍下进行观察并拍照。

2.6　肾组织中MDA水平及SOD、GSH活性测定

称取约50 mg肾组织放入EP管中，以1∶9的比例加入预冷的生理盐水，经高通量组织研磨器碾磨，制成10%的组织匀浆，4℃、12 000 r/min离心15 min，取上清液，按照试剂盒说明书测定肾组织中MDA水平及SOD、GSH活性。

2.7　实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测

取1 mm³肾脏组织放入EP管中，加入RNA提取液，经高通量组织研磨器研磨后，4℃下12 000 r/min离心10 min，取上清，根据RNA提取步骤进行操作。提取完成后用超微量分光光度计测RNA浓度，将浓度过高的RNA稀释，使其终浓度为200 ng/μL。进行反转录（20μL体系）合成cDNA。取0.1 mL PCR反应板，依据说明书配制反应体系，点完样用PCR封板膜配合封膜仪完成封膜，并用微孔板离心机离心，于qRT-PCR仪上完成扩增。结果以目的基因与GAPDH的相对表达量表示。引物序列见表1。

2.8　Western Blotting检测HIF-1α、HO-1蛋白表达

剪取1 mm³肾脏组织加入RIPA裂解液经过研磨，静置离心后取上清液，BCA蛋白定量后，置于恒温金属浴中使蛋白变性。制备10%SDS-PAGE凝胶，加入蛋白样本，电泳并转至NC膜，5%牛奶封闭，加入HIF-1α和HO-1一抗，置于摇床4℃过夜孵育，次日TBST洗涤后加入对应二抗，室温慢摇1 h，洗涤后用ECL发光液进行显色，全自动化学发光图像分析仪曝光。采用Image J 1.8.0软件进行灰度分析。

2.9　免疫组化检测GPX4、ACSL4表达

石蜡切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇复水，使用3%双氧水溶液进行内源性过氧化物酶淬灭处理，在0.01 mmol/L枸橼酸盐中进行高压抗原修复，3%胎牛血清白蛋白封闭；滴加一抗，4℃孵育过夜；滴加二抗，37℃孵育30 min；滴加新鲜配制的DAB显色液染色，5 min后苏木素染液复染3 min；脱水封片后于光镜40倍下进行观察并拍照；采用Image J软件分析图片平均吸光度（A）值，平均A值为图片上各点的A值之和除以目标分布区域的面积^[11]。

2.10　统计学方法

采用SPSS 25.0软件进行统计分析，数据均以

表示；GraphPad Prism 8.0软件进行图形绘制。多组间比较采用单因素方差分析（One-way ABOVA），若方差齐性不成立，则选取Tamhane T2检验；若方差齐性成立，选取LSD检验。

3　结果

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3.1　SM对DN大鼠Glu、24 hUTP、肾功能指标及KI的影响

与对照组相比，模型组Glu、24hUTP、Scr、BUN、KI明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，DA组及SM各组的上述指标均降低，除SM-L组BUN外差异均有统计学意义（P<0.05）；其中以SM-H组上述各指标变化最为明显。结果见插页ⅩⅩⅩⅣ图1。

3.2　SM对DN大鼠肾组织病理形态的影响

对照组的肾小球、肾小管大小及形态均无明显变化。与对照组相比，模型组HE染色可见肾小球体积增大，鲍氏囊腔扩大，肾小管扩张，肾小管上皮细胞出现肿胀、空泡变性及脱落；PASM染色可见肾小球系膜增宽、系膜基质增生，肾小球基底膜增厚；Masson染色可见细胞结构排列紊乱，大量蓝色胶原纤维沉积。与模型组相比，DA组及SM各组上述病理损伤均有所减轻，其中，SMH组病理损伤减轻最为明显。结果见插页ⅩⅩⅩⅤ图2。

3.3　SM对DN大鼠肾组织氧化应激水平的影响

与对照组比较，模型组肾脏组织中MDA含量明显升高，SOD、GSH含量均明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，DA组、SM-H组及SM-M 组肾脏组织中MDA含量降低，SOD、GSH含量均升高，SM-L组GSH含量明显升高，差异有统计学意义（P<0.05），但SM-L组MDA及SOD无明显变化，差异无统计学意义；其中以SM-H组上述各指标变化最为明显。结果见插页ⅩⅩⅩⅣ图3。

3.4　SM对DN大鼠肾组织HIF-1α、HO-1 mRNA及蛋白表达量的影响

与对照组比较，模型组肾脏组织中HIF-1α和HO-1 mRNA及蛋白表达量均明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组相比，SM-H组肾脏组织中HIF-1α和HO-1 mRNA及蛋白表达均明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。结果见插页ⅩⅩⅩⅥ图4。

3.5　SM对DN大鼠肾组织GPX4、ACSL4表达水平的影响

使用免疫组化检测各组大鼠肾脏组织中GPX4、ACSL4的表达，如插页ⅩⅩⅩⅥ图5所示，与对照组比较，GPX4表达明显降低，ACSL4表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组相比，SM-H组大鼠肾脏组织中GPX4表达明显升高，ACSL4表达明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结果见插页ⅩⅩⅩⅥ图5。

4　讨论

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DN以蛋白尿、水肿、腰膝酸软、乏力等为主要临床表现，故可归属于中医学“尿浊”“水肿”“肾劳”“消瘅”等范畴。《圣济总录·卷第五十八·消渴门》云：“消渴……久则渗漏脂膏，脱耗精液，下流胞中，与水液混浊，随小便利下膏凝”，由此可见，DN是由DM迁延不愈所致，病位在肾，肾元亏虚，封藏失职，精微不固，从小便而泄，则出现蛋白尿。王清任《医林改错》谓：“元气既虚，必不能达到于血管，血管无气必停留而为瘀”，由此可见，肾元亏虚亦可阻碍气血运行，导致血瘀的发生。国医大师张大宁教授在20世纪70年代开展证候学调查发现，绝大多数DN患者均存在着不同程度的“肾虚与血瘀”。在此基础上，张大宁教授结合临床经验提出“肾虚血瘀”理论，认为“肾虚血瘀”是DN的核心病机，“补肾活血”为DN的基本治法，SM为DN治疗的基础方剂^[12]。本研究中，DA及SM干预后DN大鼠Glu、24hUTP、Scr、BUN及KI明显降低，肾组织病理损伤明显减轻，且以SM-H组效果最为明显，提示SM对DN有一定的肾保护作用。但其机制有待进一步探讨。

氧化应激是指在各种病理状态下（如高血糖、应激等），机体产生过量的体内活性氧（ROS）无法被及时清除，使蛋白质、脂质、核酸等受到损伤，导致蛋白质变性和脂质过氧化的过程^[13]。DN出现氧化应激与ROS增多和抗氧化能力下降有关^[14]。研究表明^[15-17]，高血糖诱导肾脏细胞产生过量ROS，ROS可以刺激多种氧化应激相关信号分子的产生，导致炎症细胞聚集和多种细胞因子释放，激活炎症反应及进一步的氧化应激，加重肾脏损伤。MDA与SOD、GSH是评价机体氧化应激水平的重要指标，其中MDA是脂质过氧化的终产物，是反映组织ROS水平和细胞氧化损伤程度的指标之一。SOD是一种生物体内清除超氧阴离子自由基的重要抗氧化酶，可以保护细胞免受氧自由基的损害。GSH是体内主要的抗氧化剂，能够减轻机体氧化应激反应程度^[18]。董奥等^[19]研究表明，五味子醇提液能够降低DN模型小鼠MDA水平，减轻氧化应激对肾组织的损伤。赵同峰^[20]研究表明，阿魏酸钠（川芎主要成分阿魏酸的钠盐）有降低DM模型大鼠肾脏MDA水平和提高SOD的作用，从而增强肾脏抗氧化能力，减少氧自由基对肾脏的损害。陆颖翀^[21]研究表明，牡蛎壳及杨桃提取物为主要成分的牡杨水提物可以提高DM小鼠血清SOD活性和GSH含量，具有清除自由基、提高机体抗氧化能力的作用。在本研究中，与对照组相比，模型组肾脏组织中MDA含量明显增加，SOD、GSH含量明显减少，说明DN大鼠体内存在严重的氧化应激反应，且抗氧化能力减弱，而DA及不同剂量SM干预后MDA含量减少，SOD、GSH含量明显增加，并以SM-H组最为明显，说明不同剂量的SM能在不同程度上有效改善DN大鼠体内的氧化应激，增强抗氧化能力，但高剂量SM效果相对最佳。据此我们在接下来的研究中主要使用高剂量SM对相关机制进行深入探讨。

研究表明，在单次大剂量STZ诱导的1型DN大鼠模型^[22-23]及高糖高脂饮食联合小剂量STZ腹腔注射的2型DN大鼠模型^[24]中，HIF-1α、HO-1表达显著增加。HIF-1α是机体适应氧损伤的重要调节因子，HO-1则是受其调控的下游靶基因之一，也是关键的抗氧化酶，HIF-1α/HO-1激活可促进下游SOD、GSH-PX等抗氧化酶表达，提高机体抗氧化能力^[25]。宋玮等^[26]研究发现DN模型大鼠肾组织存在氧化应激损伤，同时HO-1、HIF-1α蛋白表达量显著增加，这可能是机体在DN损伤状态下为了增强自身抗氧化能力而产生的一种应激反应。另有研究表明^[27]，HIF-1α的不稳定性及其下游代偿途径的丧失是DN的早期致病机制，而增强HIF-1α水平能够明显延缓DN的进展^[28-31]。刘清岩等^[32]研究表明，HO-1基因过表达载体转染鼠源骨髓间充质干细胞（BMSCs）可以抑制Caspase-3的表达，从而抑制细胞的凋亡，保护肾小球基底膜，对DN大鼠起一定的保护作用。在本研究中，与对照组相比，模型组肾脏组织中的HIF-1α和HO-1的mRNA和蛋白表达明显升高，说明DN大鼠肾脏HIF-1α/HO-1信号通路被激活，这将可能进一步增强机体的抗氧化能力以达到自我保护的目的；而与模型组比较，SM-H组HIF-1α和HO-1蛋白及mRNA表达明显升高，说明高剂量SM能够进一步激活HIF-1α/HO-1信号通路，这可能使机体的抗氧化能力在原有基础上变得更强以减轻氧化应激导致的肾损伤。

由氧化应激所导致的脂质过氧化物堆积会诱导铁死亡的发生^[5]，并且铁死亡被认为在DN的发生发展中起着重要作用^[4]。GPX4/ACSL4通路是调节铁死亡的关键通路，其中GPX4是铁死亡中的关键调控因子，也是细胞内重要的抗氧化物酶，可抑制脂质过氧化物的毒性，清除铁蓄积产生的脂质过氧化物^[33]。而ACSL4则是参与合成膜磷脂氧化来调控铁死亡的关键因子，能够促进多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，参与磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇等易氧化膜磷脂的合成，促进铁死亡的发生^[11]。有学者^[34]发现DN模型小鼠肾组织中脂质过氧化产物和铁含量增加，同时ACSL4表达水平升高，GPX4表达水平降低。韩佳瑞等^[35]发现DN模型大鼠肾组织中GPX4蛋白及其mRNA表达水平降低，而ACSL4蛋白及其mRNA表达水平升高。杨素清等^[36]发现五味子乙素能够上调GPX4 mRNA及蛋白的表达抑制铁死亡减轻DM小鼠心肌损伤。郑琳琳等^[37]发现补阳还五汤通过上调GPX4表达和下调ACSL4表达抑制铁死亡，减轻MDA含量，提高GSH活性，减轻氧化应激损伤，改善DN小鼠肾组织病理损伤。本研究的免疫组织化学染色结果提示，与对照组比较，模型组GPX4蛋白表达水平显著降低，ACSL4蛋白表达水平显著增加，说明DN大鼠肾脏组织中GPX4/ACSL4通路被抑制；与模型组比较，SM-H组肾脏GPX4蛋白表达水平明显升高，ACSL4蛋白表达水平显著降低，说明高剂量SM可能通过激活GPX4/ACSL4通路进而抑制了铁死亡的发生。

综上所述，SM对DN具有一定的肾保护作用，其机制可能与调控HIF-1α/HO-1通路减轻氧化应激，以及调控GPX4/ACSL4通路抑制铁死亡有关。

基金

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国家自然科学基金项目(82074242; 82074361; 82374382)
天津市中医药研究院附属医院科研项目(2022008)
北京中医药大学“解码中医”揭榜挂帅项目(2023-JYB-JBZD-037)

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2025年第43卷第8期

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doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.08.023

首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-08-10

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北京中医药大学“解码中医”揭榜挂帅项目(2023-JYB-JBZD-037)

作者信息

^1.北京中医药大学东直门医院，北京 100700

^2.北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室，北京 100700

^3.北京中医药大学东方医院，北京 100078

^4.天津中医药研究院，天津 300120

通讯作者:

张勉之（1973-），男，天津人，主任医师，博士研究生导师，博士，研究方向：中西医结合防治肾脏疾病的基础和临床。E-mail：zhangmianzhi@vip.sina.com。

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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