中华中医药学刊

组别	n	OD值
正常对照组	5	2.74±0.02
正常+W组	5	3.77±0.03^①
miR-133过表达组	5	3.25±0.05^①②
miR-133过表达+W组	5	4.83±0.04^①②③
ADR组	5	1.04±0.03^①②③④
ADR+W组	5	1.89±0.04^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	1.44±0.02^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	2.34±0.01^{①②③④⑤⑥⑦}

组别	n	OD值
正常对照组	5	2.74±0.02
正常+W组	5	3.77±0.03^①
miR-133过表达组	5	3.25±0.05^①②
miR-133过表达+W组	5	4.83±0.04^①②③
ADR组	5	1.04±0.03^①②③④
ADR+W组	5	1.89±0.04^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	1.44±0.02^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	2.34±0.01^{①②③④⑤⑥⑦}

组别	n	NT-proBNP/（pg/mL）
正常对照组	5	22.32±0.41
正常+W组	5	14.12±0.23^①
miR-133过表达组	5	18.27±0.32^①②
miR-133过表达+W组	5	10.28±0.42^①②③
ADR组	5	38.74±0.50^①②③④
ADR+W组	5	29.87±0.53^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	34.56±0.42^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	25.67±0.23^{①②③④⑤⑥⑦}

组别	n	NT-proBNP/（pg/mL）
正常对照组	5	22.32±0.41
正常+W组	5	14.12±0.23^①
miR-133过表达组	5	18.27±0.32^①②
miR-133过表达+W组	5	10.28±0.42^①②③
ADR组	5	38.74±0.50^①②③④
ADR+W组	5	29.87±0.53^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	34.56±0.42^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	25.67±0.23^{①②③④⑤⑥⑦}

组别	n	lncRNA malat-1	miR-133	ERK1/2mRNA
正常对照组	5	1.51±0.05	1.86±0.03	1.01±0.05
正常+W组	5	0.82±0.02^①	2.68±0.02^①	1.02±0.03
miR-133过表达组	5	1.17±003^①②	2.29±0.01^①②	1.00±0.07
miR-133过表达+W组	5	0.43±0.02^①②③	3.06±0.03^①②③	1.02±0.03
ADR组	5	3.95±0.03^①②③④	0.33±0.03^①②③④	0.98±0.06
ADR+W组	5	2.65±0.03^{①②③④⑤}	1.05±0.02^{①②③④⑤}	1.00±0.03
ADR+miR-133过表达组	5	3.20±0.02^{①②③④⑤⑥}	0.66±±.01^{①②③④⑤⑥}	0.96±0.04
ADR+miR-133过表达+W组	5	2.14±0.03^{①②③④⑤⑥⑦}	1.44±0.02^{①②③④⑤⑥⑦}	0.99±0.05

组别	n	lncRNA malat-1	miR-133	ERK1/2mRNA
正常对照组	5	1.51±0.05	1.86±0.03	1.01±0.05
正常+W组	5	0.82±0.02^①	2.68±0.02^①	1.02±0.03
miR-133过表达组	5	1.17±003^①②	2.29±0.01^①②	1.00±0.07
miR-133过表达+W组	5	0.43±0.02^①②③	3.06±0.03^①②③	1.02±0.03
ADR组	5	3.95±0.03^①②③④	0.33±0.03^①②③④	0.98±0.06
ADR+W组	5	2.65±0.03^{①②③④⑤}	1.05±0.02^{①②③④⑤}	1.00±0.03
ADR+miR-133过表达组	5	3.20±0.02^{①②③④⑤⑥}	0.66±±.01^{①②③④⑤⑥}	0.96±0.04
ADR+miR-133过表达+W组	5	2.14±0.03^{①②③④⑤⑥⑦}	1.44±0.02^{①②③④⑤⑥⑦}	0.99±0.05

组别	n	ERK1/2	p-ERK1/2
正常对照组	5	0.79±0.07	1.53±0.04
正常+W组	5	0.81±0.05	0.72±0.02^①
miR-133过表达组	5	0.77±0.04	1.14±0.03^①②
miR-133过表达+W组	5	0.74±0.05	0.31±0.03^①②③
ADR组	5	0.78±0.07	3.36±0.04^①②③④
ADR+W组	5	0.80±0.04	2.45±0.03^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	0.77±0.08	2.83±.01^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	0.80±0.05	1.95±0.03^{①②③④⑤⑥⑦}

组别	n	ERK1/2	p-ERK1/2
正常对照组	5	0.79±0.07	1.53±0.04
正常+W组	5	0.81±0.05	0.72±0.02^①
miR-133过表达组	5	0.77±0.04	1.14±0.03^①②
miR-133过表达+W组	5	0.74±0.05	0.31±0.03^①②③
ADR组	5	0.78±0.07	3.36±0.04^①②③④
ADR+W组	5	0.80±0.04	2.45±0.03^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	0.77±0.08	2.83±.01^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	0.80±0.05	1.95±0.03^{①②③④⑤⑥⑦}

基于LncRNA malat-1/miR-133通路调控p-ERK1/2探讨温阳振衰颗粒含药血清对阿霉素诱导H9C2心肌细胞损伤的影响

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王楠 ¹ , 唐燕萍 ² , 蔡虎志 ¹ , 陈新宇 ¹ , 李少东 ² , 陈雪靓 ²

中华中医药学刊 | 国家项目点击 2025,43(5): 89-93

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中华中医药学刊 |国家项目点击 2025 , 43 (5) : 89 -93

基于LncRNA malat-1/miR-133通路调控p-ERK1/2探讨温阳振衰颗粒含药血清对阿霉素诱导H9C2心肌细胞损伤的影响

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王楠¹, 唐燕萍², 蔡虎志¹, 陈新宇¹, 李少东², 陈雪靓²

作者信息

^1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙 410007

^2.湖南中医药大学中西医结合学院，湖南长沙 410208

通讯作者:

唐燕萍（1985-），女，湖南郴州人，副教授，硕士研究生导师，硕士，研究方向：中医药防治心脑血管疾病。E-mail：290881559@qq.com。

作者简介:

王楠（1993-），女，云南曲靖人，医师，博士，研究方向：中医药防治心脑血管疾病。

Effect of Wenyang Zhenshuai Granule（温阳振衰颗粒）Medicated Serum on Adriamycin Induced H9C2 Myocardial Cell Injury Based on LncRNA malat-1/miR-133 Pathway Regulating p-ERK1/2

Nan WANG¹, Yanping TANG², Huzhi CAI¹, Xinyu CHEN¹, Shaodong LI², Xueliang CHEN²

Affiliations

^1.The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410007，Hunan，China

^2.College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，Hunan，China

出版时间: 2025-05-10 doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.05.019

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摘要

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目的

基于长链非编码RNA（Long non-coding RNAs，LncRNA）肺腺癌转移相关转录子1（metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1，malat-1）/微小RNA-133（microRNA-133，miR-133）通路调控细胞外调节蛋白激酶1/2磷酸化（p-ERK1/2）探讨温阳振衰颗粒含药血清对阿霉素诱导H9C2心肌细胞损伤的影响。

方法

使用2.67μmol/L阿霉素（adriamycin，ADR）培养液共培养45 h以建立H9C2心肌细胞损伤模型并设置正常对照组、正常＋W 组（W：温阳振衰颗粒含药血清）、miR-133过表达组、miR-133过表达＋W 组、ADR组［ADR：阿霉素（adriamycin）］、ADR＋W组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋miR-133过表达＋W 组共8组。细胞增殖活性采用MTT法检测，N端B型脑钠肽前体（N-terminal B-type brain natriuretic peptide precursor，NT-proBNP）的变化采用ELISA法检测，各组H9C2心肌细胞lncRNA malat-1、miR-133以及ERK1/2 mRNA的含量采用Real-time PCR法检测，ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达采用Western blot检测。

结果

ADR组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达＋W 组、正常对照组、miR-133过表达组、正常＋W 组、miR-133过表达＋W 组心肌细胞活性依次增加（P<0.05）；NT-proBNP含量依次降低（P<0.05）。实验后各组心肌细胞ERK1/2 mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05），ADR组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达＋W 组、正常对照组、miR-133过表达组、正常＋W 组、miR-133过表达＋W 组miR-133表达依次增加（P<0.05）；lncRNA malat-1表达依次降低（P<0.05）。实验后各组心肌细胞ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）；ADR组、ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋miR-133过表达＋W 组、正常对照组、miR-133过表达组、正常＋W 组、miR-133过表达＋W 组p-ERK1/2蛋白表达依次降低（P<0.05）。

结论

温阳振衰颗粒含药血清能够降低心肌细胞p-ERK1/2蛋白表达从而对慢性心力衰竭发挥疗效，其机制可能是通过对心肌细胞中的lncRNA malat-1/miR-133通路进行调控而实现的。

关键词

慢性心力衰竭 / 温阳振衰颗粒含药血清 / H9C2心肌细胞 / 细胞外信号调节激酶1/2 / 微小RNA-133 / 肺腺癌转移相关转录子1

Abstract

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Objective

To explore the effect of Wenyang Zhenshuai Granule（温阳振衰颗粒）medicated serum on adriamycin induced H9C2 myocardial cell injury based on long non-coding RNAs（LncRNA）metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1（malat-1）/microRNA-133（miR-133）pathway regulating p-ERK1/2.

Methods

H9C2 myocardial cell injury model was established by coculture with 2.67μmol/L adriamycin（ADR）for 45 h and set up a normal control group，a normal＋W group（W：Wenyang Zhenshuai Granule medicated serum），an miR-133 overexpression group，an miR-133 overexpression＋W group，an ADR group，an ADR ＋W group，an ADR ＋miR-133 overexpression group，and an ADR ＋miR-133 overexpression＋W group. The cell proliferative activity was detected by MTT method，while the change of N-terminal B-type brain natriuretic peptide precursor（NT-proBNP）was detected by ELISA. The contents of lncRNA malat-1，miR-133 and ERK1/2 mRNA in H9C2 cardiomyocytes of each group were detected by RT-PCR. The protein expressions of ERK1/2 and p-ERK1/2 were detected by Western-blot.

Results

The myocardial cell activities in the ADR group，the ADR＋miR-133 overexpression group，the ADR＋W group，the ADR＋miR-133 overexpression＋W group，the normal control group，the miR-133 overexpression group，the normal＋W group and the miR-133 overexpression＋W group were increased in sequence（P<0.05）. The content of NT-proBNP was decreased in sequence（P<0.05）. After the experiment，there was no significant difference in ERK1/2 mRNA expression in myocardial cells among different groups（P>0.05）. The expression of the miR-133 in ADR group，the ADR＋miR-133 overexpression group，the ADR＋W group，the ADR＋miR-133 overexpression＋W group，the normal control group，the miR-133 overexpression group，the normal＋W group and the miR-133 overexpression＋W group increased in sequence（P<0.05）. The expression of LncRNA malat-1 was decreased in sequence（P<0.05）. There was no significant difference in ERK1/2 protein expression in myocardial cells among different groups after the experiment（P>0.05）. The p-ERK1/2 protein expression levels in the ADR group，the ADR＋W group，the ADR＋miR-133 overexpression group，the ADR＋miR-133 overexpression＋W group，the normal control group，the miR-133 overexpression group，the normal＋W group and the miR-133 overexpression＋W group were decreased in sequence（P<0.05）.

Conclusion

Wenyang Zhenshuai Granule medicated serum can reduce the expression of p-ERK1/2 protein in myocardial cells and exert the curative effect on chronic heart failure，which may be achieved by regulating the lncRNA malat-1/miR-133 pathway in myocardial cells.

Key words

chronic heart failure / Wenyang Zhenshuai Granule（温阳振衰颗粒）medicated serum / H9C2 cardiomyocytes / extracellular signal-regulated kinase 1/2 / microRNA-133 / metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1

引用本文

王楠, 唐燕萍, 蔡虎志, 陈新宇, 李少东, 陈雪靓. 基于LncRNA malat-1/miR-133通路调控p-ERK1/2探讨温阳振衰颗粒含药血清对阿霉素诱导H9C2心肌细胞损伤的影响. 中华中医药学刊, 2025 , 43 (5) : 89 -93 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.05.019

Nan WANG, Yanping TANG, Huzhi CAI, Xinyu CHEN, Shaodong LI, Xueliang CHEN. Effect of Wenyang Zhenshuai Granule（温阳振衰颗粒）Medicated Serum on Adriamycin Induced H9C2 Myocardial Cell Injury Based on LncRNA malat-1/miR-133 Pathway Regulating p-ERK1/2[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2025 , 43 (5) : 89 -93 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.05.019

正文

收起

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）已成为世界范围内严重的公共卫生问题^[1]，近年来的流行病学数据显示，我国心力衰竭的患病率为0.9%^[2]，每年有450万患者患有心力衰竭，约50万新发心衰病例^[3-4]。虽然手术治疗和药物干预可以显著降低患者死亡率，但该病的发病率仍在逐年增加。因此，阐明心衰的分子机制，探索防治心衰的新治疗策略至关重要。课题组前期通过动物实验研究发现^[5]，温阳振衰颗粒可以经长链非编码RNA（Long non-coding RNAs，LncRNA）肺腺癌转移相关转录子1（metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1，malat-1）/微小RNA-133（microRNA-133，miR-133）通路抑制细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白过度磷酸化从而治疗慢性心力衰竭，为了进一步验证该通路在慢性心力衰竭中的作用机制，我们进行了心肌细胞实验，现将结果报道如下。

1　材料与方法

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1.1　实验细胞

H9C2心肌细胞株由上海中乔新舟生物科技有限公司提供。

1.2　实验动物

清洁级（specific pathogen free，SPF）级6周龄健康SD雄性大鼠，体质量（180±10）g，购于上海莱斯克实验动物有限责任公司，质量合格证：1107271911002467。本实验方案和操作程序经湖南中医药大学实验动物伦理委员会批准，批准号：LL2020061001。

1.3　药物

温阳振衰颗粒（主要药物组成为制附子、红参、干姜、甘草等），批号：201709，规格：8 g/包，由湖南中医药大学第一附属医院制剂室提供；阿霉素（adriamycin，ADR），批号：201702，批准文号：国药准字H14023143，规格：每瓶10 mg，由山西普德药业股份有限公司生产。

1.4　主要仪器及试剂

细胞外调节蛋白激酶ERK1/2抗体及细胞外调节蛋白激酶ERK1/2磷酸化抗体，均由美国CST有限公司提供；DMEM 培养基由美国Sigma有限公司提供（D5796）；二甲基亚砜（DMSO）由美国VETEC有限公司提供（V900090）；N端B型脑钠肽前体（N-terminal B-type brain natriuretic peptide precursor，NT-proBNP）试剂盒由武汉华美生物工程有限公司提供（F13038789）；RIPA裂解液由中国abiowell有限公司提供（AWB0136）；mRNA（CW2569）、miRNA（CW2141）逆转录试剂盒、UltraSYBR Mixture（CW2601）、DM2000 Plus DNA Marker（CW0632）均由中国北京康为世纪有限公司提供。

倒置生物显微镜（北京中显恒业仪器，DSZ2000X型）；低速离心机（知信仪器，DSZ2000X型）；台式高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司，H1650R型）；全自动酶标洗板机（深圳市汇松科技发展有限公司，PW-812型）；电泳仪（深圳市汇松科技发展有限公司，PW-812型）；荧光定量PCR仪（美国ABI，QuantStudio1型）。

1.5　H9C2心肌细胞株的传代培养、转染

H9C2细胞培养于含10%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）＋1%双抗的DMEM培养基中，37℃，5%CO₂，饱和湿度培养箱中培养。直至细胞生长范围覆盖培养基70%～80%时，向其中加入1 mL 0.05%胰蛋白酶消化细胞后使用无菌枪头吹贴壁细胞使其从培养基脱落，制备单细胞悬液，取少许剩余的细胞悬液稀释后进行计数，根据细胞计数调整细胞浓度至合适的比例，种板后继续培养备用。

选取两个离心管，每管加95μL无血清DMEM培养基，然后往离心管中分别加入5μL的Lip2000和3μg的miR-133过表达质粒后轻轻混匀静置，然后将细胞加入到800μL对应基础培养基和混合液中培养备用。

1.6　含药血清的制备^[6]

用蒸馏水将温阳振衰颗粒按1.44 g/（kg·d）剂量标准配成6 mL溶液对大鼠进行灌胃处理，灌胃2次/d，每次3 mL，连续给药7 d后剥离其腹主动脉采血8～10 mL。以3000 r/min离心15 min，取上清在56℃下灭活处理30 min，抽滤除菌后进行分装，置-20℃冰箱保存备用，使用时配置为10%浓度进行实验。

1.7　心肌细胞损伤的诱导

向心肌细胞培养液中加入浓度配制为2.67μmol/L阿霉素培养液共培养45 h以建立心肌细胞损伤模型。

1.8　实验分组

实验分为8组：正常对照组：90%DMEM＋10%FBS；正常＋W 组（W：温阳振衰颗粒含药血清）：90%DMEM＋10%温阳振衰颗粒含药血清；miR-133过表达组：miR-133 mimic和 Lipofectamine2000 的混合液＋90%DMEM＋10%FBS；miR-133过表达＋W 组：miR-133 mimic和Lipofectamine2000的混合液＋90%DMEM＋10%FBS＋10%温阳振衰颗粒含药血清；ADR组［ADR：阿霉素（adriamycin）］：90%DMEM＋2.67μmol/L ADR；ADR＋W 组：90%DMEM ＋2.67μmol/L ADR＋10%温阳振衰颗粒含药血清；ADR＋miR-133过表达组：miR-133 mimic和Lipofectamine2000的混合液＋90%DMEM＋10%FBS＋2.67μmol/L ADR；ADR＋miR-133 过表达＋W 组：miR -133 mimic和 Lipofectamine2000的混合液＋90%DMEM＋10%FBS＋2.67μmol/LADR＋10%温阳振衰颗粒含药血清。

1.9　MTT检测各组H9C2细胞增殖活性

取以上分组细胞，用胰酶消化液消化细胞后进行计数，在96孔板内每孔注入5×10³个细胞，体积为100μL/孔，各组均设5个复孔，待细胞培养贴壁后按照上述分组方法进行相应时间操作后，在每孔中倒入5 mg/mL MTT 10μL/孔后放置在37℃，5%CO₂的培养箱中孵育，4 h后经离心后去掉上清，再将150μL二甲基亚砜注入到每孔中并混合均匀，在490 nm处使用Bio-Tek酶标仪测量吸光度（OD）值。

1.10　ELISA检测各组H9C2细胞NT-proBNP含量

用ELISA法检测NT-proBNP含量，按照ELISA试剂盒标准测取。

1.11　Real-time PCR检测各组H9C2细胞lncRNA malat-1、miR-133、ERK1/2mRNA的表达

采用Real-time PCR法检测，依据试剂盒说明书，用Trizol法提取心肌组织总RNA。用紫外分光光度计测定浓度，在260 nm与280 nm处测其吸光度值，并计算其浓度和纯度。RNA浓度（ng/μL）＝A260×稀释倍数×40，浓度在100 ～200 ng/uL，RNA 纯度＝OD260/OD280，比值为1.8～2.0。琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带，于凝胶成像系统下观察。按HiFiScript cDNA Synthesis试剂盒说明书合成cDNA，以cDNA为模板按UltraSYBR Mixture合成试剂盒说明书进行扩增。从NCBI基因库中获取lncRNA malat-1、miR-133和ERK1/2的基因序列，运用Primer5软件设计引物，由上海生工生物技术有限公司合成，依照PCR反应试剂盒说明书完成分析。lncRNA malat-1上游引物：5＇-AACAGGGAGGAGTGGGTG-3＇，下游引物：5＇-TCCCTGAAGGTGTCGTGCC-3＇，长度125 bp；miR-133上游引物：5＇-ACACTCCAGCTGGGAGCTGGTAAAAUGGAA-3＇，下游引物：5＇-TGGTGTCGTGGAGTCG-3＇，长度232 bp；内参5 s上游引物：5＇-GCCTACAGCCATACCACCCGGAA-3＇，下游引物：5＇-CCTACAGCACCCGGTATCCCA-3＇，长度116 bp；ERK1上游引物：5＇-GCTGCTGTGTCTTTATCTATCCC-3＇，下游引物：5＇-CTCCACCCCTCTGTAGCAC-3＇，长度103 bp；ERK2上游引物：5＇-TCATTCGCTGCAAGATGGAC-3＇，下游引物：5＇-TAAATCCCCAGGCAGTGAGCAT-3＇，长度155 bp；内参GAPDH上游引物：上游引物：5＇-ACAGCAACAGGGTGGTGGAC-3＇，下游引物：5＇-TTTGAGGGTGCAGCGAACTT-3＇，长度252 bp。根据所得Ct值，以GAPDH为内参，用2^-△△Ct计算目的基因含量，计算公式为：△Ct＝目的基因Ct-内参基因Ct；-ΔΔCt＝（对照组）ΔCt-各样品ΔCt。

1.12　蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测各组H9C2细胞ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达

采用Western Blot法进行检测，将培养好的细胞标本用预冷的PBS洗涤1～2次，加50μL浓度为1 mmol/L的RIPA＋PMSF裂解液至培养皿中并置于冰上裂解约10～20 min，将裂解物置于4℃环以2000 r/min转速离心12 min后取上清液放入标记的EP管（1.5 mL）中并置于-80℃保存。配制一定量比例为1∶50的BCA工作液，完全溶解蛋白质，通过酶标仪测定波长562 nm处的蛋白含量，取平均数。制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，将蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至PVDF膜，以兔抗小鼠P-ERK1/2（稀释比1∶2000，分子量：42，44 KDa）、ERK（稀释比1∶1000）抗体作为一抗，山羊抗鼠（稀释比1∶5000）、山羊抗兔（稀释比1∶6000）抗体作为二抗，进入暗室曝光显影。分析ERK1/2，p-ERK1/2蛋白的相对表达水平（灰度值比值）。

1.13　统计学方法

采用SPSS 22.0统计软件分析实验数据及结果，计量资料以

表示，比较检验多样本均数间使用单因素方差分析（One-way ANOVA），先使用Levene检验验证方差齐性，当方差齐时则使用LSD法及Dunnett法进行多重比较，当方差不齐时，采用Tamhane’T2法。

2　结果

收起

2.1　H9C2细胞增殖活性

实验后各组H9C2细胞增殖活性情况见表1、插页ⅩⅩⅥ图1。表1显示，正常对照组、miR-133过表达组、正常＋W 组、miR-133过表达＋W 组细胞活性依次增加（P<0.05）；ADR组、ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋miR-133过表达＋W 组与前4组比较，细胞活性降低（P<0.05）；ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋miR-133过表达＋W 组细胞活性比ADR组高（P<0.05），其中ADR＋miR-133过表达＋W 组细胞活性最高（P<0.05），ADR＋W 组次之（P<0.05）。

2.2　H9C2细胞NT-proBNP含量

实验后各组H9C2细胞NT-proBNP含量情况见表2。表2显示，正常对照组、miR-133过表达组、正常＋W 组、miR-133过表达＋W 组NTproBNP含量依次降低（P<0.05）；ADR 组、ADR ＋W 组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋miR-133过表达＋W 组与前4组比较，NT-proBNP含量升高（P<0.05）；ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋miR-133过表达＋W 组NT-proBNP含量比ADR组低（P<0.05），其中ADR＋miR-133过表达＋W 组NT-proBNP含量最低（P<0.05），ADR＋W 组次之（P<0.05）。

2.3　H9C2细胞lncRNA malat-1、miR-133、ERK1/2mRNA的表达情况

实验后各组H9C2细胞lncRNA malat-1、miR-133、ERK1/2mRNA的表达情况见表3。表3显示，各组ERK1/2mRNA表达无明显差异（P>0.05），正常＋W 组、miR-133过表达＋W 组miR-133表达较正常组、miR-133过表达组增高（P<0.05），lncRNA malat-1表达较正常组、miR-133过表达组降低（P<0.05），其中miR-133过表达＋W 组miR-133表达最高（P<0.05），lncRNA malat-1表达最低，然后依次是正常＋W 组、miR-133过表达组和正常组。ADR组lncRNA malat-1表达增高（P<0.05），miR-133表达最低（P<0.05），ADR＋miR-133过表达＋W 组lncRNA malat-1较ADR组、ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达组表达最低（P<0.05），miR-133表达最高（P<0.05），ADR＋W 组次之（P<0.05）。

2.4　H9C2细胞ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达

实验后各组H9C2细胞ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达情况见表4、图2。表4显示，各组ERK1/2差异无统计学意义（P>0.05）；正常对照组、miR-133过表达组、正常＋W 组、miR-133过表达＋W 组含p-ERK1/2蛋白表达依次降低（P<0.05）；ADR组、ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋miR-133过表达＋W 组与前4组比较，p-ERK1/2蛋白表达升高（P<0.05）；ADR＋W 组、ADR＋miR-133过表达组、ADR＋miR-133过表达＋W组p-ERK1/2蛋白表达比ADR组低（P<0.05），其中ADR＋miR-133过表达＋W 组p-ERK1/2蛋白表达最低（P<0.05），ADR＋W 组次之（P<0.05）。

3　讨论

收起

ERK1/2是丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）家族的重要一员，广泛表达于各种哺乳动物组织中，参与细胞外信号向细胞内蛋白的传递^[7-8]。目前研究发现缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）、氧化应激、缺氧、β-肾上腺素能刺激、蒽环类药物暴露、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、内脂素、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factorα，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）以及压力超负荷和拉伸，都是导致心脏ERK1/2信号激活的已知因素^[9-11]，上述因素通过激活ERK1/2信号通路诱导心肌细胞肥大、心肌纤维化和心肌细胞凋亡，从而导致心力衰竭发生。

LncRNAs可以调节细胞活性，包括细胞增殖、凋亡、分化和代谢^[12]。许多研究证实，lncRNAs在疾病的发生、发展和诊断中起着关键作用^[13-14]。迄今为止，许多报告探讨了lncRNAs在心血管疾病中的作用^[15-16]。MiRNAs已被证明在细胞生物学发展中发挥作用，包括细胞增殖、凋亡、分化和代谢^[17-18]。有报道称，lncRNAs和miRNAs之间的相互作用在疾病的发展中起着重要作用^[19-20]。有研究表明，在炎症性疾病（包括脓毒症、急性肺损伤和心肌再灌注损伤）中，lncRNA malat-1通过与miR-125b、miR-133、miR-146a或miR-203相互作用而加速炎症^[21-22]。HAN X R等^[23]研究表明malat-1通过miR-133作为竞争性内源性RNA调节血清反应因子（serum response factor，SRF），并在成肌细胞分化中建立了malat-1、miR-133和SRF之间的新型连接。Malat-1调节缺氧诱导的血管生长，激活ERK/MAPK信号传导，并清除抗肥大的miR-133^[24]。

温阳振衰颗粒是导师陈新宇教授秉承扶阳宗旨，化裁于仲景经方之茯苓四逆汤所制，该方由制附子、红参、干姜、茯苓、五味子和甘草配伍而成，可以有效缓解慢性心力衰竭的症状和延缓病情进展，其疗效已经得到临床验证^[25-26]。本细胞实验研究发现，在阿霉素诱导的心肌细胞损伤模型中，lncRNA malat-1的表达明显上调，miR-133的表达显著下降，且ERK1/2总蛋白及ERK1/2mRNA 的表达无显著改变，但ERK1/2的磷酸化蛋白表达却显著上升，心肌细胞存活率也明显降低。在使用miR-133过表达和温阳振衰颗粒含药血清的组别中，lncRNA malat-1的表达明显下降，miR-133的表达明显升高，ERK1/2的磷酸化蛋白表达也显著下调，心肌细胞的存活率也相应上升。上述实验结果说明，miR-133的高表达有利于心肌细胞的存活，且与ERK1/2的蛋白磷酸化程度呈现相关性，温阳振衰颗粒可以通过调控ERK1/2的关键上游靶基因lncRNA malat-1和miR-133从而降低其蛋白磷酸化的表达，这可能是其治疗慢性心衰的重要机制之一。心肌细胞中的lncRNA malat-1/miR-133调控p-ERK1/2有可能成为治疗慢性心衰的新型生物学靶点，但具体调控模式尚需进一步研究。

基金

收起

国家自然科学基金项目(81704061)
国家级大学生创新创业训练计划项目(202210541012)
湖南省自然科学基金项目(2020JJ5423)
湖南省卫生健康委科研计划项目(202203015711)
湖南省中医药科研项目(B2023026)
湖南省“国内一流培育学科”中西医结合开放基金项目(2020ZXYJH74)
湖南省大学生创新创业训练计划项目(2022-2857)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2025年第43卷第5期

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doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.05.019

首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-05-10

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湖南省中医药科研项目(B2023026)

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湖南省大学生创新创业训练计划项目(2022-2857)

作者信息

^1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙 410007

^2.湖南中医药大学中西医结合学院，湖南长沙 410208

通讯作者:

唐燕萍（1985-），女，湖南郴州人，副教授，硕士研究生导师，硕士，研究方向：中医药防治心脑血管疾病。E-mail：290881559@qq.com。

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

组别	n	OD值
正常对照组	5	2.74±0.02
正常+W组	5	3.77±0.03^①
miR-133过表达组	5	3.25±0.05^①②
miR-133过表达+W组	5	4.83±0.04^①②③
ADR组	5	1.04±0.03^①②③④
ADR+W组	5	1.89±0.04^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	1.44±0.02^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	2.34±0.01^{①②③④⑤⑥⑦}

组别

OD值

正常对照组

2.74±0.02

正常+W组

3.77±0.03^①

miR-133过表达组

3.25±0.05^①②

miR-133过表达+W组

4.83±0.04^①②③

ADR组

1.04±0.03^①②③④

ADR+W组

1.89±0.04^{①②③④⑤}

ADR+miR-133过表达组

1.44±0.02^{①②③④⑤⑥}

ADR+miR-133过表达+W组

2.34±0.01^{①②③④⑤⑥⑦}

组别	n	NT-proBNP/（pg/mL）
正常对照组	5	22.32±0.41
正常+W组	5	14.12±0.23^①
miR-133过表达组	5	18.27±0.32^①②
miR-133过表达+W组	5	10.28±0.42^①②③
ADR组	5	38.74±0.50^①②③④
ADR+W组	5	29.87±0.53^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	34.56±0.42^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	25.67±0.23^{①②③④⑤⑥⑦}

组别

NT-proBNP/（pg/mL）

正常对照组

22.32±0.41

正常+W组

14.12±0.23^①

miR-133过表达组

18.27±0.32^①②

miR-133过表达+W组

10.28±0.42^①②③

ADR组

38.74±0.50^①②③④

ADR+W组

29.87±0.53^{①②③④⑤}

ADR+miR-133过表达组

34.56±0.42^{①②③④⑤⑥}

ADR+miR-133过表达+W组

25.67±0.23^{①②③④⑤⑥⑦}

组别	n	lncRNA malat-1	miR-133	ERK1/2mRNA
正常对照组	5	1.51±0.05	1.86±0.03	1.01±0.05
正常+W组	5	0.82±0.02^①	2.68±0.02^①	1.02±0.03
miR-133过表达组	5	1.17±003^①②	2.29±0.01^①②	1.00±0.07
miR-133过表达+W组	5	0.43±0.02^①②③	3.06±0.03^①②③	1.02±0.03
ADR组	5	3.95±0.03^①②③④	0.33±0.03^①②③④	0.98±0.06
ADR+W组	5	2.65±0.03^{①②③④⑤}	1.05±0.02^{①②③④⑤}	1.00±0.03
ADR+miR-133过表达组	5	3.20±0.02^{①②③④⑤⑥}	0.66±±.01^{①②③④⑤⑥}	0.96±0.04
ADR+miR-133过表达+W组	5	2.14±0.03^{①②③④⑤⑥⑦}	1.44±0.02^{①②③④⑤⑥⑦}	0.99±0.05

组别

lncRNA malat-1

miR-133

ERK1/2mRNA

正常对照组

1.51±0.05

1.86±0.03

1.01±0.05

正常+W组

0.82±0.02^①

2.68±0.02^①

1.02±0.03

miR-133过表达组

1.17±003^①②

2.29±0.01^①②

1.00±0.07

miR-133过表达+W组

0.43±0.02^①②③

3.06±0.03^①②③

1.02±0.03

ADR组

3.95±0.03^①②③④

0.33±0.03^①②③④

0.98±0.06

ADR+W组

2.65±0.03^{①②③④⑤}

1.05±0.02^{①②③④⑤}

1.00±0.03

ADR+miR-133过表达组

3.20±0.02^{①②③④⑤⑥}

0.66±±.01^{①②③④⑤⑥}

0.96±0.04

ADR+miR-133过表达+W组

2.14±0.03^{①②③④⑤⑥⑦}

1.44±0.02^{①②③④⑤⑥⑦}

0.99±0.05

组别	n	ERK1/2	p-ERK1/2
正常对照组	5	0.79±0.07	1.53±0.04
正常+W组	5	0.81±0.05	0.72±0.02^①
miR-133过表达组	5	0.77±0.04	1.14±0.03^①②
miR-133过表达+W组	5	0.74±0.05	0.31±0.03^①②③
ADR组	5	0.78±0.07	3.36±0.04^①②③④
ADR+W组	5	0.80±0.04	2.45±0.03^{①②③④⑤}
ADR+miR-133过表达组	5	0.77±0.08	2.83±.01^{①②③④⑤⑥}
ADR+miR-133过表达+W组	5	0.80±0.05	1.95±0.03^{①②③④⑤⑥⑦}

组别

ERK1/2

p-ERK1/2

正常对照组

0.79±0.07

1.53±0.04

正常+W组

0.81±0.05

0.72±0.02^①

miR-133过表达组

0.77±0.04

1.14±0.03^①②

miR-133过表达+W组

0.74±0.05

0.31±0.03^①②③

ADR组

0.78±0.07

3.36±0.04^①②③④

ADR+W组

0.80±0.04

2.45±0.03^{①②③④⑤}

ADR+miR-133过表达组

0.77±0.08

2.83±.01^{①②③④⑤⑥}

ADR+miR-133过表达+W组

0.80±0.05

1.95±0.03^{①②③④⑤⑥⑦}