中华中医药学刊

组别	n	体质量/（g）	肛温/（℃）
正常组	9	180.88±26.17	277.88±9.11	36.21±0.15	36.33±0.21
模型组	9	183.13±23.66	202.75±14.89	36.25±0.12	35.84±0.15
针刺组	8	182.38±25.29	221.50±16.34	36.23±0.17	36.16±0.32
ZL006组	8	175.88±26.26	210.25±10.74	36.20±0.16	35.94±0.17
针刺联合ANA-12组	8	200.38±18.81	206.50±9.81	36.21±0.16	35.96±0.15^##
8-OH-DPAT组	8	193.25±23.13	201.38±10.14	36.25±0.16	35.96±0.14^##

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组别	n	糖水偏好率/（%）	游泳不动时间/（s）
正常组	9	78.89±8.67	28.63±6.05
模型组	9	32.02±11.54	109.00±10.13
针刺组	8	65.60±8.41^***	68.38±6.59^***
ZL006组	8	58.91±6.85^*	75.25±7.61^***
针刺联合ANA-12组	8	53.65±12.29^△	92.75±8.31^△△△
8-OH-DPAT组	8	49.20±8.53^**	88.63±15.16^***

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组别	n	水平运动得分/（分）	垂直运动得分/（分）	中央格停留时间/（s）
正常组	9	77.21±14.48	18.13±.42	9.45±1.38
模型组	9	14.12±12.27	5.25±1.28	4.44±0.57
针刺组	8	28.37±11.71^**	11.88±1.81^***	8.89±1.56^***
ZL006组	8	26.85±6.45^*	9.25±1.04^***	8.77±0.64^***
针刺联合ANA-12组	8	12.67±8.05^△△	5.25±1.04^△△△	5.56±0.72^△△△
8-OH-DPAT组	8	13.57±6.23	6.00±1.51	4.94±0.68

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针刺对抑郁模型大鼠海马nNOS与PSD-95共表达的影响

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刘舰遥 , 王干一 , 吕琴 , 冯诗雨 , 马贤德 , 任路

中华中医药学刊 | 国家项目点击 2025,43(4): 77-81

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中华中医药学刊 |国家项目点击 2025 , 43 (4) : 77 -81

针刺对抑郁模型大鼠海马nNOS与PSD-95共表达的影响

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刘舰遥（1989-），女，辽宁沈阳人，博士在读，研究方向：针灸治疗情志病机制。

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刘舰遥（1989-），女，辽宁沈阳人，博士在读，研究方向：针灸治疗情志病机制。

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刘舰遥, 王干一, 吕琴, 冯诗雨, 马贤德, 任路

作者信息

辽宁中医药大学，辽宁　沈阳　110847

通讯作者:

任路（1966-），女，四川巴县人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中医情志病基础与临床。E-mail：lnzyxkc@sina.com。

马贤德（1979-），男，辽宁朝阳人，正高级实验师，博士研究生导师，博士，研究方向：眼针活化肥大细胞的效应机制。E-mail：maxiande197@163.com。

作者简介:

刘舰遥（1989-），女，辽宁沈阳人，博士在读，研究方向：针灸治疗情志病机制。

Effect of Acupuncture on Coexpressions of nNOS and PSD-95 in Hippocampus of Depression Model Rats

Jianyao LIU, Ganyi WANG, Qin LYU, Shiyu FENG, Xiande MA, Lu REN

Affiliations

Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110847, Liaoning, China

出版时间: 2025-04-10 doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.04.014

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摘要

收起

目的

观察针刺治疗抑郁模型大鼠对海马中神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）与突触后致密蛋白-95（postsynaptic density-95，PSD-95）共表达的影响。

方法

选择SPF级大鼠50只，随机分为正常组、模型组（腹腔注射利血平0.2 mg·kg^-1·d^-1）、针刺组、ZL006组、针刺联合ANA-12组、8-OH-DPAT组共6组，正常组和模型组9只，余组各8只，观察体质量和肛温变化；采用旷场实验、糖水偏嗜实验、强迫游泳实验观察大鼠抑郁样行为；采用HE染色观察海马神经元形态变化；采用免疫荧光双标染色观察海马CA1区、CA3区神经元中nNOS与PSD-95、酪氨酸蛋白激酶受体B（tyrosine kinase receptor B，TrkB）与PSD-95的表达情况。

结果

海马CA1区、CA3区神经元中nNOS与PSD-95、TrkB与PSD-95存在共表达，与模型组比较，针刺组和ZL006组抑郁样行为均显著改善（P<0.05，P<0.01，P<0.001），CA3区nNOS与PSD-95的共表达水平显著下调（P<0.05，P<0.01），CA3区TrkB与PSD-95的共表达水平显著上调（P<0.05），海马神经元减少和损伤显著改善，针刺组海马CA1区nNOS的表达水平显著下调（P<0.01），CA1区TrkB的表达水平显著上调（P<0.01），8-OH-DPAT组CA1区nNOS的表达水平显著下调（P<0.01）；与针刺组比较，ANA-12组CA3区nNOS与PSD-95的共表达水平显著上调（P<0.05），以上差异均有统计学意义。

结论

针刺调节少阳枢机，可能通过上调海马CA3区神经元中nNOS与PSD-95的共表达水平参与发挥抗抑郁作用，该作用机制可能与CA3区TrkB受体有关。

关键词

针刺治疗 / 抑郁 / nNOS / PSD-95

Abstract

收起

Objective

To observe the effect of acupuncture treatment on coexpression of neuronal nitric oxide synthase（nNOS）and postsynaptic dense-95（PSD-95）in the hippocampus of depression model rats.

Method

Fifty SPF grade rats were randomly divided into six groups：normal group，model group（intraperitoneal injection of 0.2 mg·kg^-1·d^-1 of reserpine），acupuncture group，ZL006 group，acupuncture combined with ANA-12 group，8-OH-DPAT group. There were 9 rats in the normal group and model group，and 8 rats in each of the remaining groups. The changes in body weight and anal temperature were observed. Open field test，sucrose preference test and forced swimming test were applied to observe depression-like behaviors in rats. The morphological changes of hippocampal neurons were observe by HE staining. Immunofluorescence double staining was used to observe the positive expression of nNOSand PSD-95，as well as tyrosine kinase receptor B（TrkB）and PSD-95 in neurons of the hippocampal CA1 and CA3 regions.

Result

There were coexpressions of nNOSand PSD-95 as well as TrkB and PSD-95 in neurons of the hippocampal CA1 and CA3 regions. Compared with those in the model group，depression-like behaviors were significantly improved in the acupuncture group and ZL006 group（P<0.05，P<0.01，P<0.001）. The coexpression levels of nNOSand PSD-95 in the CA3 region were significantly down-regulated（P<0.05，P<0.01），and the coexpression levels of TrkB and PSD-95 in the CA3 region were significantly up-regulated（P<0.05）. The reduction and damage of hippocampal neurons were significantly improved. The expression levels of nNOSin the hippocampal CA1 region were significantly down regulated（P<0.01）and the expression levels of TrkB in the CA1 region were significantly up-regulated（P<0.01）in the acupuncture group. The expression level of nNOSin the CA1 region of the 8-OH-DPAT group was significantly down-regulated（P<0.01）. Compared with those in the acupuncture group，the coexpression levels of nNOSand PSD-95 in the CA3 region of the ANA-12 group were significantly up-regulated（P<0.05），and the above differences were statistically significant.

Conclusion

Acupuncture regulates Shaoyang pivot，which may participate in the antidepressant effect by up-regulating the coexpression levels of nNOSand PSD-95 in hippocampal CA3 neurons，and this mechanism of action may be related to TrkB receptors in the CA3 region.

Key words

acupuncture treatment / depression / nNOS / PSD-95

引用本文

刘舰遥, 王干一, 吕琴, 冯诗雨, 马贤德, 任路. 针刺对抑郁模型大鼠海马nNOS与PSD-95共表达的影响. 中华中医药学刊, 2025 , 43 (4) : 77 -81 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.04.014

Jianyao LIU, Ganyi WANG, Qin LYU, Shiyu FENG, Xiande MA, Lu REN. Effect of Acupuncture on Coexpressions of nNOS and PSD-95 in Hippocampus of Depression Model Rats[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2025 , 43 (4) : 77 -81 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.04.014

正文

收起

抑郁症是以心境低落为主症的常见精神类疾病，其主症与中医“郁证”的“神颓志衰”类症状相似^[1]，其病机与阳气亏虚相关。大量近期研究围绕神经炎症、神经营养因子缺失、功能连接异常等研究重点，是抑郁症发病相关重要机制^[2]。有研究显示，N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR）、PSD-95、nNOS通过PDZ结构域相互作用形成复合物，激活nNOS生成高水平一氧化氮（nitric oxide，NO），促进氧化应激和亚硝化反应^[3]，能够负向调节神经结构可塑性^[4]，在海马区可导致功能和结构异常，参与抑郁症发病^[5]。针刺百会可通过参与降低海马NMDA亚基NR2B激活nNOS生成的NO水平，调节神经元突触结构可塑性，抑制兴奋性神经毒性以发挥抗抑郁作用^[6]。本课题组前期研究显示，针刺能通过温补肾阳、通利督脉以促进肾精生髓以养脑神，上调海马单胺能神经保护相关蛋白以治疗肾阳虚型抑郁症^[7]。《内经·玉机真藏篇》言：“移气于不足，神气乃得复”，少阳枢机在肾中阳气的温煦下枢转阳气，参与调节肾精与脑神互济。本研究拟通过观察抑郁模型大鼠海马神经元中nNOS与PSD-95蛋白阳性共表达水平的变化，探讨针刺通过调节少阳枢机改善抑郁样行为对蛋白表达的影响。

1　材料

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1.1　动物

实验用SPF级8周龄SD大鼠购自辽宁长生生物技术股份有限公司，许可证号：SYXK（辽）2019-0004，共50只，雌雄各25只，体质量（200±50）g。

1.2　药物

利血平（83580，默克Sigma-Aldrich）；ZL006［4-（，5-二氯-2-羟基-苄基氨基）-2-羟基苯甲酸（Topchem Pharmaceuticals，Sligo，Ireland）］（HY-100456，MedChemExpress）；ANA-12（SF5332，Beyotime Biotechnology）；8-羟基-2-二丙基氨基四氢萘溴酸盐（8-hydroxy-2-dipropylaminotetralin hydrobromide，8-OH-DPAT）（HY-112061，MedChemExpress）。

1.3　主要试剂及仪器

Goat Anti-Rabbit IgG H&L（FITC）（ab6717，abcam）；罗丹明标记山羊抗小鼠IgG（H＋L）（ZF-0313，北京中杉金桥生物技术有限公司）；nNOS Rabbit Monoclonal Antibody（AF1819，Beyotime Biotechnology）；Rabbit Anti-TrkB antibody（bs-0175R，bioss）；PSD95（7E3）Mouse mAb（＃36233，Cell Signaling Technology）；华佗牌针灸针（0.18 mm×25 mm，苏州医疗器械）；生物组织脱水机（KD-TS3A，KEDEE）；石蜡包埋机（EG1150，LEICA）；石蜡切片机（RM2235，LEICA）；正置荧光显微镜（BX-53，Olympus）。

1.4　分组及给药

大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、ZL006组、针刺联合ANA-12组、8-OH-DPAT组。正常组9只，雄鼠5只，雌鼠4只；模型组9只，雄鼠4只，雌鼠5只；余组各8只，雌雄各半；干预前正常组中1只雄鼠、模型组中1只雌鼠于干预前强迫游泳实验中死亡。除正常组外，余组均予腹腔注射利血平注射液0.2 mg·kg^-1·d^-1，持续28 d^[8]。正常组予腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液。针刺组和针刺联合ANA-12组于造模第15天予毫针针刺，腧穴选取“百会”，位于大鼠顶骨正中，平刺5 mm^[9]；双侧“风池”位于大鼠颈后枕骨下胸锁乳突肌和斜方肌之间的凹陷处，向对侧眼球方向进针，深度约3 mm^[9]；“肾俞”位于大鼠背部，第2腰椎下旁开5 mm之两旁肋间^[10]；“太冲”位于后肢足背第1与第2跖骨间凹陷处，直刺1 mm^[9]；留针20 min，1次/d，连续14 d。末次行为学检测前3 d予ZL006组nNOS-PSD-95复合物抑制剂ZL006注射液腹腔注射2.8 mg·kg^-1·d^-1，连续3 d^[11]。于取材前24 h予针刺联合ANA-12组TrkB拮抗剂ANA-12注射液皮下注射0.14 mg·kg^-1^[12]。予8-OH-DPAT组5-HT1A激动剂8-OHDPAT腹腔注射0.028 mg·kg^-1·d^-1，连续28 d^[13]。

2　方法

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2.1　行为学检测

体质量和肛温于干预前和干预结束后检测，旷场实验、糖水偏嗜试验、强迫游泳实验于干预结束后检测。

2.1.1　体质量

将带盒电子秤去皮调零，将大鼠放于盒中记录质量数值。

2.1.2　肛温

在大鼠安静状态下将电子温度计探头缓慢探入大鼠肛门约3 cm，1 min左右后读取温度值。

2.1.3　旷场实验

用软件将100 cm×100 cm箱底划分为4 cm×4 cm等面积方格，将大鼠放于旷场箱自由活动5 min，摄像头同步实时观察，记录大鼠穿越格子数、水平移动总距离、两前爪离地行为次数、穿越方格数和中央区域停留时间，水平运动得分＝水平移动总距离/穿越格子数，垂直运动得分＝两前爪离地行为次数^[14]。

2.1.4　糖水偏嗜试验

检测前24 h适应性训练大鼠饮1%蔗糖水，检测开始则更改为等体积纯水和1%蔗糖水各1瓶，24 h后观察糖水和纯水消耗量并计算糖水偏好率，糖水偏好率＝蔗糖水消耗量/（蔗糖水消耗量＋纯水消耗量）×100%，再次予同样糖水和纯水2瓶交换位置，24 h后观察并计算，取两次测量结果的平均值。

2.1.5　强迫游泳实验

将大鼠单只放入高60 cm、水深40 cm、水温25～28℃的塑料桶中，观察大鼠在水中游泳、爬壁和静止情况并记录静止状态累计时长作为不动时间。

2.2　标本采集及处理

行为学检测结束后予大鼠禁食24 h后10%水合氯醛麻醉取材，将大鼠断头取脑组织，PBS清洗后置于4%多聚甲醛溶液固定24 h，根据海马在大脑皮层的定位沿冠状面分层切片，脱水后放于60℃石蜡中包埋，将蜡块切为厚度5 μm和7 μm的组织切片。

2.3　苏木精-伊红（hematoxylin eosin，HE）染色

依次置于二甲苯和乙醇溶液中进行脱蜡至水，置于苏木素液中染5 min，水洗和蓝化后置于伊红液中5 min，水洗后脱水透明，用中性树胶封片，×200倍镜下观察海马CA1和CA3区神经元形态变化。

2.4　免疫荧光双标染色

将海马切片脱蜡至水，0.01 mol/L PBS溶液洗片5 min×3次。将pH 6.0的0.01 mol/L柠檬酸钠抗原修复液加热至95℃，恒温对切片进行抗原修复20 min，冷却后PBS洗片3次，滴加0.1% TritonX-100溶液以增加通透性，PBS洗片3次，滴加5%BSA溶液孵育1.5 h以完成封闭。分别滴加兔源nNOS抗体（1∶100）与小鼠源PSD-95抗体（1∶100）或兔源TrkB抗体（1∶100）与小鼠源PSD-95抗体（1∶100）以孵育一抗，置于4℃冰箱过夜，次日取出后PBS洗片6次。避光滴加山羊抗兔源FITC（1∶1000）与山羊抗小鼠源TRITC（1∶100）全覆盖切片以孵育二抗，避光37℃恒温孵育2 h，PBS洗片6次。避光滴加DAPI染色液孵育10 min以染核，PBS洗片3次，滴加抗荧光淬灭剂封片。采用正置荧光显微镜×400倍镜下观察海马CA1和CA3区的阳性神经元变化，各组每个脑区随机拍摄6～8张不重复视野的图片进行分析，Image J软件统计阳性细胞计数比^[15]。

2.5　统计学方法

采用SPSS 22.0统计软件对数据分析正态性、方差齐性后进行单因素方差分析或非参数检验，采用LSD或Tamhane或Kruskal-Wallis One-ANOVA进行两两比较，数据以

表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

3　结果

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3.1　行为学结果

3.1.1　一般情况

干预结束后，与正常组相比，余组出现不同程度的弓背、蜷缩、进食减少、眯眼、倦怠少动、小便频、皮毛稀疏少泽。

3.1.2　体质量和肛温

如表1。干预前各组未见明显差异（P>0.05），干预后各组大鼠体质量明显降低（P<0.001），除针刺组外余组大鼠肛温明显降低（P<0.01，P<0.001）。

3.1.3　糖水偏嗜实验

如表2。与正常组相比，模型组糖水偏好率明显下降（P<0.001）；与模型组相比，针刺组、ZL006组和8-OH-DPAT组均有明显升高（P<0.05，P<0.01，P<0.001）；与针刺组相比，针刺联合ANA-12组有所下降（P<0.05）。

3.1.4　强迫游泳实验

如表2。与正常组相比，模型组游泳不动时间明显增加（P<0.001）；与模型组相比，针刺组、ZL006组和8-OH-DPAT组均有明显减少（P<0.001）；与针刺组相比，针刺联合ANA-12组明显增加（P<0.001）。

3.1.5　旷场实验

如表3。干预后与正常组相比，模型组的水平运动得分、垂直运动得分和中央格停留时间明显降低（P<0.001）；与模型组相比，针刺组和ZL006组3项均有明显增加（P<0.05，P<0.01，P<0.001），8-OH-DPAT组未见明显改变（P>0.05）；与针刺组相比，针刺联合ANA-12组上述3项均有明显减少（P<0.01，P<0.001）。

3.2　HE结果

如插页ⅩⅦ图1。正常组大鼠海马CA1、CA3区可见相应脑区数量丰富、排列整齐、形态规则的神经元；与正常组相比，余组均有不同程度的神经元数减少，细胞形态欠规则，细胞核固缩，细胞质色不均，细胞皱缩，针刺组、ZL006组、8-OH-DPAT组、针刺联合ANA-12组神经元病理改变程度介于正常组和模型组之间，与针刺组相比，针刺联合ANA-12组病理改变更为明显。

3.3　免疫荧光结果

如插页ⅩⅧ图2、图3。海马CA1区存在共标的nNOS和PSD-95阳性神经元，与正常组相比，模型组的nNOS阳性细胞计数比、nNOS与PSD-95共标阳性细胞计数比均明显升高（P<0.01，P<0.001）；与模型组相比，针刺组的nNOS、nNOS与PSD-95共标均明显降低（P<0.01），ZL006组差异未见统计学意义（P>0.05），8-OH-DPAT组的nNOS、nNOS与PSD-95共标均明显降低（P<0.01，P<0.05）。

如插页ⅩⅨ图4、图5。海马CA1区存在共标的TrkB和PSD-95阳性神经元，与正常组相比，模型组的TrkB、TrkB与PSD-95共标阳性细胞计数比均明显降低（P<0.001）；与模型组相比，针刺组的TrkB、TrkB与PSD-95共标均明显升高（P<0.01），ZL006组和8-OH-DPAT组差异未见统计学意义（P>0.05）；与针刺组相比，针刺联合ANA-12组的TrkB、TrkB与PSD-95共标均明显降低（P<0.01）。

如插页ⅩⅩ图6、图7。海马CA3区存在共标的nNOS和PSD-95阳性神经元，与正常组相比，模型组的nNOS阳性细胞计数比、nNOS与PSD-95共标阳性细胞计数比均明显升高（P<0.01）；与模型组相比，针刺组和ZL006组nNOS阳性细胞计数比差异未见统计学意义（P>0.05），nNOS与PSD-95共标明显降低（P<0.05，P<0.01），8-OH-DPAT组差异未见统计学意义（P>0.05）；与针刺组相比，针刺联合ANA-12组nNOS阳性细胞计数比差异未见统计学意义（P>0.05），nNOS与PSD-95共标明显上升（P<0.05）。

如插页ⅩⅪ图8、图9海马CA3区存在共标的TrkB和PSD-95阳性神经元，与正常组相比，模型组的TrkB、TrkB与PSD-95共标阳性细胞计数比均明显降低（P<0.001）；与模型组相比，针刺组和ZL006组TrkB阳性细胞计数比差异未见统计学意义（P>0.05），TrkB与PSD-95共标明显升高（P<0.05），8-OH-DPAT组差异未见统计学意义（P>0.05）；与针刺组相比，针刺联合ANA-12组的TrkB、TrkB与PSD-95共标均明显降低（P<0.05）。

4　讨论

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《千金要方·胆腑方》云：“凡髓虚实之应，主于肝胆”，少阳为阳气转枢之处，肾精由阳气化髓并推动上行，经少阳转枢，行于三焦，部分上达清窍，充养脑髓，调理脑神。本课题组前期研究显示，命门火衰，则相火不足^[16]，少阳失温煦而枢机不利，水火气机升降失常，阴精不升则脑髓失养，神机失用，阳火不降则头部气血壅滞、阴寒阻于下焦^[6]，形成肾脑病理循环^[17]，发为抑郁，属本虚标实证，针刺督脉经穴如百会、命门穴能温肾通督，协调阴阳气机升降以改善肾脑病理循环而发挥抗抑郁作用^[6]。本研究针对病机中心环节阴阳枢机不利另选择以调节少阳枢机为主，配合温补少阴以温少阳相火，协调阴阳升降以维持肾脑互济。针刺头部少阳经风池穴可通利少阳、疏通脑髓气机壅滞，助百会通督脉、振奋阳气、醒脑宁神、共同协调阴阳气机升降，针刺风池向对侧眼球方向，可通过调节椎动脉的舒缩功能改善供血和血流速变化^[18]。太冲调畅全身气机，肾俞补肾助阳益髓、临督脉以助百会升阳。四穴合用调节少阳枢机、醒脑调神，治疗阳虚气郁之郁证。单胺类递质耗竭剂利血平抑制囊泡再摄取5-HT^[19]，诱导大鼠体质量、体温减低，上睑无力下垂，抑郁样行为和海马结构损伤，是阳气气郁型抑郁模型的常用造模方法^[7]。能诱导脑组织NO含量增高、5-HT含量减少^[20]，海马5-HT1A异源受体减少^[21]。本研究针刺干预能升高模型大鼠肛温，明显抑制快感缺失和绝望感、促进大鼠自主运动和探索行为，说明针刺可能通过振奋、输布阳气，改善抑郁样行为。

nNOS是NMDA受体下游信号分子，是NO生成的主要限速酶^[22]。相关研究显示，抑郁情绪与海马和PFC nNOS的过度表达影响神经发生有关^[23]。NO双向调节中枢神经，高浓度时具有细胞毒性^[7]。PSD-95是位于兴奋性Glu能神经树突棘突触后膜的脚手架蛋白，参与突触传递功能，NMDA、nNOS蛋白与PSD95相互作用并耦联形成复合物，可激活nNOS诱导的神经细胞毒作用^[24]。下调海马CA1、CA3区nNOS-PSD-95复合物及nNOS的表达能抑制细胞凋亡^[25]，ZL006能够通过促进nNOS-PSD-95解耦联以改善抑郁样行为^[11]，故选择CA1和CA3区为观察区观察各组神经元中nNOS与PSD-95蛋白的阳性共表达情况^[26]。TrkB与PSD-95相互作用有助于维持脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）-TrkB二聚体功能和结构完整性，使其正常调节下游通路^[27]，ZL006能够间接促进海马CA3区PSD-95与TrkB相互作用^[28]，抑制氧化应激和炎症反应以发挥抗抑郁作用^[29]，而ANA-12逆转了上述作用^[28]。有研究显示，5-HT1A受体是海马nNOS的内源性抑制因子，抑制脑内NO生成^[30]，而抑制nNOS活性能助5-HT1A发挥抗抑郁作用^[31]。8-OH-DPAT能通过激活海马5-HT1A异源受体加强5-HT能神经传导，进而缓解抑郁样行为^[32]。故本研究亦观察各组神经元中TrkB与PSD-95蛋白的阳性共表达情况，选择皮下注射ANA-12和腹腔注射8-OH-DPAT观察海马TrkB和5-HT1A受体对nNOS与PSD-95共表达的影响^[33]。针刺相关研究显示，针刺少阳经穴配合督脉百会穴能够调节少阳枢机、充养脑髓，参与下调大鼠海马nNOS及下游信号通路，降低NO水平，调整微循环，抑制细胞凋亡^[34]。

本研究镜下观察到海马CA1、CA3区神经元的nNOS和PSD-95、TrkB和PSD-95阳性表达存在共定位，针刺能有效下调CA1区nNOS的表达水平，降低CA3区nNOS与PSD-95的共表达水平，有效上调CA1区TrkB的表达水平，上调CA3区TrkB与PSD-95的共表达水平，改善神经元减少、变性和损伤。抑制nNOS-PSD-95耦联形成复合物有效下调CA3区nNOS与PSD-95的共表达水平，上调CA3区TrkB与PSD-95的共表达水平，激活5-HT1A受体能减少CA1区nNOS的表达水平，抑制TrkB受体能抑制针刺对CA3区nNOS与PSD-95的共表达水平的调节作用。提示抑制nNOS与PSD-95蛋白相互作用可能诱导海马CA3区nNOS与PSD-95的共表达水平下调、TrkB与PSD-95的共表达水平上调。针刺可能通过调节少阳枢机下调海马CA3区nNOS与PSD-95的共表达水平，该调节机制可能与缓解神经元结构性损伤进而发挥抗抑郁作用有关，可能与CA3区TrkB受体的表达水平有关。CA1区5-HT1A受体可能通过下调nNOS的表达水平改善部分抑郁样行为。本研究仅观察针刺治疗抑郁症对海马神经元中nNOS与PSD-95蛋白共表达水平的影响，而针刺对nNOS与PSD-95蛋白相互作用的影响需进一步研究。目前尚缺乏大量针对中医针药调节nNOS-PSD-95复合物治疗抑郁的相关研究，其作用机制与方证特点缺乏充分的理论联系，仍需进一步探索。

基金

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国家自然科学基金面上项目(82374375; 82274665)
辽宁省特聘教授项目(辽教发〔2015〕153号)
辽宁省高等学校创新团队项目(辽教函〔2018〕479号)
辽宁省自然科学基金面上项目(2024-MS-125)
辽宁省教育厅重点攻关项目(JYTZD2023195)

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2025年第43卷第4期

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doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.04.014

首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-04-10

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辽宁省高等学校创新团队项目(辽教函〔2018〕479号)

辽宁省自然科学基金面上项目(2024-MS-125)

辽宁省教育厅重点攻关项目(JYTZD2023195)

作者信息

辽宁中医药大学，辽宁　沈阳　110847

通讯作者:

任路（1966-），女，四川巴县人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中医情志病基础与临床。E-mail：lnzyxkc@sina.com。

马贤德（1979-），男，辽宁朝阳人，正高级实验师，博士研究生导师，博士，研究方向：眼针活化肥大细胞的效应机制。E-mail：maxiande197@163.com。

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

组别	n	体质量/（g）	肛温/（℃）
正常组	9	180.88±26.17	277.88±9.11	36.21±0.15	36.33±0.21
模型组	9	183.13±23.66	202.75±14.89	36.25±0.12	35.84±0.15
针刺组	8	182.38±25.29	221.50±16.34	36.23±0.17	36.16±0.32
ZL006组	8	175.88±26.26	210.25±10.74	36.20±0.16	35.94±0.17
针刺联合ANA-12组	8	200.38±18.81	206.50±9.81	36.21±0.16	35.96±0.15^##
8-OH-DPAT组	8	193.25±23.13	201.38±10.14	36.25±0.16	35.96±0.14^##

组别

体质量/（g）

肛温/（℃）

干预前

干预后

干预前

干预后

正常组

180.88±26.17

277.88±9.11

36.21±0.15

36.33±0.21

模型组

183.13±23.66

202.75±14.89

36.25±0.12

35.84±0.15

针刺组

182.38±25.29

221.50±16.34

36.23±0.17

36.16±0.32

ZL006组

175.88±26.26

210.25±10.74

36.20±0.16

35.94±0.17

针刺联合ANA-12组

200.38±18.81

206.50±9.81

36.21±0.16

35.96±0.15^##

8-OH-DPAT组

193.25±23.13

201.38±10.14

36.25±0.16

35.96±0.14^##

组别	n	糖水偏好率/（%）	游泳不动时间/（s）
正常组	9	78.89±8.67	28.63±6.05
模型组	9	32.02±11.54	109.00±10.13
针刺组	8	65.60±8.41^***	68.38±6.59^***
ZL006组	8	58.91±6.85^*	75.25±7.61^***
针刺联合ANA-12组	8	53.65±12.29^△	92.75±8.31^△△△
8-OH-DPAT组	8	49.20±8.53^**	88.63±15.16^***

组别

糖水偏好率/（%）

游泳不动时间/（s）

正常组

78.89±8.67

28.63±6.05

模型组

32.02±11.54

109.00±10.13

针刺组

65.60±8.41^***

68.38±6.59^***

ZL006组

58.91±6.85^*

75.25±7.61^***

针刺联合ANA-12组

53.65±12.29^△

92.75±8.31^△△△

8-OH-DPAT组

49.20±8.53^**

88.63±15.16^***

组别	n	水平运动得分/（分）	垂直运动得分/（分）	中央格停留时间/（s）
正常组	9	77.21±14.48	18.13±.42	9.45±1.38
模型组	9	14.12±12.27	5.25±1.28	4.44±0.57
针刺组	8	28.37±11.71^**	11.88±1.81^***	8.89±1.56^***
ZL006组	8	26.85±6.45^*	9.25±1.04^***	8.77±0.64^***
针刺联合ANA-12组	8	12.67±8.05^△△	5.25±1.04^△△△	5.56±0.72^△△△
8-OH-DPAT组	8	13.57±6.23	6.00±1.51	4.94±0.68

组别

水平运动得分/（分）

垂直运动得分/（分）

中央格停留时间/（s）

正常组

77.21±14.48

18.13±.42

9.45±1.38

模型组

14.12±12.27

5.25±1.28

4.44±0.57

针刺组

28.37±11.71^**

11.88±1.81^***

8.89±1.56^***

ZL006组

26.85±6.45^*

9.25±1.04^***

8.77±0.64^***

针刺联合ANA-12组

12.67±8.05^△△

5.25±1.04^△△△

5.56±0.72^△△△

8-OH-DPAT组

13.57±6.23

6.00±1.51

4.94±0.68