中华中医药学刊

名称	引物序列	温度/（℃）	长度/（bp）
LINC01089	F：CAGAAGTGGAAGGAGCAGAACG	60	136
	R：GAAAGATTGTCCATTCGGGG	60
RHOF	F：AGCTGAAGATCGTGATCGTGG	60	227
	R：CACGAGGTGGGTGTTCTGGTAG	60
HPD	F：CCCTACTTCCTAAACTGCCCAA	60	142
	R：GTGTCATCCACGGACCAGAAG	60
GAPDH	F：GGAAGCTTGTCATCAATGGAAATC	60	168
	R：TGATGACCCTTTTGGCTCCC	60

名称	引物序列	温度/（℃）	长度/（bp）
LINC01089	F：CAGAAGTGGAAGGAGCAGAACG	60	136
	R：GAAAGATTGTCCATTCGGGG	60
RHOF	F：AGCTGAAGATCGTGATCGTGG	60	227
	R：CACGAGGTGGGTGTTCTGGTAG	60
HPD	F：CCCTACTTCCTAAACTGCCCAA	60	142
	R：GTGTCATCCACGGACCAGAAG	60
GAPDH	F：GGAAGCTTGTCATCAATGGAAATC	60	168
	R：TGATGACCCTTTTGGCTCCC	60

组别	12 h	24 h	36 h	48 h
TPC-1组	0	0	0	0
UA10 μmol·L^-1组	12.10±1.37^*#	19.71±2.31^*#	21.08±3.23^*#	26.71±2.89^*#
UA20 μmol·L^-1组	25.85±0.84^*#	28.54±1.79^*#	45.32±1.90^*#	60.58±3.61^*#
UA40 μmol·L^-1组	58.58±0.84^*#	67.05±3.50^*#	79.26±0.41^*#	81.17±2.05*
UA80 μmol·L^-1组	79.91±2.53*	80.03±2.21*	81.12±1.28*	82.06±2.30*

组别	12 h	24 h	36 h	48 h
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UA80 μmol·L^-1组	79.91±2.53*	80.03±2.21*	81.12±1.28*	82.06±2.30*

组别	12 h	24 h
TPC-1组	22.77±1.70	70.22±1.52
UA10 μmol·L^-1组	13.37±2.49^*	31.37±4.00^*
UA20 μmol·L^-1组	11.60±3.13^*	17.74±2.25^*
UA40 μmol·L^-1组	7.91±1.68^*	11.88±1.13^*

组别	12 h	24 h
TPC-1组	22.77±1.70	70.22±1.52
UA10 μmol·L^-1组	13.37±2.49^*	31.37±4.00^*
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UA40 μmol·L^-1组	7.91±1.68^*	11.88±1.13^*

组别	细胞迁移数量	细胞侵袭数量
TPC-1组	837±20	986±25
UA10 μmol·L^-1组	436±11^*	767±19^*
UA20 μmol·L^-1组	332±10^*	524±14^*
UA40 μmol·L^-1组	52±3^*	284±9^*

组别	细胞迁移数量	细胞侵袭数量
TPC-1组	837±20	986±25
UA10 μmol·L^-1组	436±11^*	767±19^*
UA20 μmol·L^-1组	332±10^*	524±14^*
UA40 μmol·L^-1组	52±3^*	284±9^*

组别	n	LINC01089	RHOFmRNA	HPDmRNA
Nthy-ori3-1组	3	3.32±0.10^*	0.12±0.01^*	1.91±0.24^*
TPC-1组	3	1.00±0.12^#	1.00±0.05^#	1.02±0.21^#
UA10 μmol·L^-1组	3	1.46±0.15^*#	0.73±0.06^*#	0.60±0.30^#
UA20 μmol·L^-1组	3	1.50±0.11^*#	0.31±0.04^*#	0.49±0.18^*#
UA40 μmol·L^-1组	3	2.16±0.02^*#	0.21±0.03^*#	0.38±0.08^*#

组别	n	LINC01089	RHOFmRNA	HPDmRNA
Nthy-ori3-1组	3	3.32±0.10^*	0.12±0.01^*	1.91±0.24^*
TPC-1组	3	1.00±0.12^#	1.00±0.05^#	1.02±0.21^#
UA10 μmol·L^-1组	3	1.46±0.15^*#	0.73±0.06^*#	0.60±0.30^#
UA20 μmol·L^-1组	3	1.50±0.11^*#	0.31±0.04^*#	0.49±0.18^*#
UA40 μmol·L^-1组	3	2.16±0.02^*#	0.21±0.03^*#	0.38±0.08^*#

组别	n	RHOF	HPD
Nthy-ori3-1组	3	0.25±0.02^*	0.71±0.02^*
TPC-1组	3	0.69±0.05^#	0.23±0.01^#
UA10 μmol·L^-1组	3	0.52±0.02^*#	0.22±0.01^#
UA20 μmol·L^-1组	3	0.45±0.02^*#	0.19±0.01^*#
UA40 μmol·L^-1组	3	0.32±0.01^*#	0.13±0.01^*#

组别	n	RHOF	HPD
Nthy-ori3-1组	3	0.25±0.02^*	0.71±0.02^*
TPC-1组	3	0.69±0.05^#	0.23±0.01^#
UA10 μmol·L^-1组	3	0.52±0.02^*#	0.22±0.01^#
UA20 μmol·L^-1组	3	0.45±0.02^*#	0.19±0.01^*#
UA40 μmol·L^-1组	3	0.32±0.01^*#	0.13±0.01^*#

熊果酸对甲状腺乳头状癌细胞LINC01089及其靶基因表达的影响

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伊琳 ¹ , 何亚丽 ¹ , 吕红英 ¹ , 王晓科 ¹^,² , 杨鑫 ¹^,² , 顾远晖 ¹^,²

中华中医药学刊 | 博士导师新论 2025,43(9): 11-15

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中华中医药学刊 |博士导师新论 2025 , 43 (9) : 11 -15

熊果酸对甲状腺乳头状癌细胞LINC01089及其靶基因表达的影响

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伊琳¹, 何亚丽¹, 吕红英¹, 王晓科¹^,², 杨鑫¹^,², 顾远晖¹^,²

作者信息

^1.甘肃中医药大学，甘肃兰州 730000

^2.甘肃省人民医院，甘肃兰州 730000

通讯作者:

顾远晖（1969-），男，甘肃兰州人，主任医师，硕士研究生导师，研究方向：肿瘤临床及基础。E-mail：guyuanh@163.com。

作者简介:

伊琳（1971-），女，甘肃兰州人，教授，博士研究生导师，研究方向：中西医结合心脑血管疾病。

Effect of Ursolic Acid on Expressions of LINC01089 and Its Target Genes in Thyroid Papillary Carcinoma Cells

Lin YI¹, Yali HE¹, Hongying LYU¹, Xiaoke WANG¹^,², Xin YANG¹^,², Yuanhui GU¹^,²

Affiliations

^1.Gansu University of Chinese Medicine，Lanzhou 730000，Gansu，China

^2.Gansu Provincial People＇s Hospital，Lanzhou 730000，Gansu，China

出版时间: 2025-09-10 doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.09.003

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摘要

收起

目的

分析熊果酸对甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid carcinoma，PTC）长链非编码RNA（Long chain non coding RNA，lncRNA）-LINC01089及其靶基因表达的影响。

方法

LINC01089为前期通过转录组测序筛选并通过验证的差异表达lncRNA，体外常规培养甲状腺乳头状癌TPC-1细胞、正常人甲状腺细胞（Nthy-Ori3-1）。将细胞分为正常组（正常人甲状腺细胞组）、对照组（TPC-1细胞组）、不同浓度熊果酸（Ursolic acid，UA）干预组（10、20、40 μmol·L^-1）。CCK-8法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的存活率；划痕实验、Transwell实验检测不同浓度UA对TPC-1细胞水平、垂直迁移以及侵袭的影响作用；利用RT-qPCR法检测TPC-1细胞中LINC01089的相对表达量及熊果酸的干预作用；RT-qPCR及Western blot检测靶基因丝状伪足相关基因（Ras homolog family member F，RHOF）、4-羟基苯丙酮酸双加氧酶（4-Hydroxyphenylpyruvate dioxygenase，HPD）的mRNA及蛋白表达水平以及熊果酸的干预作用。

结果

不同浓度的UA（10、20、40、80 μmol·L^-1）作用不同时间（12～48 h）后均能抑制TPC-1细胞的增殖，当UA浓度为10～40 μmol·L^-1时，在12～24 h内随着浓度的增加和作用时间的延长，细胞的抑制效应逐渐增强，差异具有统计学意义（P<0.05），UA处理TPC-1细胞24 h后，细胞增殖缓慢，随着UA（10、20、40 μmol·L^-1）浓度的增高，细胞出现凋亡的形态学改变；与对照组相比，UA（10、20、40 μmol·L^-1）组可抑制TPC-1细胞迁移和侵袭，呈明显浓度依赖性，差异具有统计学意义（P<0.01）。熊果酸能不同程度上调LINC01089的表达量，下调RHOF、HPD的mRNA及蛋白表达水平。

结论

熊果酸对甲状腺乳头状癌细胞具有一定的抑制作用，其机制可能通过上调LINC01089作用于靶基因RHOF发挥抑癌效应。

关键词

长链非编码RNA / 甲状腺乳头状癌 / 熊果酸 / 基因

Abstract

收起

Objective

To analyze the effect of ursolic acid on the expressions of long chain non coding RNA（lncRNA）-LINC01089 and its targetgenes in papillary thyroid carcinoma（PTC）.

Method

LINC01089 was a differentially expressed lncRNA that was previously screened and verified by transcriptome sequencing in the early stage. TPC-1 cells and normal human thyroid cells（Nthy-ori3-1）were routinely cultured in vitro and were divided into normal human thyroid cell group，control group and UA groups（10，20，40 μmol·L^-1）. The survival rate of TPC-1 cells in each group was detected by CCK-8 assays. Scratch and Transwell experiments were conducted to investigate the effects of different concentrations of ursolic acid on the horizontal，vertical migration and invasion of TPC-1 cells. RT qPCRmethod was used to detect the relative expression level of LINC01089 in TPC-1 cells and the intervention effect of ursolic acid. RT-qPCR and Western blot were used to detect the mRNA and protein expression levels of target genes Ras Homolog Family Member F（RHOF）and 4-Hydroxyphenylpyruvate Dioxygenase（HPD）as well as the intervention effectof ursolic acid.

Results

Different concentrations of UA（10，20，40 and 80 μmol·L^-1）could inhibit the proliferation of TPC-1 cells for different periods of time（12～48 hours）. When the concentration of ursolic acid was 10～40 μmol·L^-1，the inhibitory effect of the cells gradually increased with increasing of concentration and prolongation of action time within 12 and 24 hours（P<0.05）. After treating TPC-1 cells with ursolic acid for 24 hours，the cell proliferation was slow，and as the concentration of ursolic acid（10，20 and 40 μmol·L^-1）increased，morphological changed in cell apoptosis. Compared with the control group，the ursolic acid（10，20，40 μmol·L^-1）groups inhibited the migration and invasion of TPC-1 cells in a significant concentration dependent manner（P<0.01）. Ursolic acid can up-regulate the expression of LINC01089，and down-regulate themRNA and protein expression levels of RHOF and HPD.

Conclusion

Ursolic acid has a certain inhibitory effect on thyroid papillary carcinoma cells，and its mechanism may be related with the LINC01089 and its target gene RHOF.

Key words

long chain non coding RNA / thyroid papillary carcinoma / ursolic acid / genes

引用本文

伊琳, 何亚丽, 吕红英, 王晓科, 杨鑫, 顾远晖. 熊果酸对甲状腺乳头状癌细胞LINC01089及其靶基因表达的影响. 中华中医药学刊, 2025 , 43 (9) : 11 -15 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.09.003

Lin YI, Yali HE, Hongying LYU, Xiaoke WANG, Xin YANG, Yuanhui GU. Effect of Ursolic Acid on Expressions of LINC01089 and Its Target Genes in Thyroid Papillary Carcinoma Cells[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2025 , 43 (9) : 11 -15 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.09.003

正文

收起

甲状腺癌（thyroid carcinoma，TC）是内分泌系统和头颈部肿瘤中最常见的恶性肿瘤^[1]，甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid carcinoma，PTC）是其最主要的病理类型^[2]，越来越多的证据表明^[3]，长链非编码RNA（Long chain non coding RNA，lncRNA）与miRNA及其下游靶基因的相互调控模式与肿瘤的发生密切相关，夏枯草为中医诊治甲状腺癌文献统计研究中应用排名第一的中药^[4-5]，而熊果酸（Ursolic acid，UA）为夏枯草三萜类中抗肿瘤的主要活性物质^[6]。本课题组前期进行了TPC患者肿瘤组织全转录组测序，研究结果发现LINC01089为TPC肿瘤组织中显著下调的差异表达基因并进行了初步验证^[7]，另外，生信分析发现HPD及RHOF为LINC01089的靶基因，本文在此基础上探讨熊果酸对LINC01089及相关靶基因表达的影响。

1　材料与方法

收起

1.1　材料

1.1.1　细胞购买

甲状腺乳头状癌TPC-1细胞、人甲状腺正常细胞Nthy-ori3-1细胞，均购自上海富衡生物科技有限公司，并在甘肃中医药大学中心实验室传代培养。本研究经甘肃省人民医院伦理委员会批准（伦理批号：2019-136）。

1.1.2　主要试剂与药品

熊果酸，纯度：95%，生产批号：LO3A6Y1，上海源叶生物科技有限公司；DMEM，批号：AF29498406，美国HyClone公司；胎牛血清，批号：504050519，上海翊圣生物科技有限公司；RHOF抗体，批号：40344、HPD抗体，批号：39897、GAPDH抗体，批号：00068668，北美Antibody Genetex公司；青霉素/链霉素双抗，批号：20200912，北京Solarbio公司；辣根过氧化物酶（HRP）标记羊抗兔二抗购自美国Immunoway公司；CCK-8试剂，批号：C8001420、细胞/组织总RNA提取试剂盒，批号：M1907651、qRT-PCR扩增及逆转录试剂盒，批号：H3001010，均购自上海翊圣生物科技有限公司；LINC01089和RHOF、HPD以及内参引物由北京博迈德公司设计合成。

1.1.3　主要仪器

细胞培养箱（日本三洋公司，SDK-8CS）；酶标仪（美国BIO-RAD，Benchmark plus）；倒置显微镜（日本OLYMPUS，6B40330）；Real-Time PCR仪（杭州博日科技股份有限公司，FT8000）；Western blot电泳仪及转膜仪（Mini-PROTEAN Tetra cell）；低温高速离心机（Sigma，D-37520 Osterode）。所有仪器均由甘肃中医药大学实验室提供。

1.2　方法

1.2.1　细胞培养^[8]与分组

将含10%胎牛血清的DMEM培养基（含青霉素100 U/mL、链霉素100 mg·L^-1）置于37℃、5% CO₂恒温箱内培养人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞，10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养甲状腺Nthy-ori3-1细胞。待细胞处于对数生长期时，用0.25% EDTA胰蛋白酶消化和传代，进行实验，本研究将细胞分为正常人甲状腺细胞组、TPC-1细胞组、UA不同剂量干预组（10、20、40、80 μmol·L^-1）。

1.2.2　CCK-8法^[9]检测熊果酸对TPC-1细胞增殖的影响

收集对数生长周期的TPC-1细胞，以5×10⁴/孔的密度接种于96孔板中，每孔100 μL，置入37℃，5% CO₂的培养箱中培养过夜，分别加入不同浓度的UA（10、20、40、80 μmol·L^-1），继续培养12、24、36、48 h后取出培养板于倒置相差显微镜下观察细胞形态，每孔加入10 μL CCK-8溶液，37℃继续培养孵育1 h后，取出培养板，置于酶标仪450 nm波长处测其吸光度（OD值）。计算各组细胞增殖抑制率，细胞增殖抑制率（%）＝（1-实验组A值/对照组A值）×100%。

1.2.3　细胞形态学观察

倒置显微镜下，观察TPC-1细胞和不同浓度的UA（10、20、40 μmol·L^-1）干预后的TPC-1细胞的生长情况，各组细胞培养24 h后，置于倒置显微镜下观察细胞的形态与密度，并照相记录。

1.2.4　划痕实验^[10]检测熊果酸对TPC-1细胞水平迁移的影响

将TPC-1细胞，以密度为5×10⁵个/mL的TPC-1细胞每孔2 mL接种于6孔板中，置恒温箱培养24 h，细胞生长融合达80%左右时用200 μL移液器枪头均匀划痕，用PBS洗涤去除漂浮细胞，实验组加入含UA（10、20、40 μmol·L^-1）培养液，TPC-1细胞对照组更换新的DMEM完全培养液。分别于0、12、24 h观察伤口愈合情况，并在同一部位拍照，用Image J图像处理软件分别测量0、12、24 h的划痕面积并计算其迁移率。迁移率（%）＝（0 h划痕面积-24 h划痕面积）/0 h划痕面积×100%，实验重复3次。

1.2.5　transwell实验^[11]检测熊果酸对TPC-1细胞垂直迁移和侵袭的影响

（1）Transwell迁移实验：取对数生长期的TPC-1细胞，实验组加入含UA（10、20、40 μmol·L^-1）培养液24 h后收集细胞，无血清DMEM重悬，调整细胞浓度为5×10⁵个/mL。

将24孔板放入超净台中，取出transwell小室，向24孔板中加入含10% FBS的DMEM培养基600 μL/孔，将小室放入加培养基的24孔板中。室温5 min后，上室中加入配制好的细胞悬液200 μL/孔，每个浓度设3个复孔，将细胞置于37℃，5% CO₂饱和湿度的恒温培养箱中培养16 h。取出transwell小室，PBS清洗3遍，加入4%的多聚甲醛600 μL固定15 min后，用0.1%结晶紫200 μL室温染色10 min，再用PBS缓冲液充分清洗并瞭干小室，然后用棉签轻轻擦去上室表面和边缘处的细胞。在倒置显微镜下随机选取3个视野计数小室底部细胞，并计算细胞数目的均值和照相。实验重复3次。

（2）Transwell侵袭实验：预先用无血清DMEM培养基将50 mg/L的Matrigel 1∶4稀释后，包被Transwell小室底部膜，4℃风干，水化基底膜。其余步骤同迁移实验。

1.2.6　RT-qPCR检测熊果酸对LINC01089和RHOFmRNA、HPDmRNA表达的影响

不同浓度UA处理细胞24 h后，Trizol法提取细胞的总RNA，按试剂盒说明合成cDNA。总体积20 μL；反应条件为25℃ 5min，55℃ 15min，85℃ 5min。随后用无霉无菌水稀释5倍的cDNA 2 μL作为扩增模板，反应总体积20 μL；扩增条件为95℃预变性5 min，95℃ 10 s，60℃ 30 s，40个循环，LINC01089和RHOF、HPD以及内参引物由北京博迈德公司合成。见表1。

1.2.7　Western blot检测熊果酸对TPC-1细胞中RHOF、HPD蛋白表达的影响

提取细胞总蛋白，测定蛋白浓度，以化学发光成像系统检测蛋白电泳条带灰度值，以GADPH为内参，蛋白相对表达量＝目的蛋白灰度值/GADPH灰度值，计算蛋白相对表达量。

1.2.8　统计学方法

采用SPSS 26.0软件，符合正态分布的计量资料数据以均数±标准差（

）表示，两组间比较用独立样本t检验，多组间比较用单因素方差分析，以P<0.05或P<0.01表示差异有统计学意义。

2　结果

收起

2.1　UA对甲状腺乳头状癌细胞增殖的影响

CCK-8结果表明，在一定范围内，UA对TPC-1细胞具有增殖抑制作用，并呈明显的浓度及时间依赖性。与对照组相比，实验组中不同浓度的UA（10、20、40、80 μmol·L^-1）均能抑制TPC-1细胞的增殖，当UA浓度为10～40 μmol·L^-1时，在12～24 h内随着作用时间的延长，细胞的抑制效应逐渐增强，差异具有统计学意义（P<0.05）（表2，插页Ⅰ图1）。当UA浓度为80 μmol·L^-1时细胞增殖几乎停止。因此后续实验中选用10、20、40 μmol·L^-1 3个药物浓度值进行后续实验研究。

2.2　UA对甲状腺乳头状癌细胞形态的影响

倒置显微镜下观察（插页Ⅰ图2），对照组TPC-1细胞呈梭形，边界清晰，形态相似，胞体较大，胞质均匀，贴壁生长良好，细胞排列紧密，随着作用时间的延长，形态无明显改变。与对照组相比，经不同浓度的UA（10、20、40 μmol·L^-1）处理24 h后，实验组细胞增殖缓慢，发生形态学改变，且随着UA浓度的增高，细胞体积逐渐变小，间隙增大，形态不规则，胞质出现空泡，核质比增大，核仁数目减少，核浓缩等细胞凋亡的形态学改变。

2.3　UA对甲状腺乳头状癌细胞水平迁移的影响

划痕结果显示（如表3、插页Ⅰ图3、插页Ⅱ图4），与TPC-1细胞组相比，各UA（10、20、40 μmol·L^-1）组细胞迁移率明显降低，差异有统计学意义（P<0.01），提示UA（10、20、40 μmol·L^-1）组细胞水平迁移能力明显降低，40 μmol·L^-1时最为明显。与0 h相比，12和24 h后细胞迁移率增高，且随时间的延长迁移率逐渐增高，差异有统计学意义（P<0.01）。

2.4　UA对甲状腺乳头状癌细胞垂直迁移和侵袭的影响

Transwell迁移侵袭结果显示（表4、插页Ⅲ图5），与TPC-1细胞组相比，UA（10、20、40 μmol·L^-1）组细胞迁移、侵袭穿膜细胞数量明显减少，提示UA（10、20、40 μmol·L^-1）组细胞垂直迁移能力和侵袭能力明显降低，呈明显浓度依赖性，具差异有统计学意义（P<0.01）。

2.5　UA对LINC01089和RHOFmRNA、HPDmRNA表达的影响

RT-qPCR结果显示（表5、插页Ⅱ图6），与Nthy-ori3-1细胞组相比，LINC01089、RHOF的mRNA、HPD的mRNA的表达水平在TPC-1细胞以及不同浓度的UA（10、20、40 μmol·L^-1）干预后差异具有统计学意义（P<0.05）；LINC01089在TPC-1中低表达，随着UA浓度的升高，LINC01089的表达量逐渐升高，具有浓度依赖性，差异具有统计学意义（P<0.05）。RHOF mRNA在TPC-1中高表达，随着UA浓度的升高，RHOFmRNA的表达量逐渐降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。HPDmRNA在TPC-1中低表达，UA干预后表达量进一步降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.6　UA对RHOF、HPD蛋白表达的影响

Western blot结果显示（表6、图7），与Nthy-ori3-1细胞组相比，RHOF蛋白在TPC-1细胞中高表达，不同浓度UA（10、20、40 μmol·L^-1）干预后，RHOF蛋白的表达逐渐降低（P<0.05），具有明显的浓度依赖性。HPD蛋白在TPC-1细胞中表达降低，不同浓度UA（10、20、40 μmol·L^-1）干预后，表达量进一步降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。

3　讨论

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甲状腺癌属中医“瘿瘤”的范畴。中医认为肿瘤多为有形之肿块，为邪气聚结而成，并由此产生了“坚者削之……结者散之”的治疗原则。在中医药诊治甲状腺癌的文献统计中，排名居于首位的中药是夏枯草^[4]，具有清肝明目、软坚散结的功效。研究表明，夏枯草中的三萜类具有较好的抗肿瘤作用，最主要包括齐墩果酸和UA^[12]。UA具有抗肿瘤、抗心血管疾病、抗炎等功能^[13]。研究发现UA的抗肿瘤作用机制与下调促肿瘤生长、侵袭和转移相关基因的水平，增强凋亡基因的表达有关，并能通过调节多种细胞信号转导通路，杀灭肿瘤细胞，延缓肿瘤组织生长^[14-15]。LEE N R等^[16]研究发现，UA通过诱导活性氧依赖的自噬以剂量依赖性的方式降低食管癌细胞的存活率。通过UA对多种癌细胞系的细胞毒性试验发现UA对白血病P-388等多种细胞具有显著的细胞毒性作用^[17-18]。在倒置显微镜下观察，与对照组相比，经UA干预后的TPC-1细胞增殖缓慢，且随着UA浓度的增高，出现细胞体积逐渐变小、核浓缩等形态学改变，这为进一步研究UA抑制TPC-1细胞的分子机制奠定了基础。

PTC是一种分化型甲状腺癌，它是目前世界范围内发病率增长最快的恶性肿瘤之一^[2]。随着RNA测序和微阵列等高通量技术的出现，越来越多的研究聚焦在了lncRNA与甲状腺癌中^[19-20]。lncRNA被认为是重要的表观遗传调控因子之一，可以作为信号调节器、诱饵、导向和支架，影响肿瘤细胞生长、凋亡、浸润和转移，调控癌细胞的扩散、血管内转运和转移定植^[21]。现已发现了数条与甲状腺癌相关的lncRNA，包括BANCR、PTCSC3、NAMA、Ak023948。多项研究发现LINC01089在肺癌^[22]、胃癌^[23]、乳腺癌等多种癌细胞中差异表达。本课题组前期实验验证了LINC01089在TPC-1细胞中表达降低，提示LINC01089可能抑制TPC的发生发展^[6]。本研究发现通过UA干预后能促进LINC01089的表达，随着UA浓度的升高，LINC01089的表达量呈浓度依赖性升高，由此推测UA对TPC细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用，其机制可能与促进LINC01089的表达有关。生信分析发现HPD及RHOF为LINC01089的靶基因。HPD是铁离子依赖型的非血红素加氧酶，在不同肿瘤组织中呈现不同的趋势。HPD在肺癌组织中高表达，可促进肺癌细胞的存活及成瘤能力，增强肺癌细胞的迁移能力^[24]；但在肾癌和肝癌组织中HPD的表达则低于正常组织^[25]。本研究结果显示HPD在TPC-1细胞中低表达，推测HPD在TPC中可能起抑癌作用，但在UA干预后HPD表达量未见有上升趋势，可能与实验本身存在误差有关，也可能UA没有通过HPD基因发挥作用，需要在后续研究中进行双向重复验证；RHOF是Ras相似物小分子G蛋白超家族中的一员，参与细胞骨架、细胞形态改变、细胞移动与黏附和DNA转录激活等。Rho家族成员在乳腺癌、胰腺癌等多种癌细胞中高表达，提示Rho家族成员可能成为新的肿瘤标志物^[16]。LI S等^[26]研究发现肝癌组织中RHOF的表达明显上调，能影响细胞形态，促进肝癌细胞系的迁移、侵袭和上皮-间充质转化，发挥促肿瘤作用。RHOF在TPC-1细胞中高表达，随着UA干预浓度的增高，RHOF的表达逐渐降低，提示UA对RHOF的表达具有抑制作用，而RHOF又为LINC01089的靶蛋白，推测UA可能通过上调LINC01089的表达，负反馈调节RHOF基因发挥抗肿瘤作用。见插页Ⅳ图8。

本实验仅限于体外实验阶段，后续还需通过体内外研究及双向验证进一步说明其间的调控关系，对于甲状腺乳头状癌中具体的分子机制需要后续更深入研究，为甲状腺癌的早期诊疗及预后方面提供新的准确方法。

基金

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国家自然科学基金项目(82160842)
甘肃省自然科学基金项目(20JR10RA368; 24JRRA590)
甘肃省人民医院院内科研资金项目(23GSSYD-17)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

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2025年第43卷第9期

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doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.09.003

首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-09-10

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作者信息

^1.甘肃中医药大学，甘肃兰州 730000

^2.甘肃省人民医院，甘肃兰州 730000

通讯作者:

顾远晖（1969-），男，甘肃兰州人，主任医师，硕士研究生导师，研究方向：肿瘤临床及基础。E-mail：guyuanh@163.com。

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/zhzyyxk/CN/10.13193/j.issn.1673-7717.2025.09.003

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

名称	引物序列	温度/（℃）	长度/（bp）
LINC01089	F：CAGAAGTGGAAGGAGCAGAACG	60	136
	R：GAAAGATTGTCCATTCGGGG	60
RHOF	F：AGCTGAAGATCGTGATCGTGG	60	227
	R：CACGAGGTGGGTGTTCTGGTAG	60
HPD	F：CCCTACTTCCTAAACTGCCCAA	60	142
	R：GTGTCATCCACGGACCAGAAG	60
GAPDH	F：GGAAGCTTGTCATCAATGGAAATC	60	168
	R：TGATGACCCTTTTGGCTCCC	60

名称

引物序列

温度/（℃）

长度/（bp）

LINC01089

F：CAGAAGTGGAAGGAGCAGAACG

136

R：GAAAGATTGTCCATTCGGGG

RHOF

F：AGCTGAAGATCGTGATCGTGG

227

R：CACGAGGTGGGTGTTCTGGTAG

HPD

F：CCCTACTTCCTAAACTGCCCAA

142

R：GTGTCATCCACGGACCAGAAG

GAPDH

F：GGAAGCTTGTCATCAATGGAAATC

168

R：TGATGACCCTTTTGGCTCCC

组别	12 h	24 h	36 h	48 h
TPC-1组	0	0	0	0
UA10 μmol·L^-1组	12.10±1.37^*#	19.71±2.31^*#	21.08±3.23^*#	26.71±2.89^*#
UA20 μmol·L^-1组	25.85±0.84^*#	28.54±1.79^*#	45.32±1.90^*#	60.58±3.61^*#
UA40 μmol·L^-1组	58.58±0.84^*#	67.05±3.50^*#	79.26±0.41^*#	81.17±2.05*
UA80 μmol·L^-1组	79.91±2.53*	80.03±2.21*	81.12±1.28*	82.06±2.30*

组别

12 h

24 h

36 h

48 h

TPC-1组

UA10 μmol·L^-1组

12.10±1.37^*#

19.71±2.31^*#

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28.54±1.79^*#

45.32±1.90^*#

60.58±3.61^*#

UA40 μmol·L^-1组

58.58±0.84^*#

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UA80 μmol·L^-1组

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80.03±2.21*

81.12±1.28*

82.06±2.30*

组别	12 h	24 h
TPC-1组	22.77±1.70	70.22±1.52
UA10 μmol·L^-1组	13.37±2.49^*	31.37±4.00^*
UA20 μmol·L^-1组	11.60±3.13^*	17.74±2.25^*
UA40 μmol·L^-1组	7.91±1.68^*	11.88±1.13^*

组别

12 h

24 h

TPC-1组

22.77±1.70

70.22±1.52

UA10 μmol·L^-1组

13.37±2.49^*

31.37±4.00^*

UA20 μmol·L^-1组

11.60±3.13^*

17.74±2.25^*

UA40 μmol·L^-1组

7.91±1.68^*

11.88±1.13^*

组别	细胞迁移数量	细胞侵袭数量
TPC-1组	837±20	986±25
UA10 μmol·L^-1组	436±11^*	767±19^*
UA20 μmol·L^-1组	332±10^*	524±14^*
UA40 μmol·L^-1组	52±3^*	284±9^*

组别

细胞迁移数量

细胞侵袭数量

TPC-1组

837±20

986±25

UA10 μmol·L^-1组

436±11^*

767±19^*

UA20 μmol·L^-1组

332±10^*

524±14^*

UA40 μmol·L^-1组

52±3^*

284±9^*

组别	n	LINC01089	RHOFmRNA	HPDmRNA
Nthy-ori3-1组	3	3.32±0.10^*	0.12±0.01^*	1.91±0.24^*
TPC-1组	3	1.00±0.12^#	1.00±0.05^#	1.02±0.21^#
UA10 μmol·L^-1组	3	1.46±0.15^*#	0.73±0.06^*#	0.60±0.30^#
UA20 μmol·L^-1组	3	1.50±0.11^*#	0.31±0.04^*#	0.49±0.18^*#
UA40 μmol·L^-1组	3	2.16±0.02^*#	0.21±0.03^*#	0.38±0.08^*#

组别

LINC01089

RHOFmRNA

HPDmRNA

Nthy-ori3-1组

3.32±0.10^*

0.12±0.01^*

1.91±0.24^*

TPC-1组

1.00±0.12^#

1.00±0.05^#

1.02±0.21^#

UA10 μmol·L^-1组

1.46±0.15^*#

0.73±0.06^*#

0.60±0.30^#

UA20 μmol·L^-1组

1.50±0.11^*#

0.31±0.04^*#

0.49±0.18^*#

UA40 μmol·L^-1组

2.16±0.02^*#

0.21±0.03^*#

0.38±0.08^*#

组别	n	RHOF	HPD
Nthy-ori3-1组	3	0.25±0.02^*	0.71±0.02^*
TPC-1组	3	0.69±0.05^#	0.23±0.01^#
UA10 μmol·L^-1组	3	0.52±0.02^*#	0.22±0.01^#
UA20 μmol·L^-1组	3	0.45±0.02^*#	0.19±0.01^*#
UA40 μmol·L^-1组	3	0.32±0.01^*#	0.13±0.01^*#

组别

RHOF

HPD

Nthy-ori3-1组

0.25±0.02^*

0.71±0.02^*

TPC-1组

0.69±0.05^#

0.23±0.01^#

UA10 μmol·L^-1组

0.52±0.02^*#

0.22±0.01^#

UA20 μmol·L^-1组

0.45±0.02^*#

0.19±0.01^*#

UA40 μmol·L^-1组

0.32±0.01^*#

0.13±0.01^*#