中华中医药学刊

组别	Chao1	Shannon	Coverage	Pielou_e
Z组	1 582.37±87.01	7.21±0.43	0.99±0.001	0.69±0.02
M组	1 474.35±112.13	5.23±1.94	0.99±0.002	0.52±0.17
LP组	1 071.87±172.73	6.88±0.50	0.99±0.001	0.67±0.03
QZ1组	1 223.88±53.92	5.84±0.73	0.99±0.001	0.58±0.07
QZ2组	1 092.14±124.26	5.25±0.99	0.99±0.001	0.60±0.07

组别	Chao1	Shannon	Coverage	Pielou_e
Z组	1 582.37±87.01	7.21±0.43	0.99±0.001	0.69±0.02
M组	1 474.35±112.13	5.23±1.94	0.99±0.002	0.52±0.17
LP组	1 071.87±172.73	6.88±0.50	0.99±0.001	0.67±0.03
QZ1组	1 223.88±53.92	5.84±0.73	0.99±0.001	0.58±0.07
QZ2组	1 092.14±124.26	5.25±0.99	0.99±0.001	0.60±0.07

Group 1	Group 2	pseudo-F	P值
M组	Z组	4.403 923	0.014
M组	QZ1组	5.612 179	0.003
M组	QZ2组	8.749 180	0.003

Group 1	Group 2	pseudo-F	P值
M组	Z组	4.403 923	0.014
M组	QZ1组	5.612 179	0.003
M组	QZ2组	8.749 180	0.003

通路	描述	logFC	SE	P值
PWY-6581	spirilloxanthin and 2，2＇-diketo-spirilloxanthin biosynthesis	0.634 9	0.061 3	<0.001
PWY-5531	chlorophyllide a biosynthesis II（anaerobic）	2.592 0	0.344 2	<0.001
PWY-7159	chlorophyllideabiosynthesisIII（aerobic，light independent）	2.592 0	0.344 2	<0.001
PWY-7398	coumarinsbiosynthesis（engineered）	0.418 6	0.059 2	<0.001
P621-PWY	nylon-6 oligomer degradation	3.111 0	0.672 5	<0.001
PWY-5529	superpathway of bacteriochlorophyll a biosynthesis	3.043 0	0.667 9	<0.001
CHLOROPHYLL-SYN	chlorophyllide a biosynthesis I（aerobic，light-dependent）	1.784 0	0.415 0	<0.001
PWY0-1533	methylphosphonate degradation I	1.482 0	0.374 4	<0.001
3-HYDROXYPHENY-LACETATE-DEGRADATION-PWY	4-hydroxyphenylacetate degradation	1.892 0	0.507 8	<0.001
PWY0-321	phenylacetate degradation I（aerobic）	1.816 0	0.594 2	<0.05
PWY-7046	4-coumarate degradation（anaerobic）	0.701 9	0.253 9	<0.05
DENITRIFICATION-PWY	nitrate reduction I（denitrification）	1.336 0	0.497 3	<0.05
PWY-3661	glycine betaine degradation I	1.565 0	0.619 7	<0.05
CRNFORCAT-PWY	creatinine degradation I	1.193 0	0.502 4	<0.05
PWY-6339	syringate degradation	1.114 0	0.499 0	<0.05
GALLATE-DEGRADATION-II-PWY	gallate degradation I	0.984 6	0.447 8	<0.05
PWY-5181	toluene degradation III（aerobic）（via p-cresol）	1.260 0	0.616 1	<0.05
PWY-6338	superpathway of vanillin and vanillate degradation	0.949 7	0.476 3	0.046 13
PWY-7097	vanillin and vanillate degradation I	0.949 7	0.476 3	0.046 13

通路	描述	logFC	SE	P值
PWY-6581	spirilloxanthin and 2，2＇-diketo-spirilloxanthin biosynthesis	0.634 9	0.061 3	<0.001
PWY-5531	chlorophyllide a biosynthesis II（anaerobic）	2.592 0	0.344 2	<0.001
PWY-7159	chlorophyllideabiosynthesisIII（aerobic，light independent）	2.592 0	0.344 2	<0.001
PWY-7398	coumarinsbiosynthesis（engineered）	0.418 6	0.059 2	<0.001
P621-PWY	nylon-6 oligomer degradation	3.111 0	0.672 5	<0.001
PWY-5529	superpathway of bacteriochlorophyll a biosynthesis	3.043 0	0.667 9	<0.001
CHLOROPHYLL-SYN	chlorophyllide a biosynthesis I（aerobic，light-dependent）	1.784 0	0.415 0	<0.001
PWY0-1533	methylphosphonate degradation I	1.482 0	0.374 4	<0.001
3-HYDROXYPHENY-LACETATE-DEGRADATION-PWY	4-hydroxyphenylacetate degradation	1.892 0	0.507 8	<0.001
PWY0-321	phenylacetate degradation I（aerobic）	1.816 0	0.594 2	<0.05
PWY-7046	4-coumarate degradation（anaerobic）	0.701 9	0.253 9	<0.05
DENITRIFICATION-PWY	nitrate reduction I（denitrification）	1.336 0	0.497 3	<0.05
PWY-3661	glycine betaine degradation I	1.565 0	0.619 7	<0.05
CRNFORCAT-PWY	creatinine degradation I	1.193 0	0.502 4	<0.05
PWY-6339	syringate degradation	1.114 0	0.499 0	<0.05
GALLATE-DEGRADATION-II-PWY	gallate degradation I	0.984 6	0.447 8	<0.05
PWY-5181	toluene degradation III（aerobic）（via p-cresol）	1.260 0	0.616 1	<0.05
PWY-6338	superpathway of vanillin and vanillate degradation	0.949 7	0.476 3	0.046 13
PWY-7097	vanillin and vanillate degradation I	0.949 7	0.476 3	0.046 13

清脂通脉方改善肠道菌群防治动脉粥样硬化的理论与机制探究

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张欢 ¹ , 于游 ² , 段盈竹 ¹ , 庞琳琳 ³ , 赵宏月 ³ , 张颖 ¹ , 郭鹤 ¹ , 郑一 ¹ , 于嘉详 ¹ , 刘鑫 ¹ , 戴劲 ¹ , 胡楠 ³ , 于睿 ¹

中华中医药学刊 | 国家项目点击 2025,43(7): 63-67

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中华中医药学刊 |国家项目点击 2025 , 43 (7) : 63 -67

清脂通脉方改善肠道菌群防治动脉粥样硬化的理论与机制探究

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张欢¹, 于游², 段盈竹¹, 庞琳琳³, 赵宏月³, 张颖¹, 郭鹤¹, 郑一¹, 于嘉详¹, 刘鑫¹, 戴劲¹, 胡楠³, 于睿¹

作者信息

^1.辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110847

^2.辽宁中医药大学附属二院，辽宁沈阳 110034

^3.辽宁中医药大学附属医院，辽宁沈阳 110032

通讯作者:

于睿（1969-），女（锡伯族），辽宁阜新人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中西医结合心血管。E-mail：yurui1969@163.com。

胡楠（1979-），女，辽宁鞍山人，主任医师，硕士研究生导师，博士，研究方向：中西医结合防治心脑血管疾病。E-mail：1503090282@qq.com。

作者简介:

张欢（1988-），女，辽宁锦州人，副教授，博士，研究方向：中西医结合心血管。

Investigation on Theory and Mechanism of Qingzhi Tongmai Formula（清脂通脉方）Improving Gut Microbiota to Prevent Atherosclerosis

Huan ZHANG¹, You YU², Yingzhu DUAN¹, Linlin PANG³, Hongyue ZHAO³, Ying ZHANG¹, He GUO¹, Yi ZHENG¹, Jiaxiang YU¹, Xin LIU¹, Jin DAI¹, Nan HU³, Rui YU¹

Affiliations

^1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，Liaoning，China

^2.The Second Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110034，Liaoning，China

^3.Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China

出版时间: 2025-07-10 doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.014

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摘要

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目的

基于“心合小肠”理论，探讨清脂通脉方防治动脉粥样硬化的机制。

方法

将32只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、清脂通脉方最佳剂量1组、清脂通脉方最佳剂量2组和西药对照组。正常对照组为8只雄性C57BL/6J小鼠。模型组、中药干预组及西药组以高脂饲料喂饲，正常对照组喂以普通饲料，喂饲12周后，中药干预组给予最佳剂量清脂通脉方灌胃，西药对照药为立普妥。第12周采集小鼠新鲜粪便标本，采用16S rRNA基因测序技术对各组粪便样本进行肠道菌群分析。

结果

肠道菌群16S rRNA基因测序发现，各组小鼠肠道菌群主要由厚壁菌门、拟杆菌门、变形杆菌门、TM7菌门、疣微菌门、放线菌门、脱铁杆菌门、软壁菌门、绿菌门以及绿弯菌门构成，在乳酸杆菌、异杆菌、脱硫弧菌、葡萄球菌、图灵杆菌、颤螺菌、安德克氏菌、瘤胃球菌、拟杆菌等菌属存在差异。正常对照组在门水平上的优势菌门为拟杆菌门（Bacteroidetes），其平均相对丰度为65%；模型组样本在门水平上的优势菌门为拟杆菌门（Bacteroidetes），其平均相对丰度为50%；清脂通脉方最佳剂量1组和清脂通脉方最佳剂量2组样本在门水平上的优势菌门为厚壁菌门（Firmicutes），其平均相对丰度分别为56%和65%；西药组样本在门水平上的优势菌门为厚壁菌门（Firmicutes），其平均相对丰度为65%，由各组门分类学水平菌种组成及相对丰度比较结果可知，各组优势菌门相似、但菌种的丰度比例均发生变化。

结论

清脂通脉方能够通过改善菌门构成，影响肠道菌群物种组成、结构、菌群多样性，维持肠道菌群稳态，发挥防治AS的作用。

关键词

清脂通脉方 / 动脉粥样硬化 / 肠道菌群

Abstract

收起

Objective

Based on the theory that“heart is corresponding to small intestine”，to explore the mechanism of Qingzhi Tongmai Formula（清脂通脉方）in preventing and treating atherosclerosis.

Methods

Thirty-two male ApoE^-/-mice were randomly divided into model group，Qingzhi Tongmai Formula optimal dose group 1，Qingzhi Tongmai granules optimal dose group 2 and western medicine control group. The normal control group consisted of 8 male C57BL/6Jmice. Model group，traditional Chinese medicine intervention groups and western medicine group were fed with high-fat diet，while the normal control group was fed the ordinary diet. After 12 weeks feeding，the Chinese medicine intervention groups were given the optimal dose of Qingzhi Tongmai Formula by gavage，and Lipitor was the control drug of western medicine. At the 12th week，the fresh fecal samples of mice were collected，and 16S rRNA gene sequencing technology was used to analyze the intestinal flora of fecal samples from each group.

Results

Intestinal flora 16S rRNA gene sequencing showed that the intestinal flora of mice in each group was mainly composed of Firmicutes，Bacteroides，Proteobacteria，TM7，verrucobacteria，actinobacteria，ferricobacteria，Leucoticus，Chloromycetes and chloromycetes. There were differences in Lactobacillus，heterobacillus，Vibrio desulphurificus，Staphylococcus，Turingbacillus，Spirillum fibrillans，Anderkeria，rumen coccus，Bacteroides and other bacteria. The dominant Bacteroidetes in the normal group were Bacteroidetes at the phylum level，and their average relative abundance was 65%. At the phylum level，the dominant Bacteroidetes in the model group were Bacteroidetes with an average relative abundance of 50%. Firmicutes were the dominant bacteria in samples of Qingzhi Tongmai Formula groups at the phylum level，and their average relative abundance was 56% and 65%，respectively. The dominant bacteria in the samples of Lipitor group at the phylum level were Firmicutes，with an average relative abundance of 65%. According to the results of comparison of taxonomic species composition and relative abundance of each phylum，the dominant bacteria were similar in each group，but the abundance proportion of species changed.

Conclusion

Qingzhi Tongmai Formula can affect the species composition，structure and diversity of intestinal flora by improving the composition of microflora，and maintain the homeostasis of intestinal flora，and plays a role in the prevention and treatment of atherosclerosis.

Key words

Qingzhi Tongmai Formula（清脂通脉方） / atherosclerosis / gut microbiota

引用本文

张欢, 于游, 段盈竹, 庞琳琳, 赵宏月, 张颖, 郭鹤, 郑一, 于嘉详, 刘鑫, 戴劲, 胡楠, 于睿. 清脂通脉方改善肠道菌群防治动脉粥样硬化的理论与机制探究. 中华中医药学刊, 2025 , 43 (7) : 63 -67 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.014

Huan ZHANG, You YU, Yingzhu DUAN, Linlin PANG, Hongyue ZHAO, Ying ZHANG, He GUO, Yi ZHENG, Jiaxiang YU, Xin LIU, Jin DAI, Nan HU, Rui YU. Investigation on Theory and Mechanism of Qingzhi Tongmai Formula（清脂通脉方）Improving Gut Microbiota to Prevent Atherosclerosis[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2025 , 43 (7) : 63 -67 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.014

正文

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动脉粥样硬化（AS）作为慢性炎症性疾病，是诱发心血管疾病的主要病理基础。根据中医“心合小肠”理论，心与小肠两者在生理和病理上相互影响。根据“肠心轴”学说，肠道菌群作为小肠的内源微生物，参与多种心血管疾病的发生发展。有研究显示，肠道菌群与AS之间联系密切，肠道菌群可能参与AS的发病过程，与炎症反应相关，经肠道屏障进入人体，导致肠道菌群失调，引发炎症反应，进而可能促进AS的发生^[1-2]。

在致病因素作用下，ApoE^-/-小鼠肠道菌群失调，肠道屏障功能受损，清脂通脉方可能纠正失调的肠道菌群，观察其对AS小鼠肠道菌群数量、多样性、丰度的影响，改善肠黏膜屏障功能，可能是清脂通脉方防治AS相关性心血管疾病的潜在分子生物学机制之一。

1　“心合小肠”的理论研究

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“心合小肠”理论源于中医经典《黄帝内经》，《灵枢·本输》首次提到：“心合小肠，小肠者，受盛之腑”，中医学认为“心与小肠相表里”，即小肠为心之离腑，一上一下，转利枢机合为表里，强调心可病及小肠，小肠病亦可反作用于心。肠道菌群作为小肠腑的内源微生物，与小肠的功能失调密切相关，目前的一些研究亦表明肠道菌群参与多种心血管疾病的发生发展，这一理论与现代医学研究认为AS与肠道菌群是密切相关的理念相符^[3]。肠道菌群是小肠生理功能正常发挥的生物学基础，肠道菌群通过不同产物参与人体的生理病理和免疫代谢过程，直接影响AS的发生发展^[4]。“心合小肠”理论为阐释AS与肠道菌群的关系提供了新思路。

2　材料和方法

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2.1　实验动物及分组

将健康的32只雄性ApoE^-/-小鼠（购自北京华阜康生物科技股份有限公司），6周龄，体质量（20±2）g，SPF级，适应性喂饲2周后，按照随机数字表法随机分为4组：模型组、清脂通脉方最佳剂量1组、清脂通脉方最佳剂量2组和西药组，每组8只。并以8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。

2.2　分组及给药

正常对照组（Z）：予以基础饲料喂饲，自由饮水，喂饲12周。第13周开始，在予基础饲料喂饲的同时给予0.01 mL·g^-1·d^-1纯净水灌胃，时间8周。

模型组（M）：予以高脂饲料喂饲，自由饮水，喂饲12周。第13周开始，高脂饲料喂饲的同时给予0.01 mL·g^-1·d^-1纯净水灌胃，时间8周。

西药组（LP）：予以高脂饲料喂饲，自由饮水，喂饲12周。第13周开始，在予高脂饲料喂饲的同时给予0.01 mL·g^-1·d^-1立普妥灌胃，时间8周。

清脂通脉方最佳剂量1组（QZ1）：予以高脂饲料喂饲，自由饮水，喂饲12周。第13周开始，在予高脂饲料喂饲的同时给予0.01 mL·g^-1·d^-1清脂通脉方最佳剂量1灌胃，时间8周。

清脂通脉方最佳剂量2组（QZ2）：予以高脂饲料喂饲，自由饮水，喂饲12周。第13周开始，在予高脂饲料喂饲的同时给予0.01 mL·g^-1·d^-1清脂通脉方最佳剂量2灌胃，时间8周。

2.3　肠道菌群16S rRNA基因测序

2.3.1　粪便样品采集及制备

造模成功后，采集新鲜粪便标本，用液氮冷冻，在-80℃环境中保存备用。根据标准规范的操作程序，用TIANamp Stool DNA试剂盒（天根，北京，中国）从解冻的粪便中提取微生物基因组DNA。使用1%琼脂糖凝胶电泳测定DNA纯度，通过NanoDrop ND-1000分光光度计（Thermo Fisher Scientific，Waltham，USA）测量其浓度。

2.3.2　高通量测序

使用反向引物806R（5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'）和正向引物338F（5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3'）通过聚合酶链式反应（PCR）扩增16S rRNA基因的高变区。使用AxyPrep DNA凝胶提取试剂盒（Axygen Biosciences，Union City，USA）对PCR的扩增产物进行纯化，再用Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit进行定量。构建DNA文库用TruSeq Nano，并在Agilent Bioanalyzer（Agilent Technologies Inc.，Palo Alto，USA）上进行测试。随后，对样本的双末端2×250 bp读数用Illumina Miseq平台（Illumina，San Diego，USA）进行汇集和测序。

2.3.3　测序数据分析

（1）根据官方教程，初筛高通量测序的原始数据序列质量。

（2）按照分析流程进行序列过滤、去噪、拼接等处理。

（3）展示对各样本在不同分类学水平的具体物种组成。

（4）根据ASV在不同样本中的分布，评估样本的Alpha多样性水平，绘制稀疏曲线。

（5）衡量不同样本间的Beta多样性差异及差异显著性。

（6）根据物种在各样本中的组成分布，构建关联网络，计算拓扑指数，并尝试找出关键物种，包括门、纲、目、科、属、种组成的不同分类水平，相当于通过不同的分辨率查看群落组成结构。

（7）根据测序结果，预测菌群的代谢功能，找出差异通路，并获得特定通路的物种组成。（8）整理实验结果，绘制图表，并进行统计检验分析。

3　结果

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3.1　ApoE^-/-小鼠肠道菌群物种组成变化

3.1.1　ASV/OTU韦恩图

M组与Z组有31.89%（1560个）的OTUs种类一致，独有的OTUs比例M组为29.86%（1461个）和Z组38.25%（1871个）。QZ1组与M 组有28.31%（1342个）的OTUs种类一致，独有的OTUs比例分别为31.67%（1501个）和40.02%（1897个）。QZ2组与M 组30.41%（1299个）的OTUs种类一致，独有的OTUs比例分别为23.16%（989个）和46.43%（1983个）。见插页ⅩⅧ图1。

3.1.2　Krona物种组成图

Krona圈图从内到外依次代表域、门、纲、目、科、属、种7个分类水平，扇形的大小反映了不同分类单元的相对丰度高低，并给出具体数值。在每个分类水平，各分类单元以不同的颜色加以区分。使用Krona软件主要从Phylum（门）分类水平展示组别不同分类单元的相对丰度高低，并给出具体数值^[5]。样本在不同分类水平上的物种组成及相对丰度见插页ⅩⅨ图2。

Z组在门水平上的优势菌门为拟杆菌门（Bacteroidetes），其平均相对丰度为65%，其次为厚壁菌（Firmicutes），平均相对丰度为29%，其他丰度值大于1%的菌门为变形菌门（Proteobacteria），其平均相对丰度为3%。

M组样本在门水平上的优势菌门为拟杆菌门（Bacteroidetes），其平均相对丰度为50%，其次为厚壁菌门（Firmicutes），其平均相对丰度为38%，其他丰度值大于1%的为TM7菌门、变形菌门（Proteobacteria）、有放线菌门（Actinobacteria），其平均相对丰度依次为5%、4%、2%。

QZ1组样本在门水平上的优势菌门为厚壁菌门（Firmicutes），其平均相对丰度为56%，其次为拟杆菌门（Bacteroidetes），平均相对丰度为33%。其他丰度值大于1%的菌门有变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、疣微菌门（Verrucomicrobia），其平均相对丰度依次为4%、2%、2%。

QZ2组样本在门水平上的优势菌门为厚壁菌门（Firmicutes），其平均相对丰度为65%，其次为拟杆菌门（Bacteroidetes），平均相对丰度为27%。其他丰度值大于1%的菌门有变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、疣微菌门（Verrucomicrobia），其平均相对丰度依次为4%、2%、2%。

LP组样本在门水平上的优势菌门为厚壁菌门（Firmicutes），其平均相对丰度为65%，其次为拟杆菌门（Bacteroidetes），平均相对丰度为29%。其他丰度值大于1%的菌门有变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria），其平均相对丰度均为2%。

由各组门分类学水平菌种组成及相对丰度比较结果可知，各组优势菌门相似、但菌种的丰度比例均发生显著变化。

3.2　Alpha多样性分析

肠道内容物样本的Alpha多样性分析揭示了每组小鼠肠道微生物群落组成的差异。利用各样本在不同测序深度时的微生物Alpha多样性指数构建稀释曲线（Rarefaction curve，RC）。

3.2.1　Alpha多样性指数

本实验选取了Chao1、Observed_species、Shannon、Simpson、Faith_pd、Pielou_e、Goods_coverage 7个表示物种多样性的指标。各组小鼠肠道菌群Alpha多样性指数如表1、插页ⅩⅩ图3。经过测序分析后，各组的Coverage指数均大于0.9。与Z组相比，M组Chao1指数明显降低；与M组相比，QZ1组和QZ2的Shannon、Pielou_e指数均有一定程度升高，差异有统计学意义（P<0.05）。结果提示，经过高脂饲料喂养后，ApoE^-/-小鼠肠道菌群丰度及多样性受到一定影响，予中药治疗后小鼠菌群的多样性和丰度有一定恢复。

3.2.2　稀释曲线

如插页ⅩⅧ图4所示，反映各组样本在不同测序数量时物种的丰富度、均一性或多样性。它可以用来比较样本在测序数据量，也反映测序数据量是否合理。曲线的平缓程度表示测序深度对于观测样本多样性的影响大小，曲线越平缓，表明测序结果已足够反映当前样本所包含的多样性，提示Alpha多样性接近饱和。

3.2.3　丰度等级曲线

如插页ⅩⅧ图5所示，与M组比较，Z组、中药组折线更为平缓，且在横轴OTU数目更高，说明群落中各ASV/OTU间的丰度差异小，群落组成的均匀度及丰富度更高。

3.3　Beta多样性分析

3.3.1　主坐标分析

（1）模型组和正常组。基于Jaccard距离的小鼠肠道菌群结构PCoA分析如插页ⅩⅩ图6所示，横坐标Axis1解释样本差异数据的比例为19.1%，纵坐标Axis2解释样本差异数据的比例为11.1%。图中M组位于左半部分，Z组位于右半部分。基于Bray-Curtis距离的高脂小鼠肠道菌群结构PCoA分析如插页ⅩⅪ图7所示，横坐标Axis1解释样本差异数据的比例为45.4%，纵坐标Axis2解释样本差异数据的比例为17%。图中M组位于右半部分，Z组位于左半部分，两部分在坐标轴上的投影距离较远。结果提示高脂饮食喂养的AS小鼠肠道菌群结构发生明显的差异性变化。

（2）模型组和中药组。基于Jaccard距离的小鼠肠道菌群结构PCoA分析如插页ⅩⅪ图8所示，横坐标Axis1解释样本差异数据的比例为14.5%，纵坐标Axis2解释样本差异数据的比例为10.9%。图中M组位于右半部分，中药QZ1组和QZ2组位于左半部分。基于Bray-Curtis距离的AS小鼠肠道菌群结构PCoA分析如插页ⅩⅫ图9所示，横坐标Axis1解释样本差异数据的比例为37.4%，纵坐标Axis2解释样本差异数据的比例为19.8%。图中M组位于左半部分，QZ1和QZ2组位于右半部分，两部分在坐标轴上的投影距离较远，无交叉。结果提示高脂饮食喂养的AS小鼠肠道菌群结构发生明显的差异性变化。

3.3.2　组间差异显著性分析

使用PERMANOVA可分析不同分组因素对样品差异的解释度，并使用置换检验进行显著性统计。结果如表2、插页ⅩⅫ图10所示，M组与Z组、M组与中药QZ1、QZ2组间差异度显著（P<0.05）。

3.4　物种差异分析

LEfSe分析，各组之间的物种差异性结果如插页ⅩⅩⅢ图11、插页ⅩⅩⅢ图12所示。

（1）正常组与模型组之间物种差异性分析。Z组和M组之间的物种差异性结果如插页ⅩⅩⅣ图13和插页ⅩⅩⅣ图14所示，M组与Z组之间的差异性物种主要存在于厚壁菌门、芽孢杆菌门、乳酸杆菌门、链球菌门（P<0.05）。

（2）中药组与模型组之间物种差异性分析。中药组和M组之间的物种差异性结果如插页ⅩⅩⅤ图15和插页ⅩⅩⅤ图16所示，中药QZ1组、QZ2组与M组之间的差异性物种主要存在于厚壁菌门、芽孢杆菌门、乳酸杆菌门、链球菌门（P<0.05）。

3.5　肠道菌群功能预测

对于肠道菌群的生态学研究，亦要关注菌群所具备的功能潜能。运用PRCIUSt2进行分析，参照已知的微生物基因组数据，对测序样本进行菌群基因或功能单元组成的预测，可以了解检测样本中菌群功能潜能的概况，最大化扩增子测序性价比高的优势。根据实验中的基因数据获得的功能单元，依据KEGG数据库、MetaCyc数据库以及COG数据库对代谢通路进行计算，获得代谢通路的丰度值，如插页ⅩⅩⅥ图17所示，针对本次检测到的数据，进行了代谢通路差异分析，得出19条差异代谢通路（P<0.05）。见表3。大部分菌群的功能集中在Biosynthesis的Nucleoside and Nucleotide biosynthesis和Amino Acid biosynthesis两个通路中。此外，其他与代谢相关的通路也有菌群大量富集，这表明菌群在不同分组的代谢功能中发挥重要的作用。这些通路中包括脂肪酸和脂类生物合成、碳水化合物生物合成和降解、维生素的生物合成、氨基酸降解、C1化合物利用与同化等代谢途径。

4　讨论

收起

前期研究表明，清脂通脉方能多角度、多靶点、多途径降低血脂防治AS，本方由柴胡、当归、山楂、绞股蓝及酸枣仁5味药物组成。其中柴胡味苦，性寒，归肝、胆经。具有疏肝解郁，疏散退热，升阳举陷之功。现代药理研究表明柴胡有效成分中的柴胡皂苷、挥发油、多糖、黄酮类及有机酸等，能抑制肝内胆固醇蓄积。当归味甘而重，故专能补血，其气轻而辛，故又能行血，行中有补，补中有动，活血行气。山楂味酸性温，气血并走，化瘀而不伤新血，行滞气而不伤正气，山楂含有大量的维生素C与微量元素，能够扩张血管，降低血压，降低血糖，能够改善和促进胆固醇排泄而降低血脂。酸枣仁含多量脂肪油和蛋白质，并含酸枣仁皂苷、甾醇、三萜类、多量维生素C，具有一定的降脂作用。方中诸药均有现代药理学毒理学的研究资料证明能改善脂代谢，减少动脉硬化斑块内的脂质，消退或延缓动脉硬化，达到稳定斑块作用，因而会降低严重急性心血管病的发生率，且安全，无明显不良反应^[6-8]。

肠道菌群是小肠生理功能正常发挥的生物学基础，肠道菌群在人体营养物质的消化、吸收及排泄过程中扮演着重要角色。这与小肠“受盛化物”“泌别清浊”的功能相契合。许多研究表明^[9-11]肠道菌群对人体健康有很大影响，其本身及代谢产物既能调节机体健康，又可调节膳食与宿主之间的关系，并在多种疾病表型中发挥着重要作用。肠道菌群影响胆固醇和脂类的代谢进而影响动脉粥样硬化斑块的形成，微生物代谢产物已成为动脉粥样硬化的特别重要的介质^[12]，饮食和肠道菌群代谢的特定成分对动脉粥样硬化也有不同的影响。

通过16S rRNA测序分析发现，各组小鼠肠道菌群主要由厚壁菌门、拟杆菌门、变形杆菌门、TM7菌门、疣微菌门、放线菌门、脱铁杆菌门、软壁菌门、绿菌门以及绿弯菌门构成，在乳酸杆菌、异杆菌、脱硫弧菌、葡萄球菌、图灵杆菌、颤螺菌、安德克氏菌、瘤胃球菌、拟杆菌等菌属存在差异。目前的很多研究也表明乳酸杆菌可抑制炎症分子表达以及降低氧化应激状态等途径发挥抗AS的作用^[13]，动物双歧杆菌菌株亚株乳酸F1-7和阴道乳杆菌FN3可有效改善高脂饮食引起的高脂血症，减轻肝脏脂质积累^[14]。金黄色葡萄球菌可能加重慢性炎症反应促进动脉粥样硬化斑块形成^[15-16]。拟杆菌属与引起AS发生的重要致病标志物氧化三甲胺（trimetlylamine oxide，TMAO）关系密切，TMAO增多能够影响心血管疾病发生^[17]，TMAO是AS发生的关键调节因子，可通过影响脂质代谢、炎症、氧化应激以及血栓形成等促进AS^[18-22]。因此推测清脂通脉方能够调节AS小鼠肠道菌群，降低致病菌丰度和提高益生菌丰度以达到重塑肠道菌群结构的目的，进而发挥防治AS的作用。

肠道菌群在脂质代谢中也发挥重要作用，脂质代谢紊乱常伴有肠道菌群的改变^[23-27]。肠道菌群稳态失衡，会导致机体脂代谢异常和炎症的发生。肠道中部分菌群可将三甲胺代谢成氧化三胺，可以直接影响血脂的代谢。脂质代谢异常易致肠道菌群结构失衡，通过应用疏肝健脾清脂通脉法有助于恢复肠道菌群的平衡稳态。

5　小结

收起

在本研究中，选取经典的AS小鼠作为模型，同时根据《内经》中“心合小肠”理论，清脂通脉方可奏疏肝健脾、清脂通脉之效^[28-30]，研究证实了清脂通脉方能够改善AS小鼠肠道微生态，通过影响肠道菌群物种、结构、菌群多样性与代谢物情况^[31-32]，进而起到防治AS的作用。

基金

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国家自然科学基金项目(81904069)
国家中医药管理局第七批全国老中医专家学术经验继承项目(国中医药人教函〔2022〕76号)
辽宁省科学技术厅应用基础研究计划项目(2023JH2/101600030; 2023JH2/101700241)
辽宁省博士启动基金项目(2021-BS-1762020)
辽宁省社会科学规划基金项目(L19DSH002)
辽宁中医药大学中医脏象理论及应用国家教育部重点实验室开放基金项目(zyzx1903)

参考文献

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文献

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排序方式：

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2025年第43卷第7期

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doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.014

首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-07-10

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国家中医药管理局第七批全国老中医专家学术经验继承项目(国中医药人教函〔2022〕76号)

辽宁省科学技术厅应用基础研究计划项目(2023JH2/101600030; 2023JH2/101700241)

辽宁省博士启动基金项目(2021-BS-1762020)

辽宁省社会科学规划基金项目(L19DSH002)

辽宁中医药大学中医脏象理论及应用国家教育部重点实验室开放基金项目(zyzx1903)

作者信息

^1.辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110847

^2.辽宁中医药大学附属二院，辽宁沈阳 110034

^3.辽宁中医药大学附属医院，辽宁沈阳 110032

通讯作者:

于睿（1969-），女（锡伯族），辽宁阜新人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中西医结合心血管。E-mail：yurui1969@163.com。

胡楠（1979-），女，辽宁鞍山人，主任医师，硕士研究生导师，博士，研究方向：中西医结合防治心脑血管疾病。E-mail：1503090282@qq.com。

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

组别	Chao1	Shannon	Coverage	Pielou_e
Z组	1 582.37±87.01	7.21±0.43	0.99±0.001	0.69±0.02
M组	1 474.35±112.13	5.23±1.94	0.99±0.002	0.52±0.17
LP组	1 071.87±172.73	6.88±0.50	0.99±0.001	0.67±0.03
QZ1组	1 223.88±53.92	5.84±0.73	0.99±0.001	0.58±0.07
QZ2组	1 092.14±124.26	5.25±0.99	0.99±0.001	0.60±0.07

组别

Chao1

Shannon

Coverage

Pielou_e

Z组

1 582.37±87.01

7.21±0.43

0.99±0.001

0.69±0.02

M组

1 474.35±112.13

5.23±1.94

0.99±0.002

0.52±0.17

LP组

1 071.87±172.73

6.88±0.50

0.99±0.001

0.67±0.03

QZ1组

1 223.88±53.92

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0.99±0.001

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QZ2组

1 092.14±124.26

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0.99±0.001

0.60±0.07

Group 1	Group 2	pseudo-F	P值
M组	Z组	4.403 923	0.014
M组	QZ1组	5.612 179	0.003
M组	QZ2组	8.749 180	0.003

Group 1

Group 2

pseudo-F

P值

M组

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4.403 923

0.014

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5.612 179

0.003

M组

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8.749 180

0.003

通路	描述	logFC	SE	P值
PWY-6581	spirilloxanthin and 2，2＇-diketo-spirilloxanthin biosynthesis	0.634 9	0.061 3	<0.001
PWY-5531	chlorophyllide a biosynthesis II（anaerobic）	2.592 0	0.344 2	<0.001
PWY-7159	chlorophyllideabiosynthesisIII（aerobic，light independent）	2.592 0	0.344 2	<0.001
PWY-7398	coumarinsbiosynthesis（engineered）	0.418 6	0.059 2	<0.001
P621-PWY	nylon-6 oligomer degradation	3.111 0	0.672 5	<0.001
PWY-5529	superpathway of bacteriochlorophyll a biosynthesis	3.043 0	0.667 9	<0.001
CHLOROPHYLL-SYN	chlorophyllide a biosynthesis I（aerobic，light-dependent）	1.784 0	0.415 0	<0.001
PWY0-1533	methylphosphonate degradation I	1.482 0	0.374 4	<0.001
3-HYDROXYPHENY-LACETATE-DEGRADATION-PWY	4-hydroxyphenylacetate degradation	1.892 0	0.507 8	<0.001
PWY0-321	phenylacetate degradation I（aerobic）	1.816 0	0.594 2	<0.05
PWY-7046	4-coumarate degradation（anaerobic）	0.701 9	0.253 9	<0.05
DENITRIFICATION-PWY	nitrate reduction I（denitrification）	1.336 0	0.497 3	<0.05
PWY-3661	glycine betaine degradation I	1.565 0	0.619 7	<0.05
CRNFORCAT-PWY	creatinine degradation I	1.193 0	0.502 4	<0.05
PWY-6339	syringate degradation	1.114 0	0.499 0	<0.05
GALLATE-DEGRADATION-II-PWY	gallate degradation I	0.984 6	0.447 8	<0.05
PWY-5181	toluene degradation III（aerobic）（via p-cresol）	1.260 0	0.616 1	<0.05
PWY-6338	superpathway of vanillin and vanillate degradation	0.949 7	0.476 3	0.046 13
PWY-7097	vanillin and vanillate degradation I	0.949 7	0.476 3	0.046 13

通路

描述

logFC

P值

PWY-6581

spirilloxanthin and 2，2＇-diketo-spirilloxanthin biosynthesis

0.634 9

0.061 3

<0.001

PWY-5531

chlorophyllide a biosynthesis II（anaerobic）

2.592 0

0.344 2

<0.001

PWY-7159

chlorophyllideabiosynthesisIII（aerobic，light independent）

2.592 0

0.344 2

<0.001

PWY-7398

coumarinsbiosynthesis（engineered）

0.418 6

0.059 2

<0.001

P621-PWY

nylon-6 oligomer degradation

3.111 0

0.672 5

<0.001

PWY-5529

superpathway of bacteriochlorophyll a biosynthesis

3.043 0

0.667 9

<0.001

CHLOROPHYLL-SYN

chlorophyllide a biosynthesis I（aerobic，light-dependent）

1.784 0

0.415 0

<0.001

PWY0-1533

methylphosphonate degradation I

1.482 0

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<0.001

3-HYDROXYPHENY-LACETATE-DEGRADATION-PWY

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1.892 0

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GALLATE-DEGRADATION-II-PWY

gallate degradation I

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PWY-5181

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