中华中医药学刊

基因名称	引物序列
miR-182	5＇-TTTGGCAATGGTAGAACTCACACT-3＇
U6	5＇-CGCTTCGGAGCACATATAC-3＇
circ-0002133	F：5＇-CCTTGTTTCAGGGTTCATAGTGGCG-3＇
	R：5＇-AGACCCTCTGGGCACAGGACAAC-3＇
Caspase-7	F：5＇-GTTTTCCCAAAGCTGCCCTC-3＇
	R：5＇-GCACAGTCCTGATCATCGGT-3＇
Caspase-3	F：5＇-GAGCTTGGAACGGTACGCTA-3＇
	R：5＇-GAGTCCACTGACTTGCTCCC-3＇
Bcl2L12	F：5＇-CTGGCCCAGCCTCTTCC-3＇
	R：5＇-GCACAGTCCTGATCATCGGT-3＇
GAPDH	F：5＇-CAGGAGGCATTGCTGATGAT-3＇
	R：5＇-GAAGGCTGGGGCTCATTT-3＇

基因名称	引物序列
miR-182	5＇-TTTGGCAATGGTAGAACTCACACT-3＇
U6	5＇-CGCTTCGGAGCACATATAC-3＇
circ-0002133	F：5＇-CCTTGTTTCAGGGTTCATAGTGGCG-3＇
	R：5＇-AGACCCTCTGGGCACAGGACAAC-3＇
Caspase-7	F：5＇-GTTTTCCCAAAGCTGCCCTC-3＇
	R：5＇-GCACAGTCCTGATCATCGGT-3＇
Caspase-3	F：5＇-GAGCTTGGAACGGTACGCTA-3＇
	R：5＇-GAGTCCACTGACTTGCTCCC-3＇
Bcl2L12	F：5＇-CTGGCCCAGCCTCTTCC-3＇
	R：5＇-GCACAGTCCTGATCATCGGT-3＇
GAPDH	F：5＇-CAGGAGGCATTGCTGATGAT-3＇
	R：5＇-GAAGGCTGGGGCTCATTT-3＇

临床特征	总数/（例）	P值
年龄	370	0.048
性别（男vs女）	401	0.037
分期	347	0.035
Ⅱ vs Ⅰ	257	0.009
Ⅲ vs Ⅰ	256	0.072
Ⅳ vs Ⅰ	176	0.527
Ⅲ vs Ⅱ	171	0.481
Ⅳ vs Ⅱ	91	0.192
Ⅳ vs Ⅲ	90	0.306
G	366	1.033 e-04
G2 vs G1	232	0.159
G3 vs G1	177	8.993 e-04
G4 vs G1	67	0.004
G3 vs G2	299	0.001
G4 vs G2	189	0.007
G4 vs G3	134	0.115
T	368	0.011
T2 vs T1	275	0.021
T3 vs T1	261	0.056
T4 vs T1	194	0.069
T3 vs T2	174	0.782
T4 vs T2	107	0.022
T4 vs T3	93	0.026
N
N1 vs N0	256	0.868
M
M1 vs M0	270	0.608

临床特征	总数/（例）	P值
年龄	370	0.048
性别（男vs女）	401	0.037
分期	347	0.035
Ⅱ vs Ⅰ	257	0.009
Ⅲ vs Ⅰ	256	0.072
Ⅳ vs Ⅰ	176	0.527
Ⅲ vs Ⅱ	171	0.481
Ⅳ vs Ⅱ	91	0.192
Ⅳ vs Ⅲ	90	0.306
G	366	1.033 e-04
G2 vs G1	232	0.159
G3 vs G1	177	8.993 e-04
G4 vs G1	67	0.004
G3 vs G2	299	0.001
G4 vs G2	189	0.007
G4 vs G3	134	0.115
T	368	0.011
T2 vs T1	275	0.021
T3 vs T1	261	0.056
T4 vs T1	194	0.069
T3 vs T2	174	0.782
T4 vs T2	107	0.022
T4 vs T3	93	0.026
N
N1 vs N0	256	0.868
M
M1 vs M0	270	0.608

circ-0002133/miR-182/Bcl2L12轴影响细胞凋亡与肝癌发生发展及绞股蓝皂苷的干预作用

PDF下载

王柏山 ¹ , 孙小扉 ¹ , 杨莹 ¹ , 朱敬轩 ¹ , 高浩 ¹ , 赵宇琪 ¹ , 王嘉鑫 ¹ , 杨潇 ² , 崔鹏 ¹

中华中医药学刊 | 国家项目点击 2025,43(7): 35-40

收起

中华中医药学刊 |国家项目点击 2025 , 43 (7) : 35 -40

circ-0002133/miR-182/Bcl2L12轴影响细胞凋亡与肝癌发生发展及绞股蓝皂苷的干预作用

全屏

王柏山¹, 孙小扉¹, 杨莹¹, 朱敬轩¹, 高浩¹, 赵宇琪¹, 王嘉鑫¹, 杨潇², 崔鹏¹

作者信息

^1.辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110847

^2.辽宁中医药大学附属第二医院，辽宁沈阳 110034

通讯作者:

杨潇（1981-），女，辽宁大连人，主任医师，博士，研究方向：中医药防治代谢性疾病。E-mail：17924948@qq.com。

崔鹏（1981-），男，辽宁沈阳人，讲师，硕士，研究方向：中西医结合临床。E-mail：29099778@qq.com。

作者简介:

王柏山（1975-），男，辽宁葫芦岛人，主任技师，硕士，研究方向：中西医结合基础。

Circ-0002133/miR-182/Bcl2L12 Axis Influences Apoptosis and Development of Liver Cancer and Intervention of Gypenosides

Baishan WANG¹, Xiaofei SUN¹, Ying YANG¹, Jingxuan ZHU¹, Hao GAO¹, Yuqi ZHAO¹, Jiaxin WANG¹, Xiao YANG², Peng CUI¹

Affiliations

^1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，Liaoning，China

^2.The Second Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110034，Liaoning，China

出版时间: 2025-07-10 doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.008

文章导航

摘要

收起

目的

探究circ-0002133/miR-182/Bcl2L12轴影响细胞凋亡与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的发生发展及绞股蓝皂苷（gypenosides，GPs）干预作用。

方法

在TCGA数据库中获取肝癌相关数据，进行Bcl2样蛋白12（Bcl2 like protein 12，Bcl2L12）的差异分析、生存分析及基因表达与临床相关性分析；分别使用miRanda和targetscan数据库与circAtlas和circRNADisease预测肝癌相关且与Bcl2L12能够建立ceRNA网络的circ-0002133miRNA、miR-182；并采用qRT-PCR进行临床标本验证；再将HepG2肝癌细胞予以GPs干预后，CCK-8法检测GPs对HepG2细胞抑制率，划痕实验观察细胞迁移能力；qRT-PCR检测细胞Caspase-3、Caspase-7、Bcl2L12 mRNA表达；Western Blot法检测细胞Caspase-7、Caspase-3、Bcl2L12蛋白表达。

结果

TCGA数据库结果显示，Bcl2L12在LIHC组织中表达显著升高，高Bcl2L12与年龄、性别和TNM分期异常相关，高Bcl2L12 HCC患者的生存时间比低Bcl2L12 HCC患者短；与癌旁组比较，肝癌组circ-0002133 mRNA降低（P<0.01），miR-182、Bcl2L12 mRNA升高（P<0.01）；划痕实验结果表明，与Control组相比，GPs组对HepG2肝癌细胞有明显的抑制作用；与Control组比较，GPs组细胞中Caspase-7、Caspase-3 mRNA升高（P<0.01），Bcl2L12 mRNA降低（P<0.01）；与Control组比较，GPs组细胞中Caspase-7、Caspase-3蛋白水平升高（P<0.01），Bcl2L12蛋白水平降低（P<0.01）。

结论

GPs可以抑制肝癌细胞的增殖，其作用机制可能与circ-0002133/miR-182/Bcl2L12轴介导细胞凋亡途径有关。

关键词

绞股蓝皂苷 / 肝癌 / circRNA / miR-182 / 细胞凋亡

Abstract

收起

Objective

To explore the effect of circ-0002133/miR-182/Bcl2L12 axis on cell apoptosis and the occurrence and development of hepatocellular carcinoma（HCC）and the intervention of gypenosides（GPs）.

Methods

The relevant data of liver cancer were obtained from TCGA database，and the difference analysis，survival analysis，gene expression and clinical correlation analysis of Bcl2 like protein 12（Bcl2L12）were performed. Circ-0002133miRNA and miR-182，which were associated with circAtlas and circRNADisease and were able to establish ceRNA networks with BCL2L12，were respectively predicted using miRanda and targetscan databases. The clinical specimens were verified by qRT-PCR. HepG2 hepatoma cells were then interfered with by GPs，the inhibition rate of GPs on HepG2 cells was detected by CCK-8 method，and the migration ability of HepG2 cells was observed by scratch test. The mRNA expressions of Caspase-3，Caspase-7 and Bcl2L12 were detected by qRT-PCR. The expressions of Caspase-7，Caspase-3 and Bcl2L12 were detected by Western Blot.

Results

The results of TCGA database showed that the expression of Bcl2L12 was significantly increased in LIHCtissues，and high Bcl2L12 was associated with abnormal age，sex and TNM stage. The survival time of high Bcl2L12 HCC patients was shorter than that of low Bcl2L12 HCC patients. Compared with paracuncinoma group，circ-0002133 mRNA decreased（P<0.01），while miR-182 and Bcl2L12 mRNA increased（P<0.01）. The scratch test results showed that compared with the control group，GPs group had obvious inhibitory effect on HepG2 hepatocellular carcinoma cells. Compared with those of the control group，the mRNA levels of Caspase-7 and Caspase-3 in GPs group were increased（P<0.01），and the mRNA levels of Bcl2L12 were decreased（P<0.01）. Compared with those of the control group，the protein levels of Caspase-7 and Caspase-3 in GPs group were increased（P<0.01），and the protein levels of Bcl2L12 were decreased（P<0.01）.

Conclusion

GPs can inhibit the proliferation of hepatoma cells，and the mechanism of action may be related to the apoptosis pathway mediated by circ-0002133/miR-182/Bcl2L12 axis.

Key words

gypenosides / HCC / circRNA / miR-182 / apoptosis

引用本文

王柏山, 孙小扉, 杨莹, 朱敬轩, 高浩, 赵宇琪, 王嘉鑫, 杨潇, 崔鹏. circ-0002133/miR-182/Bcl2L12轴影响细胞凋亡与肝癌发生发展及绞股蓝皂苷的干预作用. 中华中医药学刊, 2025 , 43 (7) : 35 -40 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.008

Baishan WANG, Xiaofei SUN, Ying YANG, Jingxuan ZHU, Hao GAO, Yuqi ZHAO, Jiaxin WANG, Xiao YANG, Peng CUI. Circ-0002133/miR-182/Bcl2L12 Axis Influences Apoptosis and Development of Liver Cancer and Intervention of Gypenosides[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2025 , 43 (7) : 35 -40 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.008

正文

收起

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界范围内最常见的癌症之一^[1-2]。这种恶性肿瘤每年导致很大比例的癌症相关死亡，特别是在中国^[3]。在过去的几十年里，肝癌的治疗取得了很大的进展，主要的治疗方法包括治疗性切除和化疗。然而，由于肿瘤复发转移频率高，HCC患者的5年生存率仍然很低，每年约有60万HCC患者死亡^[1，4-5]。因此，这些严峻的挑战使得寻找新的HCC诊断生物标志物和确定有效的治疗靶点变得非常迫切。最近的研究表明，环状RNA（circular RNA，circRNA）在许多癌症的发生和进展中起着至关重要的作用，并具有良好的预后和治疗潜力^[6-7]。据报道，circRNAs通过充当微小RNA（microRNA，miRNA）海绵或调节其同源mRNA的基因转录来发挥其功能^[8-9]。然而，circRNA在HCC中的表达谱和潜在的分子机制在很大程度上仍然未知。阐明circRNA及其与miRNA联合作用理解HCC的发病机制和识别潜在的新生物标志物或治疗靶点至关重要。

肝癌因肿瘤进展过快，有着高复发和高转移率，多数患者在中、晚期阶段接受治疗，预后相对较差^[10]。而作为我国传统医学，中医有着整体观念和辨证论治的理论优势，对HCC的治疗有独到的见解。中医将肝癌归于“胁痛”“积聚”“黄疸”“臌胀”等范畴，认为肝癌发病的基本前提是正气亏虚，则内外之邪损伤机体，引起脏腑功能失调，气血津液失去固摄，痰、湿、热、瘀、毒结聚于内，聚之不散，故而发之为病^[11]。中药对减轻肝癌患者的临床症状，提高患者的生存质量和免疫功能、预防复发和转移都具有重要作用^[12]。根据肝癌的中医病机可知，具有健脾益气、燥湿化痰、清热解毒的中药将对肝癌有较好的疗效。而绞股蓝是我国传统中药材，有清热解毒、益气健脾作用，其主要成分群是绞股蓝皂苷（gypenosides，GPs）。现代药理实验发现，GPs具有抗癌、抗氧化、降血糖、降血脂、抗血栓、保肝以及增强免疫力等作用^[13]

近年来研究发现，Bcl-2家族蛋白中的Bcl2样蛋白12（Bcl2 like protein 12，Bcl2L12），与原型Bcl-2家族成员不同，由于其对细胞死亡信号的独特影响，Bcl2L12表型具有高级别影响凋亡倾向^[14-15]。课题组前期研究发现，GPs可影响Bcl2L12介导的细胞凋亡进而缓解肝脏脂质沉积作用^[16]，而肝脏脂代谢异常与肝癌的发生发展密不可分，那么课题组提出是否GPs能够通过影响Bcl2L12及上游调控机制发挥抗肝癌的作用。由此，本研究旨在探究circRNA-miRNA-mRNA轴与细胞凋亡对肝癌发生发展的影响以及绞股蓝皂苷对其的干预作用。

1　材料与方法

收起

1.1　Bcl2L12的差异分析、生存分析及基因表达与临床相关性分析

为了测试Bcl2L12是否与HCC相关，首先在TCGA数据库中检索肝癌患者相关数据集，包含374例原发性肝癌组织（LIHC）和50例非肿瘤组织。剔除将年龄、性别、分期、转移等缺失对应数据的病例。将获得的数据中的临床数据部分导入R 3.6.3软件中，应用“limma”“beeswarm”及“survival”程序集对Bcl2L12表达进行差异分析、生存分析，以及对高表达Bcl2L12与年龄、性别和TNM分期的相关性进行分析。

1.2　ceRNA网络构建

首先，我们使用miRanda和targetscan数据库预测了前10个结合BCL2L12的miRNA。然后使用circAtlas和circRNADisease预测了肝癌中可以与上述miRNA结合的circRNA。最后，用cytoscape软件绘制ceRNA网络图。

1.3　肝细胞癌样本采集

收集2020年6月—2021年4月期间在辽宁省肿瘤医院肝胆普外科确诊并接受外科手术治疗的肝癌患者9例，其中HCC组织和对应癌旁组织新鲜样本9对，分别取材于肝癌及距肿瘤2 cm的非肿瘤肝组织，置于液氮保存，分为癌旁组与肝癌组进行后续实验。9例肝癌患者中，男5例，女4例，年龄42～71岁，中位年龄56岁，按照Edmondson-Steiner标准，Ⅰ＋Ⅱ、Ⅲ＋Ⅳ级分别有4、5例，所有患者术前均未接受放、化疗等抗肿瘤治疗，治疗方式均为根治性手术切除。本研究通过辽宁省肿瘤医院伦理委员会批准，伦理审批号：20220661。

1.4　药物

GPs，西安天丰生物科技有限公司（批号：NF-201910），提取来源为绞股蓝，纯度98%，规格UV98%。

1.5　主要试剂及仪器

cDNA反转录试剂盒（批号：W0008，北京天根生化科技有限公司）；qRT-PCR试剂盒（批号：962103H27W36，武汉爱博泰克生物科技有限公司）；miRNA cDNA Synthesis Kit、miRNA qPCR Assay Kit（康为世纪生物科技有限公司）；BCA蛋白浓度测定试剂盒（批号：20210425，杭州弗德生物科技有限公司）；Caspase-7一抗（批号：9492S）、Caspase-3一抗（批号：9662S），均购自美国Cell Signaling Technology公司；Bcl2L12一抗（批号：AB11305623，北京博奥森生物技术有限公司）；GAPDH抗体（武汉三鹰生物技术有限公司）；兔二抗（批号：SE134，北京索莱宝科技有限公司）。全自动生化分析仪（型号：7180型，日本日立公司）；PCR扩增仪（型号：QuantStudio 3，美国Applied Biosystems公司）；电泳仪（型号：PowerPac1645050，美国Bio-rad公司）；转膜仪（型号：Trans-Blot Turbo1704150，美国Bio-rad公司）；显影仪（型号：Tanon-5200，上海天能科技有限公司）。

1.6　实时荧光定量PCR检测肝癌组织circ-0002133、miR-182、Bcl2L12 mRNA表达

Trizol处理各组肝脏组织，用miRNeasyMinii试剂盒提取各组肝脏组织总RNA，按miSeriptⅡRT试剂盒说明进行基因组DNA去除后反转录，按miSeript SYBR Green PCR试剂盒配制扩增反应体系后进行40个循环的扩增反应。结果相对定量分析采用△△Ct法，最后使用2^-△△Ct法进行定量分析。实验所需引物序列见表1。

1.7　细胞培养、传代及分组

HCC细胞系（HepG2）购自美国菌种保藏中心（ATCC），在添加15%胎牛血清的DMEM培养基中，于5% CO₂ 培养箱中37℃培养。观察细胞贴壁生长至80%～90%，将细胞培养液倒入废液缸，沿着瓶身侧面加入少量的PBS，轻轻晃动瓶身使PBS充分接触细胞，冲洗后将PBS倒入废液缸，剩余的少量PBS用枪吸干净，重复3次；加入1 mL胰蛋白酶消化，镜下观察细胞加入3 mL培养液终止消化，反复吹打瓶底和细胞，使其充分悬浮并吸取到离心管中。在1000 r/min条件下离心3 min，弃上清，加入适量完全细胞培养液，混匀细胞完成细胞传代。细胞分为Control组与GPs组，肝癌细胞加入完全DMEM培养基，GPs组用250μg/mL含药培养基培养。

1.8　CCK-8法检测GPs对HepG2细胞抑制率并筛选药物浓度

制备HepG2细胞悬液，在96孔板中接种细胞悬液，每孔约200 mL，每孔细胞数≥1×10⁵个，每组设置6个复孔。待细胞贴壁后，分别于12、24、48 h在每孔加入10 mL CCK-8检测液，培养板放入培养箱中预培养2 h（37℃，5%CO₂）。用酶标仪检测450 nm处吸光度值，根据OD值计算细胞抑制率。细胞活力%＝（OD加药组-OD空白组）/（OD对照组-OD空白组）×100%；细胞抑制率% ＝1-细胞活力。根据结果计算IC₅₀并筛选药物浓度。

1.9　划痕实验测各组细胞迁移能力

通过胰酶消化细胞1～2 min，加入培养基终止消化反应，然后轻轻吹打混匀细胞，将细胞均匀种于6孔板。将细胞置于含5%CO₂的37℃温箱中孵育至贴壁后。用无菌移液管尖刮花。PBS洗涤后，细胞根据不同分组加入不同培养基中孵育。在相差显微镜下获得0、12、24 h的图像。创面愈合百分率的测定方法为：［1-（空区X h/空区0 h）］×100%计算。

1.10　qRT-PCR检测各组细胞中Caspase-3、Caspase-7、Bcl2L12 mRNA表达

采用qRT-PCR法检测RNA表达。用miRNeasyMinii试剂盒提取各组肝脏组织总RNA，按miSeriptⅡRT试剂盒说明进行基因组DNA去除后反转录，按miSeript SYBR Green PCR SYBRGreenMaterMix试剂盒配制扩增反应体系后进行40个循环的扩增反应。用TRIzol试剂（Invitrogen）按照说明书进行HepG2细胞的RNA提取。然后，遵循逆转录试剂盒说明书，将RNA逆转录成cDNA。并分别检测待测基因的mRNA水平，在以下反应体系中扩增：95℃10 min，95℃15 s，60℃1 min，共40次循环；95℃15 s，60℃1 min。结果相对定量分析采用△△Ct法，然后使用2^-△△Ct法进行定量分析。实验所需引物序列见表1。

1.11　Western Blot法检测各组细胞Caspase-7、Caspase-3、Bcl2L12蛋白表达

PBS分别清洗各组细胞3次，蛋白裂解液适量加入各培养瓶中，冰上裂解30 min；多次吹打后转移至1.5 mL离心管中，于4℃，12 500 r/min离心15 min。采用BCA蛋白定量试剂盒测定HepG2细胞蛋白浓度。首先将蛋白变性，后在泳道上样，经SDS-PAGE电泳后，电转移至PVDF膜，遵循比例配制一抗，4℃封闭过夜。TBST洗涤3次，每次10 min，加入HRP标记的二抗。配制化学发光液，将膜放在曝光板上，膜上滴适量的发光液，进行曝光。显影和定影后利用凝胶自动分析成像软件扫描分析结果，以GAPDH为内参照，对蛋白条带进行分析。

1.12　统计学方法

所有结果均为至少3个独立实验的平均值±标准差。应用SPSS 23.0软件进行数据统计分析，采用单因素方差分析，计量资料以

表示，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

收起

2.1　Bcl2L12基因在HCC中表达情况差异及预后分析

TCGA数据库结果显示，Bcl2L12在LIHC组织中表达显著升高（插页ⅩⅥ图1A）。在临床上，高Bcl2L12与年龄、性别和TNM分期异常相关（表2）。高Bcl2L12 HCC患者的生存时间比低Bcl2L12 HCC患者短（插页ⅩⅥ图1B）。

2.2　ceRNA网络

miRanda和targetscan数据库预测了前10个结合BCL2L12的miRNA；circAtlas和circRNADisease预测了13个与miRNA结合的circRNA；cytoscape软件绘制ceRNA网络图如插页ⅩⅥ图2所示。

2.3　临床肝癌组织circ-0002133、miR-182、Bcl2L12 mRNA表达水平

与癌旁组比较，肝癌组circ-0002133 mRNA降低（P<0.01）；miR-182、Bcl2L12 mRNA升高（P<0.01）。见图3。

2.4　不同浓度GPs对HepG2细胞活力的影响

CCK-8法检测不同时间内（12、24、48 h）GPs对细胞活力的影响。与Control组相比，GPs组细胞活力明显降低，且250μL/mg GPs干预24 h后，抑制细胞活力效果最好。见插页ⅩⅥ图4。

2.5　GPs对HepG2细胞迁移能力的影响

划痕实验结果表明，与Control组相比，GPs组对HepG2肝癌细胞有明显的抑制作用。见插页ⅩⅦ图5。

2.6　各组细胞中Caspase-7、Caspase-3、Bcl2L12 mRNA表达水平

与Control组比较，GPs组细胞中Caspase-7、Caspase-3 mRNA升高（P<0.01），Bcl2L12 mRNA降低（P<0.01）。见图6。

2.7　各组细胞中Caspase-7、Caspase-3、Bcl2L12蛋白表达水平

与Control组比较，GPs组细胞中Caspase-7、Caspase-3蛋白水平升高（P<0.01），Bcl2L12蛋白水平降低（P<0.01）。见图7。

3　讨论

收起

据2020年的估计，HCC是第六大最常诊断的癌症，也是第三大最常见的癌症死亡原因，同时也是癌症导致过早死亡的第二大常见原因^[17]。大量研究在HCC患者的组织和血清等中发现，miRNA存在异常表达，这对HCC的诊断、治疗及预后，尤其通过其作用的靶基因对调节临床靶向药有着重要意义^[18]。而由于共价环结构，circRNA比线性RNA更稳定，并且能够抵抗外核溶解性RNA衰变^[19]。新出现的证据表明，环状RNA可能在许多疾病中发挥重要作用，因为其进化的保守性和在生物体中的丰度，也使其有希望成为包括癌症在内的疾病诊断生物标志物^[20-21]。

circRNAs是一类新的调节性非编码RNA（Non-coding RNA，ncRNA）分子，它们是由特定外显子的环状化产生的，因此具有共价闭环结构，这意味着它们没有5′到3′极性和Poly（A）尾巴^[9，22]。高通量RNA测序（RNA-seq）和新型生物信息学工具的改进已经实现在各种生物体中鉴定数千种circRNAs。因其在与miRNA功能发挥作用中充当miRNA海绵起到调节作用，信号通路中circRNA-miRNA-mRNA轴的失调与几种癌症类型有关。例如，circPLEKHM3在卵巢癌中通过调控miR-9/BRCA1/DNAJB6/KLF4/AKT1轴发挥抑瘤作用^[23]。在HCC中，一些研究也揭示了大量circRNA的存在，它们作为miRNA的有效海绵，与miRNA相互作用，调节基因表达。环状RNA circMTO1作为miRNA-9的海绵抑制HCC进展^[24]。SOX9诱导的环状RNA circ-FOXP1通过海绵miR-875-3p和miR-421促进肝细胞癌的进展^[25]。miRNA的失调和功能在几乎所有生物过程中都得到了广泛的研究，然而，新发现的circRNAs在HCC中特异性生物活性的表达谱和功能仍需进一步研究。

miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控，在发育和病理过程中至关重要。早有研究发现miRNA是癌症生物学中潜在的诊断及预后的重要生物标志物。而最近越来越多的证据表明miR-182参与癌症的发生和发展，包括促进细胞增殖、血管生成、侵袭以及各种癌症类型的远处转移。相关实验结果表明miR-182表达升高在人类HCC组织和癌细胞系中非常常见^[26]。且研究结果表示。肝癌小鼠肝脏中存在差异表达的miRNA，其中以miR-182-5p的表达增加差异最为显著^[27]。miR-182在多种肿瘤中异常表达，并与肿瘤转移密切相关^[28-30]。miR-182下调转移抑制因子1（MTSS1）参与肝细胞癌（HCC）的转移^[31]。鉴于miR-182现已被证明在胶质瘤中靶向Bcl2L12^[32]，并且Bcl2L12可以在线粒体后效应物Caspase-3/7激活水平上抑制细胞凋亡，这一过程不同于之前肝癌的线粒体凋亡。因此，在以上研究的基础上，我们将关注点放在了这一调控机制是否能对肝癌的发生发展产生影响。

Bcl2L12具有与Caspase-7相互作用和中和的能力，可以在Caspase-3/7激活的水平上抑制线粒体后凋亡信号通路^[33]。细胞凋亡是细胞程序性死亡，是多细胞生物维持体内平衡的重要自我调节机制。在肝癌疾病中，细胞增殖和凋亡的失调经常发生并导致恶性表型^[34]，因此对通路的调控，是抗癌的关键分子机制。线粒体介导的细胞凋亡是细胞凋亡的两大途径之一，主要通过细胞色素c的传递和Caspase-9的激活来调控，Caspase-9切割下游Caspase-3和Caspase-7进一步导致细胞凋亡。而国外研究发现^[31]，Bcl2L12表达不影响CytC的释放或Caspase-9的激活，而是通过直接抑制Caspase-7活化以及上调Caspase-3特异性抑制剂αB-晶体蛋白，间接抑制Caspase-3活化，致使线粒体能量障碍，细胞死亡途径从凋亡转向坏死。大量研究表明，中药及有效成分可通过线粒体依赖途径诱导癌细胞凋亡。而绞股蓝（gynostemma pentaphyllum）是葫芦科绞股蓝属的多年生草质藤本植物，除五加科植物外，其是含有人参皂苷成分的植物资源之一^[35]。绞股蓝是我国中医传统药材，据《本草纲目》记载其有清热解毒、益气健脾、生津止渴和化浊降脂等功效。绞股蓝含有多种化学成分，包含皂苷类、黄酮类、多糖类、氨基酸类及微量元素等，其主要的活性成分是GPs和黄酮^[36]。此外，有研究表示GPs水解物可显著抑制离体培养的人非小细胞肺癌A549细胞和人肝癌Hep3B细胞的增殖^[37]。

因此，本研究以circ-0002133/miR-182/Bcl2L12轴为切入点，进一步探究其介导的细胞凋亡对HCC的影响及GPs对其的干预作用。我们的实验结果表明，肝癌组织中circ-0002133 mRNA降低；miR-182、Bcl2L12 mRNA升高，证明在肝癌疾病中circ-0002133可能通过充当miR-182海绵或调节其同源mRNA的基因转录来发挥其功能，进而调控其下游靶基因Bcl2L12。HepG2细胞中，经GPs给药后，其Caspase-7、Caspase-3 mRNA及蛋白水平升高，Bcl2L12 mRNA及蛋白水平降低，证实GPs可能通过抑制Bcl2L12对Caspase-7和Caspase-3线粒体后效应激活的抑制作用，进而促进癌症细胞的凋亡。

综上所述，GPs可以改善肝癌的发生与发展，其作用机制可能与circ-0002133/miR-182/Bcl2L12轴介导细胞凋亡途径有关。本研究首次证明了circ-0002133/miR-182可能是治疗肝癌的潜在靶点并在肿瘤的诊断和预后中具有巨大潜能。而GPs可通过对该轴介导的细胞凋亡途径，进一步干预肝癌的治疗与预后。

基金

收起

国家自然科学基金面上项目(82274455)
国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目(zyyzdxk-2023034)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

［1］

TORRE L A，BRAY F，SIEGEL R L，et al. Global cancer statistics，2012［J］. CA A Cancer JClinicians，2015，65（2）：87-108.

［2］

YANGJD，ROBERTSL R. Hepatocellular carcinoma：a global view［J］. Nat Rev Gastroenterol Hepatol，2010，7（8）：448-458.

［3］

JEMAL A，BRAY E，CENTER M M，et al. Global cancer statistics［J］. CA Cancer JClin，2011，61（2）：69-90.

［4］

EL-SERAG H B. Hepatocellular carcinoma［J］. N Engl J Med，2011，365（12）：1118-1127.

［5］

HAO K，LUK JM，LEE N P，et al. Predicting prognosis in hepatocellular carcinoma after curative surgery with common clinicopathologic parameters［J］. BMC Cancer，2009，9：389.

［6］

LI Y，ZHENG Q P，BAO C Y，et al. Circular RNA is enriched and stable in exosomes：a promising biomarker for cancer diagnosis［J］. Cell Res，2015，25（8）：981-984.

［7］

ZHANG SJ，CHEN X，LI C P，et al. Identification and characterization of circular RNAs as a new class of putative biomarkers in diabetes retinopathy［J］. Invest Ophthalmol Vis Sci，2017，58（14）：6500-6509.

［8］

CHEN L，ZHANGS，WU J，et al. circRNA_100290 plays a role in oral cancer by functioning as a sponge of the miR-29 family［J］. Oncogene，2017，36（32）：4551-4561.

［9］

ASHWAL-FLUSS R，MEYER M，PAMUDURTI N R，et al. circRNA biogenesis competes with pre-mRNA splicing［J］. Mol Cell，2014，56（1）：55-66.

［10］

SIMPSON H N，MCGUIRE B M. Screening and detection of hepatocellular carcinoma［J］. Clin Liver Dis，2015，19（2）：295-307.

［11］

LI Y C，ZHANG H X. Research overview on the mechanism of traditional Chinese medicine in preventing and treating liver cancer［J］. Pract Tradit Chin Intern Med，2023，37（2）：12-14.

［12］

HU B，AN H M，WANG S S，et al. Preventive and therapeutic effects of Chinese herbal compounds against hepatocellular carcinoma［J］. Molecules，2016，21（2）：142.

［13］

YU W，ZHANGB，ZHANGX，et al. Protective Effect of gypenoside on peripheral nerve toxicity induced by oxaliplatin in rats and lts mechanism［J］. Nat Prod Res Dev，2018，30（10）：1782-1786.

［14］

CHERNOVA O，COWELL JK. Molecular definition of chromosome translocations involving 10q24 and 19q13 in human malignant glioma cells［J］. Cancer Genet Cytogenet，1998，105（1）：60-68.

［15］

MAGNANI I，CHIARIELLO E，CONTI A M，et al. A recurrent 19q11-12 breakpoint suggested by cytogenetic and fluorescence in situ hybridization analysis of three glioblastoma cell lines［J］. Cancer Genet Cytogenet，1999，110（2）：82-86.

［16］

ZHAO Z，GAO H，YANG Y，et al. Gypenosides improve liver lipid deposition in ApoE-/-ASmice by inhibiting the Bcl2L12 apoptosis pathway［J］. Chin JIntegr Tradit West Med，2023，43（10）：1221-1227.

［17］

RUMGAY H，ARNOLD M，FERLAY J，et al. Global burden of primary liver cancer in 2020 and predictions to 2040［J］. J Hepatol，2022，77（6）：1598-1606.

［18］

ZHAO JY，WANG Y H，SU H H，et al. Non-coding RNAs as biomarkers for hepatocellular carcinoma-a systematic review［J］. Clin Res Hepatol Gastroenterol，2021，45（6）：101736.

［19］

MEMCZAK S，JENS M，ELEFSINIOTI A，et al. Circular RNAs are a large class of animal RNAs with regulatory potency［J］. Nature，2013，495（7441）：333-338.

［20］

BAHN JH，ZHANG Q，LI F，et al. The landscape of microRNA，Piwi-interacting RNA，and circular RNA in human saliva［J］. Clin Chem，2015，61（1）：221-230.

［21］

CHEN L L. The biogenesis and emerging roles of circular RNAs［J］. Nat Rev Mol Cell Biol，2016，17（4）：205-211.

［22］

WILUSZJE，SHARPPA. Molecular biology：A circuitous route to noncoding RNA［J］. Science，2013，340（6131）：440-441.

［23］

ZHANG L，ZHOU Q，QIU Q Z，et al. CircPLEKHM3 acts as a tumor suppressor through regulation of the miR-9/BRCA1/DNAJB6/KLF4/AKT1 axis in ovarian cancer［J］. Mol Cancer，2019，18（1）：144.

［24］

HAN D，LI JX，WANG H M，et al. Circular RNA circMTO1 acts as the sponge of microRNA-9 to suppress hepatocellular carcinoma progression［J］. Hepatology，2017，66（4）：1151-1164.

［25］

WANG W，LI Y，LI X L，et al. Circular RNA circ-FOXP1 induced by SOX9 promotes hepatocellular carcinoma progression via sponging miR-875-3p and miR-421［J］. Biomed Pharmacother，2020，121：109517.

［26］

HU J W，WANG Z Y，WANG J J，et al. microRNA-182 promotes cell migration by targeting programmed cell death 4 in hepatocellular carcinoma cells［J］. Onco Targets Ther，2020，13：9159-9167.

［27］

JIANG Y，CHEN J H，YUE C，et al. The role of miR-182-5p in hepatocarcinogenesis of trichloroethylene in mice［J］. Toxicol Sci，2017，156（1）：208-216.

［28］

LIU Z J，LIU JS，SEGURA M F，et al. miR-182 overexpression in tumourigenesis of high-grade serous ovarian carcinoma［J］. J Pathol，2012，228（2）：204-215.

［29］

KONG W Q，BAI R，LIU T，et al. microRNA-182 targets cAMP-responsive element-binding protein 1 and suppresses cell growth in human gastric adenocarcinoma［J］. FEBS J，2012，279（7）：1252-1260.

［30］

SUN Y H，FANG R，LI C G，et al. Hsa-mir-182 suppresses lung tumorigenesis through down regulation of RGS17 expression in vitro［J］. Biochem Biophys Res Commun，2010，396（2）：501-507.

［31］

WANG J，LI J W，SHEN J L，et al. microRNA-182 downregulates metastasis suppressor 1 and contributes to metastasis of hepatocellular carcinoma［J］. BMC Cancer，2012，12：227.

［32］

JIANG L L，MAO P，SONG L B，et al. miR-182 as a prognostic marker for glioma progression and patient survival［J］. Am J Pathol，2010，177（1）：29-38.

［33］

STEGH A H，KIM H，BACHOO R M，et al. Bcl2L12 inhibits post-mitochondrial apoptosis signaling in glioblastoma［J］. Genes Dev，2007，21（1）：98-111.

［34］

SCHATTENBERG J M，SCHUCHMANN M，GALLE P R. Cell death and hepatocarcinogenesis：Dysregulation of apoptosis signaling pathways［J］. JGastroenterol Hepatol，2011，26（Suppl 1）：213-219.

［35］

WANG J，YANG J L，ZHOU P P，et al. Further new gypenosides from Jiaogulan（Gynostemma pentaphyllum）［J］. J Agric Food Chem，2017，65（29）：5926-5934.

［36］

XIE Z H，HUANG H Q，ZHAO Y，et al. Chemical composition and anti-proliferative and anti-inflammatory effects of the leaf and whole-plant samples of diploid and tetraploid Gynostemma pentaphyllum（Thunb. ）Makino［J］. Food Chem，2012，132（1）：125-133.

［37］

LI N，WU CF，XU X Y，et al. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated from hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum［J］. Eur J Med Chem，2012，50：173-178.

2025年第43卷第7期

PDF下载

引用本文

BibTeX

文章信息

doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.008

首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-07-10

补充材料

相关文章

文章信息

作者

出版历史

基金

国家自然科学基金面上项目(82274455)

国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目(zyyzdxk-2023034)

作者信息

^1.辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110847

^2.辽宁中医药大学附属第二医院，辽宁沈阳 110034

通讯作者:

杨潇（1981-），女，辽宁大连人，主任医师，博士，研究方向：中医药防治代谢性疾病。E-mail：17924948@qq.com。

崔鹏（1981-），男，辽宁沈阳人，讲师，硕士，研究方向：中西医结合临床。E-mail：29099778@qq.com。

参考文献

分享链接

https://castjournals.cast.org.cn/joweb/zhzyyxk/CN/10.13193/j.issn.1673-7717.2025.07.008

分享至

全文二维码

扫描看全文

引用本文

BibTeX

本文的引用情况

2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

关闭全屏

BibTeX
EndNote
RefWorks
TxT