中华中医药学刊

基因	序列号	引物类型	引物（5＇-3＇）	扩增片段/（bp）
β-actin	NM_031144	荧光定量	上游：CCCATCTATGAGGGTTACGC	150
			下游：TTTAATGTCACGCACGATTTC
Hmgcr	NM_013134	荧光定量	上游：TCGTCTTCAGCACTGTCGT	130
			下游：GAACTCAGGGCAAACTTGG
Hmgcr	NC_051337.1	甲基化	上游：AAAATAGGGATATAATTGTGTAGGTG	257
			下游：ATCCTCTCTAAAATCCCTCTACTCT
Sqle	NM_017136	荧光定量	上游：CTGGGAGATGCGTATAACC	184
			下游：TCACAACAAAGGAATGGCT
Sqle	NC_051342.1	甲基化	上游：GTAGTTATTTTTTGTTGGAGA	232
			下游：TTACACACTTCTTCATTCAAC

基因	序列号	引物类型	引物（5＇-3＇）	扩增片段/（bp）
β-actin	NM_031144	荧光定量	上游：CCCATCTATGAGGGTTACGC	150
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Hmgcr	NM_013134	荧光定量	上游：TCGTCTTCAGCACTGTCGT	130
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Hmgcr	NC_051337.1	甲基化	上游：AAAATAGGGATATAATTGTGTAGGTG	257
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Sqle	NC_051342.1	甲基化	上游：GTAGTTATTTTTTGTTGGAGA	232
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组别	iWAT胆固醇	eWAT胆固醇
CON	143.7±81.1	156.1±36.4
T2DM	78.8±35.9^*	92.0±25.9^**
MET	143.4±89.5^#	165.2±57.8^##
GQDL	105.2±41.3	168.3±64.8^##
GQDH	126.3±56.7^#	206.4±99.9^##

组别	iWAT胆固醇	eWAT胆固醇
CON	143.7±81.1	156.1±36.4
T2DM	78.8±35.9^*	92.0±25.9^**
MET	143.4±89.5^#	165.2±57.8^##
GQDL	105.2±41.3	168.3±64.8^##
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组别	n	iWAT	eWAT
CON	3	1.0±0.0	1.0±0.0
T2DM	3	0.5±0.3^*	0.6±0.2
MET	3	1.0±0.9	0.8±0.2
GQDL	3	2.0±2.0^#	1.1±0.4^#
GQDH	3	1.1±0.3^#	1.6±0.4^#

组别	n	iWAT	eWAT
CON	3	1.0±0.0	1.0±0.0
T2DM	3	0.5±0.3^*	0.6±0.2
MET	3	1.0±0.9	0.8±0.2
GQDL	3	2.0±2.0^#	1.1±0.4^#
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组别	n	iWAT	eWAT
CON	3	1.0±0.0	1.0±0.0
T2DM	3	0.7±0.0^*	0.9±0.1
MET	3	1.0±0.2	1.0±0.5
GQDL	3	1.1±0.5	0.7±0.3
GQDH	3	1.3±0.3	1.0±0.3

组别	n	iWAT	eWAT
CON	3	1.0±0.0	1.0±0.0
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GQDL	3	1.1±0.5	0.7±0.3
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组别	iWAT	eWAT
CON	1.1±1.1	4.5±6.7
T2DM	0.9±0.9	5.6±4.8
MET	1.1±0.8	3.3±3.9
GQDL	1.9±1.5	2.0±1.1
GQDH	1.2±0.6	0.6±0.5^#

组别	iWAT	eWAT
CON	1.1±1.1	4.5±6.7
T2DM	0.9±0.9	5.6±4.8
MET	1.1±0.8	3.3±3.9
GQDL	1.9±1.5	2.0±1.1
GQDH	1.2±0.6	0.6±0.5^#

组别	iWAT	eWAT
CON	0.6±0.3	0.7±0.2
T2DM	0.6±0.1	0.9±0.5
MET	0.6±0.3	1.1±0.7
GQDL	0.7±0.2	0.6±0.1
GQDH	0.6±0.3	0.8±0.5

组别	iWAT	eWAT
CON	0.6±0.3	0.7±0.2
T2DM	0.6±0.1	0.9±0.5
MET	0.6±0.3	1.1±0.7
GQDL	0.7±0.2	0.6±0.1
GQDH	0.6±0.3	0.8±0.5

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs	CG1	CG2	CG3
CON	6	1.3±0.8	0.7±0.5	1.3±1.0	0.0±0.0	6.4±5.4	0.4±1.0	3.8±5.9	11.4±12.2	4.2±6.5
T2DM	6	1.4±1.2	0.4±0.4	0.4±0.6	0.8±1.5	10.5±9.8	0.0±0.0	9.1±11.9	17.5±17.3	5.0±8.4
MET	6	1.3±1.0	0.6±0.8	1.1±1.3	0.3±0.6	8.5±5.7	0.0±0.0	5.6±6.2	18.0±12.8	1.9±4.5
GQDL	6	0.8±0.7	0.6±0.6	0.5±1.3	1.0±1.1	2.9±3.8	0.3±0.8	2.4±5.8	6.4±7.2	0.0±0.0
GQDH	6	1.4±1.1	0.8±1.0	0.5±0.7	1.0±1.2	7.0±4.2	1.1±1.7	9.4±7.6	11.7±11.0	0.0±0.0

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs	CG1	CG2	CG3
CON	6	1.3±0.8	0.7±0.5	1.3±1.0	0.0±0.0	6.4±5.4	0.4±1.0	3.8±5.9	11.4±12.2	4.2±6.5
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组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs
CON	6	0.1±0.2	0.1±0.3	0.0±0.0	0.2±0.4	0.0±0.0	0.1±0.3
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组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs
CON	6	0.1±0.2	0.1±0.3	0.0±0.0	0.2±0.4	0.0±0.0	0.1±0.3
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GQDH	6	0.4±0.3	0.4±0.4	0.9±1.3	0.4±0.5	0.0±0.0	0.2±0.5

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs	CG1	CG2	CG3
CON	6	2.3±0.5	0.6±0.5	1.0±1.0	0.0±0.0	19.1±9.5	0.4±0.9	25.4±15.4	23.7±15.3	8.2±7.9
T2DM	6	2.1±0.7	0.3±0.4	0.1±0.3	0.3±0.6	19.8±7.5	0.5±0.8	25.0±15.4	34.5±18.7	0.0±0.0^*
MET	6	2.7±1.4	1.1±0.6^#	1.3±1.1^#	0.5±0.8	17.7±12.9	1.4±2.3	16.9±15.5	34.5±23.3	1.8±4.7
GQDL	6	1.6±1.5	0.6±0.7	0.7±0.9	0.6±1.5	11.1±10.5	0.6±1.0	16.9±19.3	16.1±18.7	0.0±0.0
GQDH	6	2.0±0.5	0.5±0.3	0.4±0.4	0.2±0.5	16.6±6.3	1.2±1.1	23.2±18.8	26.6±9.2	0.0±0.0

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs	CG1	CG2	CG3
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T2DM	6	2.1±0.7	0.3±0.4	0.1±0.3	0.3±0.6	19.8±7.5	0.5±0.8	25.0±15.4	34.5±18.7	0.0±0.0^*
MET	6	2.7±1.4	1.1±0.6^#	1.3±1.1^#	0.5±0.8	17.7±12.9	1.4±2.3	16.9±15.5	34.5±23.3	1.8±4.7
GQDL	6	1.6±1.5	0.6±0.7	0.7±0.9	0.6±1.5	11.1±10.5	0.6±1.0	16.9±19.3	16.1±18.7	0.0±0.0
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组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs
CON	6	0.3±0.3	0.3±0.2	0.5±0.8	0.0±0.0	0.8±0.9	0.3±0.5
T2DM	6	0.2±0.3	0.2±0.3	0.3±0.5	0.3±0.5	0.2±0.4	0.1±0.3
MET	6	0.4±0.5	0.4±0.5	1.5±2.1	0.0±0.0	0.5±1.2	0.1±0.2
GQDL	6	0.9±1.1	0.8±1.0	1.6±1.9	0.1±0.3	1.4±1.9	0.8±1.3
GQDH	6	0.9±0.4	0.2±0.3	0.6±1.1	0.0±0.0	0.6±1.4	0.1±0.3

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs
CON	6	0.3±0.3	0.3±0.2	0.5±0.8	0.0±0.0	0.8±0.9	0.3±0.5
T2DM	6	0.2±0.3	0.2±0.3	0.3±0.5	0.3±0.5	0.2±0.4	0.1±0.3
MET	6	0.4±0.5	0.4±0.5	1.5±2.1	0.0±0.0	0.5±1.2	0.1±0.2
GQDL	6	0.9±1.1	0.8±1.0	1.6±1.9	0.1±0.3	1.4±1.9	0.8±1.3
GQDH	6	0.9±0.4	0.2±0.3	0.6±1.1	0.0±0.0	0.6±1.4	0.1±0.3

Hmgcr	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
TotalC	-0.037	0.848	-0.263	0.160	-0.137	0.470	0.018	0.923	0.014	0.943	0.079	0.680	0.256	0.197
CGs	0.062	0.746	-0.217	0.249	-0.286	0.126	-0.174	0.357	-0.175	0.356	0.031	0.873	0.026	0.898
CH	-0.227	0.227	-0.194	0.303	0.132	0.488	0.232	0.217	0.227	0.228	0.188	0.319	0.458	0.016^*
CAs	-0.362	0.050^*	-0.400	0.028^*	0.218	0.247	0.384	0.036^*	0.364	0.048^*	0.397	0.030^*	0.320	0.103
CCs	-0.144	0.448	-0.178	0.345	-0.021	0.910	-0.153	0.419	-0.152	0.424	0.087	0.647	0.341	0.082
CTs	0.181	0.339	0.188	0.321	-0.101	0.594	-0.065	0.735	-0.052	0.783	-0.273	0.144	0.209	0.295
CG1	0.278	0.137	-0.263	0.160	-0.457	0.011^*	-0.236	0.209	-0.237	0.207	-0.175	0.356	0.035	0.864
CG2	0.006	0.974	-0.030	0.876	-0.096	0.615	-0.056	0.769	-0.053	0.782	-0.020	0.917	0.090	0.656
CG3	-0.030	0.874	-0.272	0.146	-0.071	0.711	-0.004	0.983	-0.033	0.864	0.118	0.535	-0.191	0.339

Hmgcr	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
TotalC	-0.037	0.848	-0.263	0.160	-0.137	0.470	0.018	0.923	0.014	0.943	0.079	0.680	0.256	0.197
CGs	0.062	0.746	-0.217	0.249	-0.286	0.126	-0.174	0.357	-0.175	0.356	0.031	0.873	0.026	0.898
CH	-0.227	0.227	-0.194	0.303	0.132	0.488	0.232	0.217	0.227	0.228	0.188	0.319	0.458	0.016^*
CAs	-0.362	0.050^*	-0.400	0.028^*	0.218	0.247	0.384	0.036^*	0.364	0.048^*	0.397	0.030^*	0.320	0.103
CCs	-0.144	0.448	-0.178	0.345	-0.021	0.910	-0.153	0.419	-0.152	0.424	0.087	0.647	0.341	0.082
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CG1	0.278	0.137	-0.263	0.160	-0.457	0.011^*	-0.236	0.209	-0.237	0.207	-0.175	0.356	0.035	0.864
CG2	0.006	0.974	-0.030	0.876	-0.096	0.615	-0.056	0.769	-0.053	0.782	-0.020	0.917	0.090	0.656
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Hmgcr	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
TotalC	0.000	1.000	-0.076	0.691	0.109	0.568	0.222	0.239	0.217	0.249	0.212	0.261	-0.132	0.529
CGs	0.139	0.463	-0.042	0.825	0.011	0.952	0.074	0.696	0.078	0.684	0.114	0.550	-0.105	0.618
CH	-0.220	0.243	0.052	0.787	0.081	0.672	0.232	0.217	0.214	0.257	0.242	0.197	0.010	0.963
CAs	-0.327	0.077	-0.063	0.741	0.334	0.071	0.476	0.008^*	^*0.437	0.016^*	0.375	0.041^*	0.101	0.631
CCs	0.187	0.322	0.116	0.542	-0.425	0.019^*	-0.237	0.207	-0.244	0.194	0.060	0.753	-0.214	0.305
CTs	0.102	0.590	0.032	0.866	0.013	0.944	0.147	0.438	0.167	0.379	-0.128	0.499	0.099	0.636
CG1	0.077	0.684	0.000	1.000	0.002	0.992	-0.181	0.339	-0.160	0.397	0.053	0.780	-0.303	0.140
CG2	0.209	0.268	-0.025	0.897	-0.078	0.683	0.229	0.224	0.208	0.271	-0.021	0.913	0.000	1.000
CG3	-0.453	0.012^*	-0.378	0.039^*	0.414	0.023^*	0.174	0.358	0.186	0.326	0.465	0.010^**	0.422	0.036^*

Hmgcr	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
TotalC	0.000	1.000	-0.076	0.691	0.109	0.568	0.222	0.239	0.217	0.249	0.212	0.261	-0.132	0.529
CGs	0.139	0.463	-0.042	0.825	0.011	0.952	0.074	0.696	0.078	0.684	0.114	0.550	-0.105	0.618
CH	-0.220	0.243	0.052	0.787	0.081	0.672	0.232	0.217	0.214	0.257	0.242	0.197	0.010	0.963
CAs	-0.327	0.077	-0.063	0.741	0.334	0.071	0.476	0.008^*	^*0.437	0.016^*	0.375	0.041^*	0.101	0.631
CCs	0.187	0.322	0.116	0.542	-0.425	0.019^*	-0.237	0.207	-0.244	0.194	0.060	0.753	-0.214	0.305
CTs	0.102	0.590	0.032	0.866	0.013	0.944	0.147	0.438	0.167	0.379	-0.128	0.499	0.099	0.636
CG1	0.077	0.684	0.000	1.000	0.002	0.992	-0.181	0.339	-0.160	0.397	0.053	0.780	-0.303	0.140
CG2	0.209	0.268	-0.025	0.897	-0.078	0.683	0.229	0.224	0.208	0.271	-0.021	0.913	0.000	1.000
CG3	-0.453	0.012^*	-0.378	0.039^*	0.414	0.023^*	0.174	0.358	0.186	0.326	0.465	0.010^**	0.422	0.036^*

Sqle	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
Total C	0.281	0.133	0.163	0.391	-0.359	0.052	-0.477	0.008^**	-0.497	0.005^**	-0.344	0.062	-0.034	0.880
CH	0.281	0.132	0.111	0.558	-0.406	0.026^*	-0.132	0.488	-0.164	0.388	-0.219	0.244	-0.165	0.463
CGs	-0.043	0.821	0.265	0.157	0.052	0.783	-0.488	0.006^**	-0.497	0.005^**	-0.278	0.138	-0.038	0.866
CAs	0.344	0.062	0.093	0.626	-0.414	0.023^*	-0.407	0.025^*	-0.394	0.031^*	-0.280	0.134	-0.033	0.884
CTs	-0.017	0.927	0.167	0.379	0.066	0.728	-0.165	0.385	-0.215	0.254	-0.040	0.834	-0.224	0.316
CCs	0.166	0.380	0.011	0.956	-0.285	0.127	-0.316	0.089	-0.338	0.068	-0.243	0.196	0.128	0.572

Sqle	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
Total C	0.281	0.133	0.163	0.391	-0.359	0.052	-0.477	0.008^**	-0.497	0.005^**	-0.344	0.062	-0.034	0.880
CH	0.281	0.132	0.111	0.558	-0.406	0.026^*	-0.132	0.488	-0.164	0.388	-0.219	0.244	-0.165	0.463
CGs	-0.043	0.821	0.265	0.157	0.052	0.783	-0.488	0.006^**	-0.497	0.005^**	-0.278	0.138	-0.038	0.866
CAs	0.344	0.062	0.093	0.626	-0.414	0.023^*	-0.407	0.025^*	-0.394	0.031^*	-0.280	0.134	-0.033	0.884
CTs	-0.017	0.927	0.167	0.379	0.066	0.728	-0.165	0.385	-0.215	0.254	-0.040	0.834	-0.224	0.316
CCs	0.166	0.380	0.011	0.956	-0.285	0.127	-0.316	0.089	-0.338	0.068	-0.243	0.196	0.128	0.572

Sqle	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
Total C	-0.143	0.409	0.133	0.483	0.078	0.683	-0.129	0.496	-0.164	0.387	0.176	0.351	0.108	0.641
CH	-0.151	0.450	0.206	0.276	0.083	0.662	-0.109	0.566	-0.141	0.457	0.162	0.391	0.007	0.977
CGs	-0.118	0.426	-0.098	0.607	0.111	0.559	-0.273	0.144	-0.294	0.115	0.119	0.533	0.013	0.954
CAs	-0.210	0.533	0.156	0.409	-0.036	0.848	-0.237	0.208	-0.257	0.170	0.042	0.826	0.096	0.678
CTs	0.290	0.265	0.142	0.455	0.186	0.324	0.060	0.752	0.024	0.900	0.094	0.621	0.037	0.875
CCs	-0.143	0.120	0.163	0.390	0.047	0.803	0.225	0.232	0.176	0.353	-0.075	0.693	-0.405	0.068

Sqle	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
Total C	-0.143	0.409	0.133	0.483	0.078	0.683	-0.129	0.496	-0.164	0.387	0.176	0.351	0.108	0.641
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葛根芩连汤对2型糖尿病大鼠脂肪组织胆固醇及合成关键酶基因表达和甲基化水平影响的研究

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李紫薇 ¹^,² , 刘欣宜 ¹^,² , 杨灵坤 ¹^,² , 张蒙雨 ¹^,² , 李昊天 ¹ , 陈嫦娥 ¹ , 章常华 ¹ , 彭淑红 ¹^,²

中华中医药学刊 | 国家项目点击 2025,43(2): 173-181

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中华中医药学刊 |国家项目点击 2025 , 43 (2) : 173 -181

葛根芩连汤对2型糖尿病大鼠脂肪组织胆固醇及合成关键酶基因表达和甲基化水平影响的研究

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李紫薇¹^,², 刘欣宜¹^,², 杨灵坤¹^,², 张蒙雨¹^,², 李昊天¹, 陈嫦娥¹, 章常华¹, 彭淑红¹^,²

作者信息

^1.江西中医药大学，江西南昌 330004

^2.江西省中医病因生物学重点实验室，江西南昌 330004

通讯作者:

彭淑红（1975-），女，山东聊城人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中医药防治代谢性疾病及机制。E-mail：yaomoon@126.com。

作者简介:

李紫薇（1998-），女，江西南昌人，硕士在读，研究方向：中医药防治代谢性疾病。

Effects of Gegen Qinlian Decoction（葛根芩连汤）on Cholesterol，Expressions and Methylation Levels of Genes Encoding Key Enzymes of Cholesterol Synthesis in Adipose Tissue of Type 2 Diabetic Rats

Ziwei LI¹^,², Xinyi LIU¹^,², Lingkun YANG¹^,², Mengyu ZHANG¹^,², Haotian LI¹, Chang'e CHEN¹, Chanhua ZHANG¹, Shuhong PENG¹^,²

Affiliations

^1.Jiangxi University of Chinese Medicine，Nanchang 330004，Jiangxi，China

^2.Jiangxi Province Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Etiopathogenisis，Nanchang 330004，Jiangxi，China

出版时间: 2025-02-10 doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.02.037

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摘要

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目的

探讨葛根芩连汤（Gegen qinlian decoction，GQD）对2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM）大鼠腹股沟脂肪组织（Inguinal white adipose tissue，iWAT）及附睾脂肪组织（Epididymal white adipose tissue，eWAT）胆固醇水平的影响，并从胆固醇合成关键酶的DNA甲基化角度探讨可能的机制。

方法

实验分为5组：对照组（CON）、2型糖尿病组（T2DM）、二甲双胍组（MET）、GQD低剂量组（GQDL）、GQD高剂量组（GQDH），灌胃给药14周。分光光度计法测定组织胆固醇水平，蛋白免疫印迹法（Western blotting，WB）、荧光定量PCR法（Quantitative Real-time PCR，QPCR）和亚硫酸盐测序PCR法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）分别用于测定基因蛋白表达、mRNA表达和甲基化水平。

结果

MET和GQDH均能显著逆转T2DM中iWAT和eWAT胆固醇水平的降低；GQDL能有效逆转eWAT胆固醇水平的降低；GQDL和GQDH能够有效升高iWAT和eWAT中胆固醇合成关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（3-Hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase，HMGCR）蛋白表达水平，但未有效调节角鲨烯环氧化酶（Squalene epoxidase，SQLE）蛋白表达水平；给药组均未有效升高胆固醇合成关键酶基因mRNA水平；Hmgcr基因在iWAT和eWAT中的CAs、eWAT中的CG3甲基化与血清空腹血糖（Fasting blood glucose，FBG）、糖化血清蛋白（Glycosylated serum protein，GSP）或胰岛素有相关性，而模型组eWAT的CG3甲基化显著降低，MET组eWAT的CAs甲基化显著升高。

结论

GQD能有效逆转T2DM大鼠脂肪组织胆固醇水平，可能不是通过调节胆固醇合成来实现。但GQD可能通过对HMGCR的转录后调控促进甲羟戊酸途径的非甾醇分支代谢。脂肪组织Hmgcr基因的CAs和CG3位点低甲基化可能与糖尿病发生密切相关。

关键词

胆固醇合成 / DNA甲基化 / 2型糖尿病 / 脂肪组织

Abstract

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Objective

To investigate the effects of Gegen Qinlian Decoction（葛根芩连汤，GQD）on cholesterol levels in inguinal adipose tissue（epididymal white adipose tissue，iWAT）and epididymal adipose tissue（epididymal white adipose tissue，eWAT）of type 2 diabetic rats and to explore the possible mechanism from the viewpoint of DNA methylation of genes encoding key enzymes of cholesterol synthesis.

Methods

Rats were divided into 5 groups：control group（CON），type 2 diabetes mellitus model group（T2DM），metformin group（MET），GQD low-dose and high-dose groups（GQDL，GQDH）which were given the corresponding medicines via gavage for 14 weeks. Choelsterol levels were determined by spectrophotometer. Western blot（WB），Quantitative Real-time PCR（QPCR）and Bisulfite sequencing PCR（BSP）were used to detect protein，mRNA expression and DNA methylation respectively.

Results

Both MET and GQDH could effectively reverse cholesterol levels of iWAT and eWAT in diabeteic rats. Moreover，GQDL could effectively reverse cholesterol levels of eWAT. GQDL and GQDH effectively elevated the protein expression levels of Hmgcr inWAT and eWAT，however，treatment groups didn’t exhibit the increase of the mRNA expression of genes encoding key enzymes of cholesterol synthesis. CAs methylation of Hmgcr in iWAT and eWAT and CG3 methylation of Hmgcr in eWAT were correlated with FBG，GSP or insulin of serum. Furthermore，CG3 methylation of eWAT in T2DM group was significantly reduced，while CAs methylation of eWAT in MET group was significantly increased.

Conclusion

The effect of GQD or MET on reversing cholesterol level in adipose tissue of diabetic rats may not be achieved by regulating the biosynthesis of the cholesterol. However，GQD may promote the nonsterol branch of mevalonate pathway by post-transcriptional regulation of Hmgcr. The hypomethylation of CAs and CG3 in adipose tissue may be closely related to the progress of diabetes mellitus.

Key words

cholesterol synthesis / DNA methylation / type 2 diabetes mellitus / adipose tissue

引用本文

李紫薇, 刘欣宜, 杨灵坤, 张蒙雨, 李昊天, 陈嫦娥, 章常华, 彭淑红. 葛根芩连汤对2型糖尿病大鼠脂肪组织胆固醇及合成关键酶基因表达和甲基化水平影响的研究. 中华中医药学刊, 2025 , 43 (2) : 173 -181 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.02.037

Ziwei LI, Xinyi LIU, Lingkun YANG, Mengyu ZHANG, Haotian LI, Chang'e CHEN, Chanhua ZHANG, Shuhong PENG. Effects of Gegen Qinlian Decoction（葛根芩连汤）on Cholesterol，Expressions and Methylation Levels of Genes Encoding Key Enzymes of Cholesterol Synthesis in Adipose Tissue of Type 2 Diabetic Rats[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2025 , 43 (2) : 173 -181 . DOI: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.02.037

正文

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现代医家用《伤寒论》中经典古方葛根芩连汤（Gegen qinlian decoction，GQD）治疗肥胖型糖尿病效果甚佳，实验研究表明GQD可降低2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者的血糖水平^[1-2]，改善脂肪组织胰岛素抵抗^[3-4]，但是其降糖的作用机制并不完全清楚。脂肪组织具有储存能量的功能，同时也是体内重要的内分泌器官，在调节血糖等方面发挥重要作用。胆固醇是构成脂肪组织的主要脂类成分之一，在参与胰岛素信号传递和葡萄糖转运过程中可能发挥重要作用^[5-6]。已有研究报道高脂饮食会使小鼠性腺脂肪组织和皮下脂肪组织胆固醇水平降低^[7-8]。在胆固醇合成过程中有2个关键限速酶，分别是3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（3-Hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase，HMGCR）和角鲨烯环氧化酶（Squalene epoxidase，SQLE），调节这2个基因的表达可以调节胆固醇水平^[9-11]。有研究报道高脂饮食可以影响肝脏Hmgcr和Sqle基因的表达^[12]，饮食的组成也会影响脂肪组织Hmgcr基因的表达^[13]。高脂饮食是否会通过影响脂肪组织中胆固醇合成关键酶Hmgcr、Sqle基因表达影响脂肪组织胆固醇水平？GQD是否通过调节T2DM大鼠脂肪组织胆固醇水平发挥相应的降糖效应，如何调节？目前鲜见文献进行报道。DNA甲基化是一种重要的表观遗传调控方式，可调控基因的转录^[14-15]，有研究指出Hmgcr基因甲基化水平伴随其基因表达发生变化^[16]。本课题组前期研究表明，GQD能够有效调节胰岛素抵抗大鼠脂肪组织的脂肪酸合成途径关键酶基因甲基化水平的变化^[17]，GQD是否通过改变胆固醇合成关键酶基因甲基化水平影响基因表达从而发挥其相应的药效作用，尚未可知。因此，本研究从调节胆固醇合成关键酶基因表达角度探讨GQD对高脂饮食合并链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）诱导的T2DM大鼠脂肪组织胆固醇水平的影响，并从基因甲基化的角度研究其作用机制，为T2DM发病及GQD的作用机制研究提供一定的数据支持。

1　材料

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1.1　实验动物

7～8周龄雄性SD大鼠90只，SPF级，体质量200～230 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物合格证号SCXK（京）2016-0011，于江西中医药大学实验动物中心饲养。本动物实验已通过江西中医药大学伦理委员会批准，动物福利伦理审查批准文号：JZLLSC20210464。高脂饲料D12492（脂肪提供60%能量），对照饲料D12450J，均由无锡帆泊生物技术有限公司加工制备。

1.2　实验材料

GQD由葛根、黄连、黄芩、炙甘草按照8∶3∶3∶2组成。为缓解长期服用寒凉药对胃部的伤害，在配方中加入少量干姜。葛根饮片（产地湖北，批号210316）、黄连饮片（产地四川，批号201216）、黄芩饮片（产地辽宁，批号200611）、炙甘草饮片（产地内蒙古，批号200826）、干姜（产地云南，批号200521）均购于江西江中中药饮片有限公司。按配方比例（葛根∶黄芩∶黄连∶炙甘草∶干姜＝8∶3∶3∶2∶0.5）取各味中药饮片加入于药重8倍量的蒸馏水，浸泡30 min，将药材浸透后煮沸保持40 min，回流提取，用减压旋转蒸发仪在低温适当压力下浓缩至1 g·mL^-1，-20℃保存备用。

1.3　实验试剂

链脲佐菌素（STZ）（Sigma，Lot：wxbd4971）；盐酸二甲双胍片（上海信谊天平，Lot：67200808）；总胆固醇（TC）含量检测试剂盒（索莱宝，Lot：20221024）；M-PER^TM哺乳动物蛋白抽提试剂（赛默飞，Lot：TL281708）；蛋白酶抑制剂（聚合美，Lot：23BB0817w）；PMSF（碧云天，Lot：ST506-2）；磷酸酶抑制剂混合物（Abmole生物科学，Lot：M7528）；蛋白Ladder（10-250 kDa）（聚合美，Lot：23MY1116LB）；HMGCR兔抗（OriGene，Lot：TA377139）；SQLE兔抗（RayBiotech，Lot：144-02428）；β-actin（D6A8）兔抗（Cell Signaling Technology，Lot：8457）；4×SDSPAGE分离胶缓冲液（索莱宝，Lot：2309001）；4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲液（索莱宝，Lot：20220907）；LB肉汤（青岛海博生物，Lot：20220304）；血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（天根，Lot：W0122）；Taq酶Mix（Promega，Lot：0000351182）；热启动Taq酶Mix（Promega，Lot：0000332791）；质粒小提试剂盒（天根，Lot：X0222）；天漠DNA甲基化试剂盒（Zymo research，Lot：211126）；PCR mix（带蓝色染料）（聚合美，Lot：22FB0102）；零背景平末端基因克隆试剂盒（全式金，Lot：Q30519）；琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（天根，Lot：R7207）；高保真DNA聚合酶（聚合美，Lot：21JB0201）；RNA提取试剂盒（全式金，Lot：Q20629），反转录试剂盒（Takara，Lot：ALG2093A），荧光定量PCR试剂盒（聚合美，Lot：22JK2802I）。用引物设计软件Oligo6设计引物，由上海生工合成，序列见表1。

1.4　实验仪器

核酸蛋白测定仪（NanoDrop-2000，美国Thermo公司）；化学发光凝胶成像系统（ChemiDocXRS+，美国Bio-Rad公司）；水平电泳仪（Sub-CellGT，美国Bio-Rad公司）；梯度PCR仪（Veriti，美国ABI公司）；台式高速冷冻离心机（Centrifuge 5424R，德国eppendorf公司）；多功能酶标仪（SPARK10M，瑞士TECAN公司）；冷冻组织振荡研磨仪（SamplePrep Geno 2010，美国SPEX公司）；超纯水仪（Milli-Q Advantage A10，德国Merck Millipore公司）；落地高速离心机（LYNX6000，美国Thermo公司）；实时荧光定量PCR仪（LightCycle 480Ⅱ，瑞士Roche公司）。

2　实验方法

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2.1　动物分组与给药

SD雄性大鼠90只，适应性喂养7 d后，按照随机数字表法随机分为正常对照组（CON组）10只（给予对照饲料和正常饮水）和模型组80只（给予高脂饲料）。28 d后模型组通过腹腔注射35 mg·kg^-1柠檬酸缓冲液新鲜配制的STZ诱导T2DM大鼠模型，正常对照组注射同等剂量的柠檬酸盐缓冲液。分别测定造模3、7 d后大鼠尾尖空腹血糖，取两次尾尖空腹血糖均≥11.1 mmoL·L^-1的大鼠即为T2DM造模成功^[18]。对于前两次尾尖空腹血糖≤11.1 mmoL·L^-1的大鼠，再次注射10 mg·kg^-1柠檬酸缓冲液新鲜配制的STZ，3 d后再次测血糖，取血糖≥11.1 mmoL·L^-1的动物也纳入T2DM造模成功大鼠。将造模成功的42只大鼠分为4组，分别是模型组（T2DM组）10只、二甲双胍组（MET组）10只、GQD低剂量组（GQDL组）10只、GQD高剂量组（GQDH组）12只，正常对照组和T2DM组给予生理盐水，给药组MET组给药200 mg·kg^-1·d^-1，GQDL组给药5 g·kg^-1·d^-1，GQDH组给药10 g·kg^-1·d^-1，每天给药2次，在14周给药期间，T2DM组和药物处理组仍以高脂饲料喂养，CON组以对照饲料喂养。由于灌胃手法的问题，在给药早期，GQDL组死亡1只，GQDH组死亡5只。

2.2　取材

实验动物分组后持续给药14周，最后1次灌胃后禁食12 h，戊巴比妥钠（3%）腹腔注射麻醉大鼠后打开大鼠腹腔，立即取出腹股沟脂肪组织（iWAT）和附睾脂肪组织（eWAT）并立即分成若干份，将用于提取RNA的脂肪组织放入含有RNA保护液的冻存管中，其余脂肪组织用锡箔纸包装好后标记，立即置于液氮冷冻，存于-80℃冰箱备用。

2.3　IWAT和eWAT胆固醇水平的测定

取100 mg脂肪组织放入无菌无酶的离心管中，加入异丙醇后开始用小剪刀进行反复剪碎之后在冷冻组织振荡研磨仪充分研磨，根据总胆固醇（TC）含量检测试剂盒说明书测定脂肪组织胆固醇水平。

2.4　蛋白免疫印迹法（Western blotting，WB）法检测HMGCR、SQLE蛋白表达

取30 mg脂肪组织和3颗小钢珠，加入200μL配制好的裂解液（裂解液：PMSF：蛋白酶抑制剂：磷酸酶抑制剂＝100∶1∶1∶1），在冷冻组织振荡研磨仪中充分研磨，取出小钢珠后4℃12 000 r/min，离心10 min，用预冷后的1 mL注射器小心吸取中间水相层，采用BCA法检测蛋白浓度；各组样本用总蛋白25μg上样，采用10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶（SDSPAGE）分离蛋白，湿转法（270 mA、60 min）将蛋白转移至PVDF膜上；再用含5%脱脂牛奶的1×TBST在室温下封闭1.5 h后，洗涤，加入一抗［HMGCR（1∶1000）、SQLE（1∶1000）］，4℃下摇床孵育过夜；1×TBST清洗5次后，加入二抗［辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG抗体（1∶10 000）］，室温下孵育1 h；洗涤3次后，加化学发光试剂ECL显影，置于化学发光凝胶成像仪中拍照；采用Image Lab软件分析蛋白条带灰度值，以β-actin为内参，对目的蛋白进行半定量分析。

2.5　SYBR Green实时荧光定量PCR法（Quantitative Realtime PCR，QPCR）检测Hmgcr、Sqle基因的表达

用RNA提取试剂盒按说明书提取脂肪组织RNA，用Nanodrop 2000测定RNA浓度。用cDNA反转录试剂盒合成cDNA。加2 ng的cDNA样本于荧光定量试剂体系中，于罗氏480Ⅱ系统中进行qPCR。以β-actin作为内参基因，计算Hmgcr和Sqle表达，具体参照文献^[17，19]的方法。

2.6　亚硫酸氢盐测序PCR法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）检测Hmgcr、Sqle基因DNA甲基化频率

2.6.1　Hmgcr和Sqle基因扩增片段的确定及C位点说明

利用Methyl Primer Express Software v1.0软件分别找到大鼠Hmgcr和Sqle基因上CG岛，以转录起始位点（Transcription start site，TSS）为+1，并在网站https://www.fruitfly.org/seq＿tools/promoter.html进行启动子预测。Hmgcr的CG岛位于（-800，+765），所扩增Hmgcr的BSP片段（-875，-665），包含CG岛的侧翼区和部分CG岛，预测的Hmgcr启动子位于（-696，-646）位置，如图1所示。Sqle的CG岛位于（-1648，+43），所扩增Sqle的BSP片段（-489，-258），位于CG岛，预测的Sqle启动子位于（-243，-193）位置，如图1所示。本文中Total C指该片段总C；non-CG又称为CH（H包含A、T、C），指总的CH。CGs、CAs、CTs、CCs分别表示总CG、总CA、总CT、总CC；CG1表示该片段第1个CG位点，依次类推。

2.6.2　脂肪组织DNA提取及重亚硫酸氢盐处理

取100 mg脂肪组织放入1.5 mL的无菌无酶离心管中，加入4～5颗小钢珠后在冷冻组织振荡研磨仪中充分研磨，按血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒说明书提取脂肪组织DNA。核酸蛋白测定仪测定DNA的纯度和浓度，琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性。提取DNA后根据EZ-DNA甲基化试剂盒说明书步骤进行DNA重亚硫酸氢盐处理，处理后的DNA置于-20℃冰箱备用。

2.6.3　Hmgcr、Sqle基因片段PCR扩增和纯化

所扩增基因的BSP片段扩增条件均如下。第1次PCR扩增体系20μL：无菌无酶水6.6μL，甲基化DNA模板2μL，上下游引物各0.7 μL，PCR Mix 10μL。反应条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，64℃退火30 s每次循环降1℃，72℃延伸30 s，共35个循环；72℃后延伸10 min。第2次PCR反应体系25μL：无菌无酶水6.5μL，第1次PCR产物2μL，上下游引物各0.5μL，PCR Buffer 12.5μL，高保真DNA聚合酶0.5μL，dNTPs 2.5 μL。反应条件：95℃预变性2 min；95℃变性25 s，55℃退火25 s，68℃延伸15 s，共35个循环；68℃后延伸5 min。琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段特异性，若出现非特异性条带，按琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒说明书将目标条带切胶进行DNA回收纯化。

2.6.4　TA克隆及阳性克隆检测

将第2次PCR产物克隆至Blunt Zero载体。挑取10个白色克隆菌落加入到含氨苄青霉素的液体培养基振荡培养5 h。克隆检测反应体系20μL：无菌无酶水8μL，菌液1μL，上下游引物各0.5μL，PCR mix（With Blue Dye）10μL。反应条件：95℃预变性3 min；94℃变性25 s，58℃退火25 s，72℃延伸15 s，共35个循环；72℃后延伸5 min。阳性克隆菌液继续培养12 h用于质粒提取。

2.6.5　质粒提取及质粒测序

将过夜培养的细菌按质粒提取试剂盒说明书提取质粒。所提取的质粒送至上海生工生物工程公司测序。

2.7　统计学处理

采用SPSS25.0进行统计学分析，统计数据均以表示。通过Shapiro-Wilk检验，进行参数正态分布分析。符合正态性分布的各组间比较采用单因素方差分析，不符合正态分布的两组间采用非参数Mann-Whitney U检验。使用Spearman相关系数进行相关性分析，P≤0.05为差异具有统计学意义。

3　结果

收起

3.1　GQD对大鼠iWAT和eWAT中胆固醇水平的影响

iWAT和eWAT中胆固醇水平如表2所示，与CON组相比，T2DM组的iWAT中胆固醇水平降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；与T2DM组相比，MET组、GQDH组大鼠iWAT中胆固醇水平升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；在eWAT中，与CON组相比，T2DM的eWAT中胆固醇水平降低，差异具有统计学意义（P<0.01）；与T2DM组相比，MET组、GQDL组和GQDH组大鼠eWAT中胆固醇水平升高，差异具有统计学意义（P<0.01）。

3.2　GQD对大鼠iWAT和eWAT中HMGCR、SQLE蛋白表达量的影响

在iWAT中，与CON组相比，T2DM组的HMGCR蛋白表达水平显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；与T2DM组相比，GQDL、GQDH组的HMGCR蛋白表达水平显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；在eWAT中，与CON组相比，T2DM组的HMGCR蛋白表达水平有下降的趋势，但差异无统计学意义（P=0.075）；与T2DM组相比，GQDL、GQDH组的HMGCR蛋白表达水平显著升高，差异具有统计学意义（P=0.05），见表3、图2。

在iWAT中，与CON组相比，T2DM组的SQLE蛋白表达水平显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；MET组、GQDL组和GQDH组SQLE蛋白表达水平与T2DM组的差异均无统计学意义（P>0.05）；在eWAT中，T2DM的SQLE蛋白表达水平与CON组的差异均无统计学意义（P>0.05）；MET组、GQDL组和GQDH组SQLE蛋白表达水平与T2DM组的差异也均无统计学意义（P>0.05），见表4、图3。

3.3　GQD对大鼠iWAT和eWAT中Hmgcr、Sqle基因表达量的影响

在iWAT中，与T2DM组相比，GQDL组、GQDH组Hmgcr基因表达量有上升的趋势但差异无统计学意义（P=0.08，P=0.06）。在eWAT中，与T2DM组相比，GQDL组Hmgcr基因表达量有下降的趋势但差异无统计学意义（P=0.08），GQDH组Hmgcr基因表达量降低，差异具有统计学意义（P<0.05），见表5。

在iWAT和eWAT中，T2DM的Sqle基因表达量与CON组的差异均无统计学意义（P>0.05）；MET组、GQDL组和GQDH组Sqle基因表达量与T2DM组的差异也均无统计学意义（P>0.05），见表6。

3.4　GQD对大鼠iWAT的Hmgcr、Sqle基因甲基化的影响

在iWAT中Hmgcr、Sqle基因甲基化如表7和8所示，与CON组比较，T2DM组Hmgcr基因CAs位点甲基化水平有降低趋势，但差异未达到统计学意义（P=0.08）；T2DM组Sqle基因各位点甲基化水平与空白对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；MET组、GQDL组和GQDH组Hmgcr基因、Sqle基因各位点甲基化与T2DM组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。

3.5　GQD对大鼠eWAT的Hmgcr、Sqle基因甲基化的影响

在eWAT中Hmgcr基因甲基化如表9所示，与CON组相比，T2DM组Hmgcr基因的CG3甲基化水平下降，差异具有统计学意义（P<0.05），CAs位点甲基化水平有降低趋势，差异未达到统计学意义（P=0.09）。与T2DM组相比，MET组Hmgcr基因CH、CAs甲基化水平上升，差异具有统计学意义（P<0.05）。

在eWAT中Sqle基因甲基化如表10所示，T2DM组Sqle基因各位点甲基化与CON组比较，差异无统计学意义（P>0.05），GQDL组Sqle基因CGs甲基化水平与T2DM组相比有上升的趋势但差异无统计学意义（P=0.06）；Met组、GQDH组Sqle基因各位点甲基化水平与T2DM组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。

3.6　大鼠iWAT和eWAT中Hmgcr、Sqle基因甲基化频率与基因表达量及各生理生化指标相关性

3.6.1　大鼠iWAT和eWAT中Hmgcr基因甲基化频率与基因表达量及各生理生化指标相关性

在iWAT的Hmgcr基因中，CAs位点甲基化水平与糖化血清蛋白（Glycosylated serum protein，GSP）、空腹血糖（Fasting blood glucose，FBG）呈显著负相关，而与乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase，LDH）、α-羟基丁酸脱氢酶（α-Hydroxybutyric acid dehydrogenase，HBDH）、同型半胱氨酸（Homocystine，HCY）呈显著正相关；CH位点与组织Hmgcr mRNA呈显著正相关。在eWAT Hmgcr基因的甲基化中，CCs位点与血清胰岛素呈显著负相关；CG3位点与FBG、GSP呈显著负相关，而与组织Hmgcr mRNA、血清胰岛素和HCY呈显著正相关；CAs位点与LDH、HBDH、HCY呈显著正相关，见表11、表12。

3.6.2　大鼠iWAT和eWAT中Sqle基因甲基化频率与各生理生化指标相关性

在iWAT的Sqle基因的甲基化中，TotalC、CGs位点与LDH、HBDH呈强显著性负相关；CH和CAs位点与血清胰岛素呈显著负相关；而CAs位点还与LDH、HBDH呈显著负相关。在eWAT中，Sqle基因各位点甲基化与生理生化指标之间差异均无统计学意义，见表13、表14。

4　讨论

收起

脂肪组织不仅是储存胆固醇的重要组织^[20]，其胆固醇水平也可能与肥胖密切相关^[21]，敲除胆固醇输出蛋白ABCA1的基因^[22]，会使脂肪细胞质膜胆固醇水平增加，而体质量和附睾脂肪量下降^[23]，也有报道指出饮食诱导的肥胖小鼠性腺脂肪和皮下脂肪胆固醇水平显著下降^[7]。本研究利用高脂饲料+STZ诱导的T2DM大鼠iWAT和eWAT胆固醇水平有显著降低，与文献报道一致。二甲双胍和GQD能有效降低血清胆固醇水平^[24-25]，但对脂肪组织胆固醇水平的影响鲜少报道。本研究发现二甲双胍和高剂量GQD能有效升高这两种脂肪组织的胆固醇水平。细胞胆固醇，尤其是膜胆固醇水平与胰岛素刺激的葡萄糖摄取可能有紧密的联系^[26]，因此推测，二甲双胍和葛根芩连汤可能通过提高脂肪组织胆固醇水平来发挥降低血糖的作用，从而达到治疗糖尿病的效用。这也可能是二甲双胍和GQD能有效降低db/db小鼠体质量^[25，27]、降低肥胖小鼠脂肪组织质量和脂肪细胞体积^[8]的重要原因。

那GQD和二甲双胍是如何调控脂肪组织胆固醇水平的呢？胆固醇从头合成，又称甲羟戊酸途径，是组织胆固醇的来源之一，而HMGCR和SQLE是胆固醇合成的关键酶^[28-29]，其相关基因的改变与糖尿病有着极大的关联^[30-31]，本研究发现，在蛋白水平上，低剂量和高剂量的GQD能够有效升高T2DM大鼠iWAT和eWAT中HMGCR蛋白表达水平，而未能有效升高脂肪组织中SQLE蛋白表达水平，二甲双胍对HMGCR、SQLE蛋白水平均无显著影响。甲羟戊酸途径由超过20步的反应构成，其中HMGCR催化了胆固醇合成过程的第3步反应甲羟戊酸的生成，SQLE催化了第9步反应即角鲨烯向单氧角鲨烯的生成^[32]。甲羟戊酸途径不仅合成胆固醇及甾醇中间体（HMGCR和SQLE均参与此过程），还合成非甾醇中间体（被称作甲羟戊酸途径的非甾醇分支，而HMGCR参与此分支，SQLE不参与），如异戊烯基二磷酸/焦磷酸、香叶基二磷酸-焦磷酸（GPP）、法尼基二磷酸或焦磷酸（Farnesyl diphosphate/pyrophosphate，FPP）和香叶基双磷酸/焦磷酸盐（Geranylgeranyl diphosphate/pyrophosphate，GGPP）等，这些非甾醇类异戊二烯对正常细胞功能至关重要，如小GTPases的异戊二烯化（法尼酰化或香叶基-香叶基化）和异戊烯基化tRNA的合成。此外，FPP和GGPP被用于合成其他必需的非甾类异戊二烯，如泛醌-10和血红素（电子传输）、多萜醇（天冬酰胺连接的糖蛋白合成）。其中GGPP能与稳定HMGCR的UbiA异戊二烯基转移酶结构域含蛋白-1（UbiA prenyltransferase domain-containing protein-1，UBIAD1）结合，导致UBIAD1与HMGCR的解离，便于HMGCR的内质网相关的降解过程（ER-associated degradation，ERAD）^[33]。本研究发现GQD能有效上调HMGCR蛋白水平，但对SQLE的蛋白水平无显著影响，这提示GQD可能参与调节了脂肪组织甲羟戊酸途径的非甾醇分支的代谢，但不影响胆固醇和甾醇中间体的合成。因此GQD可能不是通过调节胆固醇的合成来上调组织胆固醇水平。但GQD可能通过上调HMGCR蛋白水平促进脂肪组织非甾醇中间体GGPP的合成，来反馈抑制HMGCR蛋白水平，这也反映了组织对于胆固醇合成的严密调控。当然，GQD还可能通过上调其他非甾醇中间体如GPP、FPP等发挥作用，但具体发挥怎样的作用，如何起作用，与GQD上调胆固醇水平的具体关系是什么，目前并不清楚，未来需要进一步研究。有意思的是，二甲双胍并不能有效升高SQLE和HMGCR蛋白水平，提示二甲双胍可能与GQD的调控机制不同。我们进一步探讨了GQD是否通过调节HMGCR和SQLE的转录水平发挥作用，有意思的是，在转录水平上，二甲双胍和低剂量GQD对Hmgcr和Sqle mRNA水平均无显著影响，而高剂量GQD能有效降低了T2DM大鼠eWAT中Hmgcr mRNA水平。这说明，GQD对eWAT的HMGCR蛋白水平的上调作用并不是通过调节其转录水平实现的。高剂量GQD能有效降低T2DM大鼠eWAT的Hmgcr mRNA水平，这可能与高剂量GQD组的高胆固醇水平有关，因为高胆固醇水平会反馈抑制Hmgcr基因的转录^[9]。另外，在iWAT中，低剂量和高剂量GQD尽管对Hmgcr mRNA水平无显著影响，但是与T2DM组比较，都有升高Hmgcr mRNA水平的趋势（P=0.08，P=0.06），这提示在iWAT中GQD通过一定程度促进Hmgcr基因转录来上调其组织中HMGCR蛋白水平。这些结果也表明不同的脂肪组织即使相同基因，其表达调控的模式也可能不同。综上所述，GQD可能未促进脂肪组织胆固醇的合成，但可能主要通过转录后调控升高HMGCR蛋白水平，进而可能调节甲羟戊酸途径的非甾醇分支代谢。

DNA甲基化是调控基因转录的重要表观遗传学修饰^[34]。本研究中，T2DM组iWAT中Hmgcr基因CAs位点甲基化水平比CON组有降低趋势（P=0.09），其甲基化水平与FBG和GSP均呈显著负相关；T2DM组eWAT中Hmgcr基因CAs位点甲基化水平比CON组也有降低趋势（P=0.08），甲基化水平与FBG呈一定负相关（ρ＝-0.327，P=0.077），与血清胰岛素水平呈一定正相关（ρ＝0.334，P=0.071）；eWAT中Hmgcr基因CG3位点甲基化水平比CON组显著降低（P<0.05），且这些位点甲基化水平与FBG和GSP呈显著负相关，与血清胰岛素水平呈显著正相关。因此，提示这些位点的低甲基化可能与糖尿病的发生发展密切相关。但是这些位点与糖尿病发生发展的具体因果关系，目前并不清楚。二甲双胍能有效升高eWAT中Hmgcr基因CH和CAs位点的甲基化水平，这与前人报道的二甲双胍能促进一些基因的高甲基化一致^[35]，这也可能是二甲双胍有效治疗糖尿病的作用机制之一。然而，GQD对两种脂肪组织的Hmgcr和Sqle DNA甲基化水平没有显著调节作用，提示GQD对这两种组织的两个基因甲基化影响不明显。此外，尽管iWAT中的Hmgcr基因CG1位点、Sqle基因的CH、CAs位点、eWAT中的Hmgcr基因CCs位点甲基化均与血清胰岛素水平呈显著负相关，但是这些位点甲基化水平在各组之间并无显著差异，提示这些位点的甲基化可能与糖尿病发生发展并不紧密相关。

本研究在分析Hmgcr和Sqle DNA甲基化与生理生化指标相关性分析时还发现，iWAT和eWAT中Hmgcr基因CAs位点、eWAT中的CG3位点甲基化水平均与血清HCY呈显著正相关。HCY是机体甲基重要的活性供体S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosyl methionine，SAM）代谢的重要产物之一，血清高HCY伴随相关基因的高甲基化^[36]。此外，iWAT和eWAT中Hmgcr基因CAs位点甲基化与血清LDH和HBDH均呈显著正相关，有研究者报道结肠癌患者血清高LDH水平伴随解旋酶样转录因子（Helicase-like transcription factor，HLTF）和增生性息肉蛋白1（Hyperplastic polyposis 1，HPP1）基因的高甲基化^[37]，这提示了LDH与一些基因高甲基化的关系。尽管鲜少有HBDH与DNA甲基化关系的报道，但是HBDH是利用α-酮酸为底物测得的LDH1和LDH2所反映出的活性，与LDH密切相关^[38]，因此其与相关基因位点甲基化水平与LDH表现类似是可能的。有意思的是，iWAT中Sqle基因的Total C、CGs和CAs位点甲基化均与LDH和HBDH呈显著负相关，这可能是因为不同基因在不同组织中其甲基化的模式并不相同。当然关于血清LDH和HBDH水平与DNA甲基化具体因果关系，目前并不清楚，相信随着对DNA甲基化与表型功能关系研究的深入，这些疑惑终将会被解答。

此外，本研究结果还显示iWAT的Hmgcr基因CH位点甲基化与该基因mRNA水平呈正相关，eWAT的Hmgcr基因CG3位点甲基化与该基因mRNA水平呈正相关。然而，二甲双胍和GQD对这些位点的甲基化水平均无显著影响，这就提示这两类药物对脂肪组织Hmgcr的转录调控不是通过影响其甲基化来实现。

总之，本次研究发现二甲双胍和高剂量GQD均能够有效逆转高脂饲料+STZ诱导的T2DM大鼠iWAT和eWAT中胆固醇水平的降低，但这种调节作用可能不是通过调节胆固醇合成来实现的。但GQD可能通过对HMGCR的转录后调控来促进甲醛戊酸途径的非甾醇分支代谢。Hmgcr基因在iWAT和eWAT中的CAs位点低甲基化、在eWAT中CG3位点的低甲基化可能与糖尿病发生发展密切相关，而二甲双胍能有效升高eWAT中Hmgcr基因的CAs位点甲基化水平，这也许是二甲双胍发挥治疗糖尿病作用的机制之一。

基金

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国家自然科学基金项目(82060741)
江西省主要学科学术和技术带头人培养项目（领军人才-学术类）(20232BCJ22022)
江西中医药大学校级研究生创新专项(JZYC22S13)
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文献

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2025年第43卷第2期

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doi: 10.13193/j.issn.1673-7717.2025.02.037

首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-02-10

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作者信息

^1.江西中医药大学，江西南昌 330004

^2.江西省中医病因生物学重点实验室，江西南昌 330004

通讯作者:

彭淑红（1975-），女，山东聊城人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中医药防治代谢性疾病及机制。E-mail：yaomoon@126.com。

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

基因	序列号	引物类型	引物（5＇-3＇）	扩增片段/（bp）
β-actin	NM_031144	荧光定量	上游：CCCATCTATGAGGGTTACGC	150
			下游：TTTAATGTCACGCACGATTTC
Hmgcr	NM_013134	荧光定量	上游：TCGTCTTCAGCACTGTCGT	130
			下游：GAACTCAGGGCAAACTTGG
Hmgcr	NC_051337.1	甲基化	上游：AAAATAGGGATATAATTGTGTAGGTG	257
			下游：ATCCTCTCTAAAATCCCTCTACTCT
Sqle	NM_017136	荧光定量	上游：CTGGGAGATGCGTATAACC	184
			下游：TCACAACAAAGGAATGGCT
Sqle	NC_051342.1	甲基化	上游：GTAGTTATTTTTTGTTGGAGA	232
			下游：TTACACACTTCTTCATTCAAC

基因

序列号

引物类型

引物（5＇-3＇）

扩增片段/（bp）

β-actin

NM_031144

荧光定量

上游：CCCATCTATGAGGGTTACGC

150

下游：TTTAATGTCACGCACGATTTC

Hmgcr

NM_013134

荧光定量

上游：TCGTCTTCAGCACTGTCGT

130

下游：GAACTCAGGGCAAACTTGG

Hmgcr

NC_051337.1

甲基化

上游：AAAATAGGGATATAATTGTGTAGGTG

257

下游：ATCCTCTCTAAAATCCCTCTACTCT

Sqle

NM_017136

荧光定量

上游：CTGGGAGATGCGTATAACC

184

下游：TCACAACAAAGGAATGGCT

Sqle

NC_051342.1

甲基化

上游：GTAGTTATTTTTTGTTGGAGA

232

下游：TTACACACTTCTTCATTCAAC

组别	iWAT胆固醇	eWAT胆固醇
CON	143.7±81.1	156.1±36.4
T2DM	78.8±35.9^*	92.0±25.9^**
MET	143.4±89.5^#	165.2±57.8^##
GQDL	105.2±41.3	168.3±64.8^##
GQDH	126.3±56.7^#	206.4±99.9^##

组别

iWAT胆固醇

eWAT胆固醇

CON

143.7±81.1

156.1±36.4

T2DM

78.8±35.9^*

92.0±25.9^**

MET

143.4±89.5^#

165.2±57.8^##

GQDL

105.2±41.3

168.3±64.8^##

GQDH

126.3±56.7^#

206.4±99.9^##

组别	n	iWAT	eWAT
CON	3	1.0±0.0	1.0±0.0
T2DM	3	0.5±0.3^*	0.6±0.2
MET	3	1.0±0.9	0.8±0.2
GQDL	3	2.0±2.0^#	1.1±0.4^#
GQDH	3	1.1±0.3^#	1.6±0.4^#

组别

iWAT

eWAT

CON

1.0±0.0

T2DM

0.5±0.3^*

0.6±0.2

MET

1.0±0.9

0.8±0.2

GQDL

2.0±2.0^#

1.1±0.4^#

GQDH

1.1±0.3^#

1.6±0.4^#

组别	n	iWAT	eWAT
CON	3	1.0±0.0	1.0±0.0
T2DM	3	0.7±0.0^*	0.9±0.1
MET	3	1.0±0.2	1.0±0.5
GQDL	3	1.1±0.5	0.7±0.3
GQDH	3	1.3±0.3	1.0±0.3

组别

iWAT

eWAT

CON

1.0±0.0

T2DM

0.7±0.0^*

0.9±0.1

MET

1.0±0.2

1.0±0.5

GQDL

1.1±0.5

0.7±0.3

GQDH

1.3±0.3

1.0±0.3

组别	iWAT	eWAT
CON	1.1±1.1	4.5±6.7
T2DM	0.9±0.9	5.6±4.8
MET	1.1±0.8	3.3±3.9
GQDL	1.9±1.5	2.0±1.1
GQDH	1.2±0.6	0.6±0.5^#

组别

iWAT

eWAT

CON

1.1±1.1

4.5±6.7

T2DM

0.9±0.9

5.6±4.8

MET

1.1±0.8

3.3±3.9

GQDL

1.9±1.5

2.0±1.1

GQDH

1.2±0.6

0.6±0.5^#

组别	iWAT	eWAT
CON	0.6±0.3	0.7±0.2
T2DM	0.6±0.1	0.9±0.5
MET	0.6±0.3	1.1±0.7
GQDL	0.7±0.2	0.6±0.1
GQDH	0.6±0.3	0.8±0.5

组别

iWAT

eWAT

CON

0.6±0.3

0.7±0.2

T2DM

0.6±0.1

0.9±0.5

MET

0.6±0.3

1.1±0.7

GQDL

0.7±0.2

0.6±0.1

GQDH

0.6±0.3

0.8±0.5

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs	CG1	CG2	CG3
CON	6	1.3±0.8	0.7±0.5	1.3±1.0	0.0±0.0	6.4±5.4	0.4±1.0	3.8±5.9	11.4±12.2	4.2±6.5
T2DM	6	1.4±1.2	0.4±0.4	0.4±0.6	0.8±1.5	10.5±9.8	0.0±0.0	9.1±11.9	17.5±17.3	5.0±8.4
MET	6	1.3±1.0	0.6±0.8	1.1±1.3	0.3±0.6	8.5±5.7	0.0±0.0	5.6±6.2	18.0±12.8	1.9±4.5
GQDL	6	0.8±0.7	0.6±0.6	0.5±1.3	1.0±1.1	2.9±3.8	0.3±0.8	2.4±5.8	6.4±7.2	0.0±0.0
GQDH	6	1.4±1.1	0.8±1.0	0.5±0.7	1.0±1.2	7.0±4.2	1.1±1.7	9.4±7.6	11.7±11.0	0.0±0.0

组别

TotalC

CAs

CTs

CGs

CCs

CG1

CG2

CG3

CON

1.3±0.8

0.7±0.5

1.3±1.0

0.0±0.0

6.4±5.4

0.4±1.0

3.8±5.9

11.4±12.2

4.2±6.5

T2DM

1.4±1.2

0.4±0.4

0.4±0.6

0.8±1.5

10.5±9.8

0.0±0.0

9.1±11.9

17.5±17.3

5.0±8.4

MET

1.3±1.0

0.6±0.8

1.1±1.3

0.3±0.6

8.5±5.7

0.0±0.0

5.6±6.2

18.0±12.8

1.9±4.5

GQDL

0.8±0.7

0.6±0.6

0.5±1.3

1.0±1.1

2.9±3.8

0.3±0.8

2.4±5.8

6.4±7.2

0.0±0.0

GQDH

1.4±1.1

0.8±1.0

0.5±0.7

1.0±1.2

7.0±4.2

1.1±1.7

9.4±7.6

11.7±11.0

0.0±0.0

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs
CON	6	0.1±0.2	0.1±0.3	0.0±0.0	0.2±0.4	0.0±0.0	0.1±0.3
T2DM	6	0.3±0.6	0.4±0.7	1.0±1.8	0.2±0.4	0.0±0.0	0.1±0.3
MET	6	0.1±0.2	0.1±0.3	0.3±0.7	0.1±0.3	0.2±0.6	0.0±0.0
GQDL	6	0.3±0.4	0.3±0.4	0.2±0.5	0.5±0.8	0.1±0.3	0.3±0.4
GQDH	6	0.4±0.3	0.4±0.4	0.9±1.3	0.4±0.5	0.0±0.0	0.2±0.5

组别

TotalC

CAs

CTs

CGs

CCs

CON

0.1±0.2

0.1±0.3

0.0±0.0

0.2±0.4

0.0±0.0

0.1±0.3

T2DM

0.3±0.6

0.4±0.7

1.0±1.8

0.2±0.4

0.0±0.0

0.1±0.3

MET

0.1±0.2

0.1±0.3

0.3±0.7

0.1±0.3

0.2±0.6

0.0±0.0

GQDL

0.3±0.4

0.2±0.5

0.5±0.8

0.1±0.3

0.3±0.4

GQDH

0.4±0.3

0.4±0.4

0.9±1.3

0.4±0.5

0.0±0.0

0.2±0.5

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs	CG1	CG2	CG3
CON	6	2.3±0.5	0.6±0.5	1.0±1.0	0.0±0.0	19.1±9.5	0.4±0.9	25.4±15.4	23.7±15.3	8.2±7.9
T2DM	6	2.1±0.7	0.3±0.4	0.1±0.3	0.3±0.6	19.8±7.5	0.5±0.8	25.0±15.4	34.5±18.7	0.0±0.0^*
MET	6	2.7±1.4	1.1±0.6^#	1.3±1.1^#	0.5±0.8	17.7±12.9	1.4±2.3	16.9±15.5	34.5±23.3	1.8±4.7
GQDL	6	1.6±1.5	0.6±0.7	0.7±0.9	0.6±1.5	11.1±10.5	0.6±1.0	16.9±19.3	16.1±18.7	0.0±0.0
GQDH	6	2.0±0.5	0.5±0.3	0.4±0.4	0.2±0.5	16.6±6.3	1.2±1.1	23.2±18.8	26.6±9.2	0.0±0.0

组别

TotalC

CAs

CTs

CGs

CCs

CG1

CG2

CG3

CON

2.3±0.5

0.6±0.5

1.0±1.0

0.0±0.0

19.1±9.5

0.4±0.9

25.4±15.4

23.7±15.3

8.2±7.9

T2DM

2.1±0.7

0.3±0.4

0.1±0.3

0.3±0.6

19.8±7.5

0.5±0.8

25.0±15.4

34.5±18.7

0.0±0.0^*

MET

2.7±1.4

1.1±0.6^#

1.3±1.1^#

0.5±0.8

17.7±12.9

1.4±2.3

16.9±15.5

34.5±23.3

1.8±4.7

GQDL

1.6±1.5

0.6±0.7

0.7±0.9

0.6±1.5

11.1±10.5

0.6±1.0

16.9±19.3

16.1±18.7

0.0±0.0

GQDH

2.0±0.5

0.5±0.3

0.4±0.4

0.2±0.5

16.6±6.3

1.2±1.1

23.2±18.8

26.6±9.2

0.0±0.0

组别	n	TotalC	CH	CAs	CTs	CGs	CCs
CON	6	0.3±0.3	0.3±0.2	0.5±0.8	0.0±0.0	0.8±0.9	0.3±0.5
T2DM	6	0.2±0.3	0.2±0.3	0.3±0.5	0.3±0.5	0.2±0.4	0.1±0.3
MET	6	0.4±0.5	0.4±0.5	1.5±2.1	0.0±0.0	0.5±1.2	0.1±0.2
GQDL	6	0.9±1.1	0.8±1.0	1.6±1.9	0.1±0.3	1.4±1.9	0.8±1.3
GQDH	6	0.9±0.4	0.2±0.3	0.6±1.1	0.0±0.0	0.6±1.4	0.1±0.3

组别

TotalC

CAs

CTs

CGs

CCs

CON

0.3±0.3

0.3±0.2

0.5±0.8

0.0±0.0

0.8±0.9

0.3±0.5

T2DM

0.2±0.3

0.3±0.5

0.2±0.4

0.1±0.3

MET

0.4±0.5

1.5±2.1

0.0±0.0

0.5±1.2

0.1±0.2

GQDL

0.9±1.1

0.8±1.0

1.6±1.9

0.1±0.3

1.4±1.9

0.8±1.3

GQDH

0.9±0.4

0.2±0.3

0.6±1.1

0.0±0.0

0.6±1.4

0.1±0.3

Hmgcr	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
TotalC	-0.037	0.848	-0.263	0.160	-0.137	0.470	0.018	0.923	0.014	0.943	0.079	0.680	0.256	0.197
CGs	0.062	0.746	-0.217	0.249	-0.286	0.126	-0.174	0.357	-0.175	0.356	0.031	0.873	0.026	0.898
CH	-0.227	0.227	-0.194	0.303	0.132	0.488	0.232	0.217	0.227	0.228	0.188	0.319	0.458	0.016^*
CAs	-0.362	0.050^*	-0.400	0.028^*	0.218	0.247	0.384	0.036^*	0.364	0.048^*	0.397	0.030^*	0.320	0.103
CCs	-0.144	0.448	-0.178	0.345	-0.021	0.910	-0.153	0.419	-0.152	0.424	0.087	0.647	0.341	0.082
CTs	0.181	0.339	0.188	0.321	-0.101	0.594	-0.065	0.735	-0.052	0.783	-0.273	0.144	0.209	0.295
CG1	0.278	0.137	-0.263	0.160	-0.457	0.011^*	-0.236	0.209	-0.237	0.207	-0.175	0.356	0.035	0.864
CG2	0.006	0.974	-0.030	0.876	-0.096	0.615	-0.056	0.769	-0.053	0.782	-0.020	0.917	0.090	0.656
CG3	-0.030	0.874	-0.272	0.146	-0.071	0.711	-0.004	0.983	-0.033	0.864	0.118	0.535	-0.191	0.339

Hmgcr

FBG

GSP

Insulin

LDH

HBDH

HCY

Hmgcr mRNA

P值

TotalC

-0.037

0.848

-0.263

0.160

-0.137

0.470

0.018

0.923

0.014

0.943

0.079

0.680

0.256

0.197

CGs

0.062

0.746

-0.217

0.249

-0.286

0.126

-0.174

0.357

-0.175

0.356

0.031

0.873

0.026

0.898

-0.227

0.227

-0.194

0.303

0.132

0.488

0.232

0.217

0.227

0.228

0.188

0.319

0.458

0.016^*

CAs

-0.362

0.050^*

-0.400

0.028^*

0.218

0.247

0.384

0.036^*

0.364

0.048^*

0.397

0.030^*

0.320

0.103

CCs

-0.144

0.448

-0.178

0.345

-0.021

0.910

-0.153

0.419

-0.152

0.424

0.087

0.647

0.341

0.082

CTs

0.181

0.339

0.188

0.321

-0.101

0.594

-0.065

0.735

-0.052

0.783

-0.273

0.144

0.209

0.295

CG1

0.278

0.137

-0.263

0.160

-0.457

0.011^*

-0.236

0.209

-0.237

0.207

-0.175

0.356

0.035

0.864

CG2

0.006

0.974

-0.030

0.876

-0.096

0.615

-0.056

0.769

-0.053

0.782

-0.020

0.917

0.090

0.656

CG3

-0.030

0.874

-0.272

0.146

-0.071

0.711

-0.004

0.983

-0.033

0.864

0.118

0.535

-0.191

0.339

Hmgcr	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
TotalC	0.000	1.000	-0.076	0.691	0.109	0.568	0.222	0.239	0.217	0.249	0.212	0.261	-0.132	0.529
CGs	0.139	0.463	-0.042	0.825	0.011	0.952	0.074	0.696	0.078	0.684	0.114	0.550	-0.105	0.618
CH	-0.220	0.243	0.052	0.787	0.081	0.672	0.232	0.217	0.214	0.257	0.242	0.197	0.010	0.963
CAs	-0.327	0.077	-0.063	0.741	0.334	0.071	0.476	0.008^*	^*0.437	0.016^*	0.375	0.041^*	0.101	0.631
CCs	0.187	0.322	0.116	0.542	-0.425	0.019^*	-0.237	0.207	-0.244	0.194	0.060	0.753	-0.214	0.305
CTs	0.102	0.590	0.032	0.866	0.013	0.944	0.147	0.438	0.167	0.379	-0.128	0.499	0.099	0.636
CG1	0.077	0.684	0.000	1.000	0.002	0.992	-0.181	0.339	-0.160	0.397	0.053	0.780	-0.303	0.140
CG2	0.209	0.268	-0.025	0.897	-0.078	0.683	0.229	0.224	0.208	0.271	-0.021	0.913	0.000	1.000
CG3	-0.453	0.012^*	-0.378	0.039^*	0.414	0.023^*	0.174	0.358	0.186	0.326	0.465	0.010^**	0.422	0.036^*

Hmgcr

FBG

GSP

Insulin

LDH

HBDH

HCY

Hmgcr mRNA

P值

TotalC

0.000

1.000

-0.076

0.691

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0.239

0.217

0.249

0.212

0.261

-0.132

0.529

CGs

0.139

0.463

-0.042

0.825

0.011

0.952

0.074

0.696

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0.550

-0.105

0.618

-0.220

0.243

0.052

0.787

0.081

0.672

0.232

0.217

0.214

0.257

0.242

0.197

0.010

0.963

CAs

-0.327

0.077

-0.063

0.741

0.334

0.071

0.476

0.008^*

^*0.437

0.016^*

0.375

0.041^*

0.101

0.631

CCs

0.187

0.322

0.116

0.542

-0.425

0.019^*

-0.237

0.207

-0.244

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0.060

0.753

-0.214

0.305

CTs

0.102

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0.032

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0.944

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0.438

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-0.128

0.499

0.099

0.636

CG1

0.077

0.684

0.000

1.000

0.002

0.992

-0.181

0.339

-0.160

0.397

0.053

0.780

-0.303

0.140

CG2

0.209

0.268

-0.025

0.897

-0.078

0.683

0.229

0.224

0.208

0.271

-0.021

0.913

0.000

1.000

CG3

-0.453

0.012^*

-0.378

0.039^*

0.414

0.023^*

0.174

0.358

0.186

0.326

0.465

0.010^**

0.422

0.036^*

Sqle	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
Total C	0.281	0.133	0.163	0.391	-0.359	0.052	-0.477	0.008^**	-0.497	0.005^**	-0.344	0.062	-0.034	0.880
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CAs	0.344	0.062	0.093	0.626	-0.414	0.023^*	-0.407	0.025^*	-0.394	0.031^*	-0.280	0.134	-0.033	0.884
CTs	-0.017	0.927	0.167	0.379	0.066	0.728	-0.165	0.385	-0.215	0.254	-0.040	0.834	-0.224	0.316
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Sqle

FBG

GSP

Insulin

LDH

HBDH

HCY

Hmgcr mRNA

P值

Total C

0.281

0.133

0.163

0.391

-0.359

0.052

-0.477

0.008^**

-0.497

0.005^**

-0.344

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-0.034

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-0.132

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CGs

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-0.488

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-0.497

0.005^**

-0.278

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-0.038

0.866

CAs

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0.093

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CTs

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CCs

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-0.316

0.089

-0.338

0.068

-0.243

0.196

0.128

0.572

Sqle	FBG	GSP	Insulin	LDH	HBDH	HCY	Hmgcr mRNA
Total C	-0.143	0.409	0.133	0.483	0.078	0.683	-0.129	0.496	-0.164	0.387	0.176	0.351	0.108	0.641
CH	-0.151	0.450	0.206	0.276	0.083	0.662	-0.109	0.566	-0.141	0.457	0.162	0.391	0.007	0.977
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CAs	-0.210	0.533	0.156	0.409	-0.036	0.848	-0.237	0.208	-0.257	0.170	0.042	0.826	0.096	0.678
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CCs	-0.143	0.120	0.163	0.390	0.047	0.803	0.225	0.232	0.176	0.353	-0.075	0.693	-0.405	0.068

Sqle

FBG

GSP

Insulin

LDH

HBDH

HCY

Hmgcr mRNA

P值

Total C

-0.143

0.409

0.133

0.483

0.078

0.683

-0.129

0.496

-0.164

0.387

0.176

0.351

0.108

0.641

-0.151

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0.206

0.276

0.083

0.662

-0.109

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-0.141

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0.162

0.391

0.007

0.977

CGs

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CCs

-0.143

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0.232

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-0.075

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-0.405

0.068