在过去40多年，单克隆抗体逐渐从单纯的科研工具（试剂）转变为强大的生物药用于多种疾病治疗。迄今，已有50多种治疗性单克隆抗体经FDA获准上市，广泛用于肿瘤、自身免疫和感染等疾病的治疗。本文通过抗体研究技术以及靶向肿瘤和免疫等相关分子进展，综述单克隆抗体在临床疾病的诊断和治疗中的重要作用。

Hedgehog信号通路在哺乳动物的胚胎发育过程中发挥关键作用，但在成年组织中处于抑制状态。异常激活的Hedgehog信号通路与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关，近年来Hedgehog信号通路成为治疗肿瘤的热门靶标。目前已有两种Hedgehog抑制剂（维莫德吉和索尼吉步）上市用于治疗肿瘤，但上市的药物很快出现严重的毒副作用和耐药问题。研究者研发出taladegib、NVP-LEQ506和MRT-92等新型Smo抑制剂以克服维莫德吉的耐药问题，并针对Smo上游Shh配体和下游蛋白Gli蛋白设计相应抑制剂以解决毒副作用问题。同时，目前上市的Hedgehog抑制剂仅用于治疗基底细胞癌，而对其他肿瘤的治疗也在进一步的研究中。现就靶向Hedgehog信号通路的抗肿瘤新药的研发及其治疗不同肿瘤的研究进展进行综述。

隐球菌感染每年导致超100万例患者新增感染及近60万例病死报道，严重威胁公众健康。隐球菌对目前有限的抗菌药物的耐药性日益严重，新药研究十分迫切。抗隐球菌药物发挥药效除需具备一般抗真菌药物的特点外，还需进入宿主细胞以及穿透血脑屏障。筛选具有全新作用机制的小分子化合物和已上市药物“老药新用”是目前抗隐球菌药物研发的两种主要策略。本文综述了据此获得的抗隐球菌先导化合物或药物的抗菌活性、作用机制和临床研究进展。

转运体在药物的吸收、分布以及排泄过程中发挥着重要作用。明确药物转运机制有利于提高药物安全性和有效性，从而指导临床合理用药。二甲双胍作为2型糖尿病的临床一线用药，多种转运体参与了其体内过程，转运体表达和功能的改变直接影响其药动学和药效学。本文综述了基于药物转运体机制的二甲双胍体内过程，这些转运体包括有机阳离子转运体（OCTs）、多药及毒性化合物外排转运蛋白（MATE）、质膜单胺蛋白转运体（PMAT）、五羟色胺转运体（SERT）、硫胺素转运体2（THTR-2）、肉碱/有机阳离子体1（OCTN1）。

辐射为继水、大气、噪音污染之后的第四大污染，严重危害人体健康。辐射主要来自医用射线、工业用射线、核废物和大气紫外线等，其存在的广泛性引起人们对辐射损伤效应及其机制的广泛关注。辐射分为电离辐射和非电离辐射，研究来自于环境或临床治疗的电离及非电离辐射对药物代谢的影响，对于了解辐射条件下药物在机体内的代谢和消除快慢，并指导临床合理用药具有重要意义。本文综述了电离辐射（γ-射线、X-射线、铀辐射和铯辐射）和非电离辐射（紫外线）对药物代谢的影响，阐述了辐射条件下药物代谢酶、药物转运体和药物动力学特征的变化，并探讨了其在临床上的重要意义。

线粒体是细胞内重要的细胞器，在肿瘤的发生、发展中起着重要的作用。将抗癌药物靶向线粒体可以有效提高药物治疗效果，降低对正常组织的毒副作用。本文从线粒体膜电位、线粒体外膜通透性和线粒体膜转位酶3个方面，综述线粒体靶向制剂在肿瘤治疗中的研究进展，为线粒体靶向治疗系统的构建提供参考。

尽管多个研究表明苦参碱能抑制肝癌细胞增殖，然而对其作用机制尚未进行系统研究。本研究首先考察苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞迁移的作用，在此基础上，构建苦参碱抗肝癌靶点-功能相关蛋白相互作用网络，进行拓扑分析和聚类分析，预测苦参碱发挥抗肝癌作用的关键蛋白；对其验证靶点进行通路富集分析，预测苦参碱发挥抗肝癌作用的关键通路；并采用Western blot对部分关键蛋白进行分析。细胞实验结果表明，1、2和4 mg·mL^-1苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖，0.5、1和2 mg·mL^-1苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞迁移。网络药理学结果表明，苦参碱可能通过作用于乙酰肝素酶（HPSE）、半胱氨酸蛋白酶3（CASP3）、Myc原癌基因蛋白（MYC）和基质金属蛋白酶2（MMP2）等关键验证靶点，碳酸酐酶1（CA1）、再生基因1A（REG1A）、羧酸酯酶1（CES1）和乙醛脱氢酶2（ALDH2）等关键预测靶点，以及侵袭和迁移相关通路发挥抗肝癌作用。Western blot结果显示苦参碱能显著下调MMP2表达，上调CASP3表达。本文运用网络药理学阐释了苦参碱抗肝癌的作用靶点及通路，为深入阐明苦参碱抗肝癌作用机制提供科学依据。

本研究的目的是建立SGLT2选择性抑制剂筛选及药效学评价体系。分别将人全长SGLT2和SGLT1 cDNA连接至pMSCVpuro载体并转染HEK293细胞，嘌呤霉素筛选单克隆细胞，RT-PCR、Western blot或细胞免疫荧光染色检测目的基因、蛋白在细胞中的表达。采用荧光标记的1-脱氧葡萄糖（1-[N-（7-nitrobenz-2-oxa-1，3-diazol-4-yl）amino]-1-deoxy-D-glucose，1-NBDG）作为底物进行葡萄糖转运实验，检测模型细胞的Na⁺依赖的葡萄糖摄取功能，并对阳性药达格列净、根皮苷选择性进行评价。最后，进行整体药效评价，观察达格列净对正常小鼠及四氧嘧啶诱导的T1DM小鼠血糖的影响。结果显示pMSCVpuro-SGLT1转染组细胞SGLT1基因及蛋白水平均显著升高，pMSCVpuro-SGLT2转染组SGLT2蛋白高表达于细胞膜及细胞质，说明SGLT1/SGLT2稳定过表达细胞构建成功。葡萄糖转运实验结果显示，与pMSCVpuro-null转染组相比，pMSCVpuro-SGLT1、pMSCVpuro-SGLT2转染组细胞Na⁺依赖性1-NBDG摄取明显增高。达格列净具有良好的选择性，对SGLT1的半数抑制浓度（IC₅₀，6.20×10^-7 mol·L^-1）远高于对SGLT2抑制的IC₅₀值（2.24×10^-10 mol·L^-1），优于非选择性抑制剂根皮苷。达格列净单次给药即可改善正常小鼠葡萄糖耐量。对T1DM小鼠，达格列净从给药后1 h血糖水平即显著降低，能够剂量依赖地降低0~24 h血糖-时间曲线下面积。连续给药20天，能够较平稳地降低小鼠餐后血糖。本研究建立了较完善的SGLT2选择性抑制剂的体外筛选方法和整体药效学评价方法。该方法具有无同位素污染，高转运效率、良好稳定性等优点，将为新的SGLT2高选择性抑制剂研发提供良好的技术平台。

膜联蛋白（annexin）是一类进化保守的多基因家族蛋白，可与细胞膜磷脂酰丝氨酸（phosphatidyl&shy；serine，PS）结合，由于PS与许多重要疾病密切相关，具有作为药物发现新靶点的潜力，使得annexin具有良好的药物发现价值和新药研发前景。Annexin A4（以下称A4）是膜联蛋白家族成员之一，参与多项细胞功能，如胞吐作用和凝血反应，所有这些功能与膜联蛋白可结合酸性磷脂的能力相关。目前对A4的功能尚不完全了解，获得足量的A4是深入了解A4的结构与功能的基础。为了克服传统从生物组织中提纯人源A4的方法得率不高，且较为复杂等问题，本文通过原核系统重组表达A4，以获取大量可溶性蛋白，探究其与PS的结合能力，为后续研究奠定基础。利用分子生物学的手段构建融合表达质粒pET28a-annexin A4-EGFP，大量表达、选用并比较了两种获取可溶性annexin A4-EGFP（以下称A4-EGFP）融合蛋白的纯化方法，同时检测A4-EGFP对凋亡细胞的识别能力。通过亲和层析纯化获得纯度为80%的A4-EGFP；而选用膜吸附纯化方式，最终获得了纯度达90%的蛋白。流式细胞仪检测结果显示：A4-EGFP融合蛋白可识别和标记早期凋亡细胞，其与PS亲和力为79.58±11.68 nmol·L^-1，与A5-EGFP和PS的亲和力同处一个数量级。本文成功实现了A4-EGFP在原核体系中的高效可溶性表达，建立了简易、高效的分离纯化方法，获得了产率高达75.2 mg·L^-1的A4-EGFP，为深入研究A4的功能及其潜在的应用奠定了基础。

L-脯氨酸-间-双（2-氯乙基）胺基-L-苯丙氨酰基-L-正缬氨酸乙酯盐酸盐（MF13）是一个新颖的含三肽的氮芥类化合物。本课题组以往的体内外研究数据表明，MF13单药给药时，对多种不同来源的人肝癌细胞系均有较强的抗增殖活性。本文主要研究MF13与其他抗肿瘤药物联合使用时对肝癌的抑制作用。联合化疗体外实验结果显示，MF13与丝裂霉素C（MMC）在适宜浓度下联合应用时，对Bel-7402细胞的抗增殖活性有协同作用；MF13与长春新碱（VCR）联用无协同作用。联合化疗裸鼠体内实验结果表明，2 mg·kg^-1 MF13与50 mg·kg^-1环磷酰胺（CTX）或2 mg·kg^-1 MMC联用，协同作用显著；然而，2 mg·kg^-1 MF13与0.3 mg·kg^-1 VCR联合使用时无协同作用。联合化疗的体内外实验结果一致。本研究结果表明，无论单药给药还是联合化疗，MF13都是一个有潜在应用前景的抗肝癌化合物。

N-（2，6-二甲氧基吡啶-3-取代）-9-甲基咔唑-3-磺酰胺（IG-105）是全新结构的小分子微管解聚合剂，在体外和动物实验中显示出较好的抗肿瘤活性。为了解IG-105的代谢性质并评价代谢性药物相互作用可能性，使用混合人肝微粒体（HLMs）和重组CYP450同工酶（rP450s）研究参与IG-105生物转化的药物代谢酶，利用液相色谱-静电场轨道阱质谱（HPLC-Orbitrap-MS）鉴定可能的代谢产物，并评估IG-105对5种主要CYP450酶的抑制作用。结果显示，IG-105可以被包括CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和CYP3A5在内的多种P450酶代谢，其中IG-105的代谢最有可能是由CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19和CYP3A介导的；脱甲基化是IG-105最主要的I相代谢反应，鉴定出3种代谢产物（M1~M3）；同时IG-105对CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A具有一定的抑制作用，IC₅₀值分别为6.4、23.64、0.39、1.4和3.14 μmol·L^-1。结果表明，IG-105的生物转化涉及多个酶途径，当与其他药物合用时，由于其他药物抑制某种P450酶的活性而使IG-105代谢受阻从而引起毒副作用的风险较低；同时，IG-105对CYP1A2、CYP2D6和CYP3A具有中度抑制作用，对CYP2C19具有较强的抑制作用，因此与主要被这些酶代谢的药物合用时应格外注意药物相互作用，避免毒副作用。

已有研究表明乙酰胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐和加兰他敏具有减轻氧糖剥夺导致的神经元损伤并减小脑缺血动物的脑梗死体积的作用，但它们的这种作用可能并不完全依赖于其胆碱酯酶抑制活性。为了进一步研究多奈哌齐和加兰他敏对脑缺血后神经元损伤的作用，本课题组成功建立了体外大鼠神经元-星形胶质细胞共培养模型，并在该共培养模型的基础上研究多奈哌齐和加兰他敏对氧糖剥夺/复氧（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R）后神经元凋亡的作用及其可能的作用机制。结果表明，多奈哌齐和加兰他敏可以明显减轻OGD/R后共培养体系中的神经元凋亡，同时，促进共培养体系中星形胶质细胞合成和分泌BDNF和NGF，并激活星形胶质细胞内的PI3K/Akt通路和ERK通路，促进核转录因子CREB的磷酸化。以上结果说明多奈哌齐和加兰他敏对OGD/R导致的神经元损伤具有保护作用，其机制可能与激活星形胶质细胞内的PI3K/Akt通路和ERK通路，促进核转录因子CREB的磷酸化，进而促进星形胶质细胞合成和分泌BDNF和NGF有关。

组织蛋白酶K（CTSK）是抗骨质疏松药物的关键靶标。CTSK活性位点抑制剂能抑制胶原蛋白降解活性，同时抑制CTSK降解其他蛋白的水解活性，存在较大的不良反应，CTSK非活性位点（exosite）抑制剂具有抑制骨胶原降解活性且不影响活性位点（active site）的生物活性。本研究通过毕赤酵母表达系统表达出重组CTSK，进一步通过N端正丁基琼脂糖凝胶柱和SP-琼脂糖凝胶柱分离，得到高纯度有活性的重组CTSK。利用所得CTSK考察筛选了中药墨旱莲不同提取物及化学成分对CTSK的胶原降解活性和对CTSK与Z-FR-MCA底物结合的抑制作用，明确了墨旱莲的正丁醇部位为理想的潜在非活性位点活性部位，从中提取的墨旱莲皂苷Ⅸ为潜在的非活性位点抑制剂。

对云南鹤庆产黄玛咖（Lepidium meyenii Walp.）的抗骨质疏松部位进行了化学成分研究。采用MCI大孔吸附树脂、正相硅胶色谱、反相硅胶色谱、Sephadex LH-20色谱、半制备HPLC柱色谱以及重结晶等多种分离手段，从黄玛咖的正丁醇部位分离得到7个化合物，对所得单体化合物依据理化性质及波谱数据进行结构鉴定，分别为：macaolidine（1）、色氨酸（2）、胡萝卜苷（3）、（3S）-1，2，3，4-四氢-β-卡波林-3-羧酸（4）、绿原酸（5）、木犀草素（6）和金丝桃苷（7）。化合物1为一个新的酰胺类生物碱，化合物4~7均为首次从该植物中分离得到。

为进一步研究乌拉尔甘草中的黄酮类化学成分，通过采用大孔吸附树脂、RP-C₁₈、Sephadex LH-20、MCI柱色谱和HPLC等多种色谱分离方法从乌拉尔甘草80%乙醇提取物中分离得到2个黄酮类化合物。根据化合物的理化性质和光谱数据，鉴定其结构分别为：（2S）-甘草素-4´-O-β-D-葡萄糖-（1→6）-O-β-D-葡萄糖苷（1）、（2R）-甘草素-4´-O-β-D-葡萄糖-（1→6）-O-β-D-葡萄糖苷（2）。化合物1与化合物2均为新化合物，其母核结构为一对对映异构体。

黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XO）是尿酸代谢中的关键酶，其抑制剂在降尿酸治疗中发挥着重要的作用。本文以非布索坦（febuxostat）和托匹司他（topiroxostat）为模板，设计合成了18个酰胺类化合物，其中6个化合物在10 μmol·L^-1浓度下显示出一定的黄嘌呤氧化酶抑制活性。分子对接研究初步阐明了此类化合物的作用模式，为后续结构优化提供了依据。

建立止咳平喘类中药制剂中非法添加的12种化学药品的快速筛选方法。采用液相色谱-串联质谱法，以Kromasil100-5C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）为分析柱，流动相采用0.3%甲酸铵（用甲酸调至pH 2.97）和甲醇进行梯度洗脱，电喷雾电离（ESI）、全扫描一级质谱和全扫描二级质谱扫描方式，对止咳平喘类中药制剂中非法添加的12种化学药品进行筛选分析。建立了快速分离、检测止咳平喘类中药制剂中非法添加的12种化学药品的方法，检测限低于50 ng。该方法专属性强、灵敏度高，适用于止咳平喘类中药制剂中非法添加化学药品的筛选及确证工作。

本文采用UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱建立了快速、灵敏的液质联用方法在线快速鉴定黄芪建中汤的化学成分，构建了较为全面的黄芪建中汤化学成分谱，用于该复方的质量评价。依据离子峰的保留时间、精确分子量和多级质谱碎片，与对照品及文献报道数据比较，对黄芪建中汤的整体化学成分进行了在线快速鉴定。共鉴定了黄芪建中汤中71种化学成分，主要包括皂苷类和黄酮类，另外还有个别生物碱类和酚类化合物等。这些成分中，来源于黄芪的有20种、白芍14种、甘草37种、生姜3种、桂枝大枣各2种，为黄芪建中汤的质量控制以及药效物质基础研究提供了科学依据。

采用UFLC-MS/MS技术对利奈唑胺片剂的杂质进行了研究，测定了利奈唑胺片剂的有关物质，推断了其在酸、碱、氧化、水解等降解条件下的降解杂质结构，并对杂质的质谱裂解规律与途径进行了分析与归纳。本文共推定了4个杂质，分别为杂质1（S）-1-氨基-3-[（3-氟-4-吗啉基苯基）氨基]-2-丙醇、杂质2（S）-5-（乙酰胺甲基）-3-（3-氟-4-氧代吗啉基苯基）噁唑烷酮、杂质3（S）-5-（氨甲基）-3-（3-氟-4-吗啉基苯基）噁唑烷酮和杂质4（R）-N-[3-[（3-氟-4-吗啉基苯基）氨基]-2-羟基丙基]乙酰胺。其中酸降解产生杂质3和杂质4，碱降解产生杂质1和杂质4，氧化降解产生杂质2，水解降解产生杂质4；同时测定了杂质1~4的校正因子，分别为1.3、1.4、0.9和1.1，并采用计算机辅助化合物毒性预测系统对4个降解杂质进行了毒性预测。该研究结果可为利奈唑胺片的质量控制与评价提供参考。

本文拟构建一种新型的脂质-磷酸钙核/壳纳米粒（lipid bilayer-coated calcium phosphate nanoparticles，LCAPNs）可在胞内溶解实现迅速释药，以提高抗肿瘤药物对肿瘤细胞的杀伤活性。采用薄膜分散法合成制备了包载紫杉醇（paclitaxel，PTX）的脂质-磷酸钙核/壳纳米粒（lipid bilayer-coated calcium phosphate nanoparticles loaded with PTX，PTX-LCAPNs），并对其进行形态、粒度和体外释放行为的表征。同时，以人肝癌细胞Huh-7为细胞模型，考察载体的细胞摄取、胞内溶解特性、药物胞内蓄积量和抗肿瘤活性。研究结果表明：LCAPNs在透射电镜下呈球形，平均粒径为124.73±6.41 nm。载体在体外模拟正常生理pH条件下PTX泄漏量低，而在胞内酸性pH环境中快速释药。另外，LCAPNs可有效提高Huh-7细胞对药物的摄取量，并且在胞内溶解以快速释药。PTX-LCAPNs显著增加PTX对肿瘤细胞的杀伤力，将包载紫杉醇的磷酸钙纳米粒（calcium phosphate nanoparticles loaded with PTX，PTX-CAPNs）的胞内药物浓度提高了1.7倍，半数抑制浓度（IC₅₀）降低了约5倍，抗肿瘤效果显著增强。

研究制备了不同孔径的介孔二氧化硅纳米粒及西罗莫司自微乳。使用扫描电镜、透射电镜、小角度X-射线衍射、氮气吸附-脱附表征制得的介孔二氧化硅纳米粒，发现其为有序的纳米孔道结构，孔径分别为6.3、8.1和10.8 nm，通过粒径测定仪测得西罗莫司自微乳粒径为20.6±1.3 nm。通过搅拌法制备载西罗莫司自微乳介孔二氧化硅纳米粒。研究发现，当西罗莫司自微乳与介孔二氧化硅纳米粒质量比2：1时为最佳比例，载药量约为0.83%，且固体粉末流动性良好。采用差示扫描量热法表明，西罗莫司以非晶体或无定形存在于载体材料中，重分散性良好。孔径大小对于载西罗莫司自微乳介孔二氧化硅纳米粒在250 mL水中2 h的释放终点并没有显著影响，但对于最初40 min释放结果影响较大。综上，介孔二氧化硅纳米粒有望成为一种新型的自微乳吸附剂。

柔性脂质体（flexible nano-liposomes，FL）是一种优良的给药载体，但液体状态下的药物泄漏已严重阻碍了其进一步广泛应用，因此，抑制药物泄漏已成为亟待解决的行业共性技术问题。本文将5种常见挥发油如艾叶油（Folium Artemisiae Argyi oil，FA）、桉叶油（Folium Eucalypti oil，FE）、茉莉油（Arabian Jasmine oil，AJ）、丁香油（Syzygium Aromaticum oil，SA）和连翘油（Fructus Forsythiae oil，FF）分别包埋于盐酸巴马汀纳米柔性脂质体（palmatine chloride loaded flexible nano-liposomes，PFL）的脂质双分子层内，通过体外泄漏曲线评价筛选能够降低PFL药物泄漏的最佳挥发油及其用量水平；考察包埋挥发油后对PFL包封率、粒径、电位、变形性与结构的影响，并通过白兔阴道给药考察其对黏膜的刺激性；最后，采用水平双室扩散池评价挥发油对PFL体外透皮透黏膜给药行为的影响。结果显示，5种挥发油均能不同程度地抑制PFL内水相中药物的泄漏，但艾叶油抑制泄漏的程度显著优于其他4种挥发油（P < 0.05），且艾叶油与脂质质量比为1：6时具有最佳的抑制泄漏作用；包埋艾叶油的PFL与PFL在包封率、粒径、电位与变形性等方面无显著性差异（P > 0.05），且二者层状囊泡结构相似；包埋艾叶油后也进一步增强了PFL促进内水相中药物透皮透黏膜的吸收能力，而对白兔阴道黏膜无刺激性。综上，在柔性脂质体的磷脂膜中包埋合适的挥发油（如艾叶油）不仅可在一定程度上抑制内水相中药物的泄漏，且能够增强柔性脂质体促进药物透皮透黏膜的吸收。因此，本文为克服液体状态下纳米柔性脂质体药物泄漏提供了一种新方法和新思路。

为建立同时鉴别霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛的多重位点特异性PCR法，解决上述石斛属药材真伪掺杂的难题。通过比对石斛药材ITS及trnL-trnF序列，设计引物，建立多重PCR鉴别法，并对不同来源的霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛样品进行特异性扩增，根据特异性条带大小进行鉴别。结果在退火温度为61 ℃、循环数为35时，齿瓣石斛、铁皮石斛和霍山石斛分别可扩出584、397和211 bp的特异性条带。本文所建立的方法对齿瓣石斛和霍山石斛的最低检测限为1.2 ng，铁皮石斛低于0.24 ng，其对铁皮石斛、齿瓣石斛和霍山石斛的混伪检出限分别为1%、1%和5%。表明多重位点特异性PCR法能特异性鉴别霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛。

蝎毒活性肽BmK AngM1具有良好的镇痛活性，但目前对其抗炎活性的研究尚未有报道。本研究利用Escherichia coli BL21 trxB（DE3）对BmK AngM1进行了重组表达，利用IMPACT^TM-TWIN系统建立了重组BmK AngM1（rBmK AngM1）的纯化方法，并对rBmK AngM1进行了抗炎活性检测。为了进一步提高其抗炎活性，本研究对BmK AngM1功能结构域中可能的活性位点（Y5、Y42和R58）进行了定点突变。结果表明，rBmK AngM1及其突变体均具有显著的抗炎活性，其中单突变体R58N及双突变体Y5F/R58N、Y42F/R58N与野生型蛋白相比，抗炎活性均有明显提高。由此推测，58位残基在BmK AngM1的抗炎活性中起重要作用。本研究为通过蛋白质工程设计改造BmK AngM1以提高其药理活性奠定了基础。