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基于副干酪乳杆菌细胞外囊泡的虾青素递送系统构建及其抗疲劳作用研究

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杜金 ^* , 郝薛宇 , 于洪梅 , 赵毅

食品工业科技 | 营养与保健 2026,47(14): 451-460

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食品工业科技 |营养与保健 2026 , 47 (14) : 451 -460

基于副干酪乳杆菌细胞外囊泡的虾青素递送系统构建及其抗疲劳作用研究

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杜金（1987−），女，硕士，讲师，研究方向：生物活性研究，E-mail：364235861@qq.com

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杜金^*, 郝薛宇, 于洪梅, 赵毅

作者信息

长春职业技术大学，吉林长春 130033

通讯作者:

杜金（1987−），女，硕士，讲师，研究方向：生物活性研究，E-mail：364235861@qq.com。

作者简介:

杜金（1987−），女，硕士，讲师，研究方向：生物活性研究，E-mail：364235861@qq.com

Construction of an Astaxanthin Delivery System Based on Lactobacillus paracasei Extracellular Vesicles and Its Anti-fatigue Effect

Jin DU^*, Xueyu HAO, Hongmei YU, Yi ZHAO

Affiliations

Changchun Polytechnic University, Changchun 130033, China

出版时间: 2026-07-15 doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2025060291

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摘要

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目的：利用副干酪乳杆菌来源的细胞外囊泡（EVs）作为递送载体，构建虾青素（AST）封装体系（AST@EVs），以改善其水溶性、稳定性及生物利用度。方法：采用差速离心与超速离心分离EVs，并通过表征分析、体外模拟消化、自由基清除实验及C2C12细胞模型，系统评价AST@EVs的理化特性、消化稳定性、抗氧化活性与抗疲劳作用。结果：成功制备出典型球形结构且平均粒径为85.97 nm的EVs，在优化封装比例（2:1）后，AST@EVs的封装率和蛋白载量分别达到84.94%和12.74%，粒径增大至109.37 nm，且红外与电镜结果证实AST被有效封装。体外消化中AST@EVs的AST保留率显著（P<0.05）高于游离AST及物理混合组；其DPPH和ABTS⁺自由基清除率分别达83.92%和62.81%，抗氧化能力显著（P<0.01）提升。细胞实验表明，AST@EVs可促进C2C12细胞对AST的摄取（5.27±0.21 μg/mL），缓解氧化应激，调节超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性并降低丙二醛水平，同时抑制乳酸脱氢酶和肌酸激酶升高，增强糖原储存并恢复线粒体功能相关酶活性。结论：基于EVs的封装策略可显著增强AST的稳定性、抗氧化能力及抗疲劳功效，为功能性食品与抗疲劳药物开发提供了新思路。

关键词

虾青素 / 副干酪乳杆菌 / 细胞外囊泡 / 抗氧化 / 抗疲劳

Abstract

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Objective: To utilize extracellular vesicles (EVs) derived from Lactobacillus paracasei as delivery carriers to construct an astaxanthin (AST)-encapsulated system (AST@EVs), thereby improving the water solubility, stability, and bioavailability of AST. Methods: EVs were isolated via differential centrifugation and ultracentrifugation, and systematic evaluations of the physicochemical properties, digestive stability, antioxidant activity, and anti-fatigue effect of AST@EVs were conducted using characterization analysis, in vitro simulated digestion, free radical scavenging assays, and the C2C12 cell model. Results: EVs with a typical spherical structure and an average particle size of 85.97 nm were successfully prepared. After optimizing the encapsulation ratio (2:1), the encapsulation efficiency and protein loading capacity of AST@EVs reached 84.94% and 12.74%, respectively, with the particle size increasing to 109.37 nm. Additionally, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) and electron microscopy results confirmed the effective encapsulation of AST in EVs. In vitro digestion, the retention rate of AST in AST@EVs was significantly higher than that in the free AST group and the physical mixture group. The scavenging rates of AST@EVs against 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) cation radical (ABTS⁺) were 83.92% and 62.81%, respectively, indicating a significant enhancement in antioxidant capacity. Cellular experiments showed that AST@EVs could promote the uptake of AST by C2C12 cells (reaching 5.27±0.21 μg/mL), alleviate oxidative stress, regulate the activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), and reduce the level of malondialdehyde (MDA). Meanwhile, AST@EVs inhibited the increase in lactate dehydrogenase (LDH) and creatine kinase (CK) activities, enhanced glycogen storage, and restored the activities of enzymes related to mitochondrial function. Conclusion: The EV-based encapsulation strategy can significantly enhance the stability, antioxidant capacity, and anti-fatigue efficacy of AST. This study provides a new idea for the development of functional foods and anti-fatigue drugs.

Key words

astaxanthin / Lactobacillus paracasei / extracellular vesicles / antioxidant / anti-fatigue

引用本文

杜金, 郝薛宇, 于洪梅, 赵毅. 基于副干酪乳杆菌细胞外囊泡的虾青素递送系统构建及其抗疲劳作用研究. 食品工业科技, 2026 , 47 (14) : 451 -460 . DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2025060291

Jin DU, Xueyu HAO, Hongmei YU, Yi ZHAO. Construction of an Astaxanthin Delivery System Based on Lactobacillus paracasei Extracellular Vesicles and Its Anti-fatigue Effect[J]. Science and Technology of Food Industry, 2026 , 47 (14) : 451 -460 . DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2025060291

正文

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疲劳是一种常见的生理现象，尤其在长时间体力或脑力活动后更为显著，但其病理机制与氧化应激密切相关。氧化应激会导致细胞内活性氧的积累，进而引发线粒体功能障碍、能量代谢异常以及关键生物分子（如蛋白质、脂质和DNA）的损伤，最终加速细胞疲劳和机体功能衰退^[1]。研究表明，抗氧化干预是缓解疲劳的有效策略之一，而天然抗氧化剂因其安全性和高效性备受关注^[2]。

虾青素（AST）作为一种强效的天然类胡萝卜素，具有卓越的抗氧化能力，能够清除自由基、抑制脂质过氧化，并在抗疲劳方面显示出潜在的应用价值^[3]。然而，AST的疏水性、低生物利用度及易降解性严重限制了其实际应用效果^[4]。

近年来，细胞外囊泡因其独特的生物相容性、低免疫原性和高效的细胞摄取能力，成为药物递送领域的研究热点^[5]。研究表明，细胞外囊泡不仅可以作为天然载体递送疏水性药物，还能通过膜蛋白介导的内吞途径增强药物的细胞内递送效率^[6]。与传统的包埋系统（如包埋粉）相比，EVs具有天然的内源性靶向能力和优异的跨膜转运效率，可有效避免溶酶体降解，提高药物在细胞内的生物利用度；同时，其磷脂双分子层结构能够更好地保护疏水性活性物质，实现更稳定的负载与可控释放，从而显著改善包埋技术中常见的泄漏和稳定性差的问题^[7]。此外，研究还表明EVs不仅可作为高效递送载体，其本身亦具备一定的生物活性，能够通过参与细胞间通信调节代谢和抗氧化应激通路，与所封装药物产生协同增强效应^[8]。因此，利用细胞外囊泡封装AST，有望克服其理化局限性，同时提升其抗氧化和抗疲劳效果。尽管细胞外囊泡在药物递送中展现出巨大潜力，但其在AST递送及抗疲劳应用中的研究仍处于起步阶段。

基于此，本研究以副干酪乳杆菌来源的细胞外囊泡（EVs）为载体，通过超声负载法制备AST@EVs，并系统评价其形貌特征、封装效率、体外稳定性及抗氧化能力。进一步通过C2C12细胞模型，探究AST@EVs对氧化应激诱导的疲劳相关生物标志物和线粒体功能（SOD、CAT、MDA、乳酸脱氢酶、糖原、柠檬酸盐合成酶和细胞色素c氧化酶）的调节作用。本研究旨在开发一种基于EVs的高效AST递送系统，为天然功能因子或药物的临床应用提供新思路，同时为抗疲劳膳食补充剂或药物的研发奠定理论基础，为解决疲劳这一普遍健康问题提供了创新性解决方案。

1　材料与方法

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1.1　材料与仪器

副干酪乳杆菌（600 BCFU/g）　苏州善恩康生物科技有限公司；MRS肉汤培养基（HB0384-1）　青岛海博生物技术有限公司；BCA蛋白含量检测试剂盒（PC0020）、糖原含量检测试剂盒（BC0340）、柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒（BC1060）、磷酸盐（PBS）缓冲溶液（P1036）　北京索莱宝科技有限公司；虾青素（AST，纯度96%，A832359）、DPPH（D807297）、ABTS（D6132）粉末　上海麦克林生化科技股份有限公司；甲醇（分析纯）、30%过氧化氢（BN01338）、二氯甲烷（分析纯）　天津市大茂化学试剂厂；人工唾液（R27906）、人工胃液（R30388）、人工肠液（R22156）　上海源叶生物科技有限公司；CCK8细胞活力测定试剂盒（C0038）　碧云天生物技术有限公司；过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒（A007-1-1）、总超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒（A001-3-2）、丙二醛（MDA）测定试剂盒（A003-1-1）、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒（A020-1）、肌酸激酶（CK）测定试剂盒（A032-1-1）　南京建成生物工程研究所；细胞色素c氧化酶检测试剂盒（CYTOCOX1-1KT）、马血清（12449C）　西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司；C2C12成肌细胞系　武汉普诺赛生命科技有限公司；DMEM高糖培养基（11965092）、胎牛血清（C0234）、青霉素-链霉素双抗（C3420）　赛默飞世尔科技公司。

CP100NX超速离心机　日本Hitachi公司；TD3型离心机　湖南湘怡实验室仪器开发有限公司；HWS-250B型恒温恒湿培养箱　泰斯仪器有限公司；JEM-2100透射式电子显微镜　日本电子株式会社；Spectrum two傅里叶红外光谱仪　铂金埃尔默仪器有限公司；一体式动静态同步激光光散射仪　瑞士光散射仪器公司；A51119500C型酶标仪　赛默飞世尔（中国）科技有限公司；Agilent 1260 Infinity II高效液相色谱仪　美国安捷伦有限公司。

1.2　实验方法

1.2.1　副干酪乳杆菌衍生细胞外囊泡（EVs）的提取

副干酪乳杆菌衍生胞外囊泡（EVs）的分离方法参照Lee等^[9]的方法并稍作修改。具体步骤如下：副干酪乳杆菌在含有MRS液体培养基的培养瓶中培养36 h后，培养温度37 ℃，将悬浮液以6000 r/min离心20 min，并收集上清液。随后，将收集的上清液过0.22 μm水系滤膜后，以130000 r/min离心150 min，收集沉淀物并重新悬浮在无菌PBS缓冲液中，将收集的样品通过0.22 μm过滤器以获得纯化的EVs，使用BCA蛋白浓度检测试剂盒按试剂盒说明书对纯化的EVs进行定量，并将EVs储存在−80 ℃冰箱中。

1.2.2　EVs的表征

取10 μL 1 mg/mL的EVs滴在透射式电子显微镜专用铜网上，静置15 min后，用滤纸吸去多余液体，等待铜网晾干（约3 min）。在晾干的铜网表面滴加10 μL的2%磷钨酸负染色液，染色15 min后晾干，并在透射式电子显微镜（TEM）下观察EVs的形貌。

取1 mL 1 mg/mL的EVs液体稀释10倍后使用一体式动静态同步激光光散射仪（DLS）在散射角度为90°，温度为25 ℃时测试持续时长20 s获得其粒径大小及多分散指数（PDI）。

1.2.3　虾青素-副干酪乳杆菌衍生细胞外囊泡（AST@EVs）递送体系的制备

根据Cui等^[10]的方法并进行条件优化，将1.2.1中制备的EVs与AST溶液通过超声负载法进一步获得AST@EVs。AST溶液的制备方法：称取3 mg的AST，溶解在3 mL二氯甲烷中，再加入7 mL甲醇，即得0.3 mg/mL的AST溶液。将1 mg/mL的EVs与AST溶液分别以体积比1:1、2:1、4:1进行混合，负载整个过程在冰浴条件下进行，条件设置为150 W，处理10 min（工作2 s/关闭2 s）。超声负载后将混合溶液在冰上孵育1 h。随后，将混合溶液置于37 ℃条件下，旋转蒸发除去有机试剂，并将其在冰上孵育30 min。将旋转蒸发后冰浴的样品3000 r/min离心10 min，以除去游离AST，上层液体即为AST@EVs，将其在−80 ℃下储存。

为优化EVs对AST的封装效率与负载能力，实验通过改变EVs与AST的投料质量比（1:1、2:1、4:1），系统评估了不同比例对封装率和蛋白载量的影响。将AST溶于二氯甲烷中，配制成浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.5、1、2、4、5和10 μg/mL的标准溶液，在480 nm波长处测定各溶液的吸光度值，以AST浓度为横坐标（x）、吸光度为纵坐标（y）建立标准曲线，得到回归方程y=0.31379x+0.0166（R²=0.9996）。AST@EVs的封装率与蛋白载量参考文献[11]方法进行测定。向AST@EVs样品中加入5 mL二氯甲烷，经超声处理（功率150 W，总时间2 min，工作/间歇周期为2 s/2 s）后，取二氯甲烷相溶液于480 nm波长下测定吸光度值，并根据上述标准曲线计算AST@EVs中AST的实际含量，以此作为载运体系中AST的含量依据。并根据下列公式计算其封装率和蛋白载量。

$ 虾青素封装率(\text{%})=\frac{载运体系中虾青素含量}{初始添加虾青素含量}\times 100 $

$ 蛋白载量(\text{%})=\frac{载运体系中虾青素含量}{载运体系中蛋白含量}\times 100 $

1.2.4　AST@EVs的表征

如1.2.2中所述方法，使用TEM对AST@EVs进行形貌表征，并通过DLS获得其粒径大小和PDI。

1.2.5　傅里叶红外光谱（FTIR）检测

根据Zhong等^[12]方法所述，将EVs和AST@EVs从−80 ℃转移至真空度30 Pa以下的冷冻干燥系统干燥48 h，获得EVs和AST@EVs冻干粉末。将AST、EVs和AST@EVs冻干粉末分别与溴化钾混合研磨成细腻粉末，制备压片，傅里叶红外光谱扫描波数范围为4000~500 cm⁻¹。

1.2.6　体外模拟消化能力检测

设置物理混合组（AST+EVs），即将1 mL 0.3 mg/mL AST溶液和2 mL 1 mg/mL EVs分散在PBS缓冲液中在150 r/min条件下混合12 h。根据Zhang等^[13]方法所述，分别取1 mL浓度为100 μg/mL（AST浓度）的游离AST、AST@EVs和AST+EVs与1 mL人工模拟唾液混合，在37 ℃，100 r/min条件下孵育5 min。随后，向混合体系中加入等体积的人工模拟胃液并调pH至2.0，在37 ℃，100 r/min条件下孵育120 min。最后，向上述混合体系中加入等体积的人工模拟小肠液并调pH至7.4，在37 ℃，100 r/min条件下孵育120 min。整个模拟消化过程时间为245 min，在5、65、125、185、245 min时取200 μL混合消化液，按1.2.3中方法检测消化液中虾青素含量并计算虾青素保留率。

$ 虾青素保留率(\text{%})=\left(1-\frac{消化液中虾青素释放量}{初始添加虾青素总量}\right)\times 100 $

1.2.7　体外抗氧化性检测

按照Liang等^[14]的方法配制DPPH工作液和ABTS工作液。在200 μL 20 μg/mL的AST、AST@EVs、AST+EVs（以AST浓度为准）以及与AST@EVs蛋白浓度相同的EVs样品中分别加入0.2 mmol/L的200 μL现用现配的DPPH工作液。避光反应30 min后，在517 nm处测定其吸光度值为A₁。PBS缓冲液替代样品与DPPH工作液反应测定的吸光度值为A₀。PBS缓冲液替代DPPH工作液与样品反应测定的吸光度值为A₂。使用下列公式计算DPPH自由基清除活性，每组进行3次平行检测。

$\rm \text{DPPH}自由基清除率(\text{%})=\left(1-\frac{{A}_{1}-{A}_{2}}{{A}_{0}}\right)\times 100 $

在20 μL 20 μg/mL的AST、AST@EVs、AST+EVs（以AST浓度为准）样品中分别加入180 μL ABTS工作液混合，孵育30 min后，在734 nm处测定其吸光度值为A₁。PBS缓冲液替代样品与ABTS工作液反应测得的吸光度值为A₀。使用下列公式计算ABTS⁺自由基清除活性，每组进行3次平行检测。

$\rm {\text{ABTS}}^+自由基清除率(\text{%})=\left(1-\frac{{A}_{1}}{{A}_{0}}\right)\times 100 $

1.2.8　稳定性检测

1.2.8.1　热稳定性

配制50 μg/mL AST的PBS溶液，并准备50 μg/mL AST+EVs和AST@EVs（以虾青素浓度计，且AST+EVs与AST@EVs各组分浓度均相同）。将其置于100 ℃下水浴加热2 h，在0、1、2 h时测定其吸光度，计算其保留率，公式如下：

$ 虾青素保留率(\text{%})=\frac{加热后虾青素浓度}{初始虾青素浓度}\times 100 $

1.2.8.2　贮存稳定性

配制50 μg/mL的AST的PBS溶液，并准备50 μg/mL AST+EVs和AST@EVs（以虾青素浓度计，且AST+EVs与AST@EVs各组分浓度均相同）。将其置于25 ℃下储存7 d，在0、3、7 d时测定其吸光度，计算其保留率，公式如下：

$ 虾青素保留率(\text{%})=\frac{储存后虾青素浓度}{初始虾青素浓度}\times 100 $

1.2.8.3　光照稳定性

配制50 μg/mL的AST的PBS溶液，并准备50 μg/mL AST+EVs和AST@EVs（以虾青素浓度计，且AST+EVs与AST@EVs各组分浓度均相同）。将其置于白炽灯下光照24 h，在0、12、24 h时测定其吸光度，计算其保留率，公式如下：

$ 虾青素保留率(\text{%})=\frac{光照后虾青素浓度}{初始虾青素浓度}\times 100 $

1.2.9　细胞活性检测

根据Cai等^[15]的方法，将C2C12细胞在含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM）中培养，培养箱参数为37 ℃，5% CO₂。当C2C12细胞数量达到T25培养瓶面积约80%时，用PBS缓冲液冲洗，随后加入含有2%马血清的DMEM培养基以诱导C2C12细胞分化。4 d后，用分别含有0、5、10、20、40 μg/mL（AST浓度）AST、AST@EVs、AST+EVs的DMEM培养基孵育细胞24 h，并使用CCK8细胞活力测定试剂盒检测不同浓度样品对细胞活力的影响。

1.2.10　细胞摄取能力检测

按1.2.9中方法培养细胞，将其培养在12孔板中并使细胞分化。4 d后，分别用含有10 μg/mL AST、AST@EVs、AST+EVs的DMEM培养基孵育细胞24 h。随后，使用无菌PBS缓冲液清洗细胞2次，收集细胞，将其重悬在1 mL无菌PBS缓冲液中，在超声细胞破碎仪下，150 W冰浴处理2 min（工作2 s/关闭2 s）粉碎成细胞匀浆。将细胞匀浆中加入1 mL的氯仿/甲醇混合溶液（2:1，v:v），旋涡30 s，加入100 μL正己烷，在4 ℃下，以3500 r/min离心10 min，收集有机层液体1 mL，并用氮气干燥有机层，获得样品粉末。用二氯甲烷（200 μL）重悬样品粉末，经0.22 μm微孔膜过滤后，采用高效液相色谱法（HPLC）测定细胞中AST含量，色谱条件参照Zhang等^[16]的方法。具体如下：使用C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温25 ℃，流速为1.0 mL/min，检测波长476 nm，进样量为20 μL。流动相包括：（A）二氯甲烷-甲醇-乙腈-水（5.0:85.0:5.5:4.5，v/v）和（B）二氯甲烷-甲醇-乙腈-水（22.0:28.0:45.0:4.5，v/v）。洗脱程序采用线性梯度：0~8 min，0% A；8~20 min，100% A。

1.2.11　细胞抗疲劳和抗氧化应激生化指标检测

按1.2.9中方法培养细胞，将其培养在12孔板中并使细胞分化。分化后未进行处理的组为正常组，4 d后，用含有480 μmol/L的H₂O₂的DMEM培养基孵育6 h，以构建细胞疲劳模型^[17]，此为模型组。随后，弃去含有H₂O₂的DMEM培养基，并使用无菌PBS缓冲液洗去残留培养基，在孔板中分别重新加入含有10 μg/mL AST、AST@EVs、AST+EVs的DMEM培养基孵育细胞24 h，分别命名为AST组、AST@EVs组、AST+EVs组。按1.2.10中方法制备细胞匀浆，并使用BCA蛋白浓度检测试剂盒测定细胞匀浆中蛋白浓度，按总超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒、肌酸激酶（CK）测定试剂盒、糖原含量检测试剂盒、柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒、细胞色素c氧化酶检测试剂盒说明书对细胞匀浆进行检测。

1.3　数据处理

实验数据图均使用Origin 2022软件制作，并采用不同字母表示统计学组间显著性差异（P<0.05）。本研究所有实验均重复3次，实验结果以均值±标准偏差表示，利用IBM SPSS Statistics 20软件中单因素方差分析检验对实验数据进行分析。

2　结果与分析

收起

2.1　EVs的形貌表征

通过一系列差速离心、超速离心收集副干酪乳杆菌培养基中的细胞外囊泡，以获得EVs。TEM结果表明，EVs呈球形，具体表现为中间呈现黑色边缘为白色的“双层壳”结构（图1a）。这一结构可为其提供更好的稳定性和承载能力^[18]。DLS结果表明，EVs平均粒径为85.97±11.02 nm（图1b），且PDI值为0.33±0.02，该粒径范围与Wang等^[19]从副干酪乳杆菌中分离的EVs粒径尺寸基本一致，验证了本方法的可靠性。EVs溶液如图1c所示，为澄清透明白色溶液。

2.2　AST@EVs的封装能力

不同比例的EVs和AST制备的AST@EVs的封装能力结果如图2所示。随着EVs比例的增加，体系的封装率显著提高（P<0.05），从41.82%±1.91%上升至89.57%±1.82%（图2a）。在EVs与AST比例为2:1时，蛋白载量已达到最高值，着EVs比例的进一步增加，虾青素封装率变化无显著性差异，然而由于固定量的AST被分散到更多的载体中，载体利用率下降，导致蛋白载量显著（P<0.05）降低至6.72%±0.14%（4:1）（图2b）。这一现象说明，尽管提高EVs的用量有助于提升AST的包封率，可能由于载体表面结合位点增多或包封过程更充分，但单位质量EVs所负载的AST量（即蛋白载量）随之下降，反映出载体利用率与包封效果之间存在平衡关系。综合考虑封装效率和蛋白负载能力，确定EVs与AST的投料质量比为2:1时为最佳比例。在此比例下，体系不仅实现了高封装率（84.94%±1.47%），同时也达到了最高的蛋白载量（12.74%±0.22%），这表明在充分利用载体负载能力的前提下，获得了最优的包封效果，为后续实验提供了效率与成本兼顾的加载条件。

2.3　AST@EVs的形貌表征

经超声负载法制备的AST@EVs的TEM图像如图3a所示，与EVs结果相似，仍呈球状，且有明显白色边缘的“双层壳”结构。以上结构特征表明，短时间超声处理在实现AST封装的同时，并未破坏EVs的原始膜结构完整性，说明该方法具有良好的载体相容性。值得注意的是，AST@EVs表现出了更小的PDI值（0.25±0.03），表明其粒径分布更为均一，分散稳定性优于EVs，这可能与超声过程中囊泡的重新分布和AST的包覆调控作用有关。此外，AST@EVs的粒径经封装AST后增大至109.37±9.64 nm（图3b），这一变化进一步佐证了AST分子被成功封装入EVs的内部空腔或嵌入膜结构中，从而导致囊泡体积扩张^[20]。ST@EVs如图图3c所示，为红色澄清溶液。综合以上形貌与粒径分布结果，可知超声负载法在维持EVs结构稳定的同时，有效实现了AST的装载，并改善了纳米复合体系的均匀性。

2.4　FTIR分析

采用FTIR对AST、EVs及AST@EVs的结构特征进行分析（图4）。结果显示，游离AST在3033 cm⁻¹（羟基O-H伸缩振动）、2964 cm⁻¹（反式烯烃C-H振动）、2862 cm⁻¹（亚甲基C-H不对称伸缩振动）及1651 cm⁻¹（羰基C=O伸缩振动）处呈现典型特征吸收峰，这与AST分子结构中的官能团特征^[21]完全吻合。然而，在AST@EVs的红外光谱中，AST的特征峰均未出现，仅保留了EVs本身的特征吸收带（如蛋白质酰胺I带1650 cm⁻¹和酰胺II带1540 cm⁻¹）。该现象表明，AST分子未被简单吸附于EVs表面，而是被有效封装至EVs的内部。这一结果与动态光散射显示的粒径增大现象相互印证，进一步支持AST被成功封装入EVs内部的结论，表明二者形成了较为完整的核壳型纳米结构，且包封过程未引起AST或EVs结构的明显化学变化。

2.5　体外模拟消化能力分析

AST在消化过程中易受消化液中的强酸和酶环境影响而发生降解，从而影响其生物利用度。研究表明，囊泡递送体系能够有效减少其内部封装物质在胃肠消化过程中的降解，并促进机体对封装物质的吸收^[22]。为此，本研究对游离AST、AST@EVs及AST+EVs进行了体外模拟消化实验。如图5所示，AST@EVs能显著提高AST在模拟消化液中的保留率（P<0.05）。在模拟胃液消化阶段结束后，游离AST和AST+EVs组的AST保留率分别仅为45.33%±2.08%和48.12%±3.27%，而AST@EVs组的AST保留率高达82.38%±3.14%。表明EVs的封装可有效阻隔胃酸和胃酶对AST的破坏，增强其在胃部环境中的稳定性。值得注意的是，在整个模拟消化过程结束后，AST@EVs组的AST保留率仍维持在64.40%±4.22%的较高水平。说明该递送系统不仅可在胃部环境中提供保护，还能在一定程度上减缓肠液环境对AST的降解，从而有助于提升其整体生物可及性。这一结果与前期研究报道一致，即小豆蔻衍生的细胞外囊泡可有效保护其内部封装的活性肽在模拟消化过程中的稳定性^[23]。

2.6　体外抗氧化能力分析

为了评估AST、AST@EVs和AST+EVs的抗氧化能力，本研究进行了DPPH和ABTS⁺自由基清除实验。如图6所示，AST@EVs表现出显著的抗氧化活性（P<0.01）。在DPPH自由基清除实验中，游离AST的清除率为33.56%±1.14%，而EVs的抗氧化活性相对较低，仅为18.98%±1.59%。值得注意的是，AST@EVs的DPPH清除率高达83.92%±1.39%，较游离AST提高了约2.5倍。在ABTS⁺自由基清除实验中，观察到类似的趋势，各组清除能力排序如下：AST@EVs（62.81%±2.52%）>AST+EVs（41.45%±1.78%）>AST（26.62%±1.73%）>EVs（14.22%±1.76%）。这些结果表明，EVs封装能显著增强AST的抗氧化能力（P<0.01），这可能归因于封装后AST的分散性和稳定性得到改善^[24]。此外，AST+EVs组的抗氧化活性虽高于游离AST，但仍显著低于AST@EVs组（P<0.05），说明单纯物理共存并不能实现等效的保护与增效作用，进一步证实EVs的包封处理对AST抗氧化性能的提升具有关键意义。综上所述，EVs作为一种高效的递送系统，不仅可增强AST的稳定性，还能改善其体外抗氧化表现，这为AST在功能性食品或抗氧化制剂中的进一步应用提供了实验依据。

2.7　稳定性分析

AST在所处环境中稳定性较差，在加热、储藏或长期光照条件下易发生非自发降解。为评估该递送体系对AST的保护效果，比较了游离AST、AST+EVs和AST@EVs在热、储藏和光照条件下的稳定性变化。热稳定性实验结果表明（图7a），在100 ℃加热2 h后，游离AST的相对含量下降至43.47%±3.81%，AST+EVs组中AST保留率为53.25%±2.99%，而AST@EVs组中AST的相对含量仍保持在86.30%±4.16%，说明EVs封装可显著抑制AST在高温条件下的降解（P<0.05）。在储藏稳定性方面（图7b），处理7 d后，AST@EVs组中AST的保留率为85.29%±9.27%，显著高于游离AST组及AST+EVs组（P<0.05）。同样，在光照稳定性实验中（图7c），经24 h光照后，AST@EVs中AST的相对保留率达到86.76%±5.41%，明显优于其余两组。上述结果一致表明，EVs通过将AST封装于其内部结构，可有效减缓AST在加热、储藏及光照过程中的降解，显著提升其稳定性（P<0.05）。Lu等^[25]提取的一种蜂王浆外泌体在封装岩藻黄质时也表现出同样的现象，可提高岩藻黄质在紫外光环境和热环境的稳定性。该递送策略在AST应用于食品加工与生产过程中具有潜在的应用价值，有助于维持其活性与功能。

2.8　细胞活力和细胞摄取能力分析

细胞活性是评估化合物生物相容性和促增殖作用的重要指标^[26]。为评估不同处理组对细胞活性的影响，本研究采用不同浓度（0~40 μg/mL）的AST、AST@EVs及AST+EVs处理C2C12细胞。如图8所示，在测试浓度范围内，所有处理组均未表现出细胞毒性，且细胞活力呈现先升高后降低的趋势。值得注意的是，随着培养基中样品浓度的增加，C2C12细胞的细胞活力增加，可能是由于AST及EVs可能通过提供生物活性物质和营养支持，在一定程度上促进了细胞代谢和增殖过程。在10 μg/mL处理浓度下，AST@EVs组表现出最优的细胞活力，使细胞活性从对照组的100%显著提升至110.67%（P<0.05）。此外，该浓度下其他处理组（AST和AST+EVs）也显示出最佳的细胞活力促进作用。基于上述结果，本研究选择10 μg/mL的AST浓度用于后续实验。该浓度在实现显著提高细胞活力的同时未引起毒性反应，兼具生物安全性与有效性，适用于进一步研究。

基于HPLC法可灵敏检测细胞内微量虾青素的优势^[27]，本研究系统评估了C2C12细胞对游离AST、AST@EVs及AST+EVs的摄取能力。如图9所示，AST@EVs组表现出显著的细胞摄取优势，其细胞内AST含量达到5.27±0.21 μg/mL，分别是游离AST组（1.43±0.16 μg/mL）和AST+EVs组（2.68±0.30 μg/mL）的3.69倍和1.97倍（P<0.05）。值得注意的是，AST+EVs组虽较游离AST组摄取量有所提升，但显著低于AST@EVs组（P<0.05）。上述差异表明，仅通过AST与EVs的物理混合并不能实现高效的细胞递送，而封装处理（AST@EVs）可提升细胞对AST的摄取效率，其机制可能与EVs膜蛋白介导的内吞途径有关^[28]。综上，AST@EVs可凭借其纳米级尺寸、良好生物相容性及天然靶向特性，提高AST的细胞摄取效率，为进一步开发高效虾青素递送系统提供了实验依据。

2.9　细胞抗疲劳生化指标分析

氧化应激是诱发细胞疲劳的关键病理因素^[29]。其中，SOD和CAT是机体清除活性氧的关键防御酶^[30−31]，其活性反映细胞抗氧化能力；MDA作为脂质过氧化的终产物，用于评估氧化损伤程度^[32]。因此，探究了游离AST、AST@EVs和AST+EVs对H₂O₂诱导的C2C12细胞氧化应激模型SOD和CAT活性以及MDA水平的影响。研究结果显示（图10a），H₂O₂刺激导致模型组SOD和CAT活性显著降低（P<0.05），而经游离AST、AST+EVs和AST@EVs干预后，这两种关键抗氧化酶的活性均得到明显恢复。值得注意的是，AST@EVs组表现出最优的保护效果，其SOD和CAT酶活性仅比空白组下降了约0.53和0.34 mU/mL。如图10b所示，H₂O₂刺激使MDA水平显著升高（P<0.05），而各处理组均能有效抑制这种升高趋势，其抑制效能呈现明显的组间差异：AST@EVs>AST+EVs>AST。以上结果表明，AST@EVs在缓解氧化应激损伤方面显著优于游离AST及物理混合组（P<0.05），其作用机制可能与以下因素有关：一方面，EVs封装提高了AST的细胞摄取效率，使更多活性分子进入细胞内发挥抗氧化作用^[33]；另一方面，EVs的磷脂双分子层结构可改善AST的分散性，减少其疏水性导致的聚集或失活，从而提高其生物可利用性^[34]。

本研究进一步评估了不同处理组对氧化应激相关疲劳生物标志物的调节作用。乳酸脱氢酶和肌酸激酶作为反映肌肉损伤的关键指标，其水平升高与氧化应激密切相关^[35]。同时，糖原作为细胞能量储备的重要形式，其含量变化可直接反映细胞的抗疲劳能力^[36]。H₂O₂刺激显著增加了C2C12的乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平，而游离AST、AST@EVs和AST+EVs显著下调H₂O₂刺激产生的乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平的升高（图11a和图11b，P<0.05）。其中，AST@EVs组表现出最强的抑制作用，分别将乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平降低至118.17±2.88 U/L和0.56±0.04 mg/dL。如图11c所示，与模型组相比，游离AST、AST@EVs和AST+EVs组的糖原含量分别增加了约2.10倍、4.31和3.16倍。综上所述，AST@EVs可有效调节由氧化应激导致的疲劳相关生物标志物的异常化，即降低乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性，并增加糖原的储存。

线粒体作为细胞的能量工厂，其功能障碍已被证实是导致肌肉无力和疲劳的重要原因^[37]。本研究重点考察了线粒体功能关键标志物——柠檬酸盐合成酶和细胞色素c氧化酶的活性变化^[38]，以阐明不同处理组对线粒体功能的保护作用。

如图12所示，经游离AST、AST+EVs和AST@EVs干预后，由H₂O₂损伤后C2C12细胞中柠檬酸盐合酶活性和细胞色素c氧化酶的活性均得到显著恢复（P<0.05）。值得注意的是，AST@EVs组表现出最优的恢复效果，其柠檬酸盐合成酶活性（0.59±0.04 U/mg prot）和细胞色素c氧化酶活性（2.06±0.23 mU/mg prot）最接近正常组水平。这一结果充分证明，AST@EVs可有效改善氧化应激导致的线粒体功能障碍，从而发挥抗疲劳作用。

3　结论

收起

本研究成功构建了基于副干酪乳杆菌衍生细胞外囊泡的虾青素递送系统（AST@EVs），并系统评价了其理化特性、生物活性及抗疲劳效果。实验结果表明，该体系能够高效封装AST并维持其结构完整性，同时在模拟消化环境中显著提高AST的保留率与稳定性（P<0.05）。与游离AST相比，AST@EVs表现出优异的抗氧化性能，其DPPH和ABTS⁺自由基清除效率提升了约2.5倍。在细胞模型中，AST@EVs通过增强内吞作用显著提高了C2C12细胞对AST的摄取（P<0.01），并有效调控SOD、CAT活性及MDA水平，显著缓解H₂O₂诱导的氧化损伤（P<0.05）。与现有脂质体、聚合物纳米粒或包埋粉等递送系统相比，AST@EVs在生物相容性、细胞摄取效率及体内安全性方面表现出明显优势。尤其相较于传统包埋技术，EVs来源于天然益生菌，具备优异的肠道亲和性与低免疫原性，可有效避免化学载体可能引起的毒副作用，并实现更高效的胞内递送。此外，AST@EVs还在抗疲劳机制方面展现出多途径调控能力，如下调乳酸脱氢酶（LDH）与肌酸激酶（CK）活性、提升糖原储备以及增强线粒体功能关键酶（如柠檬酸盐合成酶和细胞色素c氧化酶）的活性。本研究结果突显了基于EVs的递送策略在改善疏性生物活性成分生物利用度和功能效应方面的显著优势，不仅为AST的高效利用提供了新方案，也为开发下一代抗疲劳膳食补充剂或功能性食品提供了可靠的理论基础与技术路径。AST@EVs系统在安全性、稳定性和生物活性方面的综合性能，显示出其优于现有合成载体技术的应用潜力。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

SYED A M, KARIUS A K, MA J, et al. Mitochondrial dysfunction in myalgic encephalomyelitis/chronic fatigue syndrome[J]. Physiology, 2025, 40(4): 319−328.

KANG H G, LIM J H, KIM H Y, et al. Anti-fatigue effect of tormentic acid through alleviating oxidative stress and energy metabolism-modulating property in C2C12 cells and animal models[J]. Nutrition Research Practice, 2023, 17(4): 670−681.

LIU C J, DONG X L, JIA J, et al. Effects of astaxanthin supplementation on fatigue, motor function and cognition: A meta-analysis of randomized controlled trials[J]. Biological Research For Nursing, 2024, 26(3): 469−480.

JIA L, WANG W, ZHAO H Y, et al. Innovative nano delivery systems for astaxanthin: Enhancing stability, bioavailability, and targeted therapeutic applications[J]. Journal of Agricultural Food Chemistry, 2025, 73(6): 3268−3304.

WITWER K W, WOLFRAM J. Extracellular vesicles versus synthetic nanoparticles for drug delivery[J]. Nature Reviews Materials, 2021, 6(2): 103−106.

MELDOLESI J. Unconventional protein secretion dependent on two extracellular vesicles: Exosomes and ectosomes[J]. Frontiers in Cell Developmental Biology, 2022, 10: 877344.

YANG L Y, LIANG G W, CAI B J, et al. Enhanced tumor self-targeting of lemon-derived extracellular vesicles by embedding homotypic cancer cell membranes for efficient drug delivery[J]. Journal of Nanobiotechnology, 2025, 23(1): 74.

JIANG X D, LIU Z J, YOU H J, et al. Quercetin-primed BMSC-derived extracellular vesicles ameliorate chronic liver damage through mir-136-5p and GNAS/STAT3 signaling pathways[J]. International Immunopharmacology, 2024, 142: 113162.

LEE B H, WU S C, SHEN T L, et al. The applications of Lactobacillus plantarum-derived extracellular vesicles as a novel natural antibacterial agent for improving quality and safety in tuna fish[J]. Food Chemistry, 2021, 340: 128104.

CUI W N, TIE S S, GUO M, et al. Engineering milk-derived exosome for enhancing cellular astaxanthin delivery[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2022, 70(35): 10794−10806.

AGRAWAL A K, AQIL F, JEYABALAN J, et al. Milk-derived exosomes for oral delivery of paclitaxel[J]. Nanomedicine, 2017, 13(5): 1627−1636.

ZHONG X, WANG K Y, CHEN Z J, et al. Incorporation of fucoxanthin into 3D printed Pickering emulsion gels stabilized by salmon by-product protein/pectin complexes[J]. Food & Function, 2024, 15: 1323−1339.

ZHANG L J, A Z A, ZHOU C, et al. High internal phase Pickering emulsion stabilized by sea bass protein microgel particles: Food 3D printing application[J]. Food Hydrocolloids, 2022, 131: 107744.

LIANG D, LIU C Y, LI Y, et al. Engineering fucoxanthin-loaded probiotics’ membrane vesicles for the dietary intervention of colitis[J]. Biomaterials, 2023, 297: 122107.

CAI J, XING L, ZHANG W, et al. Effect of yeast-derived peptides on skeletal muscle function and exercise-induced fatigue in c2c12 myotube cells and icr mice[J]. Journal of Agricultural Food Chemistry, 2023, 71(42): 15522−15537.

ZHANG X M, SHAUKAT M, LIU R G, et al. Orally administered dual-targeted astaxanthin nanoparticles as novel dietary supplements for alleviating hepatocyte oxidative stress[J]. Food & Function, 2024, 15(4): 2131−2143.

ZHU H, XU W, WANG N, et al. Anti-fatigue effect of Lepidium meyenii Walp. (Maca) on preventing mitochondria-mediated muscle damage and oxidative stress in vivo and vitro[J]. Food & Function, 2021, 12(7): 3132−3141.

ZHAO X, YIN F, HUANG Y, et al. Oral administration of grape-derived nanovesicles for protection against LPS/D-GalN-induced acute liver failure[J]. International Journal of Pharmaceutics, 2024, 652: 123812.

WANG S, HU Y, SONG P, et al. Harnessing extracellular vesicles from Lactobacillus reuteri and Lactobacillus paracasei for synergistic osteoporosis therapy[J]. Composites Part B: Engineering, 2025, 297: 112255.

WEI X, WANG M, DONG X, et al. Internal-external homologous drug-loaded exosome-like nanovesicles released from semi-IPN hydrogel enhancing wound healing of chemoradiotherapy-induced oral mucositis[J]. International Journal of Nanomedicine, 2025: 4105-4121.

JIANG G L, ZHU M J. Preparation of astaxanthin-encapsulated complex with zein and oligochitosan and its application in food processing[J]. LWT-Food Science and Technology, 2019, 106: 179−185.

SINGH A, SRIVASTAVA N, YADAV K S, et al. Preparation, optimization, characterization and bioevaluation of rosmarinic acid loaded phytovesicles for anti-inflammatory activity[J]. Journal of Drug Delivery Science Technology, 2020, 59: 101888.

RAJENDRAN S, JAYARAM Y, NARAYANAN J, et al. Nanocarrier potential of small cardamom-derived exosome-like nanovesicles for the delivery of appetite-enhancing peptide, Ghrelin[J]. Food Bioscience, 2025: 106830.

GUAN L, LIU J L, YU H J Y, et al. Water-dispersible astaxanthin-rich nanopowder: preparation, oral safety and antioxidant activity in vivo[J]. Food & Function, 2019, 10(3): 1386−1397.

LU Y, JIN J, YANG Y, et al. Royal jelly exosomes as a stable and bioavailable carrier for fucoxanthin: A novel approach for antimelanoma therapy[J]. Food Bioscience, 2025, 71: 107118.

WANG S, BARTHES N P, URBAN S, et al. Structure-guided design of a KMT9 inhibitor prodrug with cellular activity[J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2025, 68(13): 13395−13320.

BRIVIBA K, BORNEMANN R, LEMMER U. Visualization of astaxanthin localization in HT29 human colon adenocarcinoma cells by combined confocal resonance Raman and fluorescence microspectroscopy[J]. Molecular Nutrition Food research, 2006, 50(11): 991−995.

HE B, WANG H, LIU G, et al. Fungal small RNAs ride in extracellular vesicles to enter plant cells through clathrin-mediated endocytosis[J]. Nature Communications, 2023, 14(1): 4383.

HUANG W C, CHIU W C, CHUANG H L, et al. Effect of curcumin supplementation on physiological fatigue and physical performance in mice[J]. Nutrients, 2015, 7(2): 905−921.

CULOTTA V C, YANG M, O'HALLORAN T V. Activation of superoxide dismutases: Putting the metal to the pedal[J]. Biochimica et Biophysica Acta -Molecular Cell Research, 2006, 1763(7): 747−758.

HO Y S, XIONG Y, MA W C, et al. Mice lacking catalase develop normally but show differential sensitivity to oxidant tissue injury[J]. Journal of Biological Chemistry, 2004, 279(31): 32804−32812.

ABDELHALIM M A K, MOUSSA S A A, QAID H A Y. The protective role of quercetin and arginine on gold nanoparticles induced hepatotoxicity in rats[J]. International Journal of Nanomedicine, 2018: 2821-2825.

JIANG Q, SUN Y, SI X, et al. Anthocyanin-loaded milk-derived extracellular vesicles nano-delivery system: Stability, mucus layer penetration, and pro-oxidant effect on HepG2 cells[J]. Food Chemistry, 2024, 458: 140152.

HE R, JIANG Y, SHI Y, et al. Curcumin-laden exosomes target ischemic brain tissue and alleviate cerebral ischemia-reperfusion injury by inhibiting ROS-mediated mitochondrial apoptosis[J]. Materials Science and Engineering: C, 2020, 117: 111314.

JEON H, LEE K, KIM Y T, et al. Effect of HY7602 Fermented deer antler on physical fatigue and antioxidant activity in mice[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2024, 25(6): 3318.

SINGHAROY A, MAFFEO C, DELGADO MAGNERO K H, et al. Atoms to phenotypes: molecular design principles of cellular energy metabolism[J]. Cell, 2019, 179(5): 1098−1111.

FUSAGAWA H, SATO T, YAMADA T, et al. High-intensity interval training using electrical stimulation ameliorates muscle fatigue in chronic kidney disease-related cachexia by restoring mitochondrial respiratory dysfunction[J]. Frontiers in Physiology, 2024, 15: 1423504.

MENG L B, HU G F, SHAN M J, et al. Citrate synthase and OGDH as potential biomarkers of atherosclerosis under chronic stress[J]. Oxidative Medicine Cellular Longevity, 2021(1): 9957908.

2026年第47卷第14期

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doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2025060291

接收时间：2026-04-28
首发时间：2026-10-22
出版时间：2026-07-15

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收稿日期：2026-04-28

基金

作者信息

长春职业技术大学，吉林长春 130033

通讯作者:

杜金（1987−），女，硕士，讲师，研究方向：生物活性研究，E-mail：364235861@qq.com。

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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