食品工业科技

灌酒浓度（mL/10 g）	醉酒只数（只）	死亡只数（只）
0.09	2	0
0.10	2	0
0.11	4	0
0.12	4	1
0.13	4	1

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不同剂型活性肽复合饮品对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

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魏炳琦 ¹ , 陈柳 ¹ , 张新月 ¹ , 张剑平 ² , 郝在林 ² , 刘延鑫 ¹^,^*

食品工业科技 | 营养与保健 2026,47(2): 408-418

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食品工业科技 |营养与保健 2026 , 47 (2) : 408 -418

不同剂型活性肽复合饮品对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

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魏炳琦¹, 陈柳¹, 张新月¹, 张剑平², 郝在林², 刘延鑫¹^,^*

作者信息

¹河南中医药大学医学院，河南郑州 450046

²内蒙古肽好生物制品有限公司，内蒙古锡林浩特 010100

通讯作者:

刘延鑫（1979−），男，博士，副教授，研究方向：中医药现代技术研究，E-mail：liuyanxin@126.com。

作者简介:

魏炳琦（2002−），男，硕士研究生，研究方向：药食同源的产品开发，E-mail：415306947@qq.com

Protective Effect of Different Dosage Forms of Active Peptide Compound Drinks on Acute Alcoholic Liver Injury in Mice

Bingqi WEI¹, Liu CHEN¹, Xinyue ZHANG¹, Jianping ZHANG², Zailin HAO², Yanxin LIU¹^,^*

Affiliations

¹School of Medicine, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China

²Inner Mongolia Peptide Biological Products Co., Ltd., Xilinhot 010100, China

出版时间: 2026-01-15 doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2024120134

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摘要

收起

目的：研究活性肽对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用及其对肠道菌群的调节作用，并探讨其作用机制。方法：建立急性酒精性肝损伤小鼠模型，分别给予饮料型、固体型和浓缩型的活性肽复合饮品，检测小鼠肝组织中乙醇脱氢酶（Alcohol dehydrogenase，ADH）、乙醛脱氢酶（Acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）、肿瘤坏死因子α （Tumour necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素6（Interleukin 6，IL-6）、丙二醛（Malonicdialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（Catalase，CAT）、谷胱甘肽（Glutathione，GSH）以及血清中谷丙转氨酶（Alanine aminotrans-ferase，ALT）、谷草转氨酶（Aspartate transaminase，AST）和总胆固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）的变化，观察肝组织病理切片损伤情况，分析肠道菌群等指标。结果：与模型组相比，3种不同剂型的活性肽复合饮品均能够减轻酒精对小鼠肝细胞的损伤，下调小鼠机体内ALT、AST、TG、TC的表达（P<0.05），显著降低肝脏组织中TNF-α、IL-6的水平（P<0.05），显著降低肝组织中MDA含量（P<0.05），提高肝组织中SOD、CAT、GSH三种物质的活性（P<0.05）；肝组织病理切片表明3种不同剂型的活性肽复合饮品明显改善酒精引起的肝细胞脂肪浸润和炎症浸润；肠道菌群分析表明酒精性肝损伤小鼠肠道菌群结构发生变化，3种不同剂型活性肽复合饮品能通过增加肠道菌群丰富度来改善小鼠急性酒精中毒所致的肝损伤，这一机制与肝肠轴的传导调节有关。结论：3种不同剂型的活性肽复合饮品均具有一定的酒精性肝损伤的保护作用，其作用机制可能与改善脂质代谢、抗炎活性、抗氧化活性以及改善小鼠机体内肠道菌群有关，其中浓缩型的活性肽饮品具有一定的优势。

关键词

活性肽 / 急性酒精性肝损伤 / 肠道菌群 / 功能性饮品

Abstract

收起

Objective: To investigate the hepatoprotective effects of bioactive peptides on acute alcoholic liver injury in mice, examine their effects on the intestinal microbiota, and elucidate the underlying mechanisms of their protective action. Methods: A mouse model of acute alcohol-induced liver injury was established, and three formulations of bioactive peptide composite beverages—liquid, solid, and concentrated forms—were administered. The levels of alcohol dehydrogenase (ADH), acetaldehyde dehydrogenase (ALDH), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and glutathione (GSH) were assessed, along with serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), total cholesterol (TC), and triglycerides (TG). Histopathological examination of liver tissue was performed, and alterations in the intestinal microbiota were analyzed. Results: Compared with the model group, all three formulations of bioactive peptide composite beverages significantly attenuated alcohol-induced hepatic injury, as evidenced by reductions in ALT, AST, TG, and TC levels in mice (P<0.05). Furthermore, the treatment groups exhibited significant decreases in hepatic TNF-α, IL-6, and MDA levels (P<0.05), along with enhanced SOD, CAT, and GSH activity (P<0.05). Histological analysis revealed that bioactive peptide composite beverages markedly alleviated alcohol-induced hepatic steatosis and inflammatory infiltration. Additionally, intestinal microbiota analysis indicated that alcoholic liver injury was associated with alterations in microbial composition, whereas bioactive peptide treatment enhanced microbial diversity and richness, suggesting a regulatory effect on the gut-liver axis. Conclusion: The three different dosage forms of active peptide compound drinks have certain protective effects on alcoholic liver injury. The mechanism may be related to improving lipid metabolism, anti-inflammatory activity, antioxidant activity and improving intestinal flora in mice. Among them, concentrated active peptide drinks have certain advantages.

Key words

active peptides / acute alcoholic liver injury / gut microbiota / functional drinks

引用本文

魏炳琦, 陈柳, 张新月, 张剑平, 郝在林, 刘延鑫. 不同剂型活性肽复合饮品对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用. 食品工业科技, 2026 , 47 (2) : 408 -418 . DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2024120134

Bingqi WEI, Liu CHEN, Xinyue ZHANG, Jianping ZHANG, Zailin HAO, Yanxin LIU. Protective Effect of Different Dosage Forms of Active Peptide Compound Drinks on Acute Alcoholic Liver Injury in Mice[J]. Science and Technology of Food Industry, 2026 , 47 (2) : 408 -418 . DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2024120134

正文

收起

酒精性肝损伤（Alcoholic Liver Disease，ALD）是由过量饮酒引起的肝脏损伤，常见症状包括食欲不振、乏力、恶心和上腹部不适，严重时可导致黄疸、腹水甚至肝功能衰竭^[1]。全球每年有300万人死于大量饮用酒精，多因酒精性肝损伤所致^[2]。酒精性肝损伤不仅降低个人生活质量，还显著增加医疗负担、个人和社会经济负担^[3]。因此，有必要针对酒精性肝损伤开展相关研究，以便发掘其新型防治方式。

正常肝脏有丰富的抗氧化酶系统，如SOD、GSH和CAT，肝脏可通过清除体内的ROS和MDA，维持肝细胞的氧化还原平衡^[4]。但过量饮酒会导致氧化应激产物堆积，抗氧化机制失调，最终发生酒精性肝损伤^[5]。因此，增强肝脏的抗氧化能力是防治酒精性肝损伤的关键。已有研究表明生物活性肽来源广泛且具有抗氧化等多种生物活性，在改善酒精性肝损伤具有一定的优势^[6−7]。如胶原蛋白肽富含氨基酸，尤其是甘氨酸和脯氨酸，其可通过抑制自由基生成和促进抗氧化酶活性，减轻酒精引发的氧化损伤，从而保护肝脏^[8]。肝肽含有特定氨基酸和小分子肽，能直接保护肝细胞，改善酒精肝损伤^[9]。骨髓肽富含间充质干细胞，可通过线粒体转化来改善肝脏^[10]。以上提示未来可深度开发活性肽的抗氧化活性，为保肝新型产品的研发提供参考。

本研究以胶原蛋白肽、肝肽、骨髓肽这3种生物活性肽为原料构建生物活性肽复合饮品，并制备成固体型、浓缩型、饮料型，以期探究3种生物活性肽复合物对急性酒精性肝损伤的改善作用，以便为酒精性肝损伤的早期防治和相关功能性产品的开发提供可行性参考依据。

1　材料与方法

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1.1　材料与仪器

3~4周的SPF级KM昆明雄性小鼠　体重区间为18~20 g，动物购买自北京华阜康生物科技股份有限公司，实验动物生产许可证编号：SCXK（京）2024-0003；胶原蛋白肽（纯度95%）、骨髓肽（纯度85%）、肝肽（纯度75%）　内蒙古肽好生物制品有限公司；牛栏山二锅头白酒（52°）　北京顺鑫农业股份有限公司牛栏山酒厂；TMB底物溶液、2 mol/L的硫酸、肝素、生理盐水、GSH检测试剂盒、SOD检测试剂盒、CAT检测试剂盒、BCA蛋白定量检测试剂盒、MDA检测试剂盒、ADHL测试盒、ADH测试盒　武汉赛维尔生物科技有限公司；ALT测定试剂盒、AST测定试剂盒、TG测定试剂盒、TC测定试剂盒　深圳雷杜生命科学股份有限公司；TNF-α测试盒、IL-6测试盒　赛默飞世尔科技公司。

KZ-III-F高速组织研磨仪、MV-100涡旋混匀仪、MX-F涡旋混合器　武汉赛维尔生物科技有限公司；D3024R台式高速冷冻离心机　大龙兴创实验仪器（北京）股份公司；DK-8B电热恒温水槽　上海精宏实验设备有限公司；HH-6数显恒温水浴锅　常州澳华仪器有限公司；AK-RO-C2实验室超纯水机　艾肯（中国）厨卫有限公司；Epoch酶标检测仪　美国伯腾仪器有限公司；Chemray 800全自动生化分析仪　深圳雷杜生命科学股份有限公司；NovaSeq 6000基因测序仪　Illumina 公司。

1.2　实验方法

1.2.1　3种活性肽复合饮品的制备

3种活性肽复合饮品由本团队制备，三种剂型的活性肽饮品成分均主要由胶原蛋白肽、骨髓肽、肝肽这3种肽构成。

浓缩型活性肽复合饮品的制备方法如下^[11−12]：准确称量胶原蛋白肽、骨髓肽、肝肽等各种物料，因透明质酸钠难溶解，需要用高速剪切罐进行预处理。将透明质酸钠与抗性糊精干混在一起，然后通过高速剪切罐剪切，待完全溶解后全部打入配料罐。其余物料直接投入配料罐中，搅拌均匀。高速剪切罐残留物料全部冲洗到配料罐里，然后定容。升温至60 ℃，经过80目管道过滤、板换降温至10 ℃打入成品罐，灯检、90 ℃保持30 min二次灭菌。

饮料型活性肽复合饮品的制备方法如下^[11−12]：准确称量胶原蛋白肽、骨髓肽、肝肽等各种物料，因透明质酸钠难溶解，需要用高速剪切罐进行预处理。透明质酸钠与抗性糊精干混在一起，然后通过高速剪切罐剪切，待完全溶解后全部打入配料罐。其余物料直接投入配料罐中，搅拌均匀。高速剪切罐残留物料全部冲洗到配料罐里，然后定容。升温至60 ℃，经过80目管道过滤、板换升温至80 ℃打入成品罐、罐装，灯检、90 ℃保持30 min二次灭菌，检验。

固体型活性肽复合饮品的制备方法如下^[11−12]：准确称量胶原蛋白肽、骨髓肽、肝肽等各种物料，除了粉末香精、柠檬酸、三氯蔗糖，其余原料均过60目筛以免有结块现象。三氯蔗糖、食用粉末香精用3 kg聚葡萄糖预混均匀。将预混的物料和其他物料全部倒入混料罐，正、反转各混15 min，制袋、装盒、打码、塑封。

制备出的三种剂型的活性肽复合饮品其主要在于浓度不同，其中固体型活性肽复合饮品活性肽含量（12 g/袋）：胶原蛋白肽（0.6%）、骨髓肽（0.4%）、肝肽粉（0.2%）；浓缩型活性肽复合饮品活性肽含量（50 mL/瓶）：胶原蛋白肽粉（3 g/100 mL），骨髓肽粉（2 g/100 mL）、肝肽粉（1 g/100 mL）；饮料型活性肽复合饮品活性肽含量（245 mL/瓶）：胶原蛋白肽粉（0.6%）、骨髓肽粉（0.4%）、肝肽粉（0.2%）。

1.2.2　小鼠灌酒浓度选择

取KM昆明雄性小鼠20只，随机分为5组，每组小鼠4只。给予小鼠1周的隔离适应性饲养，而后进入河南中医药大学动物实验中心开展实验，实验动物使用许可证：SYXK（豫）2021-0015。本实验经河南中医药大学实验动物福利伦理委员会审核，伦理批准编号：1476。小鼠饲养环境：符合小鼠正常的昼夜规律，正常饮食饮水，环境温度为22 ℃，环境湿度为50%。隔离适应性饲养1周后对每组进行禁食不禁水处理，12 h后给予小鼠牛栏山二锅头白酒（52°）灌胃处理，分别按照0.09、0.10、0.11、0.12、0.13 mL/10 g的浓度梯度进行，浓度梯度设定参照韩紫薇等^[13]的研究。小鼠能背部朝下保持30 s且不翻正代表小鼠醉酒阳性，并记录每组灌酒处理后小鼠的死亡率以及醉酒率。最终选取小鼠醉酒率最高，但死亡率为0的浓度为最佳灌酒浓度。

1.2.3　造模与给药

KM昆明雄性小鼠50只，随机分为5组，每组小鼠10只。分别为空白组、模型组、饮料型、浓缩型、固体型，同样给予1周的隔离适应性饲养，对每组进行禁食不禁水处理，12 h后，按照饮料型每人每天245 mL，浓缩型每人每天50 mL，固体型每人每天12 g的人体服用剂量，进行动物的剂量换算，分别给予饮料型31.85 mL/kg的多肽饮品（饮料型）灌胃处理，浓缩型6.5 mL/kg的多肽饮品（浓缩型）灌胃处理，固体型1.56 g/kg的多肽饮品（固体型）灌胃处理。灌胃前对每只小鼠进行称重，并计算每只小鼠的灌胃体积。模型组给予等量的生理盐水。30 min后，按照探究出的最佳灌酒浓度，除空白组外，另外4组小鼠给予牛栏山二锅头白酒（52°）灌胃处理，构建急性酒精中毒模型。造模方式参照李冬梅等^[14]的研究。

1.2.4　行为学指标测定和样本采集

1.2.4.1　攀附时间测定

给予KM昆明雄性小鼠牛栏山二锅头白酒（52°）灌胃处理后，立即将小鼠放置于一竖直放置的铁丝网上，不给予小鼠外力，使其自然攀附于铁丝网上，并记录从开始攀附的时间到因不能攀附而掉落的时间，计算其间的时长即为攀附时间。

1.2.4.2　至醉酒时长

首先记录给予KM昆明雄性小鼠牛栏山二锅头白酒（52°）灌胃处理后的时间，其次记录KM昆明雄性小鼠背部朝下30 s不翻转正身体的时间，计算其间的时长即为至醉酒时长。

1.2.4.3　醒酒时长

从KM昆明雄性小鼠醉酒开始计时，直至醒酒，在30 s内能翻正身体或在60 s内能翻正身体2次，记录醒酒时间，计算其间的时长即为醒酒时长。

1.2.4.4　样品采集

进行行为学指标测定后，对各组小鼠进行称重，并剪去小鼠胡须，采用摘眼球取血法进行取血，收集至EDTAK2血常规管（动物专用），上下左右晃动，使血液与抗凝剂充分混合，并放置在4 ℃冰箱中进行储存。摘眼球取血前，本研究严格遵守《实验动物管理条例》和实验动物伦理要求，给予小鼠50 mg/kg戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉处理，以减少动物的痛苦和应激反应，进行麻醉处理^[15]。摘眼球取血完成后，采用颈椎脱臼法处死各组小鼠，解剖并取出肝脏，放入预冷的生理盐水中漂洗2~3遍，用滤纸将肝脏表面的血渍和生理盐水吸干，称重并记录肝脏质量。其中部分肝脏4%多聚甲醛固定，以便后续进行病理学的相关检测。剩余的部分肝脏冻存于液氮中，以便后续检测和备用。

1.2.5　解酒相关指标的测定

准确称取各组小鼠肝脏组织重量，按照重量（g）:体积（mL）=1:9的比例，加入生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500 r/min，离心10 min，取上清液，参考相应试剂盒对肝组织匀浆中ADH、ALDH含量进行测定。

1.2.6　肝功能指标的检测

按照摘眼球取血法取得各组小鼠血液后，在常温下静置15 min左右，3000 r/min离心15 min分离血清，置于−20 ℃保存备用。检测时严格按照试剂盒说明书来进行，测定血清中ALT、AST含量。

1.2.7　肝损伤相关指标的检测

准确称取各组小鼠肝脏组织重量，按照重量（g）:体积（mL）=1:9的比例，加入生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500 r/min，离心10 min，取上清液，参考相应试剂盒对肝组织匀浆中TNF-α、IL-6含量进行测定。

按照摘眼球取血法取得各组小鼠血液后，在常温下静置15 min，3000 r/min离心15 min分离血清，置于−20 ℃保存备用。检测时严格按照试剂盒说明书来进行，测定血清中TG、TC含量。

1.2.8　抗氧化应激相关指标的检测

准确称取各组小鼠肝脏组织重量，按照重量（g）:体积（mL）=1:9的比例，加入生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500 r/min，离心10 min，取上清液，参考相应试剂盒对肝组织匀浆中MDA、SOD、CAT、GSH含量进行测定；上清液与蛋白去除试剂1:1，充分混匀；于4 ℃下按照10000 g的离心力进行10~15 min的离心处理，取上清。

1.2.9　肝脏组织观测

摘眼球取血完成后，采用颈椎脱臼法处死各组小鼠，解剖并取出肝脏，放入预冷的生理盐水中漂洗两到三遍，用滤纸将肝脏表面的血渍和生理盐水吸干，称重并记录肝脏质量。根据下式计算小鼠肝脏指数（W，%）：

$ \mathrm{W}(\text{%})=\mathrm{a}/\mathrm{A}\times 100 $

式中：a为肝脏质量，g；A为小鼠质量，g。

取各组小鼠部分肝脏经4%多聚甲醛固定，石蜡包埋后，严格按照病理实验检测SOP程序进行修剪、脱水、包埋、切片、染色、封片，最后使用扫描浏览软件（3DHISTECH（Hungary），CaseViewer 2.4）、全景切片扫描仪（3DHISTECH（Hungary），PANNORAMIC DESK/MIDI/250/100）镜检肝组织病理切片。

1.2.10　肠道菌群16S rDNA测序

摘眼球取血完成后，采用颈椎脱臼法处死小鼠后，使用无菌解剖刀，在超净台内取出整个肠道，分离小鼠结肠粪便。采用无菌镊子夹取小鼠粪便，每只小鼠采集3~5粒粪便，放入无菌冻存管中，液氮速冻后立刻放入−80 ℃冰箱进行低温保存。送至武汉赛维尔生物科技有限公司进行16S rDNA测序。每组送样4个，共计20个样本。各样品提取总DNA后，以16S rDNA基因V3–V4高变区为扩增目标，设计特异性引物并添加Illumina测序接头。经PCR扩增、纯化、定量及均一化后构建测序文库，质检合格文库在 Illumina NovaSeq 6000平台上进行双端测序。共获得1595834对原始测序读段，经双端读段质量控制、拼接并去除嵌合体后，保留 1465048 条高质量有效序列，每个样本不少于69790条，数据读长适宜、质量可靠。

1.3　数据处理

本研究主要采用SPSS Statistics 23.0软件进行数据分析，数据结果均以“均值±标准差”的形式表示。采用单因素方差分析进行各组间差异显著性检验，P<0.05时有统计学意义。汇总数据后采用GraphPad Prism 8.0.2 软件作图。

2　结果与分析

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2.1　灌酒浓度确定

如表1所示，0.12 mL/10 g体重及以上浓度小鼠虽能达到醉酒状态，但会引起小鼠的死亡，而0.11 mL/10 g的浓度小鼠能全部达到醉酒状态，并且无死亡，0.10 mL/10 g的浓度虽无死亡小鼠，但其醉酒只数较少。综上，本实验确定最终的最佳灌酒浓度为0.11 mL/10 g，并以此浓度进行了急性酒精性肝损伤实验。

2.2　3种活性肽复合饮品对急性酒精性肝损伤小鼠的行为学指标的影响

酒精进入小鼠体内后，小鼠的运动协调能力会受到抑制，而酒精性肝损伤小鼠因肝脏对酒精的代谢功能减弱，可能导致攀附时长显著减少，至醉酒时间缩短，醒酒时长显著延长^[16−17]。由图1可知，与模型组相比，饮料型、固体型、浓缩型的攀附时长分别延长了44.5%、184.3%、319.3%（P<0.05）；至醉酒时长分别延长了33.1%、104.8%、107.2%（P<0.05）；醒酒时长分别缩短了50.9%、44.2%、63.1%（P<0.05），均能延长醉酒小鼠的攀附时长和至醉酒时长，缩短醒酒时长，差异显著（P<0.05）。在攀附时长和至醉酒时长方面，结果提示浓缩型的改善效果最好，这说明活性肽复合饮品确实具有一定的解酒活性，并且高浓度的活性肽复合饮品解酒活性更优，具有一定的剂量依赖性。以上可知，3种剂型的活性肽饮品均对急性酒精性肝损伤小鼠具有改善作用，这与Jiang等^[18]的结果相似。3种剂型的活性肽复合饮品可以改善由过量饮酒导致的机体行为学紊乱，虽然各剂型间的差异不显著，但是在攀附时长和至醉酒时长改善效果上，浓缩型的活性肽复合饮品具有一定的优势。

2.3　3种活性肽复合饮品对急性酒精性肝损伤小鼠的ADH、ALDH指标的影响

ADH能够催化乙醇转化为乙醛，其活性直接影响酒精转化为乙醛的速度，进而影响酒精代谢效率^[19−20]。ALDH可将有毒的乙醛进一步氧化为无害的乙酸盐，最终排出体外，其活性直接关联到乙醛的清除速率，可减少乙醛在体内积累、减轻酒精中毒症状等^[21]。故检测机体内ADH和ALDH酶的活性是判断机体解酒能力的一个重要指标。由图2可知，与空白组相比，模型组小鼠肝组织中ADH、ALDH水平分别降低了71.9%、52.7%（P<0.05）。与模型组相比，饮料型、固体型、浓缩型3种剂型生物活性肽复合饮品的ADH活性相较于模型组分别提高了203.7%、213.7%、243.3%（P<0.05），ALDH活性则分别提高了51.6%、77.5%、103.1%（P<0.05）。这与Xia等^[22]的研究结果相似。并且浓缩型与其余两组相比，对ADH和ALDH具有更好的改善效果。这表明3种剂型生物活性肽复合饮品均能改善因短时间内大量饮酒导致的解酒酶活性的降低，且浓缩组对于解酒酶活性的改善作用最好。

2.4　3种活性肽复合饮品对急性酒精性肝损伤小鼠的ALT、AST指标的影响

ALT与AST主要存在于肝细胞质及线粒体中，在血清中的浓度水平直接反映肝细胞受损的程度，是评估肝损伤程度的重要生化参数，为肝脏损伤的敏感标志物^[23−24]。当肝细胞受到酒精的损害时，会发生一系列病理变化，包括细胞浑浊肿胀、通透性增加，进而导致细胞质内的ALT与AST两种酶释放入血，其血清内含量增加^[25−27]。由图3可知，与空白组相比，模型组小鼠血清中ALT、AST水平分别升高了239.8%、342.4%（P<0.05）。这表明酒精灌胃导致小鼠肝脏转氨酶升高，肝脏受损。与模型组相比，饮料型、固体型、浓缩型3种剂型生物活性肽复合饮品的ALT分别显著降低了29.0%、57.0%、70.2%（P<0.05），AST分别显著降低了71.1%、70.3%、74.6%（P<0.05）。这与Song等^[28]的研究结果相似。以上表明3种活性肽复合饮品对酒精性肝损伤具有一定的改善作用，具有保肝护肝的作用，其中浓缩型生物活性肽复合饮品干预后小鼠血清ALT和AST含量下降更明显，但与其余两组剂型间的差异不显著。

2.5　3种活性肽复合饮品对急性酒精性肝损伤小鼠的TNF-α、IL-6、TG、TC指标的影响

机体摄入酒精后即进入代谢过程，代谢产生的氧化应激产物会破坏肝脏氧化应激水平的平衡，进而诱导细胞色素P450 2E1（CYP2E1）活化，上调TNF-α水平，刺激丝裂原活化蛋白激酶途径，促进ROS的生成，进一步加剧肝脏氧化应激和炎症级联反应^[29]。此外，单次大量饮酒会激活炎性小体NLRP3，刺激肝脏巨噬细胞中的NF-κB通路，进而上调IL-6表达，加快酒精性肝损伤进程^[14,30]。故当肝脏受损时，小鼠机体内炎症反应增加，TNF-α和IL-6可反映小鼠肝损伤的炎症程度。由图4可知，与空白组相比，模型组小鼠肝脏细胞释放的TNF-α、IL-6浓度分别升高了8.4%、17.9%（P<0.05）。这表明短期大量饮酒会破坏小鼠机体内肝脏的代谢平衡，引发小鼠机体的炎症反应，增加炎症因子表达，加重肝损伤。与模型组相比，饮料型、固体型、浓缩型3种剂型生物活性肽复合饮品的TNF-α浓度显著降低4.1%、5.3%、7.9%（P<0.05），IL-6浓度显著降低4.6%、10.1%、15.0%（P<0.05）。这与Wu等^[31]的研究结果相似。以上提示3种剂型的生物活性肽复合饮品均能改善酒精引起的小鼠炎症反应，调控TNF-α、IL-6炎症因子的表达，维持机体稳态；并且3种剂型间对TNF-α、IL-6炎症因子的调控能力为浓缩型优于固体型，固体型优于饮料型，这进一步表明浓缩型在改善急性酒精性肝损伤上具有一定的优势。

脂代谢异常也是机体短时间内大量饮酒的常见表现之一，大量饮酒会导致肝脂肪变性，脂质代谢过程受损^[32−34]。而肝脏脂质代谢过程受损会导致肝脏内质网功能受损，抑制脂肪酸氧化，引起内质网应激反应，导致TG和TC在肝细胞中过度积累，加重肝损伤^[35−36]。故TG和TC含量可作为检测脂代谢是否异常的重要指标。由图5可知，与空白组相比，模型组小鼠血清中TG和TC含量分别提高了48.4%、30.0%（P<0.05），说明短时间大量饮酒会破坏机体内脂代谢的稳定性，导致脂代谢紊乱，上调小鼠机体内血脂表达。与模型组相比，饮料型、固体型、浓缩型3种剂型生物活性肽复合饮品的TG含量分别降低了6.3%、18.9%、22.1%（P<0.05），TC含量则分别降低了11.9%、20.1%、20.6%（P<0.05）。这与Ye等^[37]的研究结果相似。这表明3种活性肽复合饮品能改善酒精引起的肝脏脂质代谢异常，其中浓缩型的饮料具有一定的优势。

2.6　3种活性肽复合饮品对急性酒精性肝损伤小鼠的MDA、SOD、CAT、GSH指标的影响

酒精代谢过程中，会产生大量的氧化应激产物，自由基堆积，机体内氧化应激平衡被破坏，肝脏炎症水平增高，产生肝损伤，甚至肝纤维化^[38]。肝脏受损后，肝细胞膜完整性和功能受损，肝细胞膜中的脂质成分氧化，最终产生MDA^[32−33]。而SOD、GSH、CAT是肝脏中重要的抗氧化酶，能清除超氧化物自由基，将超氧自由基还原为H₂O₂和O₂，防止羟基自由基的形成^[39]。故MDA、SOD、CAT、GSH水平是检验机体内氧化应激水平的重要指标^[40]。由图6可知，与空白组相比，模型组MDA含量提高了54.8%（P<0.05），SOD、CAT的活力分别下降了36.3%、34.2%（P<0.05），GSH的含量下降了30.4%（P<0.05）。以上表明短时间内大量饮酒会导致小鼠机体内氧化应激的产生，使小鼠肝脏产生氧化应激损害，肝脏受损。与模型组相比，饮料型、固体型、浓缩型3种剂型生物活性肽复合饮品的MDA浓度分别降低了8.3%、20.8%、31.3%（P<0.05），GSH含量分别升高了15.6%、21.4%、28.0%（P<0.05），SOD的含量分别升高了25.2%、29.8%、47.0%（P<0.05），CAT的含量分别升高了13.0%、17.3%、19.5%（P<0.05）。这与Lai等^[41]的研究结果相似。以上研究结果表明活性肽复合饮品能通过调节氧化应激相关物质的活性，有效还原氧自由基等，从而抑制氧化应激反应，减轻酒精对肝脏造成的损伤，且浓缩型效果最好。

2.7　3种活性肽复合饮品对急性酒精性肝损伤小鼠的肝脏组织观测的影响

酒精经胃肠系统吸收后，大多需经由肝脏代谢，如若饮酒量过大，酒精在肝脏中大量淤积，产生过量的乙醛等，即会产生肝脏毒性，引起肝脏肿大^[42]。肝脏指数是小鼠肝脏的质量与其体重之比，可以反映肝脏因代谢过量引发的肝脏肿大程度，可直观反映肝脏的受损程度^[43]。由图7可知，与空白组相比，模型组小鼠的肝脏指数增大了30.5%（P<0.05）。过量的酒精在机体内无法及时代谢，肝脏肿大，模型制备成功。与模型组相比，饮料型、固体型、浓缩型3种剂型生物活性肽复合饮品的肝脏指数分别降低了5.7%、12.9%、13.2%（P<0.05）。这与Wang等^[44]的研究结果相似。以上结果提示3种剂型的生物活性肽复合饮品能改善因酒精淤积于肝脏引起的肝脏肿大，能有效降低肝脏指数，且其中浓缩型的效果较好。

以上血液组织样本和肝脏指标测定结果说明，3种剂型的活性肽复合饮品均具有一定的保肝效果。为进一步检验结果的可靠性，本研究对空白组、模型组、饮料型、固体型、浓缩型小鼠的肝脏进行固定、包埋、切片后，行HE病理切片观察。由图8可知，空白组小鼠肝细胞圆润、饱满、形态结构完整，肝板排列规则、整齐，肝窦无明显扩张或挤压，未见明显炎性细胞浸润。而模型组视野中肝脏组织中央静脉周围是大致呈放射状排列的肝细胞和肝血窦，少量肝细胞水样变性（绿色箭头）；偶见肝细胞点状坏死（黑色箭头），胞核碎裂，伴有少量淋巴细胞和粒细胞浸润（黄色箭头）；门管区可见少量淋巴细胞和粒细胞浸润（紫色箭头）。与模型组相比，饮料型视野中肝脏组织中央静脉周围是大致呈放射状排列的肝细胞和肝血窦；肝细胞排列规则、整齐，肝窦无明显扩张或挤压；少量肝细胞水样变性（绿色箭头）；相邻肝小叶之间的门管区无明显异常；实质偶见极少量淋巴细胞浸润（紫色箭头）。固体型视野中肝脏组织中央静脉周围是大致呈放射状排列的肝细胞和肝血窦；肝细胞排列规则、整齐，肝窦无明显扩张或挤压；实质偶见极少量淋巴细胞浸润（紫色箭头）。浓缩型视野中肝脏组织中央静脉周围是大致呈放射状排列的肝细胞和肝血窦；肝细胞排列规则、整齐，肝窦无明显扩张或挤压；相邻肝小叶之间的门管区无明显异常；未见明显炎性细胞浸润。故相较于模型组，饮料型、固体型、浓缩型小鼠肝细胞病变程度明显降低，且浓缩型组的病变程度最轻，固体型次之，饮料型相对较重。上述结果表明，3种生物活性肽复合饮品均能够有效改善由酒精引起的肝脏损伤，对急性酒精中毒所导致的肝损伤具有一定的预防和保护作用，且浓缩型的效果优于固体型和饮料型。

2.8　3种活性肽复合饮品对急性酒精性肝损伤小鼠的肠道菌群测序结果

为了探究短期大量饮酒对小鼠肠道微生物的影响，对各组小鼠菌种的相对丰度进行了统计分析。采集了每只小鼠的粪便进行分析，去除未达到分析最小量、异质性和离群值较大的数据后，每组还余4只小鼠的数据。由图9~图10可知，急性酒精损伤会导致小鼠肠道菌群在门水平、属水平上具有显著差异。门水平上的差异体现在：拟杆菌门（Bacteroidota）、厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、疣微菌门（Verrucomicrobiota）、放线菌门（Actinobacteriota）、弯曲菌门（Campylobacterota）、脱硫杆菌门（Desulfobacterota）、蓝藻门（Cyanobacteria）、隐匿菌门（Patescibacteria）、脱铁杆菌门（Deferribacterota）。属水平上的差异体现在：乳酸杆菌（Lactobacillus）、异普雷沃氏菌（Alloprevotella）、普雷沃氏菌（Prevotellaceae_UCG_001）、阿利斯特菌（Alistipes）、拟杆菌（Bacteroides）、丽莫乳杆菌（Limosilactobacillus）。这表明短时间内大量饮酒以及经3种生物活性肽复合饮品干预后会导致肠道菌群的变化。

而Alpha多样性反映的是单个样品物种丰富度及物种多样性，有多种衡量指标：Chao1、Ace、Shannon、Simpson、Coverage、PD_whole_tree^[45]。其中Simpson和Shannon分析是用来估算样品中微生物的多样性指数之一，是衡量物种数目丰富度的重要指标。由图11可知，与空白组相比，模型组的Simpson、Shannon的指数均显著上升，机体内肠道菌群变化。与模型组相比，浓缩型、饮料型、固体型的Simpson、Shannon指数均有所降低，但无显著差异。其中浓缩型相较于其他2种剂型生物活性肽复合饮品的Simpson、Shannon的指数水平低，但无显著差异。以上结果提示生物活性肽复合饮品具有调节肠道菌群的效果，且浓缩组具有一定的优势性。结合前文3种生物活性肽复合饮品的保肝作用，以上结果还提示3种生物活性肽对于酒精性肝损伤的保护作用可能与3种生物活性肽复合饮品对于肠道菌群的调节有关。

此外，针对各组小鼠肠道菌群的表达进一步深入分析，探究3种生物活性肽复合饮品对于益生菌和有害菌丰度的调控作用。如图12所示，在益生菌水平上，与空白组相比，模型组乳酸杆菌属（Lactobacillus）、柔乳杆菌属（Limosilactobacillus）等益生菌的表达水平降低。与模型组相比，3种生物活性肽复合饮品干预后乳酸杆菌属（Lactobacillus）、副拟杆菌属（Parabacteroides）等益生菌的表达水平升高，且浓缩组对这几种益生菌的改善效果最好。在有害菌水平上，与空白组相比，模型组拉氏梭菌属（Lachnoclostridium）和28-4属等潜在有害菌的表达水平升高。与模型组相比，3种生物活性肽复合饮品干预后，除浓缩组外，拉氏梭菌属（Lachnoclostridium）和28-4属等潜在有害菌降低，且固体型降低优于饮料型，这也与前期研究相一致。综上，以上提示3种生物活性肽复合饮品可能是通过调控益生菌和有害菌的相对丰度，增加益生菌相对丰度，降低有害菌相对丰度，进而发挥改善急性酒精性肝损伤的作用。

3　结论

收起

短时间内大量饮酒会导致机体内脏器负担加重，机体受损，进而引发肝脏受损。此外，酒精经肝脏代谢后产生的氧化应激产物会破坏肠道屏障，引起肝肠轴平衡紊乱，肠道菌群变化。给予小鼠灌胃处理后，模型组小鼠会出现攀附时长减少、至醉酒时间缩短、醒酒时长增长、ADH、ALDH酶活性降低、AST、ALT表达水平升高、炎症升高、脂代谢异常、氧化应激水平增高，肝肿大以及肝脏病理样变等表现，以上结果表明短时间内大量饮酒会导致肝脏损伤的发生。而经过3种剂型的生物活性肽干预后，3种剂型均能有效改善模型组的醉酒状态和ADH、ALDH酶活性，提示具有解酒活性；均能下调小鼠机体内ALT、AST表达，改善肝肿大和病理切片，提示具有保肝活性；均能显著降低肝脏组织中TNF-α、IL-6的水平，提示具有抗炎活性；均能下调TG、TC、MDA的表达，提高肝组织中SOD、CAT、GSH三种物质的活性，提示具有抗氧化活性；均能改善因饮酒导致的肠道菌群丰富度变化，提示具有调节肠道菌群活性。此外，针对机制探究，研究发现3种剂型的生物活性肽对于急性酒精性肝损伤的保护作用可能与改善脂质代谢、抗炎活性、抗氧化活性和调节肠道菌群丰度有关。综上，未来可基于此进行大规模、多中心实验，以便构建一条安全、绿色的活性肽功能产品生产链。

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2026年第47卷第2期

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doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2024120134

接收时间：2024-12-12
首发时间：2026-10-24
出版时间：2026-01-15

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收稿日期：2024-12-12

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作者信息

¹河南中医药大学医学院，河南郑州 450046

²内蒙古肽好生物制品有限公司，内蒙古锡林浩特 010100

通讯作者:

刘延鑫（1979−），男，博士，副教授，研究方向：中医药现代技术研究，E-mail：liuyanxin@126.com。

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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