中国临床药理学杂志

Group	n	24 h Cell viability（%）	48 h Cell viability（%）
NC	8	97.13±2.51	110.19±8.00
BZ50	8	60.78±2.80^***	40.74±6.56^***
DAP20	8	96.80±3.44	88.89±3.02^***
DAP40	8	85.48±3.28^***	81.46±1.90^***
DAP80	8	81.56±2.09^***	74.45±4.66^***
DAP80+BZ50	8	38.09±2.09^***	25.59±2.40^***

Group	n	24 h Cell viability（%）	48 h Cell viability（%）
NC	8	97.13±2.51	110.19±8.00
BZ50	8	60.78±2.80^***	40.74±6.56^***
DAP20	8	96.80±3.44	88.89±3.02^***
DAP40	8	85.48±3.28^***	81.46±1.90^***
DAP80	8	81.56±2.09^***	74.45±4.66^***
DAP80+BZ50	8	38.09±2.09^***	25.59±2.40^***

Group	n	Early apoptotic cell proportions（%）	G1（%）	S（%）	G2（%）
NC	8	7.50±0.84	33.40±1.48	64.19±0.85	2.48±0.48
BZ50	8	14.51±2.58^***	36.94±1.13^***	59.31±0.36^***	4.16±1.05^**
DAP20	8	8.20±1.41	33.03±2.49	65.06±0.55	2.58±0.64
DAP40	8	9.07±1.22	31.50±1.40	64.81±1.52	4.20±1.54^**
DAP80	8	13.14±2.27^***	38.59±1.54^***	56.75±1.4^***	4.24±0.93^**
DAP80+BZ50	8	15.17±1.87^***	39.43±1.40^***	58.41±2.0^***	2.77±0.97

Group	n	Early apoptotic cell proportions（%）	G1（%）	S（%）	G2（%）
NC	8	7.50±0.84	33.40±1.48	64.19±0.85	2.48±0.48
BZ50	8	14.51±2.58^***	36.94±1.13^***	59.31±0.36^***	4.16±1.05^**
DAP20	8	8.20±1.41	33.03±2.49	65.06±0.55	2.58±0.64
DAP40	8	9.07±1.22	31.50±1.40	64.81±1.52	4.20±1.54^**
DAP80	8	13.14±2.27^***	38.59±1.54^***	56.75±1.4^***	4.24±0.93^**
DAP80+BZ50	8	15.17±1.87^***	39.43±1.40^***	58.41±2.0^***	2.77±0.97

Group	n	Related expression of RPS19
NC	8	1.08±0.05	0.99±0.09
BZ50	8	0.89±0.04^***	0.55±0.04^***
DAP20	8	0.97±0.03^***	1.00±0.14
DAP40	8	0.90±0.02^***	0.66±0.04^***
DAP80	8	0.87±0.04^***	0.61±0.06^***
DAP80+BZ50	8	0.57±0.03^***	0.53±0.07^***

Group	n	Related expression of RPS19
NC	8	1.08±0.05	0.99±0.09
BZ50	8	0.89±0.04^***	0.55±0.04^***
DAP20	8	0.97±0.03^***	1.00±0.14
DAP40	8	0.90±0.02^***	0.66±0.04^***
DAP80	8	0.87±0.04^***	0.61±0.06^***
DAP80+BZ50	8	0.57±0.03^***	0.53±0.07^***

达托霉素对骨肉瘤U266细胞生长的影响

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陈彩云 , 陈金成 , 许秋霞 , 庄奕筠

中国临床药理学杂志 | 临床与基础桥接研究 2025,41(16): 2287-2292

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中国临床药理学杂志 | 临床与基础桥接研究 2025, 41(16): 2287-2292

达托霉素对骨肉瘤U266细胞生长的影响

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陈彩云, 陈金成, 许秋霞, 庄奕筠

作者信息

福建医科大学　附属第二医院，药学部，福建　泉州　362001

陈彩云（1982-），女，本科，主管药师，主要从事临床药学及医院药学方面的研究

通讯作者:

庄奕筠，副主任药师 MP：13599933719 E-mail：happezhang1982@fjmu.edu.cn

The effect of daptomycin on the growth of osteosarcoma U266 cells

Cai-yun CHEN, Jin-cheng CHEN, Qiu-xia XU, Yi-yun ZHUANG

Affiliations

Pharmaceutical Department, Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Quanzhou 362001, Fujian Province, China

出版时间: 2025-08-28 doi: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.16.007

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摘要

收起

目的

探讨达托霉素（DAP）对U266B1人多发性骨髓瘤细胞（U266）增殖、凋亡和周期的影响。

方法

将U266细胞分为正常对照组（NC组），DAP 20 μM组（DAP20）、DAP 40 μM组（DAP40）、DAP 80 μM组（DAP80）、BZ 50 nM组（BZ50），DAP 80 μM+BZ 50 nM组（DAP80+BZ50），分别用不同浓度的DAP（0、20、40和80 μM）、50 nM硼替佐米（BZ）及DAP（80 μM）与BZ（50 nM）联合处理U266细胞，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、蛋白质印迹（WB）、流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）等实验方法检测DAP对U266细胞的影响。

结果

24 h时，DAP（0、20、40和80 μM）、50 nM BZ、DAP（80 μM）与BZ（50 nM）联合作用，U266细胞存活率分别是（97.13±2.51）%、（96.80±3.44）%、（85.48±3.28）%、（81.56±2.09）%、（60.78±2.80）%和（38.09±2.09）%；细胞早期凋亡率分别是（7.50±0.84）%、（8.20±1.41）%、（9.07±1.22）%、（13.14±2.27）%、（14.51±2.58）%和（15.17±1.87）%；处在G1期的细胞占比分别是（33.40±1.48）%、（33.03±2.49）%、（31.50±1.40）%、（38.59±1.54）%、（36.94±1.13）%和（39.43±1.40）%；核糖体蛋白S19（RPS19） mRNA的相对表达水平是0.99±0.09、1.00±0.14、0.66±0.04、0.61±0.06、0.55±0.04和0.53±0.07；RPS19蛋白的相对表达水平是1.08±0.05、0.97±0.03、0.90±0.02、0.87±0.04、0.89±0.04和0.57±0.03；和DAP 0 μM相比，50 nM BZ、DAP（80 μM）及与BZ（50 nM）联合作用时，上述指标在统计学上差异均具有统计学意义（均P<0.001）。

结论

DAP可能通过下调S19核糖体蛋白（RPS19）的表达而发挥抑制U266细胞增殖、促进U266细胞凋亡的作用。本研究为多发性骨髓瘤治疗提供了一种潜在的治疗药物。

关键词

达托霉素 / 骨髓瘤细胞 / U266细胞 / 核糖体蛋白S19

Abstract

收起

Objective

To investigate the effects of daptomycin (DAP) on the proliferation, apoptosis, and cell cycle of U266 [U266B1] human multiple myeloma cells (U266).

Methods

U266 cells were divided into the following groups: normal control group (NC group), DAP 20 μM group (DAP20), DAP 40 μM group (DAP40), DAP 80 μM group (DAP80), BZ 50 nM group (BZ50), and DAP 80 μM + BZ 50 nM group (DAP80+BZ50). U266 cells were treated with varying concentrations of DAP (0, 20, 40, and 80 μM), 50 nM bortezomib (BZ), and combination of DAP (80 μM) plus BZ (50 nM). Effects were assessed using cell counting kit-8 (CCK-8) assays, Western blotting (WB), flow cytometry, and quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR).

Results

At 24 h post-treatment: Cell viability rates were recorded as (97.13±2.51)%, (96.80±3.44)%, (85.48±3.28)%, (81.56±2.09)%, (60.78±2.80)%, and (38.09±2.09)% for DAP alone (0-80 μM), BZ monotherapy, and combinatorial treatment, respectively. Early apoptotic cell proportions measured via flow cytometry showed values of (7.50±0.84)%, (8.20±1.41)%, (9.07±1.22)%, (13.14±2.27)%, (14.51±2.58)%, and (15.17±1.87)% across groups. Proportions of cells in G1 phase were determined to be (33.40±1.48)%, (33.03±2.49)%, (31.50±1.40)%, (38.59±1.54)%, (36.94±1.13)%, and (39.43±1.40)%. Relative expression levels of ribosomal protein S19 (RPS19) mRNA exhibited fold changes of 0.99±0.09, 1.00±0.14, 0.66±0.04, 0.61±0.06, 0.55±0.04, and 0.53±0.07, while corresponding protein levels via WB analysis were 1.08±0.05, 0.97±0.03, 0.90±0.02, 0.87±0.04, 0.89±0.04, and 0.57±0.03. Statistically significant differences (all P<0.001) were observed in BZ50, DAP80, and their combination compared to DAP 0 μM group.

Conclusion

DAP may exert its inhibitory effect on U266 cell proliferation and promote apoptosis by downregulating the expression of RPS19. This study provides a potential therapeutic drug for the treatment of multiple myeloma.

Key words

daptomycin / myeloma cells / U266 cells / RPS19

引用本文

陈彩云, 陈金成, 许秋霞, 庄奕筠. 达托霉素对骨肉瘤U266细胞生长的影响. 中国临床药理学杂志, 2025 , 41 (16) : 2287 -2292 . DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.16.007

Cai-yun CHEN, Jin-cheng CHEN, Qiu-xia XU, Yi-yun ZHUANG. The effect of daptomycin on the growth of osteosarcoma U266 cells[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2025 , 41 (16) : 2287 -2292 . DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.16.007

正文

收起

多发性骨髓瘤（multiple myloma，MM）是一种常见的浆细胞恶性增生性疾病，占血液系统恶性肿瘤的15%，在欧美国家MM已超过白血病高居血液系统肿瘤第2位^[1]。临床上多引起广泛骨质破坏、贫血、高钙血症和肾功能不全等。近年来硼替佐米（bortezomib，BZ)、沙利度胺及其衍生物等新药的应用以及自体干细胞移植等治疗手段显著改善了MM的疗效和生存期，但该病仍无法治愈，多数患者仍会复发^[2]。BZ作为单一药物使用，在复发或难治性MM的初始治疗中仅显示出35%的总缓解率和7个月的中位进展时间，这说明BZ具有获得性或继发性耐药性^[3]。此外，BZ的药物不良反应也很多，比如胃肠道反应、血细胞减少及周围神经病变等^[4]。研究表明，达托霉素（daptomycin，DAP）可以抑制癌细胞的增殖^[5]。DAP能够与乳腺癌细胞中的核糖体蛋白S19（ribosomal protein S19，RPS19）结合，对人乳腺癌细胞系MCF7（michigan cancer foundation cell line 7，MCF7）细胞表现抗癌活性；敲低RPS19能够增强DAP在MCF7细胞中的疗效^[6]。在临床研究中，DAP对中性粒细胞减少的癌症患者具有特定的治疗效果^[7]。此外，与其他抗生素相比，DAP是治疗由革兰氏阳性细菌引起的癌症感染的安全有效方法^[8]。目前，关于达托霉素对MM的报道较少。因此，本研究评估DAP对U266B1人多发性骨髓瘤细胞（U266 [U266B1] human multiple myeloma cells，U266）的影响，并对其机制进行探讨。

材料、对象与方法

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1　材料

细胞系　人多发性骨髓瘤细胞U266，购自武汉普诺赛生物技术有限公司。

药品和试剂　DAP，规格：每瓶25 mg，纯度：95%，批号：C12949957；硼替佐米（bortezomib, BZ），规格：每瓶25 mg，纯度：98%，批号：C14486723，均购自上海麦克林生化科技股份有限公司；RPMI-1640培养液、胎牛血清（FBS）、双抗（青霉素10 U·mL^-1+链霉素100 g·mL^-1），均购自武汉普诺赛生物技术有限公司。高纯度RNA提取试剂盒，膜联蛋白V-增强型绿色荧光蛋白/碘化丙啶（Annexin V-enhanced green fluorescent protein /propidium iodide, Annexin V-EGFP/PI）细胞凋亡检测试剂盒，第一链cDNA合成试剂盒（用于qPCR），均购自北京全式金生物技术股份有限公司。BrightCycle通用型含UDG酶的SYBR Green实时定量PCR预混液和RPS19兔多克隆抗体，均购自武汉爱博泰克生物科技有限公司。细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒，购自上海碧云天生物技术公司。

仪器　CIB-191C CO₂恒温培养箱，美国精骐有限公司产品；MIF-BGU-BP-2荧光倒置显微镜，广州市明美光电技术有限公司产品；NovoCyte 1030流式细胞仪，艾森生物产品；6100 ChemiScope Touch发光成像仪，上海勤翔科学仪器有限公司产品。

2　实验方法

2.1　细胞培养

U266细胞系培养于含1%双抗、10% FBS的RPMI-1640培养基中，于37 ℃、5%CO₂条件下培养，隔1 d换液1次。

2.2　细胞分组

待细胞密度长至80%~90%后进行分组。设置6个实验组，分别为：正常对照组（normal control group，NC）、BZ 50 nM组（BZ50）、DAP 20 μM组（DAP20）、DAP 40 μM组（DAP40）、DAP 80 μM组（DAP80）、DAP 80 μM+BZ 50 nM组（DAP80+BZ50）。

2.3　细胞计数试剂盒8（cell counting kit 8，CCK8)检测细胞的存活率

收集对数生长期的U266细胞，调整细胞浓度至5×10⁵个，每孔（96孔板）加入细胞悬液90 μL，用DAP及BZ处理，并用完全培养基补足100 μL，每组设置8个平行复孔。96孔板周围孔加满磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution，PBS），将培养板在培养箱中分别培养24、48 h（37 ℃，5% CO₂）。向每孔加入10 μL CCK8试剂，培养板在培养箱内孵育2 h，用酶标仪测定在450 nm处的光密度，读取各孔的光密度值。根据文献[9]的公式计算细胞活力。

2.4　流式细胞分析法检测细胞凋亡和细胞周期

根据CCK8方法确定的DAP作用细胞的时间是24 h。调整细胞浓度至5×10⁵个，每孔加入1.5 mL细胞悬液，接种于六孔板中，给予相对应的DAP及BZ，每孔用完全培养基补足2 mL。每组设置8个平行复孔，将培养板在培养箱中培养48 h (37 ℃，5% CO₂)。以1 200 r·min^-1离心5 min，收集细胞。用PBS洗涤细胞2次，收集细胞。加入500 μL的膜联蛋白结合缓冲液重悬细胞，加入5 μL Annexin V-EGFP混匀后，加入5 μL PI染液，混匀；室温、避光、反应15 min；加入400 μL 膜联蛋白结合缓冲液，轻轻混匀。在1 h内进行流式细胞仪的检测。

处理后的细胞用PBS洗涤1次，收集细胞，离心后，去除上清，在细胞中加入体积分数为70%冷乙醇500 μL置于4 ℃过夜固定。3 681 r·min^-1离心3 min弃去乙醇，PBS清洗1~3遍。加入RNase A/PI孵育液500 μL，室温避光放置30~60 min后用流式细胞仪检测细胞周期。

2.5　定量聚合酶链式反应（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）检测RPS19基因在各实验组中的相对表达量

收集处理后的细胞如“2.4”处理。根据高纯度RNA提取试剂盒的说明书提取总核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）。使用第一链cDNA合成试剂盒进行反转录，得到cDNA。用5倍稀释的cDNA做为模板，根据BrightCycle通用型含UDG酶的SYBR Green实时定量PCR预混液的说明书进行qPCR。甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）作为内参基因，用2^-△△CT计算RPS19基因的相对表达量。引物序列RPS19-F：5’-CGTCAGAGAAACGGCGTCAT-3’；RPS19-R：5’-TCCCTGAGGTGTCAGTTTGC-3’；GAPDH-F：5’-GGTGTGAACCATGAGAAGTATGA-3’；GAPDH-R：5’-GAGTCCTTCCACGATACCAAAG-3’。

2.6　蛋白质印迹（Western blotting，WB）法检测RPS19蛋白水平

调整细胞浓度至每毫升5×10⁵个，每孔加入细胞悬液2 mL，接种于六孔板中，每组设置8个平行复孔，将培养板在培养箱中培养24 h（37 ℃，5% CO₂）。收集细胞。向细胞沉淀中加入含苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）的裂解液，冰上反复吹打，12 753 r·min^-1离心10 min后取上清。加入上样缓冲液，95 ℃加热10 min使蛋白变性，10% 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分离蛋白后，转至聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride membrane，PVDF）膜上，5% 牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）封闭抗原1 h后，加入RPS19（1：1 000兔来源）、GAPDH（1：1 000鼠来源）抗体，4 ℃孵育过夜，洗膜后，再加入羊抗鼠二抗（1：2 500）或羊抗兔二抗（1：2 500），室温孵育1 h，洗膜后加入增强型化学发光液显影曝光。用Image J分析各组RPS19蛋白相对表达水平。

3　统计学处理

用SPSS 22.0软件进行统计分析，用单因素方差分析比较组间的差异。

结果

收起

1　PAP对U266细胞存活率的影响

CCK-8检测结果显示，24 h、48 h时，与NC组相比较，BZ50、DAP40、DAP80及DAP80+BZ50组中的U266细胞存活率均显著下降（均P<0.001），见表1。

2　DAP对U266细胞凋亡率的影响

与NC组相比，BZ50、DAP80、DAP80+BZ50组中早期凋亡的细胞率显著增加（均P<0.001），见表2。

3　DAP对U266细胞周期的影响

和NC组相比，BZ50、DAP80及DAP80+BZ50组细胞G1期占比均显著增加（均P<0.001），DAP80，DAP80+BZ50组细胞S期占比均显著减少（均P<0.001）。说明经过药物处理U266细胞被停滞在G1期。G1期细胞占比增加，S期和G2期减少，U266细胞DNA合成和DNA复制相对减少，见表2和图1。

4　DAP对U266细胞内RPS19表达水平的影响

RT-qPCR的结果显示：NC组相比，BZ50，DAP40，DAP80及BZ50+DAP80均显著降低了RSP19 mRNA的表达（均P<0.001）。Western blot结果显示，随着DAP浓度的增加，RSP19蛋白相对表达水平在下降，DAP40和DAP80组中RSP19蛋白相对表达水平与NC组相比均显著降低（均P<0.001），见表3和图2。

讨论

收起

DAP分子是由13个氨基酸和一个正癸酸脂肪酸尾组成的环脂肽类新型抗生素，具有水溶性亲水性核心和亲脂性的尾部^[10]。对大多数革兰氏阳性菌均有抑制作用，而且对许多耐药菌，如耐甲氧西林的金黄色葡萄球、耐万古霉素的肠球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌具有较强的活性^[11]。YE等^[5]提到DAP有潜在的治疗癌症和其他免疫相关性疾病的作用。对于革兰氏阳性导管相关血流感染的癌症患者和植入式动脉内导管的结肠癌肝转移的患者，DAP具有很大的潜力^[12-13]。

据报道多肽具有抗癌特性，一些海洋环肽类具有抗癌作用，特别是与DAP分子结构相似的环豚鼠酰胺A-F^[14]。研究表明RPS19在乳腺癌细胞系和卵巢癌细胞系的表达高于正常的上皮细胞^[15]。GOTSBACHER等^[16]利用亲药靶点稳定效应法和免疫组化，证实DAP与人类细胞株结合的靶点RPS19，对某些癌细胞株具有选择性生长抑制作用，特别是人类乳腺癌细胞株（MCF7），推测可能与RPS19的表达水平有关，RPS19可能是DAP抗癌活性的药物靶蛋白。RPS19也可能具有核糖体外功能，如KONDOH等报道，RPS19在某些结肠癌细胞系中的表达水平高于正常结肠组织，并随着肿瘤发展而增加^[17]。本研究用不同浓度的DAP（40、80 μM）处理U266细胞24 h后，细胞的活力显著降低，DAP80组显著增加了细胞早期凋亡的细胞比例，使U266细胞显著阻滞在G1期，阻碍DNA合成和DNA复制。说明高浓度的DAP更有利于抑制U266的增殖，促进U266细胞的凋亡，DAP与BZ联合作用时效果更明显。qPCR和WB结果也表明，DAP和BZ联合作用时RSP19的表达水平比对照组显著降低，说明DAP和BZ联合作用可以促进细胞凋亡，使细胞周期阻滞在G1期，可能是通过降低RSP19的表达水平实现的。因此，我们推测DAP与BZ联合作用，可能通过抑制RPS19而抑制U266骨肉瘤细胞生长，这可能会为治疗骨肉瘤提供新的思路。

本研究提示，BZ和DAP联合处理能更有效地抑制人骨肉瘤U266细胞的增殖并促进其凋亡，2者联合使用可能为临床上治疗多发性骨肉瘤提供新的思路，而这些观察结果需要在临床前试验中进一步的验证。

基金

收起

福建省自然科学基金项目(2021J01253)

参考文献

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文献

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2025年第41卷第16期

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doi: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.16.007

接收时间：2025-04-10
首发时间：2026-04-02
出版时间：2025-08-28

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出版历史

收稿日期：2025-04-10

基金

福建省自然科学基金项目(2021J01253)

作者信息

福建医科大学　附属第二医院，药学部，福建　泉州　362001

通讯作者:

庄奕筠，副主任药师 MP：13599933719 E-mail：happezhang1982@fjmu.edu.cn

参考文献

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/zglcylxzz/CN/10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.16.007

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

Group	n	24 h Cell viability（%）	48 h Cell viability（%）
NC	8	97.13±2.51	110.19±8.00
BZ50	8	60.78±2.80^***	40.74±6.56^***
DAP20	8	96.80±3.44	88.89±3.02^***
DAP40	8	85.48±3.28^***	81.46±1.90^***
DAP80	8	81.56±2.09^***	74.45±4.66^***
DAP80+BZ50	8	38.09±2.09^***	25.59±2.40^***

Group

24 h Cell viability（%）

48 h Cell viability（%）

97.13±2.51

110.19±8.00

BZ50

60.78±2.80^***

40.74±6.56^***

DAP20

96.80±3.44

88.89±3.02^***

DAP40

85.48±3.28^***

81.46±1.90^***

DAP80

81.56±2.09^***

74.45±4.66^***

DAP80+BZ50

38.09±2.09^***

25.59±2.40^***

Group	n	Early apoptotic cell proportions（%）	G1（%）	S（%）	G2（%）
NC	8	7.50±0.84	33.40±1.48	64.19±0.85	2.48±0.48
BZ50	8	14.51±2.58^***	36.94±1.13^***	59.31±0.36^***	4.16±1.05^**
DAP20	8	8.20±1.41	33.03±2.49	65.06±0.55	2.58±0.64
DAP40	8	9.07±1.22	31.50±1.40	64.81±1.52	4.20±1.54^**
DAP80	8	13.14±2.27^***	38.59±1.54^***	56.75±1.4^***	4.24±0.93^**
DAP80+BZ50	8	15.17±1.87^***	39.43±1.40^***	58.41±2.0^***	2.77±0.97

Group

Early apoptotic cell proportions（%）

G1（%）

S（%）

G2（%）

7.50±0.84

33.40±1.48

64.19±0.85

2.48±0.48

BZ50

14.51±2.58^***

36.94±1.13^***

59.31±0.36^***

4.16±1.05^**

DAP20

8.20±1.41

33.03±2.49

65.06±0.55

2.58±0.64

DAP40

9.07±1.22

31.50±1.40

64.81±1.52

4.20±1.54^**

DAP80

13.14±2.27^***

38.59±1.54^***

56.75±1.4^***

4.24±0.93^**

DAP80+BZ50

15.17±1.87^***

39.43±1.40^***

58.41±2.0^***

2.77±0.97

Group	n	Related expression of RPS19
NC	8	1.08±0.05	0.99±0.09
BZ50	8	0.89±0.04^***	0.55±0.04^***
DAP20	8	0.97±0.03^***	1.00±0.14
DAP40	8	0.90±0.02^***	0.66±0.04^***
DAP80	8	0.87±0.04^***	0.61±0.06^***
DAP80+BZ50	8	0.57±0.03^***	0.53±0.07^***

Group

Related expression of RPS19

Protein

mRNA

1.08±0.05

0.99±0.09

BZ50

0.89±0.04^***

0.55±0.04^***

DAP20

0.97±0.03^***

1.00±0.14

DAP40

0.90±0.02^***

0.66±0.04^***

DAP80

0.87±0.04^***

0.61±0.06^***

DAP80+BZ50

0.57±0.03^***

0.53±0.07^***