中国临床药理学杂志

MGMTsiRNA联合替莫唑胺提高耐药黑色素瘤细胞抗肿瘤疗效的研究

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申超南 ¹ , 李娜 ¹ , 蒋韬璇 ¹ , 杨春生 ²

中国临床药理学杂志 | 临床与基础桥接研究 2025,41(1): 55-59

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中国临床药理学杂志 |临床与基础桥接研究 2025 , 41 (1) : 55 -59

MGMTsiRNA联合替莫唑胺提高耐药黑色素瘤细胞抗肿瘤疗效的研究

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申超南¹, 李娜¹, 蒋韬璇¹, 杨春生²

作者信息

^1.徐州医科大学医学系，江苏徐州 221004

^2.徐州医科大学附属淮安医院皮肤科，江苏淮安 223002

通讯作者:

杨春生，副主任医师，硕士生导师 MP: 18752409168 E-mail: 8yung@sina.com

作者简介:

申超南（1999-），女，硕士研究生，主要从事皮肤肿瘤方面的相关研究

Study on MGMTsiRNA combined with temozolomide enhances antitumor efficacy in drug-resistant melanoma cells

Chao-nan SHEN¹, Na LI¹, Tao-xuan JIANG¹, Chun-sheng YANG²

Affiliations

^1.Department of Medicine, Xuzhou Medical University, Xuzhou 221004, Jiangsu Province, China

^2.Department of Dermatology, the Affiliated Huai’an Hospital of Xuzhou Medical University, Huai’an 223002, Jiangsu Province, China

出版时间: 2025-01-17 doi: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.01.012

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摘要

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目的

探究O6-甲基鸟嘌呤- DNA甲基转移酶（MGMT）干扰联合替莫唑胺（TMZ）提高替莫唑胺对人耐药黑色素瘤细胞A375/TMZ的治疗作用。

方法

将A375/TMZ细胞随机分为对照组（正常培养）、MGMTsiRNA组（200 nmol·L^-1 MGMTsiRNA）、实验组（1 600 μmol·L^-1 TMZ）和联合组（转染MGMTsiRNA后加1 600 μmol·L^-1 TMZ）。培养24 h后，用细胞计数试剂盒-8法分析细胞的增殖情况，用蛋白印迹法检测细胞中多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、裂解的PARP（cleaved-PARP）、DNA依赖性蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）和核因子κB（NF-κB）蛋白的表达水平，用免疫荧光法检测细胞中NF-κB蛋白的表达和分布。

结果

对照组、MGMTsiRNA组、实验组和联合组的细胞抑制率分别为0、（3.45±1.53）%、（51.24±2.73）%和（70.69±4.48）%，PARP蛋白相对表达水平分别为0.45±0.08、0.47±0.06、0.33±0.04和0.14±0.03，cleaved-PARP蛋白相对表达水平分别为0.01±0.02、0.01±0.01、0.18±0.03和0.36±0.04，DNA-PKcs蛋白相对表达水平分别为0.09±0.03、0.07±0.02、0.32±0.02和0.39±0.04，NF-κB蛋白相对表达水平分别是0.35±0.04、0.36±0.05、0.20±0.02和0.15±0.02。联合组的上述指标与实验组或对照组比较，在统计学上差异均有统计学意义（均P<0.05）。免疫荧光分析显示，对照组、MGMTsiRNA组、实验组和联合组的NF-κB平均荧光强度分别为（5.26±1.05）%、（7.58±1.18）%、（10.56±1.99）%和（15.47±2.61）%，联合组与对照组和MGMTsiRNA组的细胞相比，NF-κB在肿瘤细胞核内明显增多，在统计学上差异均有统计学意义（均P<0.01）。

结论

MGMTsiRNA联合TMZ可以进一步促进TMZ对耐药黑色素瘤A375/TMZ细胞的增殖抑制和凋亡。

关键词

替莫唑胺 / O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 / 化疗耐药 / 恶性黑色素瘤 / 细胞凋亡

Abstract

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Objective

To investigate whether O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) interference combined with temozolomide (TMZ) could enhance the therapeutic effect of temozolomide on human drug-resistant melanoma cells A375/TMZ.

Methods

A375/TMZ cells were randomly divided into 4 groups, control group (normal culture), MGMTsiRNA group (200 nmol·L^-1 MGMTsiRNA), experimental group (1 600 μmol·L^-1 TMZ) and combined group (transfection of MGMTsiRNA followed by addition of 1 600 μmol·L^-1 TMZ). After 24 h of culture, the proliferation of cells in each group was analyzed by cell counting kit-8 method. Western blotting was used to detect the expression levels of poly ADP-ribose polymerase (PARP), cleaved PARP(cleaved-PARP), DNA-dependent protein kinase catalytic subunit(DNA-PKcs) and nuclear factor kappa-B(NF-κB) proteins in the cells. The expression and distribution of NF-κB proteins in the cells were detected by immunofluorescence.

Results

Cell inhibition rates of control, MGMTsiRNA, experimental and combined groups were 0, (3.45±1.53)%, (51.24±2.73)% and (70.69±4.48)%; the relative expression levels of PARP protein were 0.45±0.08, 0.47±0.06, 0.33±0.04, 0.14±0.03; the relative expression levels of the cleaved-PARP protein were 0.01±0.02、0.01±0.01、0.18±0.03 and 0.36±0.04; the relative expression levels of DNA-PKcs protein were 0.09±0.03, 0.07±0.02, 0.32±0.02 and 0.39±0.04; the relative expression levels of NF-κB protein were 0.35±0.04, 0.36±0.05, 0.20±0.02 and 0.15±0.02. Compared with experimental group or control group, the differences of above indexes were all statistically significant (all P<0.05). Immunofluorescence analysis showed that the average fluorescence intensity of NF-κB in control group, MGMTsiRNA group, experimental group and combined group were (5.26±1.05)%, (7.58±1.18)%, (10.56±1.99)% and (15.47±2.61)%; and compared with the cells in control group and MGMTsiRNA group, combined group showed NF-κB was significantly increased in the nucleus of tumor cells, and the difference was statistically significant (all P<0.01).

Conclusion

MGMTsiRNA combined with TMZ further promotes proliferation inhibition and apoptosis of drug-resistant melanoma A375/TMZ cells by TMZ.

Key words

temozolomide / O6-methylguanine-DNA methyltransferase / drug-resistant / malignant melanoma / apoptosis

引用本文

申超南, 李娜, 蒋韬璇, 杨春生. MGMTsiRNA联合替莫唑胺提高耐药黑色素瘤细胞抗肿瘤疗效的研究. 中国临床药理学杂志, 2025 , 41 (1) : 55 -59 . DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.01.012

Chao-nan SHEN, Na LI, Tao-xuan JIANG, Chun-sheng YANG. Study on MGMTsiRNA combined with temozolomide enhances antitumor efficacy in drug-resistant melanoma cells[J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2025 , 41 (1) : 55 -59 . DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.01.012

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国家自然科学基金资助项目(81803151)

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2025年第41卷第1期

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doi: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2025.01.012

接收时间：2024-07-01
首发时间：2026-08-04
出版时间：2025-01-17

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出版历史

收稿日期：2024-07-01

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国家自然科学基金资助项目(81803151)

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^1.徐州医科大学医学系，江苏徐州 221004

^2.徐州医科大学附属淮安医院皮肤科，江苏淮安 223002

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杨春生，副主任医师，硕士生导师 MP: 18752409168 E-mail: 8yung@sina.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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