实验室检测

序号	化合物	优化方法
提取次数 3 (次)	提取次数 4 (次)	提取次数 5 (次)	提取次数 6 (次)
1	PG	93.6	96.6	104.3	102.4
2	THBP	93.3	99.9	95.8	108.2
3	TBHQ	92.9	95.8	96.7	98.5
4	NDGA	96.0	108.2	114.7	115.6
5	BHA	91.4	92.3	97.0	98.6
6	Ionox-100	101.9	103.0	107.1	107.3
7	OG	102.1	105.3	117.1	114.1
8	BHT	91.4	92.3	97.0	98.6
9	DG	79.4	82.8	98.9	106.4

序号

化合物

优化方法

提取次数 3 (次)

提取次数 4 (次)

提取次数 5 (次)

提取次数 6 (次)

93.6

96.6

104.3

102.4

THBP

93.3

99.9

95.8

108.2

TBHQ

92.9

95.8

96.7

98.5

NDGA

96.0

108.2

114.7

115.6

BHA

91.4

92.3

97.0

98.6

Ionox-100

101.9

103.0

107.1

107.3

102.1

105.3

117.1

114.1

BHT

91.4

92.3

97.0

98.6

79.4

82.8

98.9

106.4

序号	化合物	优化方法
提取次数 3 (次)	提取次数 4 (次)	提取次数 5 (次)	提取次数 6 (次)
1	PG	93.6	96.6	104.3	102.4
2	THBP	93.3	99.9	95.8	108.2
3	TBHQ	92.9	95.8	96.7	98.5
4	NDGA	96.0	108.2	114.7	115.6
5	BHA	91.4	92.3	97.0	98.6
6	Ionox-100	101.9	103.0	107.1	107.3
7	OG	102.1	105.3	117.1	114.1
8	BHT	91.4	92.3	97.0	98.6
9	DG	79.4	82.8	98.9	106.4

序号

化合物

优化方法

提取次数 3 (次)

提取次数 4 (次)

提取次数 5 (次)

提取次数 6 (次)

93.6

96.6

104.3

102.4

THBP

93.3

99.9

95.8

108.2

TBHQ

92.9

95.8

96.7

98.5

NDGA

96.0

108.2

114.7

115.6

BHA

91.4

92.3

97.0

98.6

Ionox-100

101.9

103.0

107.1

107.3

102.1

105.3

117.1

114.1

BHT

91.4

92.3

97.0

98.6

79.4

82.8

98.9

106.4

序号	化合物	保留时间 (min)	线性回归方程	相关系数 $\mathrm{r}$	花生油	菜籽油
检出限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	定量限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	检出限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	定量限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$
1	PG	5.109	y=12.42534x	0.99959	0.4	1.2	0.2	0.6
2	THBP	7.963	y=13.43456x	0.99556	0.4	1.2	0.2	0.6
3	TBHQ	8.464	y=3.75304x	0.99842	0.8	2.4	0.4	1.2
4	NDGA	12.497	y=4.90455x	0.99909	0.4	1.2	0.2	0.6
5	BHA	13.674	y=4.44104x	1.00000	0.6	1.8	0.3	0.9
6	Ionox-100	15.829	$y ={1.48173x}$	0.99999	2.0	6	1.0	3
7	OG	16.707	y=9.87541x	0.99962	0.4	1.2	0.2	0.6
8	BHT	27.797	y=7.98966x	0.99945	0.8	2.4	0.4	1.2
9	DG	28.161	y=2.31516x	0.99997	0.8	2.4	0.4	1.2

序号

化合物

保留时间 (min)

线性回归方程

序号	化合物	保留时间 (min)	线性回归方程	相关系数 $\mathrm{r}$	花生油	菜籽油
检出限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	定量限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	检出限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	定量限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$
1	PG	5.109	y=12.42534x	0.99959	0.4	1.2	0.2	0.6
2	THBP	7.963	y=13.43456x	0.99556	0.4	1.2	0.2	0.6
3	TBHQ	8.464	y=3.75304x	0.99842	0.8	2.4	0.4	1.2
4	NDGA	12.497	y=4.90455x	0.99909	0.4	1.2	0.2	0.6
5	BHA	13.674	y=4.44104x	1.00000	0.6	1.8	0.3	0.9
6	Ionox-100	15.829	$y ={1.48173x}$	0.99999	2.0	6	1.0	3
7	OG	16.707	y=9.87541x	0.99962	0.4	1.2	0.2	0.6
8	BHT	27.797	y=7.98966x	0.99945	0.8	2.4	0.4	1.2
9	DG	28.161	y=2.31516x	0.99997	0.8	2.4	0.4	1.2

相关系数 $\mathrm{r}$

花生油

菜籽油

检出限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$

定量限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$

检出限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$

定量限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$

5.109

y=12.42534x

0.99959

0.4

1.2

0.2

0.6

THBP

7.963

y=13.43456x

0.99556

0.4

1.2

0.2

0.6

TBHQ

8.464

y=3.75304x

0.99842

0.8

2.4

0.4

1.2

NDGA

12.497

y=4.90455x

0.99909

0.4

1.2

0.2

0.6

BHA

13.674

y=4.44104x

1.00000

0.6

1.8

0.3

0.9

Ionox-100

15.829

$y ={1.48173x}$

0.99999

2.0

1.0

16.707

y=9.87541x

0.99962

0.4

1.2

0.2

0.6

BHT

27.797

y=7.98966x

0.99945

0.8

2.4

0.4

1.2

28.161

y=2.31516x

0.99997

0.8

2.4

0.4

1.2

序号	化合物名称	油脂种类	加标量
${20}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$	40 mg/kg	80 mg/kg
平均回收率 (%)	平均相对标准偏差 (%)	平均回收率 (%)	平均相对标准偏差 (%)	平均回收率 (%)	平均相对标准偏差 (%)
1	PG	花生油	95.1	8.0	99.5	5.8	103.0	2.3
菜籽油	96.6	1.3	102.0	1.9	102.6	7.6
2	THBP	花生油	95.9	3.9	104.4	8.2	93.2	3.1
菜籽油	92.9	0.6	96.5	1.7	105.7	8.0
3	TBHQ	花生油	97.2	5.9	95.0	6.6	105.3	2.4
菜籽油	93.2	2.0	95.3	2.4	97.2	9.4
4	NDGA	花生油	103.8	5.4	99.1	9.7	102.0	6.9
菜籽油	105.1	5.2	105.7	0.7	104.5	8.7
5	BHA	花生油	94.6	6.9	94.0	6.7	98.2	1.0
菜籽油	98.0	0.9	98.9	0.7	97.2	8.9
6	Ionox-100	花生油	96.1	3.7	101.7	5.3	105.9	1.0
菜籽油	107.6	2.0	108.8	0.7	104.2	9.0
7	OG	花生油	102.8	2.9	100.9	10.0	105.0	2.0
菜籽油	102.6	8.2	107.3	1.6	106.6	8.8
8	BHT	花生油	93.6	8.9	91.2	5.2	96.8	2.2
菜籽油	98.0	0.9	98.9	0.7	97.2	8.9
9	DG	花生油	98.2	6.7	94.5	5.1	94.5	1.1
菜籽油	104.3	3.7	95.0	1.0	93.0	9.1

序号

化合物名称

油脂种类

加标量

${20}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$

40 mg/kg

80 mg/kg

平均回收率 (%)

平均相对标准偏差 (%)

平均回收率 (%)

平均相对标准偏差 (%)

平均回收率 (%)

平均相对标准偏差 (%)

花生油

95.1

8.0

99.5

5.8

103.0

2.3

菜籽油

96.6

1.3

102.0

1.9

102.6

7.6

THBP

花生油

95.9

3.9

104.4

8.2

93.2

3.1

菜籽油

92.9

0.6

96.5

1.7

105.7

8.0

TBHQ

花生油

97.2

5.9

95.0

6.6

105.3

2.4

菜籽油

93.2

2.0

95.3

2.4

97.2

9.4

NDGA

花生油

103.8

5.4

99.1

9.7

102.0

6.9

菜籽油

105.1

5.2

105.7

0.7

104.5

8.7

BHA

花生油

94.6

6.9

94.0

6.7

98.2

1.0

菜籽油

98.0

0.9

98.9

0.7

97.2

8.9

Ionox-100

花生油

96.1

3.7

101.7

5.3

105.9

1.0

菜籽油

107.6

2.0

108.8

0.7

104.2

9.0

花生油

102.8

2.9

100.9

10.0

105.0

2.0

菜籽油

102.6

8.2

107.3

1.6

106.6

8.8

BHT

花生油

93.6

8.9

91.2

5.2

96.8

2.2

菜籽油

98.0

0.9

98.9

0.7

97.2

8.9

花生油

98.2

6.7

94.5

5.1

94.5

1.1

菜籽油

104.3

3.7

95.0

1.0

93.0

9.1

序号	化合物名称	油脂种类	加标量
${20}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$	40 mg/kg	80 mg/kg
平均回收率 (%)	平均相对标准偏差 (%)	平均回收率 (%)	平均相对标准偏差 (%)	平均回收率 (%)	平均相对标准偏差 (%)
1	PG	花生油	95.1	8.0	99.5	5.8	103.0	2.3
菜籽油	96.6	1.3	102.0	1.9	102.6	7.6
2	THBP	花生油	95.9	3.9	104.4	8.2	93.2	3.1
菜籽油	92.9	0.6	96.5	1.7	105.7	8.0
3	TBHQ	花生油	97.2	5.9	95.0	6.6	105.3	2.4
菜籽油	93.2	2.0	95.3	2.4	97.2	9.4
4	NDGA	花生油	103.8	5.4	99.1	9.7	102.0	6.9
菜籽油	105.1	5.2	105.7	0.7	104.5	8.7
5	BHA	花生油	94.6	6.9	94.0	6.7	98.2	1.0
菜籽油	98.0	0.9	98.9	0.7	97.2	8.9
6	Ionox-100	花生油	96.1	3.7	101.7	5.3	105.9	1.0
菜籽油	107.6	2.0	108.8	0.7	104.2	9.0
7	OG	花生油	102.8	2.9	100.9	10.0	105.0	2.0
菜籽油	102.6	8.2	107.3	1.6	106.6	8.8
8	BHT	花生油	93.6	8.9	91.2	5.2	96.8	2.2
菜籽油	98.0	0.9	98.9	0.7	97.2	8.9
9	DG	花生油	98.2	6.7	94.5	5.1	94.5	1.1
菜籽油	104.3	3.7	95.0	1.0	93.0	9.1

序号

化合物名称

油脂种类

加标量

${20}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$

40 mg/kg

80 mg/kg

平均回收率 (%)

平均相对标准偏差 (%)

平均回收率 (%)

平均相对标准偏差 (%)

平均回收率 (%)

平均相对标准偏差 (%)

花生油

95.1

8.0

99.5

5.8

103.0

2.3

菜籽油

96.6

1.3

102.0

1.9

102.6

7.6

THBP

花生油

95.9

3.9

104.4

8.2

93.2

3.1

菜籽油

92.9

0.6

96.5

1.7

105.7

8.0

TBHQ

花生油

97.2

5.9

95.0

6.6

105.3

2.4

菜籽油

93.2

2.0

95.3

2.4

97.2

9.4

NDGA

花生油

103.8

5.4

99.1

9.7

102.0

6.9

菜籽油

105.1

5.2

105.7

0.7

104.5

8.7

BHA

花生油

94.6

6.9

94.0

6.7

98.2

1.0

菜籽油

98.0

0.9

98.9

0.7

97.2

8.9

Ionox-100

花生油

96.1

3.7

101.7

5.3

105.9

1.0

菜籽油

107.6

2.0

108.8

0.7

104.2

9.0

花生油

102.8

2.9

100.9

10.0

105.0

2.0

菜籽油

102.6

8.2

107.3

1.6

106.6

8.8

BHT

花生油

93.6

8.9

91.2

5.2

96.8

2.2

菜籽油

98.0

0.9

98.9

0.7

97.2

8.9

花生油

98.2

6.7

94.5

5.1

94.5

1.1

菜籽油

104.3

3.7

95.0

1.0

93.0

9.1

液相色谱法检测食用油中9种抗氧化剂的优化

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陆秀青 , 韦云莹 , 农子明 ^* , 马炜烨

实验室检测 | 创新应用 2024,2(7): 45-48

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实验室检测 | 创新应用 2024, 2(7): 45-48

液相色谱法检测食用油中9种抗氧化剂的优化

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陆秀青, 韦云莹, 农子明^*, 马炜烨

作者信息

广西壮族自治区粮油质量检验中心南宁 530031

陆秀青,工程师,研究方向为粮油质量分析。

农子明,工程师,研究方向为粮油质量分析。

通讯作者:

*农子明，工程师，研究方向为粮油质量分析。E-mail: 347998976@qq.com

Optimization of liquid chromatography for the determination of nine antioxidants in edible oils

Xiu-Qing LU, Yun-Ying WEI, Zi-Ming NONG^*, Wei-Ye MA

Affiliations

Guangxi Zhuang Autonomous Region Grain and Oil Quality Inspection Center Nanning 530031 China

文章导航

摘要

收起

目的明确和优化油类样品 9 种抗氧化剂的检测方法。方法油类样品用3 mL 乙腈饱和的正己烷溶液溶解后,用 $3\mathrm{\;{mL}}$ 含 $\mathrm{{AP}}$ 的正己烷饱和的乙腈重复提取5 次,合并 5 次提取液。用 C18固相萃取柱净化,全部提取液和洗脱液一起收集浓缩至 ${0.2}\mathrm{\;{mL}}$ ,最后用乙腈定容至 $2\mathrm{\;{mL}}$ 。结果 9种抗氧化剂在 ${1.0}\sim {60.0}\mathrm{{\mug}}/\mathrm{{mL}}$ 范围内线性关系良好, 相关系数均大于 0.99;回收率 91.2%~108.8% 之间,相对标准偏差 (RSD) 为 0.6%~10.0%；检出限在0.2~2.0 mg/kg 范围, 定量限在 ${0.6}\sim {6.0}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$ 范围。结论本方法通过优化提取次数、净化方法和洗脱体积,9种抗氧化剂的回收率均有显著提高,其中提取次数对 BHT、DG的回收率影响较大。

关键词

食用油 / 抗氧化剂 / 优化 / 提取次数 / C18固相萃取柱

Abstract

收起

Objective Clarify and optimize the detection methods for 9antioxidants in oil samples. Methods After dissolving the oil sample in $3\mathrm{\;{mL}}$ of n-hexanesolution saturated with acetonitrile, repeat the extraction 5 times with $3\mathrm{\;{mL}}$ of n-hexanesaturated acetonitrile containing AP, and merge the 5 extractionsolutions. Purify with a C18 solid-phase extraction column, collect andconcentrate all extraction and eluent together to ${0.2}\mathrm{\;{mL}}$ , and finally make upto $2\mathrm{\;{mL}}$ withacetonitrile. Results 9 antioxidants linear relationship is good withinthe range of 1.0 to ${60.0}\mathrm{{\mug}}/\mathrm{{mL}}$ , and the correlation coefficients are allgreater than 0.99 ; the recovery rate ranges from 91.2% to 108.8%, witha relative standard deviation (RSD) of 0.6% to 10.0%; the detectionlimit is within the range of ${0.2}\sim {2.0}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$ ,and the quantitative limit is within the range of ${0.6}\sim {6.0}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$ . Conclusion This method optimizes the extraction frequency, purification method, and elution volume, and significantly improves the recovery rates of 9 antioxidants. The extraction frequency has a significant impact on the recovery rate of BHT and DG.

Key words

edible oil / antioxidant / optimization / extraction frequency / C18 solid-phase extraction column

引用本文

陆秀青, 韦云莹, 农子明, 马炜烨. 液相色谱法检测食用油中9种抗氧化剂的优化. 实验室检测, 2024 , 2 (7) : 45 -48 .

Xiu-Qing LU, Yun-Ying WEI, Zi-Ming NONG, Wei-Ye MA. Optimization of liquid chromatography for the determination of nine antioxidants in edible oils[J]. Laboratory Testing, 2024 , 2 (7) : 45 -48 .

正文

收起

0 引言

收起

食用油是人类日常饮食中不可或缺的重要营养源之一。然而, 在食用油的生产、储存和使用过程中会自发地发生氧化反应, 生成低级脂肪酸、醛和酮等化合物, 产生恶劣的酸臭味, 严重影响了食用油的品质与安全性 ^{[ 1 ]} 。为了延长食用油的保质期, 食用油生产商普遍添加一些抗氧化剂用以延缓氧化酸败的进程 ^{[ 2 ]} 。按来源不同,抗氧化剂可分为人工合成抗氧化剂(如 TBHQ、BHA、BHT 和 PG 等)和天然抗氧化剂(如茶多酚、维生素 $\mathrm{E}$ 、维生素 $\mathrm{C}$ 等)。人工合成抗氧化剂因其抗氧化效果好且成本较低,被广泛使用 ^{[ 3 ]} ,这些化合物都含有酚羟基(-OH) 或者氨基 $\left({-{\mathrm{{NH}}}_{2}}\right)$ 等能够捕获自由基的官能团。例如 BHA 和 BHT 分子中都含有两个叔丁基取代的酚羟基,能够有效捕获过氧自由基,阻止油脂的氧化反应。TBHQ 分子中含有一个酚羟基和一个酰胺基团,具有良好的溶解性和热稳定性。PG 分子中含有两个酚羟基,具有较强的抗氧化活性 ^{[ 4 ]} 。然而,过量摄入抗氧化剂可能会对人体健康造成风险,如肾损伤、致癌等 ^{[ 5 - 6 ]} 。

目前, 测定抗氧化剂的主要方法有: 比色法、薄层色谱法、气相色谱法、气相色谱 - 质谱联用法和液相色谱法。比色法适用范围有限,检出限较高,较少用于精确测定；薄层色谱法可在较短时间内处理大批量样品, 一般用于粗略定量; 气相色谱法和气相色谱 - 质谱联用法检出限较低,但前处理过程繁琐。液相色谱法前处理较简单, 适用范围广, 检出限低, 因此仍是现今主要的检测方法。本研究在目标物提取时添加 $\mathrm{{AP}}$ (抗坏血酸棕榈酸酯) ^{[ 7 ]} ,降低抗氧化剂在提取和浓缩过程中被氧化的程度, 以及优化液相色谱法前处理提取次数、净化方法和洗脱次数这三个关键因素, 降低了检出限, 成功提高了 9 种抗氧化剂的回收率。

1 材料与方法

收起

1.1 实验材料

日常检测到中收集的不含 9 种抗氧化剂的花生油、菜籽油。

1.1.1 实验试剂和耗材

乙腈(色谱纯,美国 Fisher)；正己烷(色谱纯,美国 Fisher); 甲醇 ( 色谱纯, 美国 Fisher ); Cleanert S C18-N-SPE 固相萃取柱 ( ${2000}\mathrm{{mg}}/{12}\mathrm{\;{mL}}$ ,天津博纳艾杰尔)；孔径 ${0.22\mu }\mathrm{m}$ 有机系滤膜。

9 抗氧化剂混标 (上海安谱), ${1000\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ ,没食子酸丙酯 (PG)、2,4,5-三羟基苯丁(THBP)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、去甲二氢愈创木酸 (NDGA)、叔丁基对羟基茴香醚 (BHA)、 2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚 (Ionox-100)、没食子酸辛酯 (OG)、 2,6-二叔丁基对甲基苯 (BHT)、没食子酸十二酯 (DG)。

1.1.2 主要实验仪器和用具

1260 高效液相色谱仪 ( 美国安捷伦 ), DMT-2500 多管涡旋混合仪 (杭州米欧仪器有限公司), N-EVAP 24-RT 氮吹仪 (美国 Organomation 公司), Mutifuge X1R 离心机(美国赛默飞世尔科技有限公司)。

${50}\mathrm{\;{mL}}$ 离心管,玻璃滴管, ${1.5}\mathrm{\;{mL}}$ 样品瓶, ${10}\mathrm{\;{mL}}$ 容量瓶。

1.2 实验方法

1.2.1 标准溶液的配制

${100\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}9$ 种抗氧化剂标准储备液:准确吸取 $1\mathrm{{mL}}$ 质量浓度为 ${1000\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 的 9 种抗氧化剂标准品于 ${10}\mathrm{\;{mL}}$ 容量瓶中, 用甲醇定容至刻度线,摇匀, $-{18}^{\circ }\mathrm{C}$ 避光保存。

${10\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}9$ 种抗氧化剂标准中间储备液:准确吸取 $1\mathrm{{mL}}$ 质量浓度为 ${100\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 的 9 种抗氧化剂标准储备液于 ${10}\mathrm{\;{mL}}$ 容量瓶中,用甲醇定容至刻度线,摇匀, $-{18}^{\circ }\mathrm{C}$ 避光保存。

${1\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}9$ 种抗氧化剂标准中间储备液:准确吸取 $1\mathrm{{mL}}$ 质量浓度为 ${10\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 的 9 种抗氧化剂标准储备液于 ${10}\mathrm{\;{mL}}$ 容量瓶中,用甲醇定容至刻度线,摇匀, $-{18}^{\circ }\mathrm{C}$ 避光保存。

9 种抗氧化剂标准工作液:移取适量的 ${100\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}9$ 种抗氧化剂标准中间储备液,配制成质量浓度为 1、2、6、10、40 ${60\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 标准工作系列溶液(质量浓度为 ${40\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 的9种抗氧化剂色谱图详见图 1 )。

1.2.2 样品前处理

提取: 准确称取混合均匀的试样 $1\mathrm{\;g}$ (精确至 ${0.01}\mathrm{\;g}$ ) 于 ${50}\mathrm{\;{mL}}$ 离心管中,加入 $3\mathrm{\;{mL}}$ 乙腈饱和的正己烷溶液溶解样品, 涡旋 $1\mathrm{\;{min}}$ ,静置 ${10}\mathrm{\;{min}}$ 后用 $3\mathrm{\;{mL}}$ 含 $\mathrm{{AP}}$ 的正己烷饱和的乙腈溶液涡旋提取 $2\mathrm{\;{min}},{3000}\mathrm{r}/\mathrm{{min}}$ 离心 $5\mathrm{\;{min}}$ ,将乙腈层收集于另一 ${50}\mathrm{\;{mL}}$ 离心管中,再重复使用含 $\mathrm{{AP}}$ 的 $3\mathrm{\;{mL}}$ 正己烷饱和的乙腈溶液溶液提取 4 次,合并 5 次提取液,待上样净化 ^{[ 6 ]} 。

固相萃取柱活化: 将 C18 固相萃取小柱上端预装 $2\mathrm{\;g}$ 无水硫酸钠,再用 $5\mathrm{\;{mL}}$ 甲醇活化柱子,再使用 $5\mathrm{\;{mL}}$ 乙腈平衡柱子, 弃去流出液。

净化:将待净化液上柱,并用 ${15}\mathrm{\;{mL}}$ 乙腈:甲醇(体积比 2:1) 洗脱,收集全部上样液和洗脱液,在 ${40}^{\circ }\mathrm{C}$ 下蒸发至 $1\mathrm{\;{mL}}$ 左右, 转移至 ${15}\mathrm{\;{mL}}$ 刻度试管中,用少量乙腈润洗蒸瓶 3 次,合并后 ${40}^{\circ }\mathrm{C}$ 氮吹至尽干,用乙腈定至 $2\mathrm{\;{mL}}$ ,涡旋 ${30}\mathrm{\;s}$ ,过 ${0.22\mu }\mathrm{m}$ 有机膜后待测定。

1.2.3 仪器条件

LC 条件: 色谱柱: ZORBAX Extend-C18 色谱柱,柱长 ${250}\mathrm{\;{mm}}$ ,内径 ${4.6}\mathrm{\;{mm}}$ ,粒径 ${5\mu }\mathrm{m}$ ；流速: ${1.0}\mathrm{\;{mL}}/\mathrm{{min}}$ ；柱温: ${35}^{\circ }\mathrm{C}$ ；检测波长: ${280}\mathrm{\;{nm}}$ ,进样量: ${5\mu }\mathrm{L}$ ；柱温: ${60}^{\circ }\mathrm{C}$ 保持 $1\mathrm{\;{min}}$ ,以 ${20}^{\circ }\mathrm{C}/\mathrm{{min}}$ 的速度升到 ${220}^{\circ }\mathrm{C}$ 保持 $1\mathrm{\;{min}}$ ,以 ${5}^{\circ }\mathrm{C}/\mathrm{{min}}$ 的速度升到 ${250}^{\circ }\mathrm{C}$ 保持 $1\mathrm{\;{min}}$ ,以 ${20}^{\circ }\mathrm{C}/\mathrm{{min}}$ 的速度升到 ${290}^{\circ }\mathrm{C}$ 保持 3.5 min。

流动相:A:0.5% 甲酸水；B:甲醇。

洗脱梯度: $0 \sim 5\mathrm{\;{min}}$ 流动相 (A) ${50}\%,5 \sim {15}\mathrm{\;{min}}$ : 流动相 (A) 从 50% 降至 20%,15~20 min 流动相 (A) 20%,20~25 min:流动相 (A) 从 20% 降至 10%,25~27 min:流动相 (A) 从 10% 增至 50%,27~30 min:流动相 (A) 50%。

2 结果与分析

收起

2.1 提取方法的优化

准确吸取 ${100\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 的 9 种抗氧化剂标准储备液 ${0.40}\mathrm{\;{mL}}$ 于 ${1.00}\mathrm{\;g}$ 菜籽油试样中进行验证实验,理论加标量为 ${40}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$ , 结果详见表 1 。

从表 1 的加标回收实验结果可以看出 9 种抗氧化剂的回收率随着提取次数的增多而增高, 在提取次数为 5 次时, 回收率已基本稳定 ^{[ 7 - 8 ]} 。

2.2 线性范围、相关系数、方法检出限和定量限

以峰面积为纵坐标, 质量浓度为横坐标绘制标准曲线, 峰面积应与相应质量浓度呈良好的线性关系, 且相关系数均大于 0.99 ,相关系数、方法检出限和定量限列于表 2 。结果表明: 9 种抗氧化剂在 ${1.0}\sim {60.0\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 范围内,各物质线性关系良好, 相关系数均大于 0.99 , 检出限通过空白样品加标的方式, 以及显示基线噪声的分析方法, 以信噪比 3 倍为检出限, 在称样量 ${1.00}\mathrm{\;g}$ ,最终定容体积 $2\mathrm{\;{mL}}$ 的方法下,花生油 9 种抗氧化剂检出限在 ${0.4}\sim {2.0\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{kg}}$ ,菜籽油 9 种抗氧化剂检出限在 ${0.2}\sim {1.0\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{kg}}$ ,定量限则以 3 倍检出限计算得出 ^{[ 9 ]} 。

2.3 回收率和相对标准偏差

以花生油、菜籽油空白样品为试样, 向试样中加入不同体积 9 种抗氧化剂标液物质,得到质量浓度为 ${20}\text{、}{40}$ 和 ${80}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$ 不同梯度的加标试样, 按照 1.2.2 的步骤, 每个加标浓度水平测定 3 次。实验结果表明该方法具有较好的准确度和精密度, 满足开展分析实验的要求,结果详见表 3^[10] 。

3 结论

收起

由于前处理固相萃取法洗脱模式有两种: 一种是目标物比干扰物与吸附剂之间的亲和力更强, 因而被保留, 洗脱时采用对目标物亲和力更强的溶剂洗脱, 另一种是干扰物比目标物与吸附剂之间的亲和力更强, 则目标物被直接的洗脱。本实验在提取时加入保护剂 AP, 并通过后一种洗脱原理优化提取次数为 5 次,待净化液通过 C18 固相萃取小柱净化,用 ${15}\mathrm{\;{mL}}\mathrm{Z}$ 腈:甲醇(体积比 2:1)洗脱、浓缩、定容后测定。结果表明, 9 种抗氧化剂在 ${1.00}\sim {60.00\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 质量浓度范围内,曲线相关系数均大于 0.99 , 9 种抗氧化剂的回收率随着提取次数的增多而增高,在提取次数为 5 次时,回收率已基本稳定。在 ${20}\sim {80}\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}$ 加标水平下,两种油脂回收率在 91.2%~108.8% 之间,符合 GB/T 27417-2017 对检验方法回收率的要求,相对标准偏差在 0.6%~10.0% 之间,相对偏差小于等于 10%,满足方法测定要求。综上, 所优化的方法可用于食用油中 9 种抗氧化剂的定量分析。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2024年第2卷第7期

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首发时间：2025-07-29

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广西壮族自治区粮油质量检验中心南宁 530031

通讯作者:

*农子明，工程师，研究方向为粮油质量分析。E-mail: 347998976@qq.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

序号	化合物	优化方法
提取次数 3 (次)	提取次数 4 (次)	提取次数 5 (次)	提取次数 6 (次)
1	PG	93.6	96.6	104.3	102.4
2	THBP	93.3	99.9	95.8	108.2
3	TBHQ	92.9	95.8	96.7	98.5
4	NDGA	96.0	108.2	114.7	115.6
5	BHA	91.4	92.3	97.0	98.6
6	Ionox-100	101.9	103.0	107.1	107.3
7	OG	102.1	105.3	117.1	114.1
8	BHT	91.4	92.3	97.0	98.6
9	DG	79.4	82.8	98.9	106.4

序号

化合物

优化方法

提取次数 3 (次)

提取次数 4 (次)

提取次数 5 (次)

提取次数 6 (次)

93.6

96.6

104.3

102.4

THBP

93.3

99.9

95.8

108.2

TBHQ

92.9

95.8

96.7

98.5

NDGA

96.0

108.2

114.7

115.6

BHA

91.4

92.3

97.0

98.6

Ionox-100

101.9

103.0

107.1

107.3

102.1

105.3

117.1

114.1

BHT

91.4

92.3

97.0

98.6

79.4

82.8

98.9

106.4

序号	化合物	保留时间 (min)	线性回归方程	相关系数 $\mathrm{r}$	花生油	菜籽油
检出限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	定量限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	检出限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$	定量限 $/\left({\mathrm{{mg}}/\mathrm{{kg}}}\right)$
1	PG	5.109	y=12.42534x	0.99959	0.4	1.2	0.2	0.6
2	THBP	7.963	y=13.43456x	0.99556	0.4	1.2	0.2	0.6
3	TBHQ	8.464	y=3.75304x	0.99842	0.8	2.4	0.4	1.2
4	NDGA	12.497	y=4.90455x	0.99909	0.4	1.2	0.2	0.6
5	BHA	13.674	y=4.44104x	1.00000	0.6	1.8	0.3	0.9
6	Ionox-100	15.829	$y ={1.48173x}$	0.99999	2.0	6	1.0	3
7	OG	16.707	y=9.87541x	0.99962	0.4	1.2	0.2	0.6
8	BHT	27.797	y=7.98966x	0.99945	0.8	2.4	0.4	1.2
9	DG	28.161	y=2.31516x	0.99997	0.8	2.4	0.4	1.2

序号

化合物

保留时间 (min)

线性回归方程