实验室检测

	类型	提供单位
培养基	PH 7.0 无菌氯化钠 - 蛋白陈缓冲液、TSB、SDB、SDA、TSA、甘露醇氯化钠琼脂培养基、溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基	北京陆桥技术股份有限公司
稀释液	0.9% 无菌氯化钠溶液 (NS)	信合援生制药股份有限公司
菌种	金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母菌、黑曲菌	中国食品药品检定研究院

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培养基	PH 7.0 无菌氯化钠 - 蛋白陈缓冲液、TSB、SDB、SDA、TSA、甘露醇氯化钠琼脂培养基、溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基	北京陆桥技术股份有限公司
稀释液	0.9% 无菌氯化钠溶液 (NS)	信合援生制药股份有限公司
菌种	金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母菌、黑曲菌	中国食品药品检定研究院

菌种	红霉素软膏	试验组	供试品对照组	菌液对照组	回收比值
金黄色葡萄球菌	S1	85	0	97	0.876
S2	83	0	98	0.847
S3	84	0	95	0.884
铜绿假单胞菌	S1	86	0	94	0.915
S2	81	0	96	0.844
S3	80	0	93	0.860
枯草芽孢杆菌	S1	83	0	93	0.892
S2	85	0	95	0.895
S3	82	0	94	0.872
白色假丝酵母菌	S1	73	0	85	0.859
S2	75	0	89	0.843
S3	71	0	85	0.835
黑曲霉	S1	35	0	49	0.714
S2	32	0	41	0.780
S3	29	0	43	0.674

菌种	红霉素软膏	试验组	供试品对照组	菌液对照组	回收比值
金黄色葡萄球菌	S1	85	0	97	0.876
S2	83	0	98	0.847
S3	84	0	95	0.884
铜绿假单胞菌	S1	86	0	94	0.915
S2	81	0	96	0.844
S3	80	0	93	0.860
枯草芽孢杆菌	S1	83	0	93	0.892
S2	85	0	95	0.895
S3	82	0	94	0.872
白色假丝酵母菌	S1	73	0	85	0.859
S2	75	0	89	0.843
S3	71	0	85	0.835
黑曲霉	S1	35	0	49	0.714
S2	32	0	41	0.780
S3	29	0	43	0.674

菌种	红霉素软膏	试验组	供试品对照组	菌液对照组	回收比值
白色假丝酵母菌	S1	76	0	90	0.844
S2	72	0	88	0.818
S3	70	0	86	0.814
S1	33	0	50	0.660
黑曲霉	S2	35	0	45	0.778
S3	28	0	46	0.609

菌种	红霉素软膏	试验组	供试品对照组	菌液对照组	回收比值
白色假丝酵母菌	S1	76	0	90	0.844
S2	72	0	88	0.818
S3	70	0	86	0.814
S1	33	0	50	0.660
黑曲霉	S2	35	0	45	0.778
S3	28	0	46	0.609

组别	金黄色葡萄球菌	铜绿假单胞菌
胰酪大豆胨液体培养基	甘露醇氯化钠琼脂平板	胰酪大豆胨液体培养基	甘露醇氯化钠琼脂平板
试验组	浑浊	典型阳性菌落	浑浊	典型阳性菌落
供试品对照组	澄清	无菌生长	澄清	无菌生长
阴性对照组	澄清	无菌生长	澄清	无菌生长
阳性对照组	浑浊	典型阳性菌落	浑浊	典型阳性菌落

组别	金黄色葡萄球菌	铜绿假单胞菌
胰酪大豆胨液体培养基	甘露醇氯化钠琼脂平板	胰酪大豆胨液体培养基	甘露醇氯化钠琼脂平板
试验组	浑浊	典型阳性菌落	浑浊	典型阳性菌落
供试品对照组	澄清	无菌生长	澄清	无菌生长
阴性对照组	澄清	无菌生长	澄清	无菌生长
阳性对照组	浑浊	典型阳性菌落	浑浊	典型阳性菌落

红霉素软膏微生物限度方法学的验证

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金健 , 陈昱 , 崔永学 , 金桂花 ^*

实验室检测 | 评价与分析 2024,2(6): 141-144

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实验室检测 | 评价与分析 2024, 2(6): 141-144

红霉素软膏微生物限度方法学的验证

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金健, 陈昱, 崔永学, 金桂花^*

作者信息

吉林省延边朝鲜族自治州食品药品检验所延吉 133000

金健,硕士,主管药师,科员,研究方向为微生物检验。

金桂花,副主任药师,主任,研究方向为药物分析。

通讯作者:

*金桂花，副主任药师，主任，研究方向为药物分析。E-mail: 1981570594@qq.com

Validation of the microbial limit methodology of erythromycin ointment

Jian JIN, Yu CHEN, Yong-Xue CUI, Gui-Hua JIN^*

Affiliations

Food and Drug Control Institute, Yanbian Korean Autonomous Prefecture Yanji 133000 China

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摘要

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目的验证红霉素软膏微生物限度实验方法。方法选取三个批号的红霉素软膏(S1~S3),分别采用三种冲洗方式分为试验组和阳性、阴性对照组(供试品对照组和菌液对照组),通过试验分析红霉素软膏的微生物限度检测方法。结果试验的不同批次红霉素软膏所需的氧菌、酵母菌、霉菌以及加菌回收比值在0.5~2区间内,红霉素软膏试验微生物菌株的抑制可以采取薄膜过滤法。因此,所有方法均能有效消除红霉素软膏的抑菌成分,实验结果能真实反映出红霉素软膏的微生物污染情况。结论离心集菌薄膜过滤法在红霉素软膏抑菌清除中的应用具有较高价值存在,且该方式不会对红霉素软膏的微生物限度试验造成影响。

关键词

红霉素软膏 / 微生物限度 / 抑菌作用 / 回收率

Abstract

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Objective To verify the experimental method of erythromycin ointment. Methods Three batch numbers of erythromycin ointment (S1~S3) were selected and divided into three washing methods: test group and positive and negative control group (test article control group and bacterial solution control group). The microbial limit detection method of erythromycin ointment was analyzed by test. Results The recovery ratio of oxygen bacteria, yeast, mold and added bacteria required for different batches of erythromycin ointment in the test is between 0.5 and 2, and the inhibition of microbial strains of erythromycin ointment test can be adopted by membrane filtration method. Therefore, all the methods can effectively eliminate the antibacterial components of erythromycin ointment, and the experimental results can truly reflect the microbial contamination of erythromycin dye ointment. Conclusion The application of centrifugal method in antibacterial removal will not affect the microbial limit test of erythromycin ointment.

Key words

erythromycin ointment / microbial limits / bacteriostasic activity / recovery rate

引用本文

金健, 陈昱, 崔永学, 金桂花. 红霉素软膏微生物限度方法学的验证. 实验室检测, 2024 , 2 (6) : 141 -144 .

Jian JIN, Yu CHEN, Yong-Xue CUI, Gui-Hua JIN. Validation of the microbial limit methodology of erythromycin ointment[J]. Laboratory Testing, 2024 , 2 (6) : 141 -144 .

正文

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0 引言

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受当前医药工业的发展, 药品制作的标准在不断提升, 而卫生无误限度试验作为可以检测药品质量的重要手段, 在保证制剂微生物质量方面具有至关重要的作用。红霉素软膏作为一种常用的抗生素制剂, 具有抑菌作用, 能够抑制微生物的生长, 在微生物质量控制中应用较为广泛 ^{[ 1 - 2 ]} 。然而,当前广泛使用的红霉素软膏微生物限度试验方法是否能够准确、可靠地评估产品的微生物质量,仍然需要进一步的验证。传统的微生物限度试验方法在应对一些特定的微生物污染问题上可能存在一定的局限性, 例如对某些微生物的检测灵敏度、试验方法的可重复性以及与实际生产条件的适应性等方面的挑战 ^{[ 3 - 4 ]} 。为了弥补这些潜在不足, 对红霉素软膏微生物限度试验方法进行系统的验证显得尤为紧迫。本研究的目的是通过验证现有的红霉素软膏微生物限度试验方法, 全面评估其在实际应用中的准确性和可靠性。通过明确现行方法的适用性和局限性, 我们致力于提出可能的改进措施, 以确保微生物限度试验方法在红霉素软膏生产过程中的稳健性和有效性。本研究特选取三个批号的红霉素软膏展开试验, 通过红霉素软膏抑菌作用的清除展开微生物限度实验方法的验证, 具体分析如下。

1 材料与方法

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1.1 材料

选取三个批号的红霉素软膏 ( S1-S3 ), 批号分别为 170301、 160412、161102,均产于新乡华青药业。具体培养基、稀释液及菌种的类型和提供单位见下表 1 。

1.2 方法及观察指标

仪器设备: ① BHC-1300 II A2 型生物安全柜(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)；② SPX-150B-Z 型生化培养箱(上海博讯医疗生物仪器股份有限公司)、SPL-450型生化培养箱(天津市波特瑞仪器设备有限公司)、SPX-150BSH- II 型生化培养箱 (上海新苗医疗器械制造有限公司)；③ Htysteritest 601型集菌仪 (杭州泰林生物技术设备有限公司)；④ FY220 滤膜孔径 ${0.45\mu }\mathrm{m}$ 的一次性集菌过滤器培养器(温州维科生物实验设备有限公司)。

供试液: 在每个批号的红霉素软膏中分别取出 10g 药膏放置在有无菌玻璃珠输液瓶中, 添加无菌十四烷酸异丙酯振摇溶解后添加 ${45}^{\circ }\mathrm{C}$ PH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液 ${100}\mathrm{\;{mL}}$ ,振摇 ${10}\mathrm{\;{min}}$ ,静置后下面的水层是 $1 :{10}$ 的供试液。

试验组回收率: 供试液和试验菌分别取 $1\mathrm{{mL}}$ 注入到平皿中, 倾注相应的培养基,平行制备 2 皿后测定均落数,用离心集菌薄膜过滤法将 $1\mathrm{\;{mL}}$ 供试液添加 ${200}\mathrm{\;{mL}}$ 稀释液中混合均匀,薄膜过滤分别用 ${200}\mathrm{\;{mL}}$ 、 ${400}\mathrm{\;{mL}}$ 、 ${600}\mathrm{\;{mL}}$ 冲洗液进行冲洗,冲洗后依次添加 $1\mathrm{{mL}}$ 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌菌悬液, 滤干后将薄膜取出贴附在琼脂培养基平板上。随后用培养基稀释法在 5 个平皿中分别注入 ${0.2}\mathrm{\;{mL}}$ 供试液,再选取 2 个平皿中注入 ${0.5}\mathrm{\;{mL}}$ 供试液,添加试验菌。加菌回收比值

菌液对照组回收率: 阳性用稀释液代替供应液, 与试验组相同添加试验菌液,在平板上呈现控制菌典型菌落生长的状态。阴性用稀释液代替菌液和供试液,其他试验的操作与试验组相同。

供试品对照组回收率:用试验组制备良好的供应液,稀释液代替菌液,具体试验的操作与试验组相同。

霉菌、酵母菌总数计数与养菌总数计数法验证方式相同, 将冲洗量控制在 ${500}\mathrm{\;{mL}}/$ 膜,在 ${25}^{\circ }\mathrm{C}$ 环境下培养 $5 \sim 7\mathrm{\;d}$ ,观察并记录每天培养结果。

1.3 统计学分析

用 Excel 表格将需氧菌总数计数法的验证结果进行记录并统计分析。

2 结果

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2.1 需氧菌、酵母菌和霉菌总数计数法的验证

S1-S3 生红霉素软膏需氧菌、酵母菌和霉菌的加菌回收率均在 0.5~2 之间, 可见薄膜过滤法的应用可以有效消除红霉素软膏对实验微生物菌株的抑制作用, 见表 2 和表 3 。

2.2 控制菌检查方法的适用性证实

根据验证方案做进一步的试验, 试验组和菌液对照组都可以对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌典型炎性菌落进行检测, 阴性对照组无菌生长, 所以控制菌检查方法适用金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的检查, 红霉素软膏的微生物限度试验可以按照该方法进行验证, 见表 4 。

3 讨论

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红霉素软膏是一种含有红霉素的外用药膏, 该药物是一种广谱抗生素,对许多细菌具有抑制和杀灭作用。红霉素软膏通

常用于治疗一些皮肤感染,例如轻度烧伤、划伤、溃疡、湿疹等, 通过药物的涂抹能帮助患者缓解炎症和症状, 可取得显著的治疗效果。但由于该药物是一种抗生素类药物,长期或过度的使用均会导致细菌耐药性等问题, 且部分患者在使用该药物期间会出现过敏反应, 因此需要结合自身病情和实际状况决定用药 ^{[ 5 - 6 ]} 。红霉素软膏微生物限度试验是确保药品质量和安全性的重要步骤之一, 微生物限度试验旨在检测药品中可能存在的微生物污染,以确保其符合法规和标准的要求 ^{[ 7 - 8 ]} 。红霉素软膏微生物限度试验的主要目的是评估产品中的微生物负载, 以确保其在使用期间不会对患者造成危害, 这一试验是对生产过程的监控, 以及对药品质量的保证的重要组成部分 ^{[ 9 ]} 。在本研究实施验证过程中, 不仅要保证微生物限度试验符合相关的法规和药典标准, 例如药典中的规范和相关的药品监管机构发布的指南, 验证的方法也应当能够有效地检测可能存在的各类微生物,包括细菌、霉菌和酵母等 ^{[ 10 - 11 ]} 。通过红霉素软膏微生物限度实验方法, 可以选择并评估相关参数, 结合产品的特性、生产的构成以及药物在实际临床中使用的情况等进行评估 ^{[ 12 ]} 。微生物限度试验方法的验证不是一次性的工作, 需要定期进行再验证,以确保方法的可靠性和适用性在生产过程中的持续性 ^{[ 13 ]} 。在进行红霉素软膏微生物限度试验方法验证时, 企业应严格遵循质量管理体系和相关法规的要求, 以保障患者的用药安全和产品的质量。验证结果的透明记录有助于确保药品在市场上的合规性和可靠性。

本研究结果中指出, 红霉素软膏的抑菌作用较高, 运用十四烷酸异丙酯能将红霉素软膏充分溶解, 消除软膏的抑菌作用, 并通过多次的萃取、冲洗消除其抑菌作用, 同时不破坏红霉素软膏的微生物污染检测。根据样品微生物限度的标准、供试液稀释倍数及冲洗量选取供试液的倍数, 较大的供试液倍数能降低误差发生率。在供试液制备时,将 ${20}\mathrm{\;{mL}}$ 无菌十四烷酸异丙酯添加至红霉素软膏样品中并充分的摇晃溶解,添加 ${45}^{\circ }\mathrm{C}$ ${100}\mathrm{\;{mL}}$ 的 PH 7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液,则需要注意在转换的过程中控制幅度, 避免乳化难分层。整体工作量相对较大, 为了能在最短时间内掌握红霉素软膏微生物验证的方法, 以少数敏感菌做预实验, 不仅能找准检测的方法, 还能有效缩短时间 ^{[ 14 ]} 。红霉素软膏与水不易相容,所以无菌十四烷酸异丙酯的添加能够有效溶解软膏,确保水层分离后有效提取供试液 ^{[ 15 ]} 。经最终的结果分析, 可见离心集菌薄膜过滤法在试验中的应用可以有效的将从霉素软膏的抑菌作用清除、抑制,这一方式对于红霉素软膏微生物限度检查具有积极意义。

4 结论

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综上所述, 离心集菌薄膜过滤法在试验中的应用能有效抑制红霉素软膏的抑菌作用,具有较为显著的抑制效果,该方法在红霉素软膏微生物限度检查中应用具有较高价值存在。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2024年第2卷第6期

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首发时间：2025-07-29

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吉林省延边朝鲜族自治州食品药品检验所延吉 133000

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*金桂花，副主任药师，主任，研究方向为药物分析。E-mail: 1981570594@qq.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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培养基	PH 7.0 无菌氯化钠 - 蛋白陈缓冲液、TSB、SDB、SDA、TSA、甘露醇氯化钠琼脂培养基、溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基	北京陆桥技术股份有限公司
稀释液	0.9% 无菌氯化钠溶液 (NS)	信合援生制药股份有限公司
菌种	金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母菌、黑曲菌	中国食品药品检定研究院

类型

提供单位

培养基

PH 7.0 无菌氯化钠 - 蛋白陈缓冲液、TSB、SDB、SDA、TSA、甘露醇氯化钠琼脂培养基、溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基

北京陆桥技术股份有限公司

稀释液

0.9% 无菌氯化钠溶液 (NS)

信合援生制药股份有限公司

菌种

金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母菌、黑曲菌

中国食品药品检定研究院

菌种	红霉素软膏	试验组	供试品对照组	菌液对照组	回收比值
金黄色葡萄球菌	S1	85	0	97	0.876
S2	83	0	98	0.847
S3	84	0	95	0.884
铜绿假单胞菌	S1	86	0	94	0.915
S2	81	0	96	0.844
S3	80	0	93	0.860
枯草芽孢杆菌	S1	83	0	93	0.892
S2	85	0	95	0.895
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白色假丝酵母菌	S1	73	0	85	0.859
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菌种

红霉素软膏

试验组

供试品对照组

菌液对照组

回收比值

金黄色葡萄球菌

0.876

0.847

0.884

铜绿假单胞菌

0.915

0.844

0.860

枯草芽孢杆菌

0.892

0.895

0.872

白色假丝酵母菌

0.859

0.843

0.835

黑曲霉

0.714

0.780

0.674

菌种	红霉素软膏	试验组	供试品对照组	菌液对照组	回收比值
白色假丝酵母菌	S1	76	0	90	0.844
S2	72	0	88	0.818
S3	70	0	86	0.814
S1	33	0	50	0.660
黑曲霉	S2	35	0	45	0.778
S3	28	0	46	0.609

菌种

红霉素软膏

试验组

供试品对照组

菌液对照组

回收比值

白色假丝酵母菌

0.844

0.818

0.814

0.660

黑曲霉

0.778

0.609

组别	金黄色葡萄球菌	铜绿假单胞菌
胰酪大豆胨液体培养基	甘露醇氯化钠琼脂平板	胰酪大豆胨液体培养基	甘露醇氯化钠琼脂平板
试验组	浑浊	典型阳性菌落	浑浊	典型阳性菌落
供试品对照组	澄清	无菌生长	澄清	无菌生长
阴性对照组	澄清	无菌生长	澄清	无菌生长
阳性对照组	浑浊	典型阳性菌落	浑浊	典型阳性菌落

组别

金黄色葡萄球菌

铜绿假单胞菌

胰酪大豆胨液体培养基

甘露醇氯化钠琼脂平板

胰酪大豆胨液体培养基

甘露醇氯化钠琼脂平板

试验组

浑浊

典型阳性菌落

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典型阳性菌落

供试品对照组

澄清

无菌生长

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无菌生长

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澄清

无菌生长

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典型阳性菌落

浑浊

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