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Objective To establish an extraction process and contentdetermination method for quercetin in Gentiana macrophylla, and optimizethe processing technology of Gentiana macrophylla. Methods This studyused ultrasound assisted extraction to extract quercetin from Gentianamacrophylla, and determined the content of quercetin in four processedGentiana macrophylla decoction pieces by HPLC-ELSD. Results The optimalprocess conditions for ultrasonic extraction of quercetin from Gentianamacrophylla are: ethanol volume fraction of 75%, ultrasonic time of 45minutes, solid-liquid ratio of 1 : 10, and ultrasonic temperature of ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ . Thehighest yield of quercetin is ${3.40}\mathrm{{mg}}/\mathrm{g}$ . Conclusion The established extraction process and content determinationmethod for quercetin galls have good repeatability, stability, andreliability, which can provide reference for optimizing the processingtechnology of Gentiana macrophylla decoction pieces.

, correspAuthors=Hong YU, authorNote=null, correspAuthorsNote=
*YU Hong, Deputy Chief Pharmacist, Shangrao Inspection and Testing Certification Institute, Shangrao 334000, China. E-mail:
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目的 通过建立秦艽中栎瘿酸提取工艺和含量测定方法,优选秦艽的炮制工艺。方法 本研究采用超声辅助法提取秦艽中的栎瘿酸,并通过HPLC-ELSD 的方法测定 4 种炮制秦艽饮片种栎瘿酸的含量。结果 超声提取秦艽中栎瘿酸的最佳工艺条件为:乙醇体积分数 ${75}\%$ 、超声时间为 ${45}\mathrm{\;{min}}$ 、料液比为 $1 :{10}$ 、超声温度为 ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ 时,栎瘿酸的得率最高为 ${3.40}\mathrm{{mg}}/\mathrm{g}$结论 建立的栎瘿酸提取工艺和含量测定方法重复性好、稳定可靠,可为优选秦艽饮片的炮制工艺提供参考。

, correspAuthors=余红, authorNote=null, correspAuthorsNote=
*余红,副主任药师,研究方向为药物分析。E-mail:
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丁金有,工程师,研究方向为药物分析和实验室安全管理。

余红,副主任药师,研究方向为药物分析。

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丁金有,工程师,研究方向为药物分析和实验室安全管理。

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丁金有,工程师,研究方向为药物分析和实验室安全管理。

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余红,副主任药师,研究方向为药物分析。

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余红,副主任药师,研究方向为药物分析。

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基于多成分药物代谢的秦艽质控成分遴选研究[J]. 世界中医药, 2020, 15(13): 1897-1907., articleTitle=基于多成分药物代谢的秦艽质控成分遴选研究, refAbstract=null), Reference(id=1156967416929538853, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2010, volume=12, issue=12, pageStart=12, pageEnd=14, url=null, language=null, rfNumber=[6], rfOrder=5, authorNames=聂继红, 张海英, 郭亭亭, journalName=中国现代医药杂志, refType=null, unstructuredReference=聂继红, 张海英, 郭亭亭. 中药秦艽抗炎镇痛作用的实验研究[J]. 中国现代医药杂志, 2010, 12(12): 12-14., articleTitle=中药秦艽抗炎镇痛作用的实验研究, refAbstract=null), Reference(id=1156967416988259111, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2022, volume=24, issue=02, pageStart=42, pageEnd=45, url=null, language=null, rfNumber=[7], rfOrder=6, authorNames=王丹丹, 卞理, 张雯, journalName=湖北中医药大学学报, refType=null, unstructuredReference=王丹丹, 卞理, 张雯, 等. 正交试验法改进大黄游离蒽醌提取方法的研究[J]. 湖北中医药大学学报, 2022, 24(02): 42-45., articleTitle=正交试验法改进大黄游离蒽醌提取方法的研究, refAbstract=null), Reference(id=1156967417034396457, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2010, volume=30, issue=05, pageStart=787, pageEnd=790, url=null, language=null, rfNumber=[8], rfOrder=7, authorNames=郑姜彬, 陈宝宝, 陈千良, journalName=药物分析杂质, refType=null, unstructuredReference=郑姜彬, 陈宝宝, 陈千良, 等. HPLC-ELSD法测定麻花秦艽中4种脂溶性成分的含量[J]. 药物分析杂质, 2010, 30(05): 787-790., articleTitle=HPLC-ELSD法测定麻花秦艽中4种脂溶性成分的含量, refAbstract=null), Reference(id=1156967417097311018, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2005, volume=27, issue=09, pageStart=1074, pageEnd=1075, url=null, language=null, rfNumber=[9], rfOrder=8, authorNames=白莎, 倪健, 孔慧, journalName=中成药, refType=null, unstructuredReference=白莎, 倪健, 孔慧, 等. 秦艽的提取工艺研究[J]. 中成药, 2005, 27(09): 1074-1075., articleTitle=秦艽的提取工艺研究, refAbstract=null), Reference(id=1156967417143448364, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2022, volume=19, issue=01, pageStart=27, pageEnd=31, url=null, language=null, rfNumber=[10], rfOrder=9, authorNames=覃新化, 陈娟, 李岩, journalName=中国医药导报, refType=null, unstructuredReference=覃新化, 陈娟, 李岩, 等. 正交试验法优选复方益肾利石颗粒的提取工艺[J]. 中国医药导报, 2022, 19(01): 27-31., articleTitle=正交试验法优选复方益肾利石颗粒的提取工艺, refAbstract=null), Reference(id=1156967417193780014, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2019, volume=null, issue=36, pageStart=122, pageEnd=null, url=null, language=null, rfNumber=[11], rfOrder=10, authorNames=杜萌, 寇章妮, 李晓花, journalName=中外企业家, refType=null, unstructuredReference=杜萌, 寇章妮, 李晓花. 秦艽多糖的超声提取工艺优化[J]. 中外企业家, 2019(36): 122 ., articleTitle=秦艽多糖的超声提取工艺优化, refAbstract=null)], funds=[Fund(id=1156967416447193879, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, awardId=2022JS21, language=EN, fundingSource=Scientific Research Project of Jiangxi Provincial Drug Administration(2022JS21), fundOrder=null, country=null), Fund(id=1156967416514302745, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, awardId=2022JS21, language=CN, fundingSource=江西省药品监督管理局科研项目(2022JS21), fundOrder=null, country=null)], companyList=[AuthorCompany(id=1156967404271129159, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, xref=null, ext=[AuthorCompanyExt(id=1156967404275323464, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, companyId=1156967404271129159, language=EN, country=null, province=null, city=null, postcode=null, companyName=null, departmentName=null, remark=Shangrao Inspection and Testing Certification Institute Shangrao 334000 China), AuthorCompanyExt(id=1156967404279517769, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, companyId=1156967404271129159, language=CN, country=null, province=null, city=null, postcode=null, companyName=null, departmentName=null, remark=上饶市检验检测认证院 上饶 334000)])], figs=[ArticleFig(id=1156967415549612807, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=EN, label=Fig. 1, caption=Liquid phase chromatogram of reference substance of roburic acid, figureFileSmall=qvYH9C+v1+dmjVyiNlkGBg==, figureFileBig=mr9HpfTu/OSY7tLrpX+LRw==, tableContent=null), ArticleFig(id=1156967415612527368, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=CN, label=图 1, caption=栎瘿酸对照品液相图谱, figureFileSmall=qvYH9C+v1+dmjVyiNlkGBg==, figureFileBig=mr9HpfTu/OSY7tLrpX+LRw==, tableContent=null), ArticleFig(id=1156967415683830537, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=EN, label=Fig. 2, caption=Liquid phase chromatogram of Gentiana macrophylla samples, figureFileSmall=anOo1sKcP1mNLrKmAZYlYw==, figureFileBig=4f9SM5EaKn7+yO2vT+3lGg==, tableContent=null), ArticleFig(id=1156967415759328010, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=CN, label=图 2, caption=秦艽样品中液相图谱, figureFileSmall=anOo1sKcP1mNLrKmAZYlYw==, figureFileBig=4f9SM5EaKn7+yO2vT+3lGg==, tableContent=null), ArticleFig(id=1156967415822242571, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=EN, label=Fig. 3, caption=Single-factor experiment, figureFileSmall=h8Xe/0nWBWGz4eibnt0gMA==, figureFileBig=llDx5u5ntSmpjEXM0Hkpog==, tableContent=null), ArticleFig(id=1156967415872574220, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=CN, label=图 3, caption=单因素实验, figureFileSmall=h8Xe/0nWBWGz4eibnt0gMA==, figureFileBig=llDx5u5ntSmpjEXM0Hkpog==, tableContent=null), ArticleFig(id=1156967415927100173, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=EN, label=Table 1, caption=Factor level table, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
水平 A 乙醇体积 分数(%) B 超声 提取时间(min) C 料液比 (g/mL) D 超声 提取温度 $\left({{}^{\circ }\mathrm{C}}\right)$
1 60 20 1 : 8 20
2 75 30 1 : 10 30
3 90 45 1 : 15 40
), ArticleFig(id=1156967416002597646, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=CN, label=表 1, caption=因素水平表, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
水平 A 乙醇体积 分数(%) B 超声 提取时间(min) C 料液比 (g/mL) D 超声 提取温度 $\left({{}^{\circ }\mathrm{C}}\right)$
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试验号 A乙醇 体积分数 (%) B 超声 提取时间 (分钟) C 料液比 (g/mL) D 超声 提取温度 (℃) 栎瘿酸 含量 (mg/g)
1 1 1 1 1 2.93
2 1 2 2 2 3.18
3 1 3 3 3 3.15
4 2 1 2 3 3.18
5 2 2 3 1 3.40
6 2 3 1 2 3.29
7 3 1 3 2 2.95
8 3 2 1 3 3.09
9 3 3 2 1 3.18
K1 9.26 9.06 9.31 9.41
K2 9.77 9.57 9.54 9.56
K3 9.22 9.62 9.40 9.42
R 0.55 0.56 0.23 0.15
), ArticleFig(id=1156967416182952720, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=CN, label=表 2, caption=正交试验安排与结果, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
试验号 A乙醇 体积分数 (%) B 超声 提取时间 (分钟) C 料液比 (g/mL) D 超声 提取温度 (℃) 栎瘿酸 含量 (mg/g)
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2 1 2 2 2 3.18
3 1 3 3 3 3.15
4 2 1 2 3 3.18
5 2 2 3 1 3.40
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9 3 3 2 1 3.18
K1 9.26 9.06 9.31 9.41
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序号 批号 生产企业 栎瘿酸含量(mg/g)
1 2301078 清炒秦艽 1.39
2 2301079 清炒秦艽 0.85
3 2301080 清炒秦艽 1.14
4 2302003 麸炒秦艽 0.59
5 2302004 麸炒秦艽 0.49
6 2302005 麸炒秦艽 0.62
7 2302006 酒炒秦艽 1.10
8 2302007 酒炒秦艽 0.92
9 2302008 酒炒秦艽 0.98
10 2302009 浸润秦艽 1.52
11 2302010 浸润秦艽 1.51
12 2302011 浸润秦艽 1.51
13 2302012 浸润麻花秦艽 2.48
14 2302013 浸润麻花秦艽 2.48
15 2302014 浸润麻花秦艽 2.26
16 2302015 酒炒麻花秦艽 1.82
17 2302016 酒炒麻花秦艽 1.82
18 2302017 酒炒麻花秦艽 1.97
19 2302018 麸炒麻花秦艽 1.15
20 2302019 麸炒麻花秦艽 1.11
21 2302020 麸炒麻花秦艽 1.06
22 2302021 清炒麻花秦艽 2.36
23 2302022 清炒麻花秦艽 2.14
24 2302023 清炒麻花秦艽 2.14
25 2302024 浸润小秦艽 4.68
26 2302025 浸润小秦艽 4.93
27 2302026 浸润小秦艽 4.43
28 2302027 酒炒小秦艽 3.80
29 2302028 酒炒小秦艽 3.15
30 2302029 酒炒小秦艽 3.05
31 2302030 麸炒小秦艽 2.13
32 2302031 麸炒小秦艽 2.02
33 2302032 麸炒小秦艽 2.69
34 2302033 清炒小秦艽 4.36
35 2302034 清炒小秦艽 4.01
36 2302035 清炒小秦艽 4.42
), ArticleFig(id=1156967416308781842, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1156967369097695326, language=CN, label=表 3, caption=样品中栎瘿酸成分的含量, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
序号 批号 生产企业 栎瘿酸含量(mg/g)
1 2301078 清炒秦艽 1.39
2 2301079 清炒秦艽 0.85
3 2301080 清炒秦艽 1.14
4 2302003 麸炒秦艽 0.59
5 2302004 麸炒秦艽 0.49
6 2302005 麸炒秦艽 0.62
7 2302006 酒炒秦艽 1.10
8 2302007 酒炒秦艽 0.92
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10 2302009 浸润秦艽 1.52
11 2302010 浸润秦艽 1.51
12 2302011 浸润秦艽 1.51
13 2302012 浸润麻花秦艽 2.48
14 2302013 浸润麻花秦艽 2.48
15 2302014 浸润麻花秦艽 2.26
16 2302015 酒炒麻花秦艽 1.82
17 2302016 酒炒麻花秦艽 1.82
18 2302017 酒炒麻花秦艽 1.97
19 2302018 麸炒麻花秦艽 1.15
20 2302019 麸炒麻花秦艽 1.11
21 2302020 麸炒麻花秦艽 1.06
22 2302021 清炒麻花秦艽 2.36
23 2302022 清炒麻花秦艽 2.14
24 2302023 清炒麻花秦艽 2.14
25 2302024 浸润小秦艽 4.68
26 2302025 浸润小秦艽 4.93
27 2302026 浸润小秦艽 4.43
28 2302027 酒炒小秦艽 3.80
29 2302028 酒炒小秦艽 3.15
30 2302029 酒炒小秦艽 3.05
31 2302030 麸炒小秦艽 2.13
32 2302031 麸炒小秦艽 2.02
33 2302032 麸炒小秦艽 2.69
34 2302033 清炒小秦艽 4.36
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秦艽中栎瘿酸提取工艺优化和含量测定方法建立
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丁金有 , 余红 * , 龚平双
实验室检测 | 创新应用 2024,2(8): 21-24
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秦艽中栎瘿酸提取工艺优化和含量测定方法建立
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丁金有, 余红* , 龚平双
作者信息
  • 上饶市检验检测认证院 上饶 334000
  • 丁金有,工程师,研究方向为药物分析和实验室安全管理。

    余红,副主任药师,研究方向为药物分析。

通讯作者:

*余红,副主任药师,研究方向为药物分析。E-mail:
Optimization of extraction process and establishment of content determination method for roburic acid in Gentiana macrophylla
Jin-You DING, Hong YU* , Ping-Shuang GONG
Affiliations
  • Shangrao Inspection and Testing Certification Institute Shangrao 334000 China
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目的 通过建立秦艽中栎瘿酸提取工艺和含量测定方法,优选秦艽的炮制工艺。方法 本研究采用超声辅助法提取秦艽中的栎瘿酸,并通过HPLC-ELSD 的方法测定 4 种炮制秦艽饮片种栎瘿酸的含量。结果 超声提取秦艽中栎瘿酸的最佳工艺条件为:乙醇体积分数 ${75}\%$ 、超声时间为 ${45}\mathrm{\;{min}}$ 、料液比为 $1 :{10}$ 、超声温度为 ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ 时,栎瘿酸的得率最高为 ${3.40}\mathrm{{mg}}/\mathrm{g}$结论 建立的栎瘿酸提取工艺和含量测定方法重复性好、稳定可靠,可为优选秦艽饮片的炮制工艺提供参考。

秦艽  /  栎瘿酸  /  超声提取法  /  正交试验  /  含量测定

Objective To establish an extraction process and contentdetermination method for quercetin in Gentiana macrophylla, and optimizethe processing technology of Gentiana macrophylla. Methods This studyused ultrasound assisted extraction to extract quercetin from Gentianamacrophylla, and determined the content of quercetin in four processedGentiana macrophylla decoction pieces by HPLC-ELSD. Results The optimalprocess conditions for ultrasonic extraction of quercetin from Gentianamacrophylla are: ethanol volume fraction of 75%, ultrasonic time of 45minutes, solid-liquid ratio of 1 : 10, and ultrasonic temperature of ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ . Thehighest yield of quercetin is ${3.40}\mathrm{{mg}}/\mathrm{g}$ . Conclusion The established extraction process and content determinationmethod for quercetin galls have good repeatability, stability, andreliability, which can provide reference for optimizing the processingtechnology of Gentiana macrophylla decoction pieces.

Gentiana macrophylla  /  roburic acid  /  ultrasound extraction method  /  orthogonal test  /  content determination
丁金有, 余红, 龚平双. 秦艽中栎瘿酸提取工艺优化和含量测定方法建立. 实验室检测, 2024 , 2 (8) : 21 -24 .
Jin-You DING, Hong YU, Ping-Shuang GONG. Optimization of extraction process and establishment of content determination method for roburic acid in Gentiana macrophylla[J]. Laboratory Testing, 2024 , 2 (8) : 21 -24 .
秦艽为龙胆科植物秦艽(Gentiana macrophylla Pall.)、麻花 秦 艽 (Gentiana straminea Maxim.)、粗 茎 秦 艽 (Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.) 或小秦艽 (Gentiana dahurica Fisch.) 的干燥根 [ 1 ] 。秦艽最先记载于《神农本草经》,被列为中品,为祛风湿清热之首药,风药中之润剂。中医使用秦艽根入药,功能与主治为祛风湿,清湿热,止痹痛,退虚热 [ 1 ] 。常用于治疗风湿痹痛,中风半身不遂,筋脉拘挛,骨节酸痛,湿热黄疸, 骨蒸潮热,小儿疳积发热 [ 1 ]
秦艽含有多种活性成分, 具有抗炎症、抗氧化等作用, 是中医临床高频使用药物 [ 2 - 6 ] ,栎瘿酸是秦艽中专属成分。本文采用 HPLC-ELSD 法测定栎瘿酸含量, 对其提取方法进行考察, 通过单因素考察提取溶剂和提取方法, 再以料液比、提取时间和提取次数为因数水平, 以浸出物、栎瘿酸含量指标综合评价, 采用正交试验法优选栎瘿酸的最佳提取方案, 并通过方法考察建立栎瘿酸的 HPLC-ELSD 测定方法, 最后通过对比不同炮制方法的秦艽进行验证。
Agilent 1260 型高效液相色谱仪 (美国 Agilent 有限公司)、 Agilent Technologies ELSD 检测器 (美国 Agilent 有限公司)、 Sartorius BSA124S 电子天平 (德国 Sartoriu)、赛多利斯 MSE125P-1CE-DU 型电子天平 (赛多利斯科学仪器有限公司北京)。
栎瘿酸对照品为中国食品药品检定研究院提供, 批号: 111864-201603, 含量以 100%。
甲醇 (4L/瓶,国药集集团化学试剂有限公司)、乙腈 (4L/瓶, 国药集集团化学试剂有限公司)均为色谱级,其余试剂均为分析纯。超纯水自制。秦艽饮片试样: 36 批秦艽饮片 (购买), 生产单位:江西信键药业有限公司;产地:甘肃。鉴定人员:盛晓静,九江市检验检测中心,副主任中药师;陈雪华,江西信键药业有限公司,执业中药师。
采用Thermoscientifica BetasilTM- ${\mathrm{C}}_{18}$ 色谱柱 $({250}\mathrm{\;{mm}}\times {4.6}\mathrm{\;{mm}}$ , ${5\mu }\mathrm{m}$ );以乙腈 - 水( $6 :{40}$ )为流动相;流速为 ${1.0}\mathrm{\;{mL}}/\mathrm{{min}}$ ;柱温 ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ ;用 Agilent Technologies ELSD 检测器(美国 Agilent 有限公司)检测。
精密称取栎瘿酸对照品 ${14.51}\mathrm{{mg}}$ ,置于 ${10}\mathrm{{mL}}$ 量瓶中,加入甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得栎瘿酸标准溶液储备液。
精密量取栎瘿酸标准溶液储备液 0.25、0.5、1.0、1.5、2.5 mL 分别置于 6 个 $5\mathrm{\;{mL}}$ 量瓶中,摇匀,即得标准曲线各浓度溶液。
称取本品细粉 (过五号筛) ${2.5}\mathrm{\;g}$ ,置于 ${150}\mathrm{\;{mL}}$ 锥形瓶中, 加 75%乙醇 25mL,称定质量,超声提取(功率 360 W,频率 ${40}\mathrm{{kHz}}$ ) ${30}\mathrm{\;{min}}$ ,放冷,再称定质量,用 ${75}\%$ 乙醇补足减失的质量, 摇匀,过滤,作为供试品溶液。
精密量取栎瘿酸标准溶液储备液 0.25、0.5、1.0、1.5、2.5 mL 分别置于6个 $5\mathrm{\;{mL}}$ 量瓶中,摇匀,即得标准曲线各浓度溶液。 分别精密吸取 ${10\mu }\mathrm{L}$ 注入液相色谱仪,按 “1.3” 项下的色谱条件测定。以质量浓度 $\left({\mu \mathrm{g}/\mathrm{{mL}}}\right)$ 为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线并进行回归分析, 结果显示栎瘿酸的线性回归方程 $Y ={378.62X}+ {2.5359}$ ,线性范围 ${72.55}\sim {725.5\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ ,相关系数 ${r}^{2}= {0.9995}$ ,栎瘿酸在浓度范围内与其峰面积呈现良好的线性关系。(栎瘿酸对照品和样品典型液相图谱见 图 1 ~2)。
精密称取本品细粉 (过五号筛) (批号:2302035,炒小秦艽), 六份, 按 “3.3” 项下方法制备供试品溶液。按 “1.3” 项下的色谱条件测定,测得平均含量为 为 , 表明该方法重复性良好。
精密吸取栎瘿酸(浓度为 ${290.2\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ )对照品溶液 ${10\mu }\mathrm{L}$ , 依试验方法连续进样检测 6 次,峰面积平均值为 1091.0, RSD $\left({n = 6}\right)$ 为 3.0%,表明仪器精密度良好。
取已知含量的本品供试品溶液(批号:2302035,炒小秦艽, 含栎瘿酸,精密吸取 ,置 量瓶中,按含量的 80%、100%、120% 三种浓度分别加入对照品溶液 0.8、1.0、 ,分别制备 3 份供试品,共 9 份,依试验方法试验,计算回收率,结果平均回收率 ,回收率良好,适合本品的含量测定。
取本品约 2.5g (批号: 2302035,炒小秦艽),一份,按 “1.4.3” 项下方法制备供试品溶液。依次在0、1、2、4、8、12、 进样检测,每次进样 ,依法检测,结果供试品溶液中栎瘿酸在 24 小时内峰面积 RSD 为 0.4%,表明供试品溶液在制备后 24 小时内稳定。
根据文献报道和预实验的结果 [ 7 - 11 ] ,实验设置了 $\mathrm{A}$ 乙醇体积分数 (45%、60%、75%、90% 及 100%)、B 超声时间 (10、 ${20}\text{、}{30}\text{、}{40}\text{、}{50}\mathrm{\;{min}})\text{、}\mathrm{C}$ 液料比 $(1 : 5\text{、}1 : 8\text{、}1 :{10}\text{、}1 :{15}$$1 :{20}\mathrm{\;g}/\mathrm{{mL}}$ ) 和 $\mathrm{D}$ 超声温度 $\left({{10}\text{、}{20}\text{、}{30}\text{、}{40}\text{、}{50}^{\circ }\mathrm{C}}\right)$ 四个单因素, 设定超声温度 ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ 、提取时间 ${30}\mathrm{\;{min}}$ 、料液比 $1 :{10}$ 及乙醇体积分数 75%,固定超声功率 ${360}\mathrm{\;W}$ ,分别考察以上因素对秦艽栎瘿酸提取率的影响,确定各因素的影响和适宜参数范围。
A 乙醇体积分数: 称取同一批供试品,在液料比为 $1 :{10}$ , ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ ,提取 ${30}\mathrm{\;{min}}$ ,按乙醇体积分数分别为 ${45}\%$${60}\%$${75}\%$ 、 90% 及 100% 实验得到栎瘿酸的得率, 结果显示随着乙醇体积分数的增加, 栎瘿酸的得率在增加, 在 75% 时候达到最大值, 随后乙醇体积分数增加, 提取率反而下降。
$\mathrm{B}$ 超声提取时间:称取同一批供试品,在液料比为 $1 :{10}$ , ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ , ${75}\%$ 乙醇,分别提取10、20、30、40、 ${50}\mathrm{\;{min}}$ ,实验得到栎瘿酸的得率, 结果显示随着提取时间的增加栎瘿酸的提取率逐渐增加,在 ${30}\mathrm{\;{min}}$ 的时候最大,而后随着时间的增加提取率反而降低, 可能由于长时间的超声对栎瘿酸的结构有破坏作用。
$\mathrm{C}$ 料液比: 称取同一批供试品,用 75% 乙醇在 30℃时, 提取 ${30}\mathrm{\;{min}}$ ,按液料比分别为 $1 : 5\text{、}1 : 8\text{、}1 :{10}\text{、}1 :{15}\text{、}1 :{20}$ 实验得到栎瘿酸的得率, 结果显示随着溶剂的增加提取率先增加后趋于平缓呈下降趋势,在 $1 :{10}$ 的时候趋于饱和。
$\mathrm{D}$ 超声提取温度: 称取同一批供试品,用液料比为 $1 :{10}$ 的 75% 乙醇,提取 30 min,超声提取温度分别 10、20、30、 40、 ${50}^{\circ }\mathrm{C}$ 时候得到栎瘿酸的得率,结果显示随着温度的增加提取率先增加后呈下降趋势,在温度为 ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ 时候达到最大值,而后呈下降趋势, 可能由于随着温度增加, 栎瘿酸的结构被破坏而导致提取率下降。结果图 3
本实验以栎瘿酸的提取率为指标, 分别考察单个因素对栎瘿酸提取率的影响, 初步确定每个因素中的较好水平。
在单个因素试验结果的基础上, 利用正交试验的方法设计实验,选取 $\mathrm{A}$$\mathrm{B}$$\mathrm{C}$$\mathrm{D}$ 四个考察因素,采用四因素三水平的正交试验分析方法, 以栎瘿酸得率为指标, 优选出秦艽中栎瘿酸的最佳提取工艺参数, 正交试验的因素水平和结果见 表 1 ~2
通过综合分析, 秦艽中栎瘿酸含量的影响程度大小为: $\mathrm{B}> \mathrm{A}> \mathrm{C}> \mathrm{D}$ ,因此本实验优化出的最佳工艺条件为: 乙醇体积分数 ${75}\%$ 、超声时间为 ${45}\mathrm{\;{min}}$ 、料液比为 $1 :{10}$ 、超声温度为 ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ 。在此条件下秦艽中栎瘿酸的含量达到 ${3.40}\mathrm{{mg}}/\mathrm{g}$ ,高于传统的水提醇沉法提取率。
取不同产地采集的秦艽、小秦艽、麻花秦艽药材和通过四种炮制加工的秦艽按照 “1.4.3” 项方法制备供试品溶液,每批药材平行制备 3 份溶液在上述色谱条件下各进样 ${10\mu }\mathrm{L}$ 进行分析记录色谱峰面积, 以峰面积按外标法计算栎瘿酸成分的含量, 结果见 表 3
样品分别用水饱和的正丁醇、70%甲醇、75%乙醇、乙酸乙酯进行提取溶剂的考察结果乙醇对栎瘿酸成分的提取效率最高;经过对不同浓度乙醇提取效率的考察表明用 75% 乙醇提取时杂质较少分离度好。样品分别用超声波提取 10、20、30、 40、50 min 结果表明 40 min 可将栎瘿酸成分提取完全。
通过综合分析, 选出秦艽中栎瘿酸提取的最佳工艺条件为: 乙醇体积分数 ${75}\%$ 、超声提取时间为 ${45}\mathrm{\;{min}}$ 、料液比为 $1 :{10}$ 、 超声提取温度为 ${30}^{\circ }\mathrm{C}$ 。该提取工艺优于传统的水提醇沉法,本研究为秦艽饮片炮制方法的选择提供了参考。
本实验结果表明在小秦艽中栎瘿酸含量最高, 最高者可达 ${4.93}\mathrm{{mg}}/\mathrm{g}$ 。但经过麸炒和酒炒等方法炮制加工后栎瘿酸含量下降很多。清炒炮制后栎瘿酸含量略有下降。提示栎瘿酸对温度较为敏感, 在炮制加工时需注意控制好炮制的温度。秦艽中的栎瘿酸在国内外尚无其药理活性研究报道。但其在小秦艽中含量较高,还有待进一步研究。
  • 江西省药品监督管理局科研项目(2022JS21)
参考文献 引证文献
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*余红,副主任药师,研究方向为药物分析。E-mail:
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Genus
种数
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占总种数比例
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species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae 2 11 5.26 鹅膏菌属 Amanita 10 4.78
小菇科 Mycenaceae 2 12 5.74 丝盖伞属 Inocybe 5 2.39
多孔菌科 Polyporaceae 8 14 6.70 蜡蘑属 Laccaria 5 2.39
红菇科 Russulaceae 3 23 11.00 小皮伞属 Marasmius 6 2.87
小菇属 Mycena 11 5.26
光柄菇属 Pluteus 5 2.39
红菇属 Russula 17 8.13
栓菌属 Trametes 5 2.39
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