实验室检测

特殊染色镜检 (金标准)	常规 RT-PCR 法	荧光定量 RT-PCR 法	合计
阳性	阴性	阳性	阴性
阳性	6358	654	7010	2	7012
阴性	11	479	2	488	490
合计	6369	1133	7012	490	7502

特殊染色镜检 (金标准)

常规 RT-PCR 法

荧光定量 RT-PCR 法

合计

阳性

阴性

阳性

阴性

阳性

6358

654

7010

7012

阴性

479

488

490

合计

6369

1133

7012

490

7502

特殊染色镜检 (金标准)	常规 RT-PCR 法	荧光定量 RT-PCR 法	合计
阳性	阴性	阳性	阴性
阳性	6358	654	7010	2	7012
阴性	11	479	2	488	490
合计	6369	1133	7012	490	7502

特殊染色镜检 (金标准)

常规 RT-PCR 法

荧光定量 RT-PCR 法

合计

阳性

阴性

阳性

阴性

阳性

6358

654

7010

7012

阴性

479

488

490

合计

6369

1133

7012

490

7502

检测方法	例数	灵敏度	特异度	准确度
常规 RT-PCR 法	7502	6358/7012(90.67)	${479}/{490}\left({97.76}\right)$	6837/7502(91.14)
荧光定量 RT-PCR 法	7502	7010/7012(99.97)	${488}/{490}\left({99.59}\right)$	7498/7502(99.95)
${\chi }^{2}$	-	677.7408	4.9893	681.5082
$P$	-	0.0000	0.0255	0.0000

检测方法

例数

灵敏度

特异度

准确度

常规 RT-PCR 法

7502

6358/7012(90.67)

${479}/{490}\left({97.76}\right)$

6837/7502(91.14)

荧光定量 RT-PCR 法

7502

7010/7012(99.97)

${488}/{490}\left({99.59}\right)$

7498/7502(99.95)

${\chi }^{2}$

677.7408

4.9893

681.5082

$P$

0.0000

0.0255

0.0000

检测方法	例数	灵敏度	特异度	准确度
常规 RT-PCR 法	7502	6358/7012(90.67)	${479}/{490}\left({97.76}\right)$	6837/7502(91.14)
荧光定量 RT-PCR 法	7502	7010/7012(99.97)	${488}/{490}\left({99.59}\right)$	7498/7502(99.95)
${\chi }^{2}$	-	677.7408	4.9893	681.5082
$P$	-	0.0000	0.0255	0.0000

检测方法

例数

灵敏度

特异度

准确度

常规 RT-PCR 法

7502

6358/7012(90.67)

${479}/{490}\left({97.76}\right)$

6837/7502(91.14)

荧光定量 RT-PCR 法

7502

7010/7012(99.97)

${488}/{490}\left({99.59}\right)$

7498/7502(99.95)

${\chi }^{2}$

677.7408

4.9893

681.5082

$P$

0.0000

0.0255

0.0000

检验方法	衣原体 $\left({n ={1142}}\right)$	支原体 $\left({n ={1304}}\right)$	寄生虫($n ={1467}$)	细菌 $\left({n ={1142}}\right)$	真菌 $\left({n ={815}}\right)$	病毒 $\left({n ={1142}}\right)$	总检出 $\left({n ={7012}}\right)$
常规 RT-PCR 法	953(83.45)	1271(97.47)	1430(97.48)	953(83.45)	794(97.42)	957(83.80)	6358(90.67)
荧光定量 RT-PCR 法	1141(99.91)	1304(100.00)	1467(100.00)	1141(99.91)	${815}\left({100.00}\right)$	${1142}\left({100.00}\right)$	7010(99.97)
${\chi }^{2}$	200.7470	31.4280	35.4744	200.7470	19.2962	199.1350	677.8408
$P$	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000

检验方法

衣原体 $\left({n ={1142}}\right)$

支原体 $\left({n ={1304}}\right)$

寄生虫($n ={1467}$)

细菌 $\left({n ={1142}}\right)$

真菌 $\left({n ={815}}\right)$

病毒 $\left({n ={1142}}\right)$

总检出 $\left({n ={7012}}\right)$

常规 RT-PCR 法

953(83.45)

1271(97.47)

1430(97.48)

953(83.45)

794(97.42)

957(83.80)

6358(90.67)

荧光定量 RT-PCR 法

1141(99.91)

1304(100.00)

1467(100.00)

1141(99.91)

${815}\left({100.00}\right)$

${1142}\left({100.00}\right)$

7010(99.97)

${\chi }^{2}$

200.7470

31.4280

35.4744

200.7470

19.2962

199.1350

677.8408

$P$

0.0000

检验方法	衣原体 $\left({n ={1142}}\right)$	支原体 $\left({n ={1304}}\right)$	寄生虫($n ={1467}$)	细菌 $\left({n ={1142}}\right)$	真菌 $\left({n ={815}}\right)$	病毒 $\left({n ={1142}}\right)$	总检出 $\left({n ={7012}}\right)$
常规 RT-PCR 法	953(83.45)	1271(97.47)	1430(97.48)	953(83.45)	794(97.42)	957(83.80)	6358(90.67)
荧光定量 RT-PCR 法	1141(99.91)	1304(100.00)	1467(100.00)	1141(99.91)	${815}\left({100.00}\right)$	${1142}\left({100.00}\right)$	7010(99.97)
${\chi }^{2}$	200.7470	31.4280	35.4744	200.7470	19.2962	199.1350	677.8408
$P$	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000

检验方法

衣原体 $\left({n ={1142}}\right)$

支原体 $\left({n ={1304}}\right)$

寄生虫($n ={1467}$)

细菌 $\left({n ={1142}}\right)$

真菌 $\left({n ={815}}\right)$

病毒 $\left({n ={1142}}\right)$

总检出 $\left({n ={7012}}\right)$

常规 RT-PCR 法

953(83.45)

1271(97.47)

1430(97.48)

953(83.45)

794(97.42)

957(83.80)

6358(90.67)

荧光定量 RT-PCR 法

1141(99.91)

1304(100.00)

1467(100.00)

1141(99.91)

${815}\left({100.00}\right)$

${1142}\left({100.00}\right)$

7010(99.97)

${\chi }^{2}$

200.7470

31.4280

35.4744

200.7470

19.2962

199.1350

677.8408

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荧光定量逆转录聚合酶链式反应法在病原微生物检验中的应用研究

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郭金芳 ^*

实验室检测 | 创新应用 2024,2(10): 162-164

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实验室检测 | 创新应用 2024, 2(10): 162-164

荧光定量逆转录聚合酶链式反应法在病原微生物检验中的应用研究

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郭金芳^*

作者信息

滨州市第二人民医院检验科滨州 256800

郭金芳,副主任技师,实验室主任,研究方向:临床医学检验。

通讯作者:

*郭金芳，副主任技师，实验室主任，研究方向：临床医学检验。E-mail: 1303609333@qq.com

Analysis of application results of fluorescence quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction in pathogenic microorganism detection

Jin-Fang GUO^*

Affiliations

Department of Clinical Laboratory The Second People's Hospital of Binzhou Binzhou 256800 China

文章导航

摘要

收起

目的对荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法在病原微生物检验中的应用结果进行分析。方法回顾性分析我院检验科于 2023 年 1 月 14 日 -2023 年 12 月 14日期间检验的 7502 份微生物检验资料,分别实施了常规RT-PCR法及荧光定量RT-PCR法检验,金标准为特殊染色镜检结果,分析两种检验结果的诊断效能等指标差异。结果 ①金标准检测出阴性、阳性占比为 490:7012,常规 RT-PCR法检验结果为阴性、阳性为: 479:6358,荧光定量 RT-PCR法检验阴性、阳性比为:488:7010。②荧光定量 RT-PCR 法的灵敏度为99.97%、特异度为 99.59%、准确度为 99.95%,均高于常规RT-PCR法,有统计学意义 $\left({P <{0.05}}\right)$ 。③荧光定量 RT-PCR 法检验各类微生物检出率依次为99.91%、100.00%、100.00%、99.91%、100.00%、100.00%、99.97%,高于常规RT-PCR法,有统计学意义( $P <{0.05}$ )。结论荧光定量 RT-PCR法在病原微生物检验中诊断效能及各类微生物检出率高,能够为医生诊疗提供科学依据,可推行。

关键词

荧光定量逆转录聚合酶链式反应法 / 病原微生物 / 检验 / 常规逆转录聚合酶链式反应法 / 支原体

Abstract

收起

Objective To analyze the application results offluorescence quantitative reverse transcription-polymerase chainreaction (RT-PCR) in the detection of pathogenic microorganisms. MethodsA retrospective analysis was made of 7502 microbiological test dataexamined in the laboratory of our hospital from January 14th, 2023 toDecember 14th, 2023. Conventional RT-PCR method and fluorescentquantitative RT-PCR method were performed respectively, and the goldstandard was the results of special staining microscopy. The diagnosticefficiency and other indicators of the two test results were analyzed.Results ① The ratio of negative to positive by gold standard was ${490}: {7012}$ , the ratio of negative topositive by conventional RT-PCR was ${479}:{6358}$ , and the ratio of negative to positive by fluorescencequantitative RT-PCR was 488 : 7010. ② The sensitivity, specificity andaccuracy of fluorescence quantitative RT-PCR method were 99.97%, 99.59%and 99.95%, which were higher than that of conventional RT-PCR method,with statisticalsignificance $\left({P<{0.05}}\right)$ . ③ The detection rates of variousmicroorganisms by fluorescence quantitative RT-PCR were 99.91%, 100.00%,100.00%, 99.91%, 100.00%, 100.00%, 99.97%, higher than that byconventional RT-PCR, with statistical significance ( $P <{0.05}$ ). Conclusion Fluorescencequantitative RT-PCR method has high diagnostic efficiency and detectionrate in pathogenic microorganisms, which can provide scientific basisfor doctors’ diagnosis and treatment and can be implemented.

Key words

fluorescence quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction method / pathogenic microorganism / inspect / conventional reverse transcription-polymerase chain reaction method / mycoplasma

引用本文

郭金芳. 荧光定量逆转录聚合酶链式反应法在病原微生物检验中的应用研究. 实验室检测, 2024 , 2 (10) : 162 -164 .

Jin-Fang GUO. Analysis of application results of fluorescence quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction in pathogenic microorganism detection[J]. Laboratory Testing, 2024 , 2 (10) : 162 -164 .

正文

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0 引言

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病原微生物检验属于医学上常见的检验, 目前临床常见的微生物检验涉及传统的微生物培养法、显微镜检查、血清学检测等,目前病原微生物检测已经被广泛应用于临床各科室,如呼吸科、感染科、消化科等多种感染性疾病的诊断 ^{[ 1 ]} 。病原微生物在医学领域有至关重要的作用,医生通过对患者的样本检验结果进行分析, 能够确定患者感染病原体的重量, 并有针对性制定治疗方案。同时病原微生物检验还有助于检测抗生素的疗效,以便对产生耐药性的患者及时调整方案,并做到对疾病有效控制和预防。目前临床上将特殊染色镜检结果作为金标准, 另外还有常规逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR) 法及荧光定量 RT-PCR 法检验等, 常规 RT-PCR 法在临床较为常见, 但检测结果不太理想, 荧光定量 RT-PCR 法能够弥补常规法的不足, 同时针对样本较少的情况检测结果也十分准确 ^{[ 2 ]} 。本文研究的意义在于,分析荧光定量 RT-PCR 检验法检验的灵敏度、特异度以及准确度, 以及对不同类型病原微生物的检出率, 以证明该种方式在一定程度上比常规 RT-PCR 法更具优势。鉴于此, 为分析荧光定量 RT-PCR 法在病原微生物检验中的应用结果, 文章回顾性分析了我院检验科于 2023 年 1 月 14-2023 年 12 月 14 日期间检验的 7502 份微生物检验资料, 下文将报道。

1 资料与方法

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1.1 资料

回顾性分析我院检验科于 2023 年 1 月 14-2023 年 12 月 14 日期间检验的 7502 份微生物检验资料, 以上资料来自不同的患者,患者男女比例为 4010 : 3492 ,年龄范围 22~95 周岁, 中间值 (45.64±1.37) 岁,患者知情同意,并且基础相仿,研究可行 (P>0.05)。

1.2 纳排标准

纳入标准:所有参与的患者均属于微生物感染症状；相关资料完整；资料中途无丢失。

排除标准: 检测出酒精成分的样本; 有传染病的样本; 采集过程中被污染的样本。

1.3 方法

所有样本均进行常规RT-PCR法以及荧光定量RT-PCR法检验。

常规 RT-PCR 法检验: 检验样本为患者的粪便, 每位患者取粪 1 g,并用 ${10}\mathrm{\;{mL}}$ 无菌生理盐水混合后,再继续加入氯仿 ${0.2}\mathrm{\;{mL}}$ ,将样本均匀晃动 ${30}\mathrm{\;s}$ ,让样本和试剂充分结合,之后将样本放置于室温下等待 $3\mathrm{\;{min}}$ ,之后将样本离心处理,离心温度为 ${4}^{\circ }\mathrm{C}$ 以下, ${12000}\mathrm{\;g}$ 离心 ${15}\mathrm{\;{min}}$ ,用取上清液进行检验, 将上层清液放置到离心管中, 加入清液同等数量的异丙醇, 将其放置在 $-{20}^{\circ }\mathrm{C}$ 环境中半小时,继续离心,低于 ${4}^{\circ }\mathrm{C}$ 温度下, ${12000}\mathrm{\;g}$ 离心 ${15}\mathrm{\;{min}}$ 。将深层清液中加入 ${75}\%$ 乙醇 $1\mathrm{\;{mL}}$ ,离心, 继续在 ${4}^{\circ }\mathrm{C}$ 下以 ${7500}\mathrm{\;g}$ 离心 ${10}\mathrm{\;{min}}$ 。得到上层青叶,将残留液用滤纸吸取, 将处理好的样本放置于室温下干燥处理。后继续在处理好的样本中加入 ${20\mu }\mathrm{L}$ 焦碳酸二乙酯 (DEPC),将其混合均匀,并取出 ${1\mu }\mathrm{L}$ ,继续加入 $\mathrm{{DEPC}}{79\mu }\mathrm{L}$ ,并计算出样本的核糖核酸 (Ribonucleic Acid, RNA) 浓度, 计算方法为分光度法, 后实施逆转录处理, 合成互补脱氧核糖核酸 (DeoxyriboNucleic Acid, DNA),应用 PCR 仪进行扩增,实施 25~35 个循环检测, 取扩增后聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)产物, 进行纯化与测序处理。

荧光定量 RT-PCR 法检验: 样本采取,制作、互补 DNA 合成方法和常规 RT-PCR 法检验一致, 互补 DNA 扩增有所差异, 此法中采取特异引物与染料法荧光定量试剂盒, 检测循环次数为 40, 取扩增后 PCR 产物, 进行纯化与测序处理。

1.4 观察指标

①检验结果:对比常规 RT-PCR 法及荧光定量 RT-PCR 法检验的结果。

②诊断效能:分别计算常规RT-PCR法及荧光定量 RT-PCR法的诊断效能, 准确度 =(真阴性 + 真阳性) 例数 / 总例数 × 100%,灵敏度 = 真阳性例数 /(真阳性 + 假阴性) 例数 × 100%,特异度 = 真阴性例数 /(真阴性 + 假阳性) 例数 × 100%。

③各类病原微生物的检出率: 对比两种方法检测下不同病原微生物的检出率。

1.5 统计学分析

研究所获得数据均输入 SPSS 22.0 统计学软件, 以 [(n)%] 代表计数指标,由 ${\chi }^{2}$ 实施组间诊断效能、各种病原微生物检出率等差异检验,当 $P <{0.05}$ 具有统计学意义。

2 结果与分析

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2.1 检验结果

金标准检测出 7502 份样本中, 阴性、阳性占比为 490:7012, 常规 RT-PCR 法检验结果中, 阴性、阳性比为 479 : 6358, 荧光定量 RT-PCR 法检验阴性、阳性比为: 488 : 7010, 结果表明荧光定量 RT-PCR 法检验结果与金标准更为接近, 如表 1 所示。

2.2 诊断效能

荧光定量 RT-PCR 法的灵敏度、特异度、准确度均高于常规 RT-PCR 法,有统计学意义 $\left({P <{0.05}}\right)$ ,如表 2 所示。这是由于荧光定量 RT-PCR 能够实时监测 PCR 扩增过程, 同时一体化操作减少了人为干扰,能够有效提高检测的灵敏度和特异性。

2.3 各类病原微生物的检出率

特殊染色镜检(金标准)检测出衣原体感染 1142 份,支原体感染 1304 份,寄生虫 1467 份,细菌感染 1142 份,真菌感染 815 份, 病毒感染 1142 份, 荧光定量 RT-PCR 法检验的微生物检出率较常规 RT-PCR 法更高,差异有统计学意义 $\left({P <{0.05}}\right)$ , 见表 3 。

3 讨论与结论

收起

主要针对细菌、病毒、真菌等多种微生物的检测,是医生诊断疾病、评估感染源以及预测疾病发展趋势的主要手段之一。不同类型的病原微生物侵入患者身体,可导致多种疾病,严重威胁患者生命 ^{[ 3 ]} 。病原微生物检验的主要目的是能尽快确定患者感染的类型, 进而帮助医生对疾病进行判断及预测, 为患者健康做出保障。目前常见的有常规 RT-PCR 检验法及荧光定量 RT-PCR 法, 通过研究检验样本的分子结构和功能, 对各种疾病做出客观评估 ^{[ 4 ]} 。PCR 技术属于一种利用多种引物进行聚合酶链式反应的分子生物学技术, 能够得出多种病原微生物的 DNA、RNA 序列, RT-PCR 检验法在针对样本较少的情况下结果可能不是十分准确, 而荧光定量 RT-PCR 法的准确性、灵敏度等均比较高,同时检测结果迅速,比常规方法更具优势 ^{[ 5 ]} 。

在本研究中, 荧光定量 RT-PCR 法检验出的阴性、阳性比与金标准更为接近, 究其原因, 该种检测方式主要以计算机和软件分析实现 PCR 扩增、产物检测和定量分析,实施的是一体化操作。并且荧光定量 RT-PCR 法能够将 DNA 杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融合, 应用荧光探针和光电传导, 直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化, 以获得定量结果, 相当于在 PCR 反应过程中自动完成了 Northern 杂交, 该种方法操作简便、速度快通过计算机和分析软件实现 PCR 扩增、产物检测和定量分析一体化, 最终得到的结果观测重复性好一起在线实时观测,结果判断直观,避免人为因素干扰,因而能够与金标准更为接近,让阴性和阳性结果更加准确 ^{[ 6 ]} ; 荧光定量 RT-PCR 法的灵敏度、特异度、准确度均高于常规 RT-PCR 法 ( $P <{0.05}$ ), 证明荧光定量 RT-PCR 法可对单个基因进行逐一检验, 还能对极低浓度的微生物进行检验, 除此之外, 该种检测方法能对一系列特定微生物做到精准识别, 防止出现非特异性反应, 并在检测中克服假阳性的问题。同时应该定量 RT-PCR 能够检测非常低浓度的 RNA 分子, 甚至能够检测到单个细胞中的 RNA 表达。通过设计特异性引物, 该种检测方法可以精确地扩增目标 RNA 序列, 从而避免非特异性扩增的干扰。这种特异性使得 RT-PCR 在复杂生物样本中能够准确识别并扩增目标基因。并且可以根据实验需求进行多种变通,如使用不同的引物来扩增不同的基因片段,或者通过调整反应条件来优化扩增效果。这种灵活性使得 RT-PCR 能够适应不同的研究目的和实验条件, 最终得出的数据更加可靠, 减少了因非特异性扩增导致的假阳性结果, 从而提高了实验的准确度, 因此其灵敏度、特异度、准确度均较高 ^{[ 7 ]} ; 荧光定量 RT-PCR 法检验各类微生物检出率高于常规 RT-PCR 法 $\left({P <{0.05}}\right)$ ,证明荧光定量 RT-PCR 法在病原微生物检验中, 其结果十分接近金标准检验, 并且诊断效能较高,微生物检出率也较常规方法更高。究其原因,主要是荧光定量 RT-PCR 法结合了 PCR 技术与荧光检测技术, 在分子生物学的范畴内,能够对 PCR 产物进行标记和跟踪,实时监测反应物变化, 并能够通过扩增循环产物, 定量分析, 最终提升诊断效能以及病原微生物的检出率 ^{[ 8 ]} 。在应该定量 RT-PPCR 法检测中, PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针, 该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。开始时, 探针完整地结合在 DNA 任意一条单链上, 报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,检测不到荧光信号； PCR 扩增时, Taq 酶将探针酶切降解, 使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离, 从而荧光监测系统可接收到荧光信号, 即每扩增一条 DNA 链, 就有一个荧光分子形成, 实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步。另外, 该种方法将 DNA 杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融合, 应用荧光探针和光电传导, 直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化, 以获得定量结果, 相当于在 PCR 反应过程中自动完成了 Northern 杂交, 提升微生物检出率 ^{[ 9 - 10 ]} 。

荧光定量 RT-PCR 法在病原微生物检验中的, 灵敏度、特异度、准确度均较高,能够有效检出各种病原微生物, 对临床诊断有积极意义,可推广。

参考文献

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文献

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尚慧锋 , 武艳飞 . 实时荧光定量PCR法在检测3种泌尿生殖道病原微生物中的应用 [J]. 中国医药指南 , 2012 . 10 ( 31 ): 450 - 451 .

2024年第2卷第10期

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首发时间：2025-07-29

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滨州市第二人民医院检验科滨州 256800

通讯作者:

*郭金芳，副主任技师，实验室主任，研究方向：临床医学检验。E-mail: 1303609333@qq.com

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/sysjc/CN/1156918077267988927

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

特殊染色镜检 (金标准)	常规 RT-PCR 法	荧光定量 RT-PCR 法	合计
阳性	阴性	阳性	阴性
阳性	6358	654	7010	2	7012
阴性	11	479	2	488	490
合计	6369	1133	7012	490	7502

特殊染色镜检 (金标准)

常规 RT-PCR 法

荧光定量 RT-PCR 法

合计

阳性

阴性

阳性

阴性

阳性

6358

654

7010

7012

阴性

479

488

490

合计

6369

1133

7012

490

7502

检测方法	例数	灵敏度	特异度	准确度
常规 RT-PCR 法	7502	6358/7012(90.67)	${479}/{490}\left({97.76}\right)$	6837/7502(91.14)
荧光定量 RT-PCR 法	7502	7010/7012(99.97)	${488}/{490}\left({99.59}\right)$	7498/7502(99.95)
${\chi }^{2}$	-	677.7408	4.9893	681.5082
$P$	-	0.0000	0.0255	0.0000

检测方法

例数

灵敏度

特异度

准确度

常规 RT-PCR 法

7502

6358/7012(90.67)

${479}/{490}\left({97.76}\right)$

6837/7502(91.14)

荧光定量 RT-PCR 法

7502

7010/7012(99.97)

${488}/{490}\left({99.59}\right)$

7498/7502(99.95)

${\chi }^{2}$

677.7408

4.9893

681.5082

$P$

0.0000

0.0255

0.0000

检验方法	衣原体 $\left({n ={1142}}\right)$	支原体 $\left({n ={1304}}\right)$	寄生虫($n ={1467}$)	细菌 $\left({n ={1142}}\right)$	真菌 $\left({n ={815}}\right)$	病毒 $\left({n ={1142}}\right)$	总检出 $\left({n ={7012}}\right)$
常规 RT-PCR 法	953(83.45)	1271(97.47)	1430(97.48)	953(83.45)	794(97.42)	957(83.80)	6358(90.67)
荧光定量 RT-PCR 法	1141(99.91)	1304(100.00)	1467(100.00)	1141(99.91)	${815}\left({100.00}\right)$	${1142}\left({100.00}\right)$	7010(99.97)
${\chi }^{2}$	200.7470	31.4280	35.4744	200.7470	19.2962	199.1350	677.8408
$P$	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000	0.0000

检验方法

衣原体 $\left({n ={1142}}\right)$

支原体 $\left({n ={1304}}\right)$

寄生虫($n ={1467}$)

细菌 $\left({n ={1142}}\right)$

真菌 $\left({n ={815}}\right)$

病毒 $\left({n ={1142}}\right)$

总检出 $\left({n ={7012}}\right)$

常规 RT-PCR 法

953(83.45)

1271(97.47)

1430(97.48)

953(83.45)

794(97.42)

957(83.80)

6358(90.67)

荧光定量 RT-PCR 法

1141(99.91)

1304(100.00)

1467(100.00)

1141(99.91)

${815}\left({100.00}\right)$

${1142}\left({100.00}\right)$

7010(99.97)

${\chi }^{2}$

200.7470

31.4280

35.4744

200.7470

19.2962

199.1350

677.8408

$P$

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