实验室检测

待测成分	回归方程		线性范围	检出限(μg/mL)	定量限
莫诺苷	$y = {18364357.2276x} + {1728.6169}$	0.9999	1.99~31.84	0.22	0.68
马钱苷	$y = {16558901.7192x} + {1728.6169}$	0.9999	${2.21} \sim {35.32}$	0.41	0.81
阿魏酸	$y = {51919627.8073x} + {17733.7323}$	0.9999	0.37~5.97	0.01	0.08
丹皮酚	$y = {52873726.8979x} + {1127.8704}$	0.9999	${4.62} \sim {73.88}$	0.12	0.38

待测成分

回归方程

线性范围

检出限(μg/mL)

定量限

莫诺苷

$y = {18364357.2276x} + {1728.6169}$

0.9999

1.99~31.84

0.22

0.68

马钱苷

$y = {16558901.7192x} + {1728.6169}$

0.9999

${2.21} \sim {35.32}$

0.41

0.81

阿魏酸

$y = {51919627.8073x} + {17733.7323}$

0.9999

0.37~5.97

0.01

0.08

丹皮酚

$y = {52873726.8979x} + {1127.8704}$

0.9999

${4.62} \sim {73.88}$

0.12

0.38

待测成分	回归方程		线性范围	检出限(μg/mL)	定量限
莫诺苷	$y = {18364357.2276x} + {1728.6169}$	0.9999	1.99~31.84	0.22	0.68
马钱苷	$y = {16558901.7192x} + {1728.6169}$	0.9999	${2.21} \sim {35.32}$	0.41	0.81
阿魏酸	$y = {51919627.8073x} + {17733.7323}$	0.9999	0.37~5.97	0.01	0.08
丹皮酚	$y = {52873726.8979x} + {1127.8704}$	0.9999	${4.62} \sim {73.88}$	0.12	0.38

待测成分

回归方程

线性范围

检出限(μg/mL)

定量限

莫诺苷

$y = {18364357.2276x} + {1728.6169}$

0.9999

1.99~31.84

0.22

0.68

马钱苷

$y = {16558901.7192x} + {1728.6169}$

0.9999

${2.21} \sim {35.32}$

0.41

0.81

阿魏酸

$y = {51919627.8073x} + {17733.7323}$

0.9999

0.37~5.97

0.01

0.08

丹皮酚

$y = {52873726.8979x} + {1127.8704}$

0.9999

${4.62} \sim {73.88}$

0.12

0.38

成分	峰面积	平均值	RSD(%)
1	2	3	4	5	6
莫诺苷	729854	729338	732614	729365	729605	729105	729980	0.18
马钱苷	717106	714913	716360	715840	716067	714067	715726	0.15
阿魏酸	392586	391658	392118	391754	392405	390240	391794	0.21
丹皮酚	4636717	4632003	4645078	4647388	4652024	4662024	4645872	0.23

成分

峰面积

平均值

RSD(%)

莫诺苷

729854

729338

732614

729365

729605

729105

729980

0.18

马钱苷

717106

714913

716360

715840

716067

714067

715726

0.15

阿魏酸

392586

391658

392118

391754

392405

390240

391794

0.21

丹皮酚

4636717

4632003

4645078

4647388

4652024

4662024

4645872

0.23

成分	峰面积	平均值	RSD(%)
1	2	3	4	5	6
莫诺苷	729854	729338	732614	729365	729605	729105	729980	0.18
马钱苷	717106	714913	716360	715840	716067	714067	715726	0.15
阿魏酸	392586	391658	392118	391754	392405	390240	391794	0.21
丹皮酚	4636717	4632003	4645078	4647388	4652024	4662024	4645872	0.23

成分

峰面积

平均值

RSD(%)

莫诺苷

729854

729338

732614

729365

729605

729105

729980

0.18

马钱苷

717106

714913

716360

715840

716067

714067

715726

0.15

阿魏酸

392586

391658

392118

391754

392405

390240

391794

0.21

丹皮酚

4636717

4632003

4645078

4647388

4652024

4662024

4645872

0.23

成分	1	2	3	4	5	6	平均值 (mg/g)	RSD(%)
莫诺苷	0.268	0.266	0.271	0.269	0.268	0.269	0.268	0.57
马钱苷	0.226	0.223	0.232	0.226	0.226	0.223	0.226	1.39
阿魏酸	0.043	0.042	0.043	0.042	0.043	0.042	0.042	1.70
丹皮酚	0.514	0.510	0.511	0.514	0.513	0.513	0.513	0.34

成分

平均值 (mg/g)

RSD(%)

莫诺苷

0.268

0.266

0.271

0.269

0.268

0.269

0.268

0.57

马钱苷

0.226

0.223

0.232

0.226

0.223

0.226

1.39

阿魏酸

0.043

0.042

0.043

0.042

0.043

0.042

1.70

丹皮酚

0.514

0.510

0.511

0.514

0.513

0.34

成分	1	2	3	4	5	6	平均值 (mg/g)	RSD(%)
莫诺苷	0.268	0.266	0.271	0.269	0.268	0.269	0.268	0.57
马钱苷	0.226	0.223	0.232	0.226	0.226	0.223	0.226	1.39
阿魏酸	0.043	0.042	0.043	0.042	0.043	0.042	0.042	1.70
丹皮酚	0.514	0.510	0.511	0.514	0.513	0.513	0.513	0.34

成分

平均值 (mg/g)

RSD(%)

莫诺苷

0.268

0.266

0.271

0.269

0.268

0.269

0.268

0.57

马钱苷

0.226

0.223

0.232

0.226

0.223

0.226

1.39

阿魏酸

0.043

0.042

0.043

0.042

0.043

0.042

1.70

丹皮酚

0.514

0.510

0.511

0.514

0.513

0.34

成分	取样量(g)	样品中成分含量(mg)	加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(%)	平均回收率(%)	RSD(%)
莫诺苷	0.5007	0.138	0.24	0.380	101.43		1.01%
0.5022	0.138	0.24	0.383	101.89
0.5031	0.138	0.24	0.380	100.66
0.5085	0.140	0.12	0.259	99.88
0.5062	0.139	0.12	0.257	98.71	100.23%
0.5055	0.139	0.12	0.258	99.19
0.5048	0.139	0.36	0.497	99.84
0.5077	0.140	0.36	0.500	100.44
0.5034	0.139	0.36	0.497	100.00
马钱苷	0.5007	0.126	0.26	0.390	99.59		1.07
0.5022	0.127	0.26	0.393	100.62
0.5031	0.127	0.26	0.390	99.53
0.5085	0.128	0.13	0.262	101.25
0.5062	0.128	0.13	0.260	101.57	100.39
0.5055	0.127	0.13	0.260	102.25
0.5048	0.127	0.40	0.523	99.51
0.5077	0.128	0.40	0.527	99.85
0.5034	0.127	0.40	0.524	99.32
阿魏酸	0.5007	0.300	0.55	0.847	98.74	99.87	1.29
0.5022	0.301	0.55	0.858	101.36
0.5031	0.302	0.55	0.849	99.52
0.5085	0.305	0.28	0.578	98.78
0.5062	0.303	0.28	0.578	98.12
0.5055	0.303	0.28	0.581	99.34
0.5048	0.303	0.83	1.150	101.94
0.5077	0.304	0.83	1.141	100.69
0.5034	0.302	0.83	1.136	100.32
丹皮酚	0.5007	0.024	0.04	0.069	99.36		0.82
0.5022	0.024	0.04	0.069	100.38	99.02
0.5031	0.024	0.04	0.069	98.99
丹皮酚	0.5085	0.025	0.02	0.047	98.26	99.02	0.82
0.5062	0.025	0.02	0.047	98.45
0.5055	0.025	0.02	0.047	99.66
0.5048	0.024	0.07	0.090	97.88
0.5077	0.025	0.07	0.091	98.52
0.5034	0.024	0.07	0.091	99.68

成分

取样量(g)

样品中成分含量(mg)

加入量(mg)

测得量(mg)

回收率(%)

平均回收率(%)

RSD(%)

莫诺苷

0.5007

0.138

0.24

0.380

101.43

1.01%

0.5022

0.138

0.24

0.383

101.89

0.5031

0.138

0.24

0.380

100.66

0.5085

0.140

0.12

0.259

99.88

0.5062

0.139

0.12

0.257

98.71

100.23%

0.5055

0.139

0.12

0.258

99.19

0.5048

0.139

0.36

0.497

99.84

0.5077

0.140

0.36

0.500

100.44

0.5034

0.139

0.36

0.497

100.00

马钱苷

0.5007

0.126

0.26

0.390

99.59

1.07

0.5022

0.127

0.26

0.393

100.62

0.5031

0.127

0.26

0.390

99.53

0.5085

0.128

0.13

0.262

101.25

0.5062

0.128

0.13

0.260

101.57

100.39

0.5055

0.127

0.13

0.260

102.25

0.5048

0.127

0.40

0.523

99.51

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0.128

0.40

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99.85

0.5034

0.127

0.40

0.524

99.32

阿魏酸

0.5007

0.300

0.55

0.847

98.74

99.87

1.29

0.5022

0.301

0.55

0.858

101.36

0.5031

0.302

0.55

0.849

99.52

0.5085

0.305

0.28

0.578

98.78

0.5062

0.303

0.28

0.578

98.12

0.5055

0.303

0.28

0.581

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0.303

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1.150

101.94

0.5077

0.304

0.83

1.141

100.69

0.5034

0.302

0.83

1.136

100.32

丹皮酚

0.5007

0.024

0.04

0.069

99.36

0.82

0.5022

0.024

0.04

0.069

100.38

99.02

0.5031

0.024

0.04

0.069

98.99

丹皮酚

0.5085

0.025

0.02

0.047

98.26

99.02

0.82

0.5062

0.025

0.02

0.047

98.45

0.5055

0.025

0.02

0.047

99.66

0.5048

0.024

0.07

0.090

97.88

0.5077

0.025

0.07

0.091

98.52

0.5034

0.024

0.07

0.091

99.68

成分	取样量(g)	样品中成分含量(mg)	加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(%)	平均回收率(%)	RSD(%)
莫诺苷	0.5007	0.138	0.24	0.380	101.43		1.01%
0.5022	0.138	0.24	0.383	101.89
0.5031	0.138	0.24	0.380	100.66
0.5085	0.140	0.12	0.259	99.88
0.5062	0.139	0.12	0.257	98.71	100.23%
0.5055	0.139	0.12	0.258	99.19
0.5048	0.139	0.36	0.497	99.84
0.5077	0.140	0.36	0.500	100.44
0.5034	0.139	0.36	0.497	100.00
马钱苷	0.5007	0.126	0.26	0.390	99.59		1.07
0.5022	0.127	0.26	0.393	100.62
0.5031	0.127	0.26	0.390	99.53
0.5085	0.128	0.13	0.262	101.25
0.5062	0.128	0.13	0.260	101.57	100.39
0.5055	0.127	0.13	0.260	102.25
0.5048	0.127	0.40	0.523	99.51
0.5077	0.128	0.40	0.527	99.85
0.5034	0.127	0.40	0.524	99.32
阿魏酸	0.5007	0.300	0.55	0.847	98.74	99.87	1.29
0.5022	0.301	0.55	0.858	101.36
0.5031	0.302	0.55	0.849	99.52
0.5085	0.305	0.28	0.578	98.78
0.5062	0.303	0.28	0.578	98.12
0.5055	0.303	0.28	0.581	99.34
0.5048	0.303	0.83	1.150	101.94
0.5077	0.304	0.83	1.141	100.69
0.5034	0.302	0.83	1.136	100.32
丹皮酚	0.5007	0.024	0.04	0.069	99.36		0.82
0.5022	0.024	0.04	0.069	100.38	99.02
0.5031	0.024	0.04	0.069	98.99
丹皮酚	0.5085	0.025	0.02	0.047	98.26	99.02	0.82
0.5062	0.025	0.02	0.047	98.45
0.5055	0.025	0.02	0.047	99.66
0.5048	0.024	0.07	0.090	97.88
0.5077	0.025	0.07	0.091	98.52
0.5034	0.024	0.07	0.091	99.68

成分

取样量(g)

样品中成分含量(mg)

加入量(mg)

测得量(mg)

回收率(%)

平均回收率(%)

RSD(%)

莫诺苷

0.5007

0.138

0.24

0.380

101.43

1.01%

0.5022

0.138

0.24

0.383

101.89

0.5031

0.138

0.24

0.380

100.66

0.5085

0.140

0.12

0.259

99.88

0.5062

0.139

0.12

0.257

98.71

100.23%

0.5055

0.139

0.12

0.258

99.19

0.5048

0.139

0.36

0.497

99.84

0.5077

0.140

0.36

0.500

100.44

0.5034

0.139

0.36

0.497

100.00

马钱苷

0.5007

0.126

0.26

0.390

99.59

1.07

0.5022

0.127

0.26

0.393

100.62

0.5031

0.127

0.26

0.390

99.53

0.5085

0.128

0.13

0.262

101.25

0.5062

0.128

0.13

0.260

101.57

100.39

0.5055

0.127

0.13

0.260

102.25

0.5048

0.127

0.40

0.523

99.51

0.5077

0.128

0.40

0.527

99.85

0.5034

0.127

0.40

0.524

99.32

阿魏酸

0.5007

0.300

0.55

0.847

98.74

99.87

1.29

0.5022

0.301

0.55

0.858

101.36

0.5031

0.302

0.55

0.849

99.52

0.5085

0.305

0.28

0.578

98.78

0.5062

0.303

0.28

0.578

98.12

0.5055

0.303

0.28

0.581

99.34

0.5048

0.303

0.83

1.150

101.94

0.5077

0.304

0.83

1.141

100.69

0.5034

0.302

0.83

1.136

100.32

丹皮酚

0.5007

0.024

0.04

0.069

99.36

0.82

0.5022

0.024

0.04

0.069

100.38

99.02

0.5031

0.024

0.04

0.069

98.99

丹皮酚

0.5085

0.025

0.02

0.047

98.26

99.02

0.82

0.5062

0.025

0.02

0.047

98.45

0.5055

0.025

0.02

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99.66

0.5048

0.024

0.07

0.090

97.88

0.5077

0.025

0.07

0.091

98.52

0.5034

0.024

0.07

0.091

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编号	莫诺苷	马钱苷	阿魏酸	丹皮酚
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S7	0.257	0.224	0.041	0.487
S8	0.225	0.219	0.030	0.516
S9	0.242	0.187	0.039	0.461
平均值	0.242	0.209	0.035	0.518

编号

莫诺苷

马钱苷

阿魏酸

丹皮酚

0.246

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0.553

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0.534

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0.203

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0.215

0.214

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0.242

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0.039

0.461

平均值

0.242

0.209

0.035

0.518

编号	莫诺苷	马钱苷	阿魏酸	丹皮酚
S1	0.246	0.206	0.032	0.553
S2	0.269	0.211	0.035	0.534
S3	0.221	0.203	0.041	0.523
S4	0.215	0.214	0.038	0.512
S5	0.252	0.223	0.027	0.572
S6	0.249	0.196	0.034	0.501
S7	0.257	0.224	0.041	0.487
S8	0.225	0.219	0.030	0.516
S9	0.242	0.187	0.039	0.461
平均值	0.242	0.209	0.035	0.518

编号

莫诺苷

马钱苷

阿魏酸

丹皮酚

0.246

0.206

0.032

0.553

0.269

0.211

0.035

0.534

0.221

0.203

0.041

0.523

0.215

0.214

0.038

0.512

0.252

0.223

0.027

0.572

0.249

0.196

0.034

0.501

0.257

0.224

0.041

0.487

0.225

0.219

0.030

0.516

0.242

0.187

0.039

0.461

平均值

0.242

0.209

0.035

0.518

高效液相色谱法同时测定定眩丸中4种成分的含量

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张鑫 , 杨晓霞 , 郑俭 , 柴国林 ^*

实验室检测 | 创新应用 2025,3(1): 1-4

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实验室检测 | 创新应用 2025, 3(1): 1-4

高效液相色谱法同时测定定眩丸中4种成分的含量

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张鑫, 杨晓霞, 郑俭, 柴国林^*

作者信息

兰州佛慈制药股份有限公司兰州 730300

张鑫，工程师，主要研究方向为中药鉴定及制剂质量控制。

通讯作者:

^*柴国林，正高级工程师，主要研究方向为中药鉴定中药现代化质量控制研究。E-mail: 3136174195@qq.com

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摘要

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目的建立高效液相色谱法同时测定定眩丸中四个成分的含量测定方法。方法采用COSMOSIL 5C18MSII (4.6 mm ID × 250 mm, 5µm)色谱柱;流动相为乙腈0.3%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长为240nm(莫诺苷、马钱苷),274nm(丹皮酚),316nm(阿魏酸);柱温为 30℃;进样量为10µL。结果上述4个成分分别在一定的浓度范围内与峰面积的线性关系良好,平均加样回收率分别为100.23%、100.39%、99.87%、99.02%,RSD分别为1.01%, 1.07%、1.29%、0.82%。结论该研究建立的HPLC同时测定定眩丸中4个成分含量的方法简便、准确、重复性好,灵敏度高,可为定眩丸的质量控制提供参考。

关键词

定眩丸 / 高效液相色谱 / 含量测定 / 质量控制

引用本文

张鑫, 杨晓霞, 郑俭, 柴国林. 高效液相色谱法同时测定定眩丸中4种成分的含量. 实验室检测, 2025 , 3 (1) : 1 -4 .

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0 引言

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定眩丸为兰州佛慈制药股份有限公司独家产品, 用于头目眩晕,耳鸣耳聋心惊失眠,手面麻木,潮热盗汗,痰多胸闷等症^[1]。现代药效学研究证明还具有镇静催眠、抗眩晕作用^[1], 疗效确切。主要由山茱萸(制)、牡丹皮、当归、川芎、等中药组成。具有滋补肝肾,清热化痰的功效。山茱萸具有补益肝肾、涩精固脱等功效^[2],常用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精等症,所含的环烯醚萜苷类化合物有马钱苷、莫诺苷^[3],是其主要活性成分。川芎 - 当归药对,具有扩张血管,增加冠脉血量,改善心肌缺血和抑制血小板凝聚等药理作用^[4]。阿魏酸作为川芎和当归的有效成分, 是当归和川芎质量检测中的一个必要指标^[5],牡丹皮的传统功效为清热凉血、活血化瘀,具有抗炎、解热、抗血小板聚集、抗血栓形成、改善血液流变性、等与传统功效相对应的药理作用, 丹皮酚是牡丹皮的主要活性成分^[6]。原有质量标准中采用薄层扫描法仅对山茱萸中的熊果酸含量做了测定^[7],并不能完全反映定眩丸的内在质量,因此本研究对其山茱萸、当归、川芎及牡丹皮建立了相应含量测定方法, 为提高该产品的质量控制提供参考。

1 材料与方法

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1.1 材料与试剂

实验所用 9 批定眩丸样品均来自兰州佛慈制药股份有限公司。莫诺苷(批号 111998-202104,质量百分数为 96.8%)；马钱苷(批号 111640-201808,质量百分数为 99.0%)；丹皮酚 (批号 110708-201908,质量百分数为 99.8%)；阿魏酸(批号 110773-201915,质量百分数为 99.4%)以上对照品均来自中国食品药品检定研究院。乙腈(色谱纯,批号 50102,质量百分数为 99.9%,迪马科技)；甲醇(色谱纯,批号 50101 质量百分数为 99.9%,迪马科技)；磷酸(色谱纯,批号为 2024090,质量百分数为 85%)。

1.2 仪器

LC-20AB 型高效液相色谱仪、SIC-20AC 自动进样器、 SPD-M20A 二极管阵列检测器、C10-20AC 柱温箱, 均购自日本岛津公司；XPE105 型电子天平 (梅特勒仪器有限公司); SK-S26 电热恒温水浴锅 (上海精宏实验设备有限公司)；超纯水仪 (四川优普超纯科技有限公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 液相色谱条件

采用 COSMOSIL 5C18-MS-II (${4.6}\mathrm{\;{mm}}\mathrm{{ID}}\times {250}\mathrm{\;{mm}},{5\mu }\mathrm{m}$ ) 色谱柱；流动相为乙腈 (A)-0.3% 磷酸溶液 (B),按以下方式进行梯度洗脱,(0~5 min,5%~8% A；5~20 min,8%~8% A； 20~35 min,8%~18% A； 35~45 min,18%~45%； 45~55 min, 45%~90% A),流速为${1.0}\mathrm{\;{mL}}/\mathrm{{min}}$ ；莫诺苷、马钱苷的检测波长为${240}\mathrm{\;{nm}}$ ,丹皮酚的为${274}\mathrm{\;{nm}}$ ,阿魏酸的为${316}\mathrm{\;{nm}}$ ; 柱温为${30}^{\circ }\mathrm{C}$ ; 进样量为${10\mu }\mathrm{L}$ 。理论板数按马钱苷峰计应不低于 4000, 各主峰之间的分离度应大于 1.5 。

1.3.2 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的四种对照品适量, 加 80% 甲醇溶解,制成每$1\mathrm{\;{mL}}$ 分别含${39.80\mu }\mathrm{g}$ 莫诺苷、${44.14\mu }\mathrm{g}$ 马钱苷、7.46 μg 阿魏酸、92.35 μg 丹皮酚的混合对照品溶液。

1.3.3 供试品溶液的制备

取定眩丸水蜜丸 30 丸,研磨,过三号筛,精密称取约$1\mathrm{\;g}$ , 置锥形瓶中,加${80}\%$ 甲醇${50}\mathrm{\;{mL}}$ ,密塞称定重量,加热回流 1 小时,放冷; 加 80% 甲醇补足减失的重量,摇匀,以 0.45μm 微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

1.3.4 阴性样品溶液的制备

按定眩丸水丸的处方工艺, 分别制备缺酒萸肉、缺当归、川芎及缺牡丹皮的样品溶液,按 1.3.1 项下色谱条件测定,色谱图如图 1所示, 显示阴性样品无干扰。

2 结果与分析

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2.1 测定结果

取对照品溶液和定眩丸样品溶液, 进样测定, 混合对照品及样品溶液色谱图如图 2~3。理论板数按马钱苷峰计为 18400,符合系统色谱条件要求,4 个成分之间均可达到分离要求。

2.2 线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液 0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、${8.0}\mathrm{\;{mL}}$,分别置${10}\mathrm{\;{mL}}$容量瓶中,加${80}\%$甲醇定容,摇匀,分别配制成对照品溶液,按 1.3.1 项下色谱条件进行测定,绘制计算浓度与峰面积的线性回归方程, 绘制标准曲线, 并分别按照信噪比$\mathrm{S}/\mathrm{N}= 3$和$\mathrm{S}/\mathrm{N}= {10}$时测定检测限和定量。结果见表 1 可知, 四种成分分别在各自浓度范围内, 线性关系良好, 且各自最低浓度均能达到检出限与定量限。

2.3 精密度试验

取 1.3.2 项下制得的对照品溶液, 按 1.3.1 项下的色谱条件连续进样 6 次, 记录峰面积。结果由表 2 可知, RSD 分别为 0.18%、0.15%、0.21%、0.23%,均小于 2.0%,表明仪器精密度良好。

2.4 重复性试验

取同一个的定眩丸样品, 按 1.3.3 项下方法制备供试品溶液, 平行 6 份, 按 1.3.1 项下的色谱条件进样分析, 记录峰面积并计算含量及平均值。结果如表 3 所示, 四种成分的平均含量分别为 0.268、0.226、0.04、0.513 mg/g, RSD 分别为 0.57%、 1.39%、1.70%、0.34%,结果表明本法的重复性良好。

2.5 加样回收率试验

精密称取已知含量的供试品 9 份, 供试品按 1.3.3 项下操作制备供试品溶液, 分别加入一定量的 1.3.2 项下的对照品溶液, 混合均匀, 按 1.3.1 项下的色谱条件进样并测定含量, 计算回收率。结果如表 4 所示, 四种成分的平均回收率为分别为 99.02%~100.39%, RSD 分别为 0.82%~1.29%,表明该方法具有良好的准确度。

2.6 样品含量测定

取 6 批定眩丸样品溶液,照 1.3.3 项制备供试品溶液,精密吸取供试品溶液${10\mu }\mathrm{L}$,在1.3.1项下色谱条件下进样分析,测定峰面积, 计算样品中四种含量, 见表 5。

3 讨论与结论

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预实验过程中, 分别将莫诺苷、马钱苷、丹皮酚、阿魏酸对照品按 1.3.1 项下色谱条件下进样分析,分别记录在波长${190}\sim {800}\mathrm{\;{nm}}$范围内光谱图, 确定具有最大吸收的波长, 结果显示莫诺苷、马钱苷、丹皮酚、阿魏酸的最佳检测波长分别为 240、274、316nm。

前期考察了甲醇-水、乙腈-水系统及甲醇-磷酸溶液、乙腈 - 磷酸溶液^[7-11]等流动相配比,经过反复试验发现乙腈 -0.3% 磷酸溶液洗脱能力更强, 四种成分均具有良好的峰型且与相邻杂峰之间无干扰。故最终确定采用乙腈 -0.3% 磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱的方法检测。

分别考察了回流、超声 2 种提取方法制备供试品溶液, 结果使用加热回流的方式提取的四种成分含量更高, 故选择用甲醇回流提取方法; 又通过改变甲醇浓度比较提取效果结果, 80% 甲醇溶液提取更完全。使用 80% 加热回流分别提取 0.5 、$1\text{、}{1.5}\text{、}2\mathrm{\;h}$,发现回流$1\mathrm{\;h}$后指标成分的四种成分含量不再增加；因此使用 80% 甲醇加热回流提取 1.5 小时制备供试品溶液。

通过对 9 批不同批次的定眩丸进行含量测定可以看出莫诺苷含量范围为${0.215}\sim {0.269}\mathrm{{mg}}/\mathrm{g}$,马钱苷含量范围为 0.187 ~0.224 mg/g,阿魏酸含量范围为 0.027 ~0.041 mg/g,丹皮酚含量范围为${0.461}\sim {0.572}\mathrm{{mg}}/\mathrm{g}$,由此可见上述四种成分的含量均具有差异性。这可能是因为采用了不同含量的原料造成了含量的差异性。

由于定眩丸由山茱萸、牡丹皮、当归、等 10 余种中药组成,所含有效成分复杂。现有标准针对阿魏酸、丹皮酚、熊果酸三种成分进行了薄层色谱鉴别及采用薄层扫描法对熊果酸含量进行了测定。并未对阿魏酸、丹皮酚的含量进行检测,且熊果酸的测定具有提取过程复杂、检测灵敏度低、准确性差等缺陷。《中华人民共和国药典(2020 版)》选择莫诺苷、马钱苷作为山茱萸的指标性成分。本实验建立了高效液相色谱法同时测定阿魏酸、丹皮酚、莫诺苷、马钱苷含量的方法, 分别对当归、川芎、牡丹皮、山茱萸有效成分含量做了检测,进一步完善和提高了质量标准。由于定眩丸成分的复杂性与多样性本研究涉及的检测成分的种类目前还不够完整, 测定的成分种类有待提高, 以后随着方法的不断完善可以增加定眩丸中其他药材的特征性成分检测。

本研究通过对检测波长、流动相和提取方法的优化, 建立了高效液相色谱法测定定眩丸中四种有效成分的方法具有良好的准确性、重复性及操作简便、灵敏度高的特点。这些结果为定眩丸含量标准的提高及其他成分的质量控制和稳定性考察提供了重要的理论依据与实践参考, 也有利于企业对定眩丸原料及产品质量实行更加有效地控制。

基金

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甘肃省重点研发(2021GSMPA-KL01)
甘肃省重点研发(2021GSMPA-KL02)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

[1]

耿铁海. 新药“定眩丸”的研制简介[J]. 中药新药与临床药理, 1991,(z1):61-62.

[2]

张程荣, 曹岗, 张云, 等. 山茱萸的化学、药理与炮制研究进展[J]. 中华中医药学刊, 2011, 29(09):2002-2005.

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张莹莹, 张科, 宋崟, 等. “川芎—当归”药对主要活性成分的网络药理学研究[J]. 安徽医药, 2023, 27(01):19-24.

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[6]

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国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2020 版)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2020: 139-140.

[10]

国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2020 版)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2020: 42-43.

[11]

国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2020 版)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2020: 179.

2025年第3卷第1期

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兰州佛慈制药股份有限公司兰州 730300

通讯作者:

^*柴国林，正高级工程师，主要研究方向为中药鉴定中药现代化质量控制研究。E-mail: 3136174195@qq.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

待测成分	回归方程		线性范围	检出限(μg/mL)	定量限
莫诺苷	$y = {18364357.2276x} + {1728.6169}$	0.9999	1.99~31.84	0.22	0.68
马钱苷	$y = {16558901.7192x} + {1728.6169}$	0.9999	${2.21} \sim {35.32}$	0.41	0.81
阿魏酸	$y = {51919627.8073x} + {17733.7323}$	0.9999	0.37~5.97	0.01	0.08
丹皮酚	$y = {52873726.8979x} + {1127.8704}$	0.9999	${4.62} \sim {73.88}$	0.12	0.38

待测成分

回归方程

线性范围

检出限(μg/mL)

定量限

莫诺苷

$y = {18364357.2276x} + {1728.6169}$

0.9999

1.99~31.84

0.22

0.68

马钱苷

$y = {16558901.7192x} + {1728.6169}$

0.9999

${2.21} \sim {35.32}$

0.41

0.81

阿魏酸

$y = {51919627.8073x} + {17733.7323}$

0.9999

0.37~5.97

0.01

0.08

丹皮酚

$y = {52873726.8979x} + {1127.8704}$

0.9999

${4.62} \sim {73.88}$

0.12

0.38

成分	峰面积	平均值	RSD(%)
1	2	3	4	5	6
莫诺苷	729854	729338	732614	729365	729605	729105	729980	0.18
马钱苷	717106	714913	716360	715840	716067	714067	715726	0.15
阿魏酸	392586	391658	392118	391754	392405	390240	391794	0.21
丹皮酚	4636717	4632003	4645078	4647388	4652024	4662024	4645872	0.23

成分

峰面积

平均值

RSD(%)

莫诺苷

729854

729338

732614

729365

729605

729105

729980

0.18

马钱苷

717106

714913

716360

715840

716067

714067

715726

0.15

阿魏酸

392586

391658

392118

391754

392405

390240

391794

0.21

丹皮酚

4636717

4632003

4645078

4647388

4652024

4662024

4645872

0.23

成分	1	2	3	4	5	6	平均值 (mg/g)	RSD(%)
莫诺苷	0.268	0.266	0.271	0.269	0.268	0.269	0.268	0.57
马钱苷	0.226	0.223	0.232	0.226	0.226	0.223	0.226	1.39
阿魏酸	0.043	0.042	0.043	0.042	0.043	0.042	0.042	1.70
丹皮酚	0.514	0.510	0.511	0.514	0.513	0.513	0.513	0.34

成分

平均值 (mg/g)

RSD(%)

莫诺苷

0.268

0.266

0.271

0.269

0.268

0.269

0.268

0.57

马钱苷

0.226

0.223

0.232

0.226

0.223

0.226

1.39

阿魏酸

0.043

0.042

0.043

0.042

0.043

0.042

1.70

丹皮酚

0.514

0.510

0.511

0.514

0.513

0.34

成分	取样量(g)	样品中成分含量(mg)	加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(%)	平均回收率(%)	RSD(%)
莫诺苷	0.5007	0.138	0.24	0.380	101.43		1.01%
0.5022	0.138	0.24	0.383	101.89
0.5031	0.138	0.24	0.380	100.66
0.5085	0.140	0.12	0.259	99.88
0.5062	0.139	0.12	0.257	98.71	100.23%
0.5055	0.139	0.12	0.258	99.19
0.5048	0.139	0.36	0.497	99.84
0.5077	0.140	0.36	0.500	100.44
0.5034	0.139	0.36	0.497	100.00
马钱苷	0.5007	0.126	0.26	0.390	99.59		1.07
0.5022	0.127	0.26	0.393	100.62
0.5031	0.127	0.26	0.390	99.53
0.5085	0.128	0.13	0.262	101.25
0.5062	0.128	0.13	0.260	101.57	100.39
0.5055	0.127	0.13	0.260	102.25
0.5048	0.127	0.40	0.523	99.51
0.5077	0.128	0.40	0.527	99.85
0.5034	0.127	0.40	0.524	99.32
阿魏酸	0.5007	0.300	0.55	0.847	98.74	99.87	1.29
0.5022	0.301	0.55	0.858	101.36
0.5031	0.302	0.55	0.849	99.52
0.5085	0.305	0.28	0.578	98.78
0.5062	0.303	0.28	0.578	98.12
0.5055	0.303	0.28	0.581	99.34
0.5048	0.303	0.83	1.150	101.94
0.5077	0.304	0.83	1.141	100.69
0.5034	0.302	0.83	1.136	100.32
丹皮酚	0.5007	0.024	0.04	0.069	99.36		0.82
0.5022	0.024	0.04	0.069	100.38	99.02
0.5031	0.024	0.04	0.069	98.99
丹皮酚	0.5085	0.025	0.02	0.047	98.26	99.02	0.82
0.5062	0.025	0.02	0.047	98.45
0.5055	0.025	0.02	0.047	99.66
0.5048	0.024	0.07	0.090	97.88
0.5077	0.025	0.07	0.091	98.52
0.5034	0.024	0.07	0.091	99.68

成分

取样量(g)

样品中成分含量(mg)

加入量(mg)

测得量(mg)

回收率(%)

平均回收率(%)

RSD(%)

莫诺苷

0.5007

0.138

0.24

0.380

101.43

1.01%

0.5022

0.138

0.24

0.383

101.89

0.5031

0.138

0.24

0.380

100.66

0.5085

0.140

0.12

0.259

99.88

0.5062

0.139

0.12

0.257

98.71

100.23%

0.5055

0.139

0.12

0.258

99.19

0.5048

0.139

0.36

0.497

99.84

0.5077

0.140

0.36

0.500

100.44

0.5034

0.139

0.36

0.497

100.00

马钱苷

0.5007

0.126

0.26

0.390

99.59

1.07

0.5022

0.127

0.26

0.393

100.62

0.5031

0.127

0.26

0.390

99.53

0.5085

0.128

0.13

0.262

101.25

0.5062

0.128

0.13

0.260

101.57

100.39

0.5055

0.127

0.13

0.260

102.25

0.5048

0.127

0.40

0.523

99.51

0.5077

0.128

0.40

0.527

99.85

0.5034

0.127

0.40

0.524

99.32

阿魏酸

0.5007

0.300

0.55

0.847

98.74

99.87

1.29

0.5022

0.301

0.55

0.858

101.36

0.5031

0.302

0.55

0.849

99.52

0.5085

0.305

0.28

0.578

98.78

0.5062

0.303

0.28

0.578

98.12

0.5055

0.303

0.28

0.581

99.34

0.5048

0.303

0.83

1.150

101.94

0.5077

0.304

0.83

1.141

100.69

0.5034

0.302

0.83

1.136

100.32

丹皮酚

0.5007

0.024

0.04

0.069

99.36

0.82

0.5022

0.024

0.04

0.069

100.38

99.02

0.5031

0.024

0.04

0.069

98.99

丹皮酚

0.5085

0.025

0.02

0.047

98.26

99.02

0.82

0.5062

0.025

0.02

0.047

98.45

0.5055

0.025

0.02

0.047

99.66

0.5048

0.024

0.07

0.090

97.88

0.5077

0.025

0.07

0.091

98.52

0.5034

0.024

0.07

0.091

99.68

编号	莫诺苷	马钱苷	阿魏酸	丹皮酚
S1	0.246	0.206	0.032	0.553
S2	0.269	0.211	0.035	0.534
S3	0.221	0.203	0.041	0.523
S4	0.215	0.214	0.038	0.512
S5	0.252	0.223	0.027	0.572
S6	0.249	0.196	0.034	0.501
S7	0.257	0.224	0.041	0.487
S8	0.225	0.219	0.030	0.516
S9	0.242	0.187	0.039	0.461
平均值	0.242	0.209	0.035	0.518

编号

莫诺苷

马钱苷

阿魏酸

丹皮酚

0.246

0.206

0.032

0.553

0.269

0.211

0.035

0.534

0.221

0.203

0.041

0.523

0.215

0.214

0.038

0.512

0.252

0.223

0.027

0.572

0.249

0.196

0.034

0.501

0.257

0.224

0.041

0.487

0.225

0.219

0.030

0.516

0.242

0.187

0.039

0.461

平均值

0.242

0.209

0.035

0.518