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目的 检测并分析母系突变的亲子鉴定案件,研究基因突变的意义和影响。方法 采用MicroreaderTM 21D ID System 试剂盒、MicroreaderTM 23SP ID System 试剂盒和 HuaxiaTM Platinum 扩增试剂盒对1例疑似存在遗传异常的家系进行常染色体 STR检测分析。结果 D2S441 基因座发生了母系突变,通过增加位点辅助检测,分别用二联体、三联体公式计算达到认定标准。结论 母系突变的发生概率较低,D2S441 基因座发生母系突变的检测研究提供数据材料。

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林翠霞,研究方向为法医物证学。

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*宋健文,硕士,副教授、副主任法医师,研究方向为法医鉴定、毒品成瘾康复。E-mail:
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林翠霞,研究方向为法医物证学。

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林翠霞,研究方向为法医物证学。

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Sci Rep, 2024. 14(01): 1385-1394., articleTitle=Analysis of data and common mutations encountered during routine parentage testing in Zimbabwe, refAbstract=null), Reference(id=1154353681865630187, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2014, volume=null, issue=null, pageStart=null, pageEnd=null, url=null, language=null, rfNumber=[8], rfOrder=7, authorNames=中华人民共和国公安部, journalName=法庭科学DNA实验室检验规范:GA/ T383-2014, refType=null, unstructuredReference=中华人民共和国公安部. 法庭科学DNA实验室检验规范:GA/ T383-2014[S]. 北京: 中国标准出版社, 2014., articleTitle=null, refAbstract=null), Reference(id=1154353681941127661, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2018, volume=null, issue=null, pageStart=null, pageEnd=null, url=null, language=null, rfNumber=[9], rfOrder=8, authorNames=国家市场监督管理总局,国家标准化管理委员会, journalName=亲权鉴定技术规范:GB/T37223—2018, refType=null, unstructuredReference=国家市场监督管理总局,国家标准化管理委员会. 亲权鉴定技术规范:GB/T37223—2018[S]. 北京: 中国标准出版社, 2018., articleTitle=null, refAbstract=null), Reference(id=1154353681999847919, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2014, volume=null, issue=null, pageStart=null, pageEnd=null, url=null, language=null, rfNumber=[10], rfOrder=9, authorNames=中华人民共和国公安部, journalName=人类DNA荧光标记STR分型结果的分析及应用:GA/T 1163—2014, refType=null, unstructuredReference=中华人民共和国公安部. 人类DNA荧光标记STR分型结果的分析及应用:GA/T 1163—2014[S]. 北京: 中国标准出版社, 2014., articleTitle=null, refAbstract=null), Reference(id=1154353682066956785, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2023, volume=9, issue=02, pageStart=85, pageEnd=88, url=null, language=null, rfNumber=[11], rfOrder=10, authorNames=彭苗苗, 周炜, journalName=生物化工, refType=null, unstructuredReference=彭苗苗, 周炜. 亲子鉴定中D21S11 和D2S1338 基因座母系突变两例[J]. 生物化工, 2023. 9(02): 85-88., articleTitle=亲子鉴定中D21S11 和D2S1338 基因座母系突变两例, refAbstract=null), Reference(id=1154353682129871349, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2023, volume=9, issue=03, pageStart=87, pageEnd=91, url=null, language=null, rfNumber=[12], rfOrder=11, authorNames=彭苗苗, journalName=生物化工, refType=null, unstructuredReference=彭苗苗. 7例母系突变的亲子鉴定案例分析[J]. 生物化工, 2023. 9(03): 87-91., articleTitle=7例母系突变的亲子鉴定案例分析, refAbstract=null), Reference(id=1154353682209563127, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2020, volume=35, issue=04, pageStart=444, pageEnd=445, url=null, language=null, rfNumber=[13], rfOrder=12, authorNames=徐冬冬, 王韵, 杨慧凌, journalName=中国法医学杂志, refType=null, unstructuredReference=徐冬冬, 王韵, 杨慧凌, 等 . 亲子鉴定中PentaE突变 1例[J]. 中国法医学杂志, 2020. 35(04): 444-445., articleTitle=亲子鉴定中PentaE突变 1例, refAbstract=null)], funds=[Fund(id=1154353681291010522, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, awardId=2023YL16, language=CN, fundingSource=粤高职公安司法与公共管理教指委2023年度教育教学改革项目(2023YL16), fundOrder=null, country=null)], companyList=[AuthorCompany(id=1154353676895379794, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, xref=1, ext=[AuthorCompanyExt(id=1154353676899574099, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, companyId=1154353676895379794, language=CN, country=null, province=null, city=null, postcode=null, companyName=null, departmentName=null, remark=1 广东广安法医临床司法鉴定所 广州 510000)]), AuthorCompany(id=1154353677734240612, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, xref=2, ext=[AuthorCompanyExt(id=1154353677738434917, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, companyId=1154353677734240612, language=CN, country=null, province=null, city=null, postcode=null, companyName=null, departmentName=null, remark=2 广东司法警官职业学院 司法鉴定研究所 广州 510000)])], figs=[ArticleFig(id=1154353680154354104, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, language=EN, label=null, caption=null, figureFileSmall=oRzk+X2RwEgtfvK5ah7qNw==, figureFileBig=dAb1n6Rpi7d0NIcWz0QS6Q==, tableContent=null), ArticleFig(id=1154353680221462970, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, language=CN, label=图 1, caption=D2S441 基因座 Microreader ${}^{\mathrm{{TM}}}$ 21D ID System 试剂盒检测结果

注:由左至右依次为$\mathrm{C}1$. 孩子 1 ;$\mathrm{C}2$. 孩子 2 ; AF. 被检父;M. 生母

, figureFileSmall=oRzk+X2RwEgtfvK5ah7qNw==, figureFileBig=dAb1n6Rpi7d0NIcWz0QS6Q==, tableContent=null), ArticleFig(id=1154353680288571836, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, language=EN, label=null, caption=null, figureFileSmall=zB7MABn5STJxMXtxhqSToQ==, figureFileBig=WzHlRmJkD7r6lbkDQ79Zcw==, tableContent=null), ArticleFig(id=1154353680347292094, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, language=CN, label=图 2, caption=D2S441 基因座 Huaxia™ Platinum 扩增试剂盒检测结果, figureFileSmall=zB7MABn5STJxMXtxhqSToQ==, figureFileBig=WzHlRmJkD7r6lbkDQ79Zcw==, tableContent=null), ArticleFig(id=1154353680473121218, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996352742117600, language=EN, label=null, caption=null, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
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AMEL X, Y X $X$ - - -
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一例亲子鉴定中D2S441 基因座母系突变的检测案例分析
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林翠霞 1 , 宋健文 2, *
实验室检测 | 评价与分析 2025,3(3): 107-110
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一例亲子鉴定中D2S441 基因座母系突变的检测案例分析
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林翠霞,研究方向为法医物证学。

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林翠霞1, 宋健文2, *
作者信息
  • 1 广东广安法医临床司法鉴定所 广州 510000
  • 2 广东司法警官职业学院 司法鉴定研究所 广州 510000
通讯作者:
*宋健文,硕士,副教授、副主任法医师,研究方向为法医鉴定、毒品成瘾康复。E-mail:
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目的 检测并分析母系突变的亲子鉴定案件,研究基因突变的意义和影响。方法 采用MicroreaderTM 21D ID System 试剂盒、MicroreaderTM 23SP ID System 试剂盒和 HuaxiaTM Platinum 扩增试剂盒对1例疑似存在遗传异常的家系进行常染色体 STR检测分析。结果 D2S441 基因座发生了母系突变,通过增加位点辅助检测,分别用二联体、三联体公式计算达到认定标准。结论 母系突变的发生概率较低,D2S441 基因座发生母系突变的检测研究提供数据材料。

母系突变  /  亲子鉴定  /  D2S441  /  等位基因突变
林翠霞, 宋健文. 一例亲子鉴定中D2S441 基因座母系突变的检测案例分析. 实验室检测, 2025 , 3 (3) : 107 -110 .
法医物证中运用规范和标准方法对常染色体短串联重复序列 (STR) 进行检测分析是亲权鉴定和个体识别的首选方法。 STR 基因座的突变主要由于 DNA 在复制过程中发生滑动或错配, 导致 STR 基因座重复单位数目的变化, 通常表现为增加或减少一个重复单位的一步突变,约占突变现象的 90%[1]。 根据文献报道, STR基因座的平均突变率达到$2 \times {10}^{-3}{}^{\left\lbrack 2\right\rbrack }$, STR 突变性别特异性高,母系突变较为罕见[3-6]。在津巴布韦一项 1135 例案件研究中父系和母系突变率分别为 0.0021 和 0.0011,其中 D2S441 为突变率最低的位点之一[7],而中国尚未发现 D2S441 母系突变的相关报道。因此, D2S441 母系突变的发现具有重要研究意义, 本案例通过不同试剂盒检测验证及不同计算方式进行分析, 为此基因座母系突变的研究提供数据基础。
1 例亲子鉴定分析: 委托四人 (被检父 (AF)、孩子 1 (C1)、 孩子 2(C2)、生母 (M)) 亲子鉴定案件,四名被鉴定人均未有骨髓移植、输血及放化疗等病史。按照知情同意原则,经无菌操作采集被鉴定人的指尖血少许。
(1)检验仪器:ABI9700PCR 仪、ABI3130XL 型基因分析仪等。
(2)参照《法庭科学 DNA 实验室检验规范》(GA/T 383- 2014)[8]中 FTA 卡法提取上述检材的 DNA。
(3)取上述检材的 DNA 提取产物适量,用荧光标记 STR 复合扩增试剂盒 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}$21D ID System (苏州阅微)、 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}$23SP ID System(苏州阅微)、Huaxia${}^{\mathrm{{TM}}}$Platinum 扩增试剂盒 (ABI 公司) 进行${10\mu }\mathrm{L}$体系扩增 (操作步骤按试剂盒说明),并设立阴性及阳性对照。
(4)扩增产物应用 ABI3130XL 型基因分析仪进行电泳分离, 用 Gene Mapper 基因座分析软件对电泳数据进行分析, 得到上述检材的基因分型。
(5) STR 多态性检验结果。本例案件中采用苏州阅微基因技术有限公司的Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}$21D ID System 试剂盒和 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}$23SP ID 试剂盒共检测 39 个 STR 常染色体基因座:D3S1358、vWA、FGA、D8S1179、D21S11、D5S818、 D18S51、D16S539、D13S317、D7S820、D6S1043、PentaE、 TPOX、PentaD、D2S441、D12S391、D14S608、D2S1338、 D6S477、D18S535、D19S253、D15S659、D11S2368、 D20S470、TH01、D1S1656、CSF1PO、D7S3048、D8S1132、 D4S2366、D21S1270、D13S325、D9S925、D3S3045、D22- GATA198B05、D10S1435、D17S1290、D19S433、D5S2500。 本检测系统的累积非父排除率达 0.9999 以上。
根据《亲权鉴定技术规范》(GB/T 37223-2018)[9]的公式分两种方式进行计算。若分别以$\mathrm{{AF}}/\mathrm{M}- \mathrm{C}$二联体进行分析, 在 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}$21D ID System 检测的 21 个基因座,${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{F}/\mathrm{{Cl}}}$为${1.5654}\times {10}^{6},{\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{F}/\mathrm{C}2}$为${3.3178}\times {10}^{7}$,均大于 10000,达到认定标准。值得注意的是,在 D2S441 基因座,计算${\mathrm{{PI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{{Cl}}}$为 0.0031,${\mathrm{{PI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}2}$为${0.0005},{\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}1}$为${3.5965}\times {10}^{4},{\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}2}$为${7.4334}\times {10}^{3}$,${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}2}$未达到认定标准 (如 表1<inline-formula> 2</inline-formula> 所示)。Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}{23}\mathrm{{SP}}$ID 试剂盒的检测共计 39 个基因座,${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{F}/\mathrm{C}1}$为${3.3045}\times {10}^{13}$,${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{F}/\mathrm{C}2}$为${2.1296}\times {10}^{14}$,均大于 10000,达到认定标准。${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}1}$为${1.3431}\times {10}^{10},{\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}2}$为${4.2022}\times {10}^{10}$,均大于 10000,达到认定标准。
若以生母为前提,按 AF-M-C 三联体进行分析,在 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}$21D ID System 检测的 21 个基因座,在 D2S441 基因座,计算${\mathrm{{PI}}}_{\text{triol }}$为1.5253,计算${\mathrm{{PI}}}_{\text{trio2 }}$为${2.6137},{\mathrm{{CPI}}}_{\text{triol }}$为${3.4329}\times {10}^{8},{\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{{trio}}2}$为${1.1676}\times {10}^{10}$,均大于 10000,达到认定标准。Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}{23}\mathrm{{SP}}$ID 试剂盒的检测共计 39 个基因座,${\mathrm{{CPI}}}_{\text{triol }}$为${5.6292}\times {10}^{18},{\mathrm{{CPI}}}_{\text{trio2 }}$为${1.30434}\times {10}^{20}$,均大于 10000,达到认定标准 (如 表 3所示)。
在本次 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}{21}\mathrm{D}$ID System 试剂盒检测中,$\mathrm{M}$和$\mathrm{C}1\text{、}\mathrm{C}2$在$\mathrm{D}2\mathrm{S}{441}$基因座上均表现为纯合子峰型,且$\mathrm{C}1\text{、}\mathrm{C}2$的基因分型均能从$\mathrm{{AF}}$中找到来源,无法从$\mathrm{M}$的基因分型中找到来源。经 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}{21}\mathrm{D}$ID System (表 1和表 2)试剂盒检测,再经 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}{23}\mathrm{{SP}}$ID System(表 3)试剂盒进行加位点辅助检测,发现$\mathrm{C}1\text{、}\mathrm{C}2$在检测的试剂盒中所有基因座的基因分型均能在 AF 中找到来源。
因此,子 1(C1)、子 2(C2)、父 (AF) 和母 (M) 的 D2S441 基因座基因分型分别为 11/11、12/12、11/12、10/10,不符合孟德尔遗传规律 (图 1), 而其余基因暂未发现类似情况。
根据 GA/T 1163-2014《人类 DNA 荧光标记 STR 分型结果的分析及应用[10]对所检测的图谱进行观察分析突变 STR 基因座的峰高和峰面积, Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}{21}\mathrm{D}$ID System 试剂盒检测的$\mathrm{M}$、$\mathrm{C}1$、$\mathrm{C}2$在$\mathrm{D}2\mathrm{S}{441}$基因座的峰高和峰面积来看 ( 图 1), 无法判断是否基因沉默或基因漏检。通过 Huaxia${}^{\mathrm{{TM}}}$Platinum 扩增试剂盒检测验证,$\mathrm{M}\text{、}\mathrm{C}1\text{、}\mathrm{C}2$的峰高和峰面积可以排除基因沉默或等位基因漏检的情况 (图 2)。
注:由左至右依次为$\mathrm{C}1$. 孩子 1 ;$\mathrm{C}2$. 孩子 2 ; AF. 被检父;M. 生母
通过对比 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}{21}\mathrm{D}$ID System 试剂盒和 Huaxia${}^{\mathrm{{TM}}}$Platinum 扩增试剂盒 (STR 常染色体基因座包涵 D3S1358、 vWA、FGA、D8S1179、D21S11、D5S818、D18S51、 D16S539、D13S317、D7S820、D6S1043、PentaE、TPOX、 PentaD、D2S441、D12S391、D2S1338、TH01、D1S1656、 CSF1PO、D19S433、D22S1045、D10S1248)检测结果, AF、$\mathrm{C}1\text{、}\mathrm{C}2\text{、}\mathrm{M}$四人在两个不同厂家生产的常染色体试剂盒包涵相同的 20 个常染色体基因座分型结果一致(表 1~4)。本案例母亲 (M)分别与子 1(C1)、子 2(C2)在 D2S441 基因座上不符合孟德尔遗传规律,因此判断为 D2S441 基因座“母系突变”。
在实际的亲权鉴定工作中, 如果发现被检父母的某一方存在某个等位基因不能遗传给亲代时, 除了需要考虑该基因座是否发生基因突变, 还需要排除该基因座上是否存在基因沉默或者等位基因漏检的现象[11-12]。从遗传学角度来看, STR 基因座的突变虽然在总体上发生率相对较低,但却可能对个体识别、 亲权鉴定等法医实践产生深远影响。传统的 STR 分析基于等位基因的稳定遗传模式, 然而突变事件的存在挑战了这种常规认知。若发生基因突变,需要分析是“父系突变”“母系突变”还是 “无法判断”,进而才可以根据《亲权鉴定技术规范》(GB/ T 37223-2018)中规定的计算方法进行计算, 得出被检父母与孩子之间是否存在亲子关系。
根据研究, STR 基因座发生突变机制的共识是 DNA 复制滑动 (replication slippage) 或称滑动错配 (slip strand mispairing), 表现为基序的插入或缺失, 从而使新合成的 DNA 链增加或减少 1 个或多个基序,对应则被称为一步突变或多步突变[13]。人体生殖细胞通过减数分裂形成配子的过程中, 男性精子有丝分裂的次数比女性的配子细胞分裂次数多,有文献统计报道称女性突变率是男性突变率的 0.25 倍 [ 3 - 6 ]。D2S441 基因座发生突变的报道较少, 而在 D2S441 基因座发生母系突变的案例更是未见相关报道。
从本案例检验结果来看,在 D2S441 基因座,$\mathrm{M}$的等位基因 10 突变成$\mathrm{C}1$的等位基因 11 为一步突变,突变成$\mathrm{C}2$的等位基因 12 为二步突变。用 Microreader${}^{\mathrm{{TM}}}$21D ID System 试剂盒检测时,若二联体计算方式,在$\mathrm{D}2\mathrm{S}{441}$基因座,${\mathrm{{PI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}1}$是${\mathrm{{PI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}2}$的 6.2 倍,${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}1}$是${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}2}$的 4.8 倍,可见在检测 20 个常染色体基因座时, 除基因频率影响外, 突变步数越多, 亲权指数或累计亲权指数越低, 甚至出现达不到认定标准。加位点至 39 个基因座时,${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}2}$反而略大于${\mathrm{{CPI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}1}$,且均大于认定标准, 可见二联体亲子鉴定遇到基因突变时, 增加位点检测有利于判定亲权关系。若三联体计算方式,检测 20 个常染色体时,${\mathrm{{PI}}}_{\text{triol }}$是${\mathrm{{PI}}}_{\text{trio2 }}$的 0.58 倍,${\mathrm{{CPI}}}_{\text{trio1 }}$是${\mathrm{{CPI}}}_{\text{trio2 }}$的 0.0029 倍,检测 39 个基因座时,${\mathrm{{CPI}}}_{\text{trio1 }}$是${\mathrm{{CPI}}}_{\text{trio2 }}$的 0.043 倍,二步突变的亲权指数或累计亲权指数反而比一步突变的数值大。在 D2S441 基因座, 计算${\mathrm{{PI}}}_{\text{triol }}$是${\mathrm{{PI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{{Cl}}}$的 492 倍,${\mathrm{P}}_{\text{ltrio }2}$是${\mathrm{{PI}}}_{\mathrm{M}/\mathrm{C}2}$的 5227 倍,随着检测 STR 基因座数目的增加, 不管是二联体还是三联体的 CPI 都随之增大,而三联体${\mathrm{{CPI}}}_{\text{trio }}$增大的幅度更大,证明三联体的证据力度比二联体的要更大。因此, 综合判断该亲子鉴定结果为 D2S441 基因座母系突变, 此次检测结果有望为 D2S441 基因座后续的检测和结果分析提供参考价值。
D2S441 基因座发生的母系突变凸显了即使母系突变在亲权鉴定案例中相对罕见的情况下, 突变仍有发生的可能性。这一发现提示在进行亲权鉴定时, 不能仅仅依赖于常规 STR 基因座的匹配情况, 对于可能出现的突变情况需要有更为深入的考虑与检测策略:(1)当遇到亲子关系在某些 STR 基因座存在不符时, 需深入探究基因失活或等位基因遗漏与基因变异的可能性, 而不是轻易排除亲子关系。(2)不同实验员检测或者不同实验室间不同仪器检测的同时需要结合其他厂家生产的检测试剂盒进行进一步验证, 从而更全面地判断和解析 STR 突变的机制与规律;(3)若存在突变,二联体鉴定时尽量补充另一方生父或者生母样本进行比对计算或者三联体鉴定;(4)当存在突变未达到认定标准,需增加常染色体基因座检测,必要时增加$\mathrm{X}\text{、}\mathrm{Y}$性染色体、SNP、线粒体等辅助检测,以更好地确定突变的来源和方向, 进而根据具体突变得出对应的分析方式及客观的鉴定结论。
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*宋健文,硕士,副教授、副主任法医师,研究方向为法医鉴定、毒品成瘾康复。E-mail:
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2种不同金属材料的力学参数
科
Family
属数
Number of
genus
种数
Number of
species
占总种数比例
Percentage of
total species (%)
属
Genus
种数
Number of
species
占总种数比例
Percentage of total
species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae 2 11 5.26 鹅膏菌属 Amanita 10 4.78
小菇科 Mycenaceae 2 12 5.74 丝盖伞属 Inocybe 5 2.39
多孔菌科 Polyporaceae 8 14 6.70 蜡蘑属 Laccaria 5 2.39
红菇科 Russulaceae 3 23 11.00 小皮伞属 Marasmius 6 2.87
小菇属 Mycena 11 5.26
光柄菇属 Pluteus 5 2.39
红菇属 Russula 17 8.13
栓菌属 Trametes 5 2.39
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