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目的 高效液相色谱串联质谱法测定山药中50种植物生长调节剂残留。方法 样品采用QuEChERS 法净化提取,以流动相 11 mmol/L 甲酸铵溶液(0.06%甲酸)9mmol/L 甲酸铵甲醇(0.04%甲酸)进行梯度洗脱,采用高效液相色谱串联质谱技术内标标准曲线法同时测定山药中 50种植调剂残留。结果 50种植调剂在5~200 ng/mL 的浓度范围内线性良好,检出限 0.006~0.09 mg/kg;相关系数r2 ≥ 0.9921;加标回收率76%~96%;精密度1.14%~3.47% (n=6),24批次样品中测出了矮壮素、甲哌鑰、对硝基苯酚钠。结论 该植物调节剂测定方法学验证结果符合要求,为山药质量控制和有害物残留风险监控提供参考。

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陈慧芝,副主任中药师,研究方向为药品与化妆品检验。

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*薛慧萍，副主任，研究方向为质量管理。E-mail:
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QuEChERS-UPLC-MS/MS测定人参中19种植物生长调节剂残留及膳食暴露评估[J]. 食品工业科技, 2021. 42(24): 161-169., articleTitle=QuEChERS-UPLC-MS/MS测定人参中19种植物生长调节剂残留及膳食暴露评估, refAbstract=null), Reference(id=1154354884901069448, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996337659405122, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2020, volume=null, issue=null, pageStart=null, pageEnd=null, url=null, language=null, rfNumber=[6], rfOrder=5, authorNames=国家卫生健康委员会, 农业农村部, 国家市场监督管理总局, journalName=食品安全国家标准食品中农药最大残留限量:GB 2763-2019, refType=null, unstructuredReference=国家卫生健康委员会, 农业农村部, 国家市场监督管理总局. 食品安全国家标准食品中农药最大残留限量:GB 2763-2019[S]. 北京: 中国标准出版社, 2020., articleTitle=null, refAbstract=null), Reference(id=1154354884955595401, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996337659405122, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2002, volume=2, issue=null, pageStart=null, pageEnd=null, url=null, language=null, rfNumber=[7], rfOrder=6, authorNames=null, journalName=中医古籍出版社, refType=null, unstructuredReference=神农本草经疏[M]. 中医古籍出版社, 北京: 2002. 2., articleTitle=神农本草经疏, refAbstract=null), Reference(id=1154354885005927050, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996337659405122, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2024, volume=null, issue=08, pageStart=null, pageEnd=null, url=null, language=null, rfNumber=[8], rfOrder=7, authorNames=刘国霞, 姚川, 范阳阳, journalName=安徽农业科学, refType=null, unstructuredReference=刘国霞, 姚川, 范阳阳, 等 . 3种山药鲜品营养成分与药理活性成分分析[J]. 安徽农业科学, 2024, 08 ):, articleTitle=3种山药鲜品营养成分与药理活性成分分析, refAbstract=null), Reference(id=1154354885060453003, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996337659405122, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2021, volume=27, issue=12, pageStart=53, pageEnd=60, url=null, language=null, rfNumber=[9], rfOrder=8, authorNames=郭林宇, 汤晓艳, journalName=中国食物与营养, refType=null, unstructuredReference=郭林宇, 汤晓艳. 国内山药营养品质、影响因素及评价方法研究进展[J]. 中国食物与营养, 2021. 27(12): 53-60., articleTitle=国内山药营养品质、影响因素及评价方法研究进展, refAbstract=null), Reference(id=1154354885110784652, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996337659405122, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2021, volume=null, issue=null, pageStart=null, pageEnd=null, url=null, language=null, rfNumber=[10], rfOrder=9, authorNames=陈梦雨, journalName=null, refType=null, unstructuredReference=陈梦雨. 山药饮片质量标准研究[D]. 上海: 上海中医药大学, 2021., articleTitle=山药饮片质量标准研究, refAbstract=null)], funds=null, companyList=[AuthorCompany(id=1154354881788895836, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996337659405122, xref=null, ext=[AuthorCompanyExt(id=1154354881797284445, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996337659405122, companyId=1154354881788895836, language=CN, country=null, province=null, city=null, postcode=null, companyName=null, departmentName=null, remark=乌海检验检测中心 乌海 016000)])], figs=[ArticleFig(id=1154354883646972533, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1152996337659405122, language=EN, label=null, caption=null, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
时间(min) 流动相 流动相
0~1 5 95
1~4 5-60 ${95} \rightarrow {40}$
4~8 ${60} \rightarrow {64}$ ${40} \rightarrow {36}$
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8.5~9 ${68} \rightarrow {75}$ ${32} \rightarrow {25}$
9~16 ${75} \rightarrow {95}$ ${25} \rightarrow 5$
16~20 95 5
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名称 扫描模式 母离子 子离子 能量
莠去津 正 216.3 173.9 26
146 32
氘代莠去津 正 221 178.8 36
101.1 36
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名称 扫描模式 母离子 子离子 能量
仲丁灵 正 296 240.1 222 21 31
矮壮素 正 122.3 58.2 62.8 43 30
坐果胺 正 200 154.9 127 18 27
胺鲜酯 正 216 143.1 100.2 27 27
增产胺 正 262.1 100.1 57.9 25 26
氟节胺 正 422.1 143 107 20 101
吲熟酯 正 239.1 164.9 193.1 24 20
1,3- 二苯基脲 正 213.2 94 76.9 35 67
抗倒胺 正 339.2 321.2 79.9 24 37
糠氨基嘌呤 正 216 80.7 147.9 35 20
呋嘧醇 正 313.1 270.1 269.1 35 48
3- 吲哚丁酸 正 204.1 186.2 144.2 17 31
3- 吲哚丙酸 正 190.1 130 172.1 29 17
3- 吲哚乙酸 正 176.2 130.3 103.2 21 47
甲哌鎓 正 114.1 98.1 58.2 36 3
脱叶磷 正 315 169 225 20 17
烯效唑 正 292 70 125 69 40
茉莉酮 正 255 195 177 16 15
苄氨基嘌呤 负 224 133 106 -32 -45
4- 溴苯氧乙酸 负 229 171 173 -20 -20
4-氯苯氧乙酸 负 185 127 111 -19 -20
氯氨环丙 负 272 160 228 -26 -17
坐果酸 负 215 157 127 -19 -36
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名称 扫描模式 母离子 子离子 能量
调果酸 负 199 127 71 110 -21 -14 -22
4- 氟苯氧乙酸 负 169 125 161 -15 -18
2,4- 滴丙酸 负 233 125 193.5 -39 -35
地乐酚 负 239 163 -42
氯吡脲 负 245 127 91 -12 -36
2,4- 二氯苯氧乙酸 负 219 161 125 239 -21 -36 -21
赤霉酸 负 345 143 -34
赤霉素 7 负 329 223 255 -24 -28
4- 碘苯氧乙酸 负 277 219 217 -21 -39
5- 硝基邻甲氧基苯酚钠 负 168 153 123 -19 -25
噻苯隆 负 219 100 71 -17 -46
对硝基苯酚钠 负 138 107.9 92 -24 -31
2- 萘氧乙酸 负 201 157 126.8 -20 -15
2,4,5-三氯苯氧乙酸 负 253 195 159 -18 -37
萘乙酸乙酯 正 215.2 141 169.1 19 11
烯腺嘌呤 正 204 136 148.1 25 21
茉莉酸甲酯 正 225 151.1 147.2 18 20
萘乙酸甲酯 正 201.1 115.1 141 61 18
萘乙酰胺 正 186.1 140.8 115 27 54
调环酸 正 213.1 157 139 14 15
多效唑 正 294.2 70.1 125 53 55
脱落酸 负 262.8 153.1 204.1 -17 -25
吡啶醇 正 137.9 120.1 92 22 32
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2,4- 滴丙酸 负 233 125 193.5 -39 -35
地乐酚 负 239 163 -42
氯吡脲 负 245 127 91 -12 -36
2,4- 二氯苯氧乙酸 负 219 161 125 239 -21 -36 -21
赤霉酸 负 345 143 -34
赤霉素 7 负 329 223 255 -24 -28
4- 碘苯氧乙酸 负 277 219 217 -21 -39
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名称 扫描模式 母离子 子离子 能量
反式玉米素 正 220 137 26
148 22
抑芽唑 正 264 68 31
110 30
抗倒酯 正 253 207 18
69 2
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名称 精密度 (%) 加标回收 (%) 检出限 (mg/kg)
莠去津 0.9999 1.17 82 0.007
仲丁灵 0.9969 2.57 77 0.006
矮壮素 0.9995 2.21 80 0.008
坐果胺 0.9996 1.95 79 0.016
胺鲜酯 0.9926 2.26 92 0.007
增产胺 0.9985 2.65 82 0.007
氟节胺 0.9922 2.54 77 0.009
吲熟酯 0.9997 1.97 79 0.008
1,3- 二苯基脲 0.9998 2.14 82 0.008
呋嘧醇 0.9994 1.87 84 0.006
糠氨基嘌呤 0.9993 2.85 93 0.007
抗倒胺 0.9999 1.15 92 0.006
3- 吲哚乙酸 0.9998 1.35 83 0.046
3- 吲哚丁酸 0.9974 2.84 81 0.007
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名称 精密度 (%) 加标回收 (%) 检出限 (mg/kg)
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萘乙酸甲酯 0.9954 2.47 79 0.07
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调环酸 0.9962 3.27 76 0.09
茉莉酮 0.9936 3.47 77 0.049
吡啶醇 0.9962 2.27 79 0.047
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抑芽唑 0.9999 1.14 86 0.006
脱叶磷 0.9998 1.64 84 0.007
抗倒酯 0.9994 1.54 83 0.006
烯效唑 0.9992 1.33 95 0.008
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调果酸 0.9997 1.66 80 0.046
坐果酸 0.9986 1.82 81 0.007
氯氨环丙 0.9997 1.66 84 0.006
2,4- 二氯苯氧乙酸 0.9979 2.43 82 0.008
2,4- 滴丙酸 - - 82 -
地乐酚 0.999 1.85 87 0.007
4- 氟苯氧乙酸 0.9993 1.55 81 0.007
氯吡脲 0.9951 2.08 76 0.016
赤霉酸 - - - -
赤霉素 7 0.9922 2.94 91 0.008
4- 碘苯氧乙酸 0.9973 2.85 87 0.047
5- 硝基邻甲氧基苯酚钠 0.9992 2.03 90 0.018
2- 萘氧乙酸 0.9994 1.81 83 0.006
对硝基苯酚钠 - - - -
噻苯隆 0.9976 2.33 80 0.048
2,4,5-三氯苯氧乙酸 - - - -
6- 苄氨基嘌呤 0.9994 1.26 83 0.017
4- 溴苯氧乙酸 0.9982 2.21 82 0.006
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高效液相色谱-串联质谱法测定山药中50种植物生长调节剂残留
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陈慧芝 , 王利清 , 李艳洁 , 宋乐 , 薛慧萍 *
实验室检测 | 创新应用 2025,3(3): 9-12
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高效液相色谱-串联质谱法测定山药中50种植物生长调节剂残留
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陈慧芝,副主任中药师,研究方向为药品与化妆品检验。

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陈慧芝,副主任中药师,研究方向为药品与化妆品检验。

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陈慧芝, 王利清, 李艳洁, 宋乐, 薛慧萍*
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*薛慧萍，副主任，研究方向为质量管理。E-mail:
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目的 高效液相色谱串联质谱法测定山药中50种植物生长调节剂残留。方法 样品采用QuEChERS 法净化提取,以流动相 11 mmol/L 甲酸铵溶液(0.06%甲酸)9mmol/L 甲酸铵甲醇(0.04%甲酸)进行梯度洗脱,采用高效液相色谱串联质谱技术内标标准曲线法同时测定山药中 50种植调剂残留。结果 50种植调剂在5~200 ng/mL 的浓度范围内线性良好,检出限 0.006~0.09 mg/kg;相关系数r2 ≥ 0.9921;加标回收率76%~96%;精密度1.14%~3.47% (n=6),24批次样品中测出了矮壮素、甲哌鑰、对硝基苯酚钠。结论 该植物调节剂测定方法学验证结果符合要求,为山药质量控制和有害物残留风险监控提供参考。

山药  /  植物生长调节剂  /  高效液相色谱-串联质谱技术
陈慧芝, 王利清, 李艳洁, 宋乐, 薛慧萍. 高效液相色谱-串联质谱法测定山药中50种植物生长调节剂残留. 实验室检测, 2025 , 3 (3) : 9 -12 .
正文
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0 引言
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植物生长调节剂是用于调整植物生长和发育的化学成分[1], 在增产、抗逆等方面具有显著功效[2]。但是在中药材生长发育阶段不合理使用将对人体带来致畸、致癌的潜在风险, 甚至会引发机体代谢和内分泌系统疾病[3-5]。GB 2763-2019 标准中对食品中 22 种植物生长调节剂的残留限量作出了规定[6],但在我国中药材市场中植物调节剂的残留限量尚无公开的标准数据, 对禁用、限用的品种及合理用量还没有明确的指导目录, 其安全性标准亟待完善。随着我国对药品安全的重视程度持续提高, 中药材的质量标准也随之提升, 即将更新的国家标准将植物调节剂残留测定纳入部分品种检测标准项目, 而山药作为人们药食两用的常用品种, 又由于其种植过程中植物调节剂的使用种类和剂量缺少明确的国家规定, 也无明确的研究数据和应用指导, 不规范使用可能对人体造成危害, 其安全性指标需要进一步提高。因此本文对山药中植物调节剂残留情况的探索, 对未来标准限值的确定具有重要意义。
《神农本草经疏》中曾记载,山药味甘,补脾,补虚羸, 长肌肉,充五脏,除烦热,强阴也[7]。山药不仅是临床常用药材, 还是人们药膳养生的佳品 [ 8 - 10 ]。本文采用高效液相色谱- 串联质谱法对市场中流通的 24 批次山药饮片进行检测分析, 考察了 50 种植物调节剂残留情况, 该方法快速、灵敏、便捷, 可以达到一测多评的效果, 为山药质量控制和安全性指标监测提供参考。
1 材料与方法
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1.1 材料与试剂
莠去津 -D5 标准溶液${100\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$(天津阿尔塔科技有限公司)；50 种植物生长调节剂标准溶液${100\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$(天津阿尔塔科技有限公司)；乙腈(德国默克公司)；QuEChERS 净化管萃取柱 (比克曼生物科技有限公司)。
1.2 仪器与设备
6500 + 高效液相色谱质谱联用仪 (AB Sciex 公司); DPM24 振荡器 (德国维根斯)。
1.3 方法
1.3.1 基质对照品混合工作溶液制备
制备混合对照品溶液: 精密量取$1\mathrm{\;{mL}}$ 的${100\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 的 50 种植物调节剂混合对照品溶液置于${100}\mathrm{\;{mL}}$ 容量瓶里,加入乙腈溶解制成${1000}\mathrm{{ng}}/\mathrm{{mL}}$ 的溶液,再精密量取${1000}\mathrm{{ng}}/\mathrm{{mL}}$ 的混合溶液$1\mathrm{\;{mL}}$ 置于${10}\mathrm{\;{mL}}$ 容量瓶中,加乙腈溶解,即得${100}\mathrm{{ng}}/\mathrm{{mL}}$ 的溶液。内标溶液的制备:精密量取${0.6}\mathrm{\;{mL}}$ 的${100\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$ 氘代莠去津对照品溶液置于${10}\mathrm{\;{mL}}$ 容量瓶中,加乙腈制成每$1\mathrm{\;{mL}}$ 含${6\mu }\mathrm{g}$ 的溶液。制备混合对照品基质工作液:分别取 6 份空白基质样品各$3\mathrm{\;g}$ ,同供试品溶液的制备法处理置于${40}^{\circ }\mathrm{C}$ 水浴中氮吹浓缩至约${0.5}\mathrm{\;{mL}}$ ,每份中分别加入${100}\mathrm{{ng}}/\mathrm{{mL}}$ 的混合对照品溶液 50、100 μL,1000 ng/mL 的混合对照品溶液 20、50、${100}\text{、}{200\mu }\mathrm{L}$ ,加乙腈至$1\mathrm{\;{mL}}$ ,涡旋后过${0.22\mu }\mathrm{m}$ 的微孔滤膜, 取续滤液,即得 5、10、20、50、100、200 ng/mL 的系列基质混合对照品溶液。
1.3.2 QuEChERS 法样品前处理
精密称定粉碎成粉末过三号筛的供试品约$3\mathrm{\;g}$ ,置${50}\mathrm{\;{mL}}$ 具塞离心管中,精密加入${10}\mathrm{\;{mL}}$ 水,涡旋后放置${30}\mathrm{\;{min}}$ ,精密加${15}\mathrm{\;{mL}}$ 乙腈与${100\mu }\mathrm{L}$ 的内标溶液,涡旋后,置500次/分钟的振荡器上剧烈震荡${10}\mathrm{\;{min}}$ ,加入${6.5}\mathrm{\;g}$ 的柠檬酸氢二钠、柠檬酸三钠、氯化钠和无水硫酸镁的混合粉末$\left({{0.5}: 1 : 1 : 4}\right)$ ,振摇,再置振荡器上剧烈震荡$5\mathrm{\;{min}}$ ,置于冰浴中${15}\mathrm{\;{min}}$ ,于${4000}\mathrm{r}/\mathrm{{min}}$ 转速离心$5\mathrm{\;{min}}$ ,精密吸取上层液体$9\mathrm{\;{mL}}$ ,置固相萃取净化管 [ 硅胶 (Silica,粒径${40}\sim {60\mu }\mathrm{m}$ )${100}\mathrm{{mg}}$ 和十八烷基硅烷键合硅胶$\left({\mathrm{C}}_{18}\right.$ ,粒径${40}\sim {60\mu }\mathrm{m}){450}\mathrm{{mg}}$ 、无水硫酸镁${900}\mathrm{{mg}}\rbrack$ 中,涡旋后置振荡器上剧烈震荡$6\mathrm{\;{min}}$ ,离心$(6\mathrm{\;{min}}$ ,精密吸取$5\mathrm{\;{mL}}$ 上清液,置${40}^{\circ }\mathrm{C}$ 水浴氮吹浓缩至约${0.5}\mathrm{\;{mL}}$ ,加乙腈至$1\mathrm{\;{mL}}$ ,涡旋后用${0.22\mu }\mathrm{m}$ 的微孔滤膜滤过,取续滤液即得。
1.3.3 测定方法
(1) 色谱条件
以十八烷基硅烷键合核壳硅胶为填充剂(内径 3 mm,粒径${2.7\mu }\mathrm{m}$ ,柱长为${150}\mathrm{\;{mm}}$ 或等柱效)；以${0.06}\%$ 甲酸溶液(含 11 mmol/L 甲酸铵)为流动相 A,以 0.04% 甲酸的甲醇溶液(含$9\mathrm{{mmol}}/\mathrm{L}$ 甲酸铵)为流动相$\mathrm{B}$ ,梯度洗脱按表 1规定进行; 流速为${0.4}\mathrm{\;{mL}}/\mathrm{{min}}$ ,柱温${35}^{\circ }\mathrm{C}$ 。
(2) 质谱条件
三重四极杆串联质谱仪: 电喷雾(ESI)离子源, 依据表 2正、 负离子切换扫描模式。多反应监测(MRM)监测模式, 各化学成分的离子扫描模式、监测离子对、碰撞能量的参考值见表 2 。
续表
续表
续表
1.3.4 样品测定
按照 1.3.1 节方法对 24 批次山药样品进行 50 种植物调节剂残留的筛查。
2 结果与分析
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2.1 方法学验证
按 1.3.1 节方法采用空白山药基质作为提取液,制备系列混合标准溶液, 横坐标为浓度, 纵坐标为化合物定量离子对峰面积与内标物质峰面积比值,线性回归计算得到相关系数。 以 3 倍信噪比对应的浓度作为检出限。选择${20}\mathrm{{ng}}/\mathrm{{mL}}$混合标准溶液连续进样 6 次进行精密度测定。进行了${80\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{kg}}$的加标回收试验。方法学验证结果显示 50 种植物生长调节剂在配制浓度内线性关系良好, 相关系数均大于 0.99 。测得检出限在 0.006 ~0.09 mg/kg 范围内满足检测要求。精密度结果良好, RSD 为 1.14%~3.47%。加标回收率为 76%~96%,满足考察要求,详见 表 3。
续表
2.2 样品检测分析
本实验采用高效液相色谱 - 质谱联用法对山药样品中的 50 种植调剂进行定性筛查。实验结果为 24 批次山药样品中共检测出矮壮素、甲哌锑、对硝基苯酚钠 3 种植物生长调节剂,所有样品均不同程度地存在植物生长调节剂残留的情况。
3 讨论与结论
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中药材在种植过程中, 农户为了追求产量获得短期效益, 存在植物生长调节滥用的情况, 而不同品种由于生长特性不同,对植物调节剂的敏感性不同,因此不同药材品种中此类外源性有害物质的残留情况也不相同。下一步, 相关部门应结合中药材在种植环节使用植物调节剂的实际情况, 分类别分品种完善其限量标准。本文采用高效液相串联质谱方法快速、便捷地考察了山药中 50 种植物调节剂的残留状况, 为国家制定药材植物调节剂使用指导提供参考,规范药材种植保证质量安全。 该方法验证结果良好, 可以达到快速、准确而简便的筛查效果。通过对 24 批次山药样品的检测分析显示,所有样品均存在不同程度残留植物调节剂的情况, 其中 23 批次检出对硝基苯酚钠、22 批次检出矮壮素、10 批次检出甲哌锑；通过观察统计样品性状并外观直径大小结合残留情况, 结果显示植物调节剂种类的使用情况与饮片直径大小未呈现出直接的相关性。本文旨在对中药材山药中多种植调剂检测技术及残留情况的探索, 为进一步规范中药材从种植到临床使用的全过程管理, 强化质量控制, 不断完善植调剂限量标准, 有效监测外源性有害物质残留提供参考。

文献
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参考文献 引证文献
排序方式：
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2025年第3卷第3期
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鹅膏菌科Amanitaceae 2 11 5.26 鹅膏菌属 Amanita 10 4.78
小菇科 Mycenaceae 2 12 5.74 丝盖伞属 Inocybe 5 2.39
多孔菌科 Polyporaceae 8 14 6.70 蜡蘑属 Laccaria 5 2.39
红菇科 Russulaceae 3 23 11.00 小皮伞属 Marasmius 6 2.87
小菇属 Mycena 11 5.26
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栓菌属 Trametes 5 2.39
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