实验室检测

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不同方法检测抗-M抗体效果分析比较

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韦彩珍 ¹ , 陈宇强 ² , 廖思宇 ³ , 朱诗漫 ³ , 王荣 ³^,^*

实验室检测 | 评价与分析 2025,3(2): 143-145

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实验室检测 | 评价与分析 2025, 3(2): 143-145

不同方法检测抗-M抗体效果分析比较

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韦彩珍¹, 陈宇强², 廖思宇³, 朱诗漫³, 王荣³^,^*

作者信息

¹ 玉林市第一人民医院输血科玉林 537000

² 玉林市第一人民医院检验科玉林 537000

³ 右江民族医学院附属医院输血科百色 533000

韦彩珍，主管技师，研究方向为输血检验研究。

通讯作者:

^*王荣，博士，副教授，主管技师，研究方向为输血检验研究。E-mail: rongwang50@163.com

Affiliations

出版时间: 2025-01-23

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摘要

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目的分析不同方法检测抗 –M抗体对检测结果的影响。方法收集抗筛阳性标本且抗 –M 初筛阳性的标本,分别用试管法和微柱凝胶法在不同温度下将阳性标本进行普细胞实验,对不同方法检出抗 –M抗体的检出率进行分析。结果在4℃条件下,试管法和微柱凝胶法检测抗M抗体的检出率均为92.31%,在37℃条件下,试管法检测抗M 的检出率为38.46%,微柱凝胶法检测抗 –M 检出率为61.54%。结论 4℃条件下,两种方法检测抗M抗体灵敏度均高于37℃,而在37℃时,微柱凝胶法检测灵敏度高于试管法。玉林地区抗M检出率较高,应结合两种不同方法在不同温度条件下检测抗M,提高抗M抗体的检出率,减少输血不良反应的发生。

关键词

抗-M抗体 / 盐水法 / 微柱凝胶法 / 反应温度

引用本文

韦彩珍, 陈宇强, 廖思宇, 朱诗漫, 王荣. 不同方法检测抗-M抗体效果分析比较. 实验室检测, 2025 , 3 (2) : 143 -145 .

正文

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0 引言

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MNS 血型系统是第二个被发现的血型系统, 其相应的抗体易引起输血反应^[1]。目前已证实的抗原有 46 个,我国汉族人群中约 45%~50% 含有 M 抗原^[2]。MNS 血型系统的复杂性排在 Rh 系统之后^[3],因而也应重视MNS系统的同种抗体^[4]。抗-M、抗-$\mathrm{N}$、抗$-\mathrm{S}$都属于$\mathrm{{MNS}}$血型抗体,抗$-\mathrm{M}$抗体较为常见^[5]。抗-$\mathrm{M}$最佳反应温度是${4}^{\circ }\mathrm{C}$,多数抗$\mathrm{M}$抗体低于${37}^{\circ }\mathrm{C}$下发生反应, 很容易漏检$\mathrm{{IgG}}$类抗${\mathrm{M}}^{\left\lbrack 6\right\rbrack }$。随着现代输血技术水平的不断提高, 输血前抗体筛查阳性率较过去升高不少,抗$-\mathrm{M}$抗体检出比例在近年来也在逐年增加。本文旨在分析在不同反应温度条件下使用不同方法鉴定抗 -M 抗体的灵敏度,将对指导临床输血实验室鉴定抗-M 抗体提供参考依据。

1 材料与方法

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1.1 一般资料

选择 2023 年 1 月至 2023 年 12 月玉林市第一人民医院抗筛阳性标本 290 例,抗 -M 初筛阳性 13 例(男性 4 例,女性 9 例)。

1.2 试剂与仪器

人不规则抗体检测用 3% 红细胞试剂盒 (奥森多医疗器械贸易(中国)有限公司,批号 3SS403Z)；普细胞(上海血液生物医药有限责任公司,批号 20231116)；血液分析用稀释液 (奥森多医疗器械贸易(中国)有限公司,批号 280731 )；抗人球蛋白试剂(上海血液生物医药有限责任公司,批号 20235001)；微柱凝胶试剂卡(奥森多医疗器械贸易(中国)有限公司,批号 AHC333J); 抗-M血清试剂(上海血液生物医药有限责任公司,批号 20231221); 2-Me 应用液 (上海血液生物医药有限责任公司,批号 20227701)；低速离心机(北京白洋医疗器械有限公司,型号 BY-400C 型)；久保田 KA-2200 血清学离心机(日本 Kubota); 血型卡离心机 (YZB/USA1763-2008, 美国强生), 微柱凝胶卡孵育器(美国强生 BIOVUE)；精密三用恒温水箱 (HH600-2B,上海比朗国仪器有限公司)。

1.3 操作方法

直接抗人球试验:将抗 -M 初筛阳性标本红细胞经三次洗涤后制成 3%~5% 红细胞悬液,将 2 滴直接抗人球蛋白试剂加入玻璃试管中,再加入$3\%\sim 5\%$红细胞悬液 1 滴,混匀,放入血清学离心机离心${15}\mathrm{\;s}$,轻摇试管观察是否有凝集,镜下观察并记录结果。

自身抗体试验: 取一支试管, 加入 2 滴患者血清, 再加入 1 滴患者 3%~5% 红细胞悬液,混匀,离心 15 s,轻摇试管观察凝集情况, 并镜下观察记录结果。

试管法普细胞检测抗 -M 抗体:取 10 支试管,依次编号, 在试管中加入 2 滴患者血清,再按编号试管中依次加入相应序号的普细胞 1 滴,混匀,${1000}\mathrm{\;g}$离心${15}\mathrm{\;s}$,轻摇试管观察凝集情况,并记录结果。将试管放置在${4}^{\circ }\mathrm{C}$冰箱${30}\mathrm{\;{min}}$,混匀,${1000}\mathrm{\;g}$离心${15}\mathrm{\;s}$,轻摇试管观察凝集情况,并记录结果。再将试管放置在${37}^{\circ }\mathrm{C}$水浴箱${30}\mathrm{\;{min}}$,混匀,1000 g离心${15}\mathrm{\;s}$,观察凝集情况, 并记录结果。

微柱凝胶法检测抗 -M 抗体:将抗人球蛋白检测卡编号, 加入${50\mu }\mathrm{L}$血液分析用稀释液,加入${40\mu }\mathrm{L}$患者血清,再加入${20\mu }\mathrm{L}$普细胞,重复 2 次以上步骤,分别将加好反应物的抗人球蛋白检测卡放入${4}^{\circ }\mathrm{C}$环境和${37}^{\circ }\mathrm{C}$孵育器${30}\mathrm{\;{min}}$,最后放入血型卡离心机离心,记录结果。

抗$-\mathrm{M}$抗体性质检测:取$1\mathrm{\;{mL}}$患者血清与$1\mathrm{\;{mL}}$的$2 -\mathrm{{Me}}$应用液加入试管中,以$1 : 1$的比例混合,放置在${37}^{\circ }\mathrm{C}$水浴箱${30}\mathrm{\;{min}}$,用以破坏$\mathrm{{IgM}}$抗$-\mathrm{M}$抗体,先在微柱凝胶检测卡中加入${40\mu }\mathrm{L}$的$2 -\mathrm{{Me}}$处理后的患者血清,再加入${20\mu }\mathrm{L}$试剂普细胞,在${37}^{\circ }\mathrm{C}$孵育器中孵育${30}\mathrm{\;{min}}$,放入血型卡离心机离心,记录结果。

$\mathrm{{MN}}$分型: 在 2 支试管中,分别加入 2 滴抗$-\mathrm{M}$试剂、 2 滴抗 -N 试剂,再各加入患者悬浮红细胞 1 滴,混匀,1000 g 离心${15}\mathrm{\;s}$,观察并记录结果。

2 结果与分析

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2.1 直接抗人球试验和自身抗体实验

13 例抗 -M 初筛阳性的样本其直接抗人球试验和自身抗体实验匀为阴性, 说明自身抗体没有被包在患者红细胞表面 (如图 1~2)。

2.2 试管法普细胞检测抗 -M 抗体

其中${4}^{\circ }\mathrm{C}$条件下,抗一M 抗体检出 12 例,检出率为 92.31%。37°C条件下,抗-M抗体检出 5 例,检出率为 38.46%。在试管法中,在${4}^{\circ }\mathrm{C}$条件下抗-$\mathrm{M}$抗体检出率明显高于${37}^{\circ }\mathrm{C}$条件下的检出率 (如图 3)。

2.3 微柱凝胶法检测抗 -M 抗体

在${4}^{\circ }\mathrm{C}$条件下,抗一M 抗体检出 12 例,检出率为 92.31%。${37}^{\circ }\mathrm{C}$条件下,抗-M 抗体检出 8 例,检出率为 61.54%。在微柱凝胶法检测抗 -M 抗体时,${4}^{\circ }\mathrm{C}$条件下抗 -M 抗体检出率高于${37}^{\circ }\mathrm{C}$条件下的检出率 (如图 4)。

2.4 抗 -M 抗体性质检测

经$2 -\mathrm{{Me}}$应用液处理后的血清,用微柱凝胶法检测$\mathrm{{IgG}}$抗- M,其中,有反应性的标本为 8 例,检出率为 61.54%。其中 7 例为$\mathrm{{IgM}}+ \mathrm{{IgG}}$类, 1 例为单纯$\mathrm{{IgG}}$类抗体 (如图 5)。

2.5 MN 分型

研究中 13 例样本 MN 分型都是 NN 型 (见表 1)。

表 1结果分析: 13 例试管法初筛抗 -M 阳性标本中,单纯$\mathrm{{IgM}}$类抗$-\mathrm{M}$有 5 例,编号为 1、3、5、7、9,单纯$\mathrm{{IgG}}$类抗体有 1 例,其编号为 4 , IgM+IgG 类 7 例,编号为 2、6、8、10、 11、12、13,同时存在 IgM 和 IgG 类抗体占 53.85%,低于以往报道的${78}{\%}^{\left\lbrack 7\right\rbrack }$。在${4}^{\circ }\mathrm{C}$条件下,试管法与微柱凝胶法检测出抗 -$\mathrm{M}$抗体 12 例,4 号(单纯$\mathrm{{IgG}}$类)标本使用两种方法均未检出。

3 讨论与结论

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通常情况下盐水试管法只能检测出$\mathrm{{IgM}}$类抗体^[7],虽然有研究称,室温条件下,试管盐水法也会有少数的$\mathrm{{IgG}}$类抗$-\mathrm{M}$产生凝集^[8],但是仅用试管法检测会导致$\mathrm{{IgG}}$类抗$-\mathrm{M}$抗体漏检。抗人球蛋白添加在微柱凝胶卡中,可以检出$\mathrm{{IgG}}$类抗体, 因此, 试管法与微柱凝胶法结合, 可检出不同类型的抗体, 提高了抗 -M 抗体的检出率。

大多数抗-M抗体对温度较为敏感,最佳反应温度为${4}^{\circ }\mathrm{C}$,${25}^{\circ }\mathrm{C}$反应变弱,${37}^{\circ }\mathrm{C}$反应减弱甚至没有活性^[7],本次研究中,结果为单纯$\mathrm{{IgG}}$类抗体的标本有 1 例,${4}^{\circ }\mathrm{C}$时在试管法和微柱凝胶法中均未检出,而${37}^{\circ }\mathrm{C}$微柱凝胶法呈阳性反应,因此,虽然${4}^{\circ }\mathrm{C}$条件下试管法与微柱凝胶法的检出率已经很高了, 但是仍不能忽视${37}^{\circ }\mathrm{C}$微柱凝胶法,以免漏掉单纯$\mathrm{{IgG}}$类抗$-\mathrm{M}$抗体的检出。

抗 -M 抗体大多数是 IgM 类抗体,少数是 IgG 类,$\mathrm{{IgG}}$类抗 -M 抗体的产生多数由妊娠刺激或输血产生, 可引起较为严重的输血反应^[8]。国内外都曾有报道过抗$-\mathrm{M}$抗体引起的溶血性输血反应的案例^[9]。有活性的$\mathrm{{IgG}}$类抗 -M 可以通过胎盘屏障引起严重的新生儿溶血病^[10]。抗-M最佳反应温度是${4}^{\circ }\mathrm{C}$, 其在$4 \sim {20}^{\circ }\mathrm{C}$时具有反应活性,通常情况下,输血过程中不会产生输血反应^[11],若病患在低温麻醉状态下手术时,此类有活性的抗体可激活补体造成溶血反应^[12]。陆琼^[13]等指出,${4}^{\circ }\mathrm{C}$冷反应性的抗 -M 抗体也会引起新生儿溶血病。如果将含有相应抗原的红细胞给抗筛阳性的患者输注, 在补体的作参与下可导致红细胞溶解,甚至危及患者生命^[14]。若是这类抗体能够提前检测出则可以降低临床输血不良反应的风险^[15]。因而,在输血前能够正确检测出抗体对临床输血安全十分重要。在条件容许的情况下,应选择抗原阴性且交叉配血相合的血液输注。

因抗 -M 抗体具有冷反应性盐水凝集的特性,会对血型鉴定造成干扰,导致配血困难^[16]。有研究发现,大多数含有抗-M 抗体在做血清学检验时,环境温度低于${37}^{\circ }\mathrm{C}$均可能有反应^[17]。血型鉴定是安全输血的基础, 能够正确鉴定出患者的血型在临床安全输血中至关重要。在本次研究中,共有 3 例因抗 -M 抗体冷反应性盐水凝集的特性而导致的疑难血型。依笔者经验, 此类疑难血型需将患者红细胞用${37}^{\circ }\mathrm{C}$盐水洗三遍,将患者血清${37}^{\circ }\mathrm{C}$洗孵育 30 min,用盐水试管法即可鉴定出患者血型。本研究中有 1 例消化道出血的患者因其多次输注了$\mathrm{M}$抗原阴性的血液,导致该患者抗$-\mathrm{M}$抗体效价较弱,在${4}^{\circ }\mathrm{C}$盐水普细胞时减弱,但做加量血清后,可在${4}^{\circ }\mathrm{C}$盐水谱细胞实验中看到凝集加强。

本研究收集了玉林地区典型的临床病例进行分析总结, 但收集数据时间较短,病例数较少,且并未做${25}^{\circ }\mathrm{C}$条件下试管法与微柱凝胶法结果对照。下一步还需增加${25}^{\circ }\mathrm{C}$温度条件下做试管法、微柱凝胶法的比较。随着近年来抗 -M 抗体引起的新生儿溶血病的病例有明显增多,接下来笔者也将关注抗 -M 抗体导致的新生儿溶血病的病例分析。

通过本次研究结果发现,${4}^{\circ }\mathrm{C}$条件下,两种方法检测抗$-\mathrm{M}$抗体灵敏度均高于${37}^{\circ }\mathrm{C}$,而在${37}^{\circ }\mathrm{C}$时,微柱凝胶法检测灵敏度则高于试管法。但无论是试管法还是微柱凝胶法都会存在漏检的概率, 因此在做检测抗体时应在不同温度条件下同时使用试管法与微柱凝胶法以减少抗体的漏检,达到临床输血安全的目的。

基金

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国家自然科学基金(62341210)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2025年第3卷第2期

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首发时间：2025-07-18
出版时间：2025-01-23

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国家自然科学基金(62341210)

作者信息

¹ 玉林市第一人民医院输血科玉林 537000

² 玉林市第一人民医院检验科玉林 537000

³ 右江民族医学院附属医院输血科百色 533000

通讯作者:

^*王荣，博士，副教授，主管技师，研究方向为输血检验研究。E-mail: rongwang50@163.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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