实验室检测

序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
装量(g)	6.0324	6.1567	5.8966	6.0107	6.1868	6.0414	6.0528	5.9706	5.9825	6.0379
平均装量 ${W}_{\mathrm{均}}\left( \mathrm{g}\right)$		6.0368

序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
装量(g)	6.0324	6.1567	5.8966	6.0107	6.1868	6.0414	6.0528	5.9706	5.9825	6.0379
平均装量 ${W}_{\mathrm{均}}\left( \mathrm{g}\right)$		6.0368

序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
含量(mg)	2.268	2.261	2.266	2.271	2.266	2.267	2.260	2.264	2.272	2.269
平均含量 $\bar{C}$ (mg)		2.266

序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
含量(mg)	2.268	2.261	2.266	2.271	2.266	2.267	2.260	2.264	2.272	2.269
平均含量 $\bar{C}$ (mg)		2.266

序号	加入量	测得量	回收率(%)	平均回收率(%)
1	111.8	110.27	98.63	99.45
2	111.8	110.74	99.05
3	111.8	113.35	101.39
4	111.8	109.47	97.92
5	111.8	110.83	99.13
6	111.8	112.44	100.57

序号	加入量	测得量	回收率(%)	平均回收率(%)
1	111.8	110.27	98.63	99.45
2	111.8	110.74	99.05
3	111.8	113.35	101.39
4	111.8	109.47	97.92
5	111.8	110.83	99.13
6	111.8	112.44	100.57

各分量名称	不确定数值
对照品称量的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {M}_{\mathrm{s}}\right)$	${1.154} \times {10}^{-2}$
供试品平均装量的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \bar{M}\right)$	${7.819} \times {10}^{-2}$
供试品称量过程引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {M}_{\mathrm{t}}\right)$	${4.555} \times {10}^{-4}$
对照品溶液配制的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{s}}\right)$	${8.055} \times {10}^{-3}$
供试品溶液配制的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{t}}\right)$	${7.857} \times {10}^{-3}$
HPLC 设备的测定不确定度 ${u}_{\text{rel }}\left( \mathrm{{HPLC}}\right)$	${5.774} \times {10}^{-3}$
供试品测量结果重复性的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \mathrm{{rep}}\right)$	${5.504} \times {10}^{-4}$
回收率引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{p}}\left( \mathrm{{rec}}\right)$	${5.289} \times {10}^{-3}$

各分量名称	不确定数值
对照品称量的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {M}_{\mathrm{s}}\right)$	${1.154} \times {10}^{-2}$
供试品平均装量的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \bar{M}\right)$	${7.819} \times {10}^{-2}$
供试品称量过程引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {M}_{\mathrm{t}}\right)$	${4.555} \times {10}^{-4}$
对照品溶液配制的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{s}}\right)$	${8.055} \times {10}^{-3}$
供试品溶液配制的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{t}}\right)$	${7.857} \times {10}^{-3}$
HPLC 设备的测定不确定度 ${u}_{\text{rel }}\left( \mathrm{{HPLC}}\right)$	${5.774} \times {10}^{-3}$
供试品测量结果重复性的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \mathrm{{rep}}\right)$	${5.504} \times {10}^{-4}$
回收率引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{p}}\left( \mathrm{{rec}}\right)$	${5.289} \times {10}^{-3}$

高效液相色谱法测定连花清瘟颗粒中连翘苷含量的不确定度评定

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高敏 ¹^,^* , 李珧珲 ² , 李茗 ¹

实验室检测 | 创新应用 2025,3(4): 5-8

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实验室检测 | 创新应用 2025, 3(4): 5-8

高效液相色谱法测定连花清瘟颗粒中连翘苷含量的不确定度评定

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高敏¹^,^*, 李珧珲², 李茗¹

作者信息

¹ 枣庄市食品药品检验检测中心枣庄 277000

² 枣庄市市中区市场监管综合服务中心枣庄 277011

通讯作者:

^*高敏，硕士，主管中药师，研究方向为中药质量控制。E-mail: gaomin169@163.com

Affiliations

出版时间: 2025-02-23

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摘要

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目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定连花清瘟颗粒中连翘苷含量的不确定度评定。方法根据2020年版《中华人民共和国药典(一部)》和JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》,采用HPLC法测定连花清瘟颗粒中连翘苷含量的不确定度。结果在95%的置信区间下,包含因子k=2时评定扩展不确定度为(2.279±0.160)mg。结论本方法的测量不确定度主要由样品称量、制备引入。通过不确定度的评估,可提高检验结果的可靠性,及时发现和降低检验风险,提升检验报告质量。

关键词

连花清瘟颗粒 / 不确定度 / 连翘苷 / 含量 / 高效液相色谱法

引用本文

高敏, 李珧珲, 李茗. 高效液相色谱法测定连花清瘟颗粒中连翘苷含量的不确定度评定. 实验室检测, 2025 , 3 (4) : 5 -8 .

正文

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0 引言

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连花清瘟颗粒, 具有清瘟解毒、宣肺泄热的功效。是在中医理论指导研发的用于治疗流行性感冒属热毒袭肺证^[1-2]。目前连花清瘟颗粒中连翘苷含量的检测方法依据为 2020 年版《中华人民共和国药典(一部)》^[3],在检测过程中引入不确定度的因素很多。连翘苷含量的准确测定, 可以更好地评价连花清瘟颗粒制剂的质量状况。而在实际的实验室检测过程中, 含量测定结果受到实验室环境、操作人员、仪器设备等因素的影响。因此正确评价测量结果, 分析影响结果的因素来源及可信程度, 分析测量不确定度尤为必要。本研究依据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1-2012)^[4]、《化学分析中不确定度的评估指南》(CNAS-GL006: 2019)^[5]和《常用玻璃量器检定规程》(JJG 196-2006)^[6],并参考文献^[7-10],对含量测定过程中不确定度来源进行详细分析, 比较不确定度主要来源的影响大小, 建立不确定度模型, 计算扩展不确定度, 更好地规范实验操作和提高结果准确性, 并为正确评价测量结果、提高药品质量提供科学依据。

1 材料与方法

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1.1 主要仪器与试剂

岛津 LC-20AT 型高效液相色谱仪；梅特勒电子天平 XS205DU；连翘苷对照品(中国食品药品检定研究院,批号: 110821-202117, 纯度: 94.9%)。

色谱纯级别乙腈、甲醇；优级纯级别磷酸；超纯水；连花清瘟颗粒(批号:A2204127H,衡水以岭药业股份有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱: Agilent ZORBAX SB C18(${4.6}\mathrm{\;{mm}}\times {250}\mathrm{\;{mm}},{5\mu }\mathrm{m}$ ); 流动相:乙腈$-{0.1}\%$ 磷酸溶液 (22:78)；流速:1.0 mL/min；检测波长为${205}\mathrm{\;{nm}}$ 。

1.2.2 溶液制备

(1)对照品溶液的制备:取连翘苷对照品${11.18}\mathrm{{mg}}$ ,配制成 4.244μg/L 的对照品溶液。

(2)供试品溶液的制备:取装量差异项下的供试品,混匀, 取适量,研细,取 2.0040 g,精密称定,制备供试品溶液。

1.2.3 测定方法

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各${10\mu }\mathrm{L}$ ,注入高效液相色谱仪,测定。

1.3 测量模型

$ X =\frac{{\bar{A}}_{\mathrm{t}}\times {f}_{\mathrm{t}}\times \bar{M}}{\bar{F}\times {M}_{\mathrm{t}}}\\ F =\frac{{\bar{A}}_{\mathrm{s}}\times {f}_{\mathrm{s}}}{{M}_{\mathrm{s}}\times C}$

式中,$X$——每袋样品中连翘苷的含量,$\mathrm{{mg}};{f}_{\mathrm{t}}$——供试品稀释倍数；${f}_{\mathrm{s}}$——对照品稀释倍数；${M}_{\mathrm{t}}$——供试品质量,$\mathrm{g}$；${M}_{\mathrm{s}}$——对照品质量,$\mathrm{g};{\bar{A}}_{\mathrm{t}}$——供试品峰面积平均值；${\bar{A}}_{\mathrm{s}}$—— 对照品峰面积平均值;$C$——对照品纯度,$\%;\bar{M}$样品平均装量, g。

2 结果与分析

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2.1 不确定度来源分析

根据检测方法及函数关系式, 连花清瘟颗粒中连翘苷含量的不确定度来源主要有:

A 类不确定度: 涉及的测量重复性。

B 类不确定度:(1)样品和对照品称量过程引入的不确定度;(2)样品和对照品稀释定容过程引入的不确定度；(3)样品的不均匀性;(4)仪器测量引入的不确定度。

2.2 不确定度评定

2.2.1 天平称量过程引入的不确定度

(1)对照品称量过程引入的不确定度${u}_{\mathrm{{rel}}}\left({M}_{\mathrm{s}}\right)$

用十万分之一电子天平称量连翘苷对照品,$m ={11.18}\mathrm{{mg}}$ 。根据使用天平的校准证书, 在称量负荷范围的最大允许误差为$\pm {0.05}\mathrm{{mg}}$ ,按照均匀分布计算,$k =\sqrt{3}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{1}\left({M}_{\mathrm{s}}\right)= \frac{0.05}{\sqrt{3}}= {2.887}\times {10}^{-2}\mathrm{{mg}}$

根据使用天平的校准证书, 天平称量重复性的标准偏差为${0.15}\mathrm{{mg}}$ ,按照均匀分布计算,$k =\sqrt{3}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{2}\left({M}_{\mathrm{s}}\right)= \frac{0.15}{\sqrt{3}}= {8.660}\times {10}^{-2}\mathrm{{mg}}$

对照品称量使用减重法, 称量实验室的环境独立, 温湿度在快速称量的短期内变化忽略不计, 故对照品称量过程的合成标准不确定度计算如下:

$ u\left({M}_{\mathrm{s}}\right)= \sqrt{2 \times \left\{{{\left\lbrack {u}_{1}\left({M}_{\mathrm{s}}\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{2}\left({M}_{\mathrm{s}}\right)\right\rbrack }^{2}}\right\}} ={0.129}\mathrm{{mg}}$

相对标准不确定度计算如下:

${u}_{\text{rel }}\left({M}_{\mathrm{s}}\right)= \frac{u\left({M}_{\mathrm{s}}\right)}{{11.18}\mathrm{{mg}}}= {1.154}\times {10}^{-2}$

(2)供试品平均装量称量引入的不确定度${u}_{\mathrm{{rel}}}\left(\bar{M}\right)$

平均装量引入的不确定度分为天平称量过程的测量不确定度和装量量差异的不确定度。使用万分之一天平称量供试品的装量差异, 测量不确定度计算如下:

根据使用天平的校准证书, 在称量负荷范围的最大允许误差为$\pm {0.50}\mathrm{{mg}}$ ,按照均匀分布计算,$k =\sqrt{3}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{1}\left({M}_{\mathrm{t}}\right)= \frac{0.50}{\sqrt{3}}= {0.2887}\mathrm{{mg}}$

根据使用天平的校准证书, 天平称量重复性的标准偏差为${1.0}\mathrm{{mg}}$ ,按照均匀分布计算,$k =\sqrt{3}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{2}\left({M}_{\mathrm{t}}\right)= \frac{1.0}{\sqrt{3}}= {0.5774}\mathrm{\;{mg}}$

供试品称量使用减重法, 称量实验室的环境独立, 温湿度在称量的短期内变化忽略不计, 故称量过程的合成标准不确定度计算如下:

$ u\left({M}_{\mathrm{t}}\right)= \sqrt{2 \times \left\{{{\left\lbrack {u}_{1}\left({M}_{\mathrm{t}}\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{2}\left({M}_{\mathrm{t}}\right)\right\rbrack }^{2}}\right\}} ={0.9129}\mathrm{\;{mg}}$

供试品装量差异引入的不确定度计算如下: 取供试品 10 袋, 分别取内容物精密称定, 并得出平均装量, 结果如表 1 。

计算标准偏差${S}_{\text{均 }}= {1.4911}$

则${u}_{\text{rel }}\left(\bar{M}\right)= \frac{{S}_{\text{均 }}}{\sqrt{10}}= {0.472}\mathrm{\;g}$

综上所述, 平均装量引入的相对不确定度为

${u}_{\text{rel }}\left(\bar{M}\right)= \frac{\sqrt{{\left\lbrack u\left({M}_{\mathrm{t}}\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack u\left(\bar{M}\right)\times {10}^{3}\right\rbrack }^{2}}}{\bar{M}\times {10}^{3}}= {7.819}\times {10}^{-2}\mathrm{\;g}$

(3)供试品称量过程引入的不确定度${u}_{\mathrm{{rel}}}\left({M}_{\mathrm{t}}\right)$

用万分之一电子天平称量装量差异项下的连花清瘟颗粒供试品$m ={2.0040}\mathrm{\;g}$ 。

供试品称量过程的合成标准不确定度同 2.2.1(2)中

$u\left({M}_{\mathrm{t}}\right)= {0.9129}\mathrm{{mg}}$

相对标准不确定度计算如下:

${u}_{\text{rel }}\left({M}_{\mathrm{t}}\right)= \frac{u\left({M}_{\mathrm{t}}\right)}{{2.0040}\mathrm{\;g}\times {10}^{3}}= {4.555}\times {10}^{-4}$

2.2.2 溶液配制过程引入的不确定度

(1) 对照品溶液配制过程引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{s}}\right)$

a. 玻璃仪器校准不确定度

根据使用到的${50}\mathrm{\;{mL}}$ ,$\mathrm{A}$ 级单标线容量瓶的允许误差为$\pm {0.05}\mathrm{\;{mL}}$ ,使用到 2 次,按照三角分布计算,$k =\sqrt{6}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{s}\left({{V}_{50}1}\right)= \frac{0.05}{\sqrt{6}}\times 2 ={4.082}\times {10}^{-2}\mathrm{\;{mL}}$

根据检定证书$1\mathrm{\;{mL}}\mathrm{\;A}$ 级移液管的允许误差为$\pm {0.005}\mathrm{\;{mL}}$ , 按照三角分布计算,$k =\sqrt{6}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{s}\left({{V}_{1}1}\right)= \frac{0.005}{\sqrt{6}}= {2.041}\times {10}^{-3}\mathrm{\;{mL}}$

########## b. 温度引入的不确定度

实验温度为${\left({20}\pm 5\right)}^{\circ }\mathrm{C}$ ,配制过程中使用到${50}\%$ 甲醇, 此条件下根据甲醇及水的体积膨胀系数分别为${1.2}\times {10}^{-{30}}\mathrm{C}$ 、${2.07}\times {10}^{-3}\mathrm{O}$ ,得出${50}\%$ 甲醇体积膨胀系数为${1.635}\times {10}^{-3}\mathrm{O}$ 。标准不确定度计算如下:

${u}_{\mathrm{s}}\left({{V}_{50}2}\right)= \frac{{1.635}\times {10}^{-3}\times {50}\times 5}{\sqrt{3}}\times 2 ={0.471}\mathrm{\;{mL}}$

${u}_{\mathrm{s}}\left({{V}_{1}2}\right)= \frac{{1.635}\times {10}^{-3}\times 1 \times 5}{\sqrt{3}}= {4.720}\times {10}^{-3}\mathrm{\;{mL}}$

则${u}_{\mathrm{s}}\left({V}_{50}\right)= \sqrt{{\left\lbrack {u}_{\mathrm{s}}\left({V}_{50}1\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\mathrm{s}}\left({V}_{50}2\right)\right\rbrack }^{2}}= {0.473}\mathrm{\;{mL}}$

${u}_{\mathrm{s}}\left({V}_{1}\right)= \sqrt{{\left\lbrack {u}_{\mathrm{s}}\left({V}_{1}1\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\mathrm{s}}\left({V}_{1}2\right)\right\rbrack }^{2}}= {5.300}\times {10}^{-3}\mathrm{\;{mL}}$

综上, 对照品溶液配制过程中引入的相对不确定度为:

${u}_{\text{rel }}\left({V}_{\mathrm{s}}\right)= \sqrt{{\left\lbrack \frac{{u}_{\mathrm{s}}\left({V}_{50}\right)}{50}\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack \frac{{u}_{\mathrm{s}}\left({V}_{1}\right)}{1}\right\rbrack }^{2}}= {8.055}\times {10}^{-3}\mathrm{\;{mL}}$

(2)供试品溶液配制过程引入的不确定度${u}_{\mathrm{{rel}}}\left({V}_{\mathrm{t}}\right)$

a. 玻璃仪器校准不确定度

根据使用到的${25}\mathrm{\;{mL}},\mathrm{\;A}$ 级单标线容量瓶的允许误差为$\pm {0.03}\mathrm{\;{mL}}$ ,使用到 2 次,按照三角分布计算,$k =\sqrt{6}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{t}\left({{V}_{25}1}\right)= \frac{0.03}{\sqrt{6}}\times 2 ={2.449}\times {10}^{-2}\mathrm{\;{mL}}$

根据检定证书$5\mathrm{\;{mL}}\mathrm{\;A}$ 级移液管的允许误差为$\pm {0.015}\mathrm{\;{mL}}$ , 按照三角分布计算,$k =\sqrt{6}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{t}\left({{V}_{5}1}\right)= \frac{0.015}{\sqrt{6}}= {6.124}\times {10}^{-3}\mathrm{\;{mL}}$

b. 温度引入的不确定度

实验温度为${\left({20}\pm 5\right)}^{\circ }\mathrm{C}$ ,供试品配制过程中使用到甲醇和水,此条件下甲醇及水的体积膨胀系数分别为${1.2}\times {10}^{-{30}}\mathrm{C}$ 、${2.07}\times {10}^{-3}{}^{\circ }\mathrm{C}$ 。

标准不确定度计算如下。${25}\mathrm{\;{mL}}$ 容量瓶分别使用到甲醇和水, 分别计算为:

${u}_{\text{t 甲醇 }}\left({{V}_{25}2}\right)= \frac{{1.2}\times {10}^{-3}\times {25}\times 5}{\sqrt{3}}= {8.660}\times {10}^{-2}\mathrm{\;{mL}}\\{u}_{\text{t水 }}\left({{V}_{25}2}\right)= \frac{{2.07}\times {10}^{-3}\times {25}\times 5}{\sqrt{3}}= {0.149}\mathrm{\;{mL}}\\{u}_{\mathrm{t}}\left({{V}_{5}2}\right)= \frac{{1.2}\times {10}^{-3}\times 5 \times 5}{\sqrt{3}}= {1.732}\times {10}^{-2}\mathrm{\;{mL}}\\\text{则}{u}_{\mathrm{t}\text{ 甲醇 }}\left({V}_{25}\right)= \sqrt{{\left\lbrack \frac{{u}_{\mathrm{t}}\left({{V}_{25}1}\right)}{2}\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\mathrm{t}\text{ 甲醇 }}\left({V}_{25}2\right)\right\rbrack }^{2}}= {8.746}\times {10}^{-2}\mathrm{\;{mL}}\\{u}_{\mathrm{t}\text{ 水 }}\left({V}_{25}\right)= \sqrt{{\left\lbrack \frac{{u}_{\mathrm{t}}\left({{V}_{25}1}\right)}{2}\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\mathrm{t}\text{ 水 }}\left({V}_{25}2\right)\right\rbrack }^{2}}= {0.150}\mathrm{\;{mL}}\\{u}_{\mathrm{t}}\left({V}_{5}\right)= \sqrt{{\left\lbrack {u}_{\mathrm{t}}\left({V}_{5}1\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\mathrm{t}}\left({V}_{5}2\right)\right\rbrack }^{2}}= {1.837}\times {10}^{-3}\mathrm{\;{mL}}$

综上, 供试品溶液配制过程中引入的相对不确定度为:

${u}_{\text{rel }}\left({V}_{\mathrm{t}}\right)= \sqrt{{\left\lbrack \frac{{u}_{\mathrm{t}\text{ 甲醇 }}\left({V}_{25}\right)}{25}\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack \frac{{u}_{\mathrm{t}\text{ 水 }}\left({V}_{25}\right)}{25}\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack \frac{{u}_{\mathrm{t}}\left({V}_{5}\right)}{5}\right\rbrack }^{2}}= {7.857}\times {10}^{-3}$

#### 2.2.3 HPLC 方法测量过程中引入的不确定度

(1) HPLC 设备的测定不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \mathrm{{HPLC}}\right)$

根据设备的检定证书,测定相对标准偏差为${1.0}\%$ ,按照均匀分布计算,$k =\sqrt{3}$ ,故标准不确定度为:

${u}_{\text{rel }}\left(\mathrm{{HPLC}}\right)= \frac{{1.0}\%}{\sqrt{3}}= {5.774}\times {10}^{-3}$

(2)供试品测量结果重复性引入的不确定度${u}_{\mathrm{{rel}}}\left(\mathrm{{rep}}\right)$

使用同一设备重复进样 10 次, 结果如表 2所示。

计算标准偏差${S}_{n}= {3.944}\times {10}^{-3}$

则$u\left(\mathrm{{rep}}\right)= \frac{{S}_{n}}{\sqrt{10}}= {1.247}\times {10}^{-3}\mathrm{{mg}}$

综上所述, 测量结果重复性引入的相对不确定度为

${u}_{\text{rel }}\left(\mathrm{{rep}}\right)= \frac{u\left(\mathrm{{rep}}\right)}{2.266}= {5.504}\times {10}^{-4}\mathrm{{mg}}$

#### 2.2.4 回收率引入的不确定度

因连花清瘟颗粒供试品前处理较为复杂, 提取步骤对结果存在一定的影响, 通过测定回收率对结果进行校正。取 6 份空白质控样品约${2.0}\mathrm{\;g}$ ,精密称定,加入定量的连翘苷对照品溶液, 按 1.2.2 供试品溶液制备方法制备, 测定其连翘苷含量。回收率为${97.25}\%\sim {101.39}\%$ ,平均回收率$\bar{R}= {99.45}\%$ ,校正后含量为${2.279}\mathrm{{mg}}/$ 袋。回收率结果见表 3 。

计算标准偏差${S}_{n}= {1.288}$

则$u\left(\mathrm{{rec}}\right)= \frac{{S}_{n}}{\sqrt{6}}= {0.526}\mathrm{{mg}}$

综上所述, 测量结果重复性引入的相对不确定度为

${u}_{\text{rel }}\left(\mathrm{{rec}}\right)= \frac{u\left(\mathrm{{rec}}\right)}{99.45}= {5.289}\times {10}^{-3}$

2.2.5 合成标准不确定度

连花清瘟颗粒中连翘苷含量测定过程中各分量不确定度见表 4 。各分量的不确定度来源相互独立, 因此合成标准不确定度${u}_{\text{crel }}$ 为:

${u}_{\text{crel }}= {\left\{{\left\lbrack {u}_{\text{rel }}\left({M}_{\mathrm{s}}\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\text{rel }}\left(\bar{M}\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\text{rel }}\left({M}_{\mathrm{t}}\right)\right\rbrack }^{2}+ \left\lbrack {u}_{\text{rel }}\left({V}_{\mathrm{s}}\right)\right\rbrack \right\rbrack }^{2}\\{\left.+{\left\lbrack {u}_{\mathrm{{rel}}}\left({V}_{\mathrm{t}}\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\mathrm{{rel}}}\left(\mathrm{{HPLC}}\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\mathrm{{rel}}}\left(\mathrm{{rep}}\right)\right\rbrack }^{2}+ {\left\lbrack {u}_{\mathrm{p}}\left(\mathrm{{rec}}\right)\right\rbrack }^{2}\right\}}^{\frac{1}{2}}\\= {8.022}\times {10}^{-2}\mathrm{{mg}}$

2.2.6 扩展不确定度

连翘苷含量测定结果属正态分布, 取 95% 置信区间$\left({k = 2}\right)$ ,扩展不确定度为:

$ U ={u}_{\text{crel }}\times k ={8.022}\times {10}^{-2}\times 2 ={0.160}\mathrm{{mg}}$

综上所述,含量测定结果为$X =\left({{2.279}\pm {0.160}}\right)\mathrm{{mg}}/$ 袋

3 讨论与结论

收起

通过对连花清瘟颗粒中连翘苷含量的不确定度评定可知, 不确定度来源较多, 但分量值较小。具体分析来看, 不确定度最大的为对照品称量的不确定度, 这主是因为对照品的称量质量较小,对实验人员操作水平和设备使用状况、精度等要求较高。在日常操作中, 可通过称取较大质量标准品置于较大容积的容量瓶中进行配制, 同时确保设备在检定周期内, 选择性能最佳的进行操作^[11-13]。其次是供试品平均装量的不确定度,因此生产厂家在控制药品质量过程中应提高生产工艺^[14]从而降低装量差异^[15-16]。

综上所述, 评定检测数据的不确定度可以提升试验数据的准确性和可靠性, 降低检验报告的风险, 尤其在面对检验工作中遇到的检验结果处在标准要求数据临界值或者略低于标准限值^[17-18]时更具有指导意义^[19]。通过本次研究可以为中成药中颗粒剂含量指标的不确定度评定提供参考。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

[1]

成蕾, 刘洪, 王婷婷, 等 . 连花清瘟制剂化学成分、药理作用、临床应用的研究进展[J]. 中成药, 2021. 43(12): 3409-3416.

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2025年第3卷第4期

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首发时间：2025-07-09
出版时间：2025-02-23

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作者信息

¹ 枣庄市食品药品检验检测中心枣庄 277000

² 枣庄市市中区市场监管综合服务中心枣庄 277011

通讯作者:

^*高敏，硕士，主管中药师，研究方向为中药质量控制。E-mail: gaomin169@163.com

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/sysjc/CN/1149790677296443677

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
装量(g)	6.0324	6.1567	5.8966	6.0107	6.1868	6.0414	6.0528	5.9706	5.9825	6.0379
平均装量 ${W}_{\mathrm{均}}\left( \mathrm{g}\right)$		6.0368

序号

装量(g)

6.0324

6.1567

5.8966

6.0107

6.1868

6.0414

6.0528

5.9706

5.9825

6.0379

平均装量 ${W}_{\mathrm{均}}\left( \mathrm{g}\right)$

6.0368

序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
含量(mg)	2.268	2.261	2.266	2.271	2.266	2.267	2.260	2.264	2.272	2.269
平均含量 $\bar{C}$ (mg)		2.266

序号

含量(mg)

2.268

2.261

2.266

2.271

2.266

2.267

2.260

2.264

2.272

2.269

平均含量 $\bar{C}$ (mg)

2.266

序号	加入量	测得量	回收率(%)	平均回收率(%)
1	111.8	110.27	98.63	99.45
2	111.8	110.74	99.05
3	111.8	113.35	101.39
4	111.8	109.47	97.92
5	111.8	110.83	99.13
6	111.8	112.44	100.57

序号

加入量

测得量

回收率(%)

平均回收率(%)

111.8

110.27

98.63

99.45

111.8

110.74

99.05

111.8

113.35

101.39

111.8

109.47

97.92

111.8

110.83

99.13

111.8

112.44

100.57

各分量名称	不确定数值
对照品称量的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {M}_{\mathrm{s}}\right)$	${1.154} \times {10}^{-2}$
供试品平均装量的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \bar{M}\right)$	${7.819} \times {10}^{-2}$
供试品称量过程引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {M}_{\mathrm{t}}\right)$	${4.555} \times {10}^{-4}$
对照品溶液配制的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{s}}\right)$	${8.055} \times {10}^{-3}$
供试品溶液配制的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{t}}\right)$	${7.857} \times {10}^{-3}$
HPLC 设备的测定不确定度 ${u}_{\text{rel }}\left( \mathrm{{HPLC}}\right)$	${5.774} \times {10}^{-3}$
供试品测量结果重复性的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \mathrm{{rep}}\right)$	${5.504} \times {10}^{-4}$
回收率引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{p}}\left( \mathrm{{rec}}\right)$	${5.289} \times {10}^{-3}$

各分量名称

不确定数值

对照品称量的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {M}_{\mathrm{s}}\right)$

${1.154} \times {10}^{-2}$

供试品平均装量的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \bar{M}\right)$

${7.819} \times {10}^{-2}$

供试品称量过程引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {M}_{\mathrm{t}}\right)$

${4.555} \times {10}^{-4}$

对照品溶液配制的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{s}}\right)$

${8.055} \times {10}^{-3}$

供试品溶液配制的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( {V}_{\mathrm{t}}\right)$

${7.857} \times {10}^{-3}$

HPLC 设备的测定不确定度 ${u}_{\text{rel }}\left( \mathrm{{HPLC}}\right)$

${5.774} \times {10}^{-3}$

供试品测量结果重复性的不确定度 ${u}_{\mathrm{{rel}}}\left( \mathrm{{rep}}\right)$

${5.504} \times {10}^{-4}$

回收率引入的不确定度 ${u}_{\mathrm{p}}\left( \mathrm{{rec}}\right)$

${5.289} \times {10}^{-3}$