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目的 建立一测多评法同时测定抗病毒口服液中(R,S)告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘苷、连翘酯苷A、松脂素吡喃葡萄糖苷和连翘脂素7个成分的含量。方法 采用高效液相色谱法测定,采用Hydrosphere C18色谱柱(4.6mm×250 mm, 5µm);以乙腈(A)0.01%磷酸溶液(B)为流动相梯度洗脱;检测波长为236nm;进样量10 µL。以连翘苷为内参物,计算(R,S) 告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘酯苷A、松脂素吡喃葡萄糖苷和连翘脂素的相对校正因子和含量,比较外标法和一测多评法的结果差异。结果 7种成分的色谱峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999; 样品加标平均回收率分别 为95.83%~100.27%;测定结果的相对标准偏差为0.11%~2.02%(n=6)。结论本研究建立的抗病毒口服液中7个成分的含量的测定方法准确,简单可行,可用于抗病毒口服液的质量控制。

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*丁金有,工程师,研究方向为药物分析和实验室安全管理。E-mail:
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工程师,研究方向为药物分析和实验室安全管理。

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基于一测多评法的麸炒金樱子成分含量测定[J]. 中国医院药学杂志, 2023, 43(24): 2770-2775., articleTitle=基于一测多评法的麸炒金樱子成分含量测定, refAbstract=null), Reference(id=1154353354848329731, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2023, volume=34, issue=9, pageStart=1081, pageEnd=1085, url=null, language=null, rfNumber=[10], rfOrder=9, authorNames=王佳佳, 李希, 冯建安, journalName=中国药房, refType=null, unstructuredReference=王佳佳, 李希, 冯建安, 等. HPLC指纹图谱结合一测多评法控制马齿苋药材质量[J]. 中国药房, 2023, 34(9): 1081-1085., articleTitle=HPLC指纹图谱结合一测多评法控制马齿苋药材质量, refAbstract=null), Reference(id=1154353354915438596, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, doi=null, pmid=null, pmcid=null, year=2023, volume=21, issue=5, pageStart=1352, pageEnd=1357, url=null, language=null, rfNumber=[11], rfOrder=10, authorNames=邝敏, 严玉晶, 林嘉明, journalName=中南药学, refType=null, unstructuredReference=邝敏, 严玉晶, 林嘉明, 等. 一测多评法同时测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分[J]. 中南药学, 2023, 21(5): 1352-1357., articleTitle=一测多评法同时测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分, refAbstract=null)], funds=[Fund(id=1154353354122716138, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, awardId=20242CZDX65, language=CN, fundingSource=上饶市科学技术局科研项目(20242CZDX65), fundOrder=null, country=null)], companyList=[AuthorCompany(id=1154353349337015132, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, xref=null, ext=[AuthorCompanyExt(id=1154353349341209437, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, companyId=1154353349337015132, language=CN, country=null, province=null, city=null, postcode=null, companyName=null, departmentName=null, remark=上饶市检验检测认证院 上饶 334000)])], figs=[ArticleFig(id=1154353353195774929, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=EN, label=null, caption=null, figureFileSmall=5mHZPyzUXUElX1UsOKR/Kg==, figureFileBig=/R9hOi3Y5aFgt4Kd4mJ4+g==, tableContent=null), ArticleFig(id=1154353353275466707, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=CN, label=图 1, caption=混合对照品液相图谱, figureFileSmall=5mHZPyzUXUElX1UsOKR/Kg==, figureFileBig=/R9hOi3Y5aFgt4Kd4mJ4+g==, tableContent=null), ArticleFig(id=1154353353334186964, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=EN, label=null, caption=null, figureFileSmall=0Re8BCDpr+gDkAivcHIdZg==, figureFileBig=kJf5bzHn7N0dJ81gjUbZ5g==, tableContent=null), ArticleFig(id=1154353353430655958, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=CN, label=图 2, caption=样品液相图谱, figureFileSmall=0Re8BCDpr+gDkAivcHIdZg==, figureFileBig=kJf5bzHn7N0dJ81gjUbZ5g==, tableContent=null), ArticleFig(id=1154353353493570520, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=EN, label=null, caption=null, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
成分 回归方程 线性范围
(R, S)- 告依春 $Y = {73451X} + {20207}$ 0.9997 0.2402~60.55
芒果苷 $Y = {40705X} - {9858.5}$ 0.9995 0.2395~59.878
连翘酯苷 I $Y = {10293X} + {1779.4}$ 0.9998 4.90~98.00
连翘酯苷 A $Y = {12209X} - {5695.4}$ 0.9998 6.3050 ~1261.0
松脂素吡喃葡 糖糖苷 $Y = {13906X} - {5259.9}$ 0.9994 3.92~78.40
连翘苷 $Y = {18780X} + {4424.3}$ 0.9996 0.1957 ~48.921
连翘酯素 $Y = {25500X} + {358.27}$ 0.9999 0.2417 % 60.417
), ArticleFig(id=1154353353560679386, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=CN, label=表 1, caption=各成分回归方程, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
成分 回归方程 线性范围
(R, S)- 告依春 $Y = {73451X} + {20207}$ 0.9997 0.2402~60.55
芒果苷 $Y = {40705X} - {9858.5}$ 0.9995 0.2395~59.878
连翘酯苷 I $Y = {10293X} + {1779.4}$ 0.9998 4.90~98.00
连翘酯苷 A $Y = {12209X} - {5695.4}$ 0.9998 6.3050 ~1261.0
松脂素吡喃葡 糖糖苷 $Y = {13906X} - {5259.9}$ 0.9994 3.92~78.40
连翘苷 $Y = {18780X} + {4424.3}$ 0.9996 0.1957 ~48.921
连翘酯素 $Y = {25500X} + {358.27}$ 0.9999 0.2417 % 60.417
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进样量 _告依春 芒果苷 /连翘酯苷 I / 连翘酯苷 A / 松脂素吡喃葡糖糖苷 /连翘酯素
5 3.1232 2.0503 1.7351 0.8689 0.9664 1.2909
10 3.1352 2.0841 1.7563 0.8728 0.9804 1.2978
15 3.1578 2.0927 1.7349 0.8821 0.9735 1.3002
20 3.1479 2.0678 1.7466 0.8735 0.9834 1.3147
25 3.1583 2.0591 1.7621 0.8804 0.9609 1.3185
30 3.1692 2.0866 1.7206 0.8651 0.9824 1.3212
平均值 3.1486 2.0734 1.7426 0.8738 0.9745 1.3072
RSD/% 0.54 0.82 0.88 0.75 0.94 0.96
), ArticleFig(id=1154353353678119902, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=CN, label=表 2, caption=各组分的相对校正因子, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
进样量 _告依春 芒果苷 /连翘酯苷 I / 连翘酯苷 A / 松脂素吡喃葡糖糖苷 /连翘酯素
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10 3.1352 2.0841 1.7563 0.8728 0.9804 1.2978
15 3.1578 2.0927 1.7349 0.8821 0.9735 1.3002
20 3.1479 2.0678 1.7466 0.8735 0.9834 1.3147
25 3.1583 2.0591 1.7621 0.8804 0.9609 1.3185
30 3.1692 2.0866 1.7206 0.8651 0.9824 1.3212
平均值 3.1486 2.0734 1.7426 0.8738 0.9745 1.3072
RSD/% 0.54 0.82 0.88 0.75 0.94 0.96
), ArticleFig(id=1154353353762005985, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=EN, label=null, caption=null, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
仪器 色谱柱
芒果苷 /s 连翘酯苷 I/s 连翘酯苷 A/s 松脂素吡喃葡糖糖苷 /s 连翘酯素
安捷伦 1260 Agilent 5 TC-C C18 0.2681 0.4496 0.6200 0.6928 0.7444 1.268
YMC Hydrosphere C18 0.2709 0.4569 0.6283 0.6924 0.7514 1.2753
Shimadzu AcclaimTM120 C18 0.2596 0.4474 0.6167 0.6831 0.7468 1.2513
Agilent 5 TC-C C18 0.2608 0.4469 0.6164 0.6829 0.7613 1.2512
岛津 LC-2030C 3D Plus YMC Hydrosphere C18 0.2633 0.4484 0.6178 0.6849 0.7466 1.2498
Shimadzu AcclaimTM120 C18 0.2706 0.4567 0.6281 0.6922 0.7539 1.2757
平均值 0.2656 0.4510 0.6212 0.6881 0.7507 1.2619
RSD/% 1.9 1.0 0.89 0.71 0.83 0.99
), ArticleFig(id=1154353353824920546, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=CN, label=表 3, caption=各成分相对保留值, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
仪器 色谱柱
芒果苷 /s 连翘酯苷 I/s 连翘酯苷 A/s 松脂素吡喃葡糖糖苷 /s 连翘酯素
安捷伦 1260 Agilent 5 TC-C C18 0.2681 0.4496 0.6200 0.6928 0.7444 1.268
YMC Hydrosphere C18 0.2709 0.4569 0.6283 0.6924 0.7514 1.2753
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批号 连翘苷/ (μg/mL) (R, S)- 告依春 / (μg/mL) 芒果苷/ 连翘酯苷 连翘酯苷A/(μg/mL) 松脂素吡喃 葡糖糖苷/(μg/mL) 连翘酯素/ (μg/mL)
ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM
S1 95.07 24.37 24.85 52.43 52.71 46.53 46.99 679.89 680.33 23.17 23.46 5.87 5.95
S2 89.82 21.42 21.90 55.27 54.63 66.76 66.62 577.34 576.27 28.32 27.96 5.55 5.48
S3 88.74 37.34 36.08 50.38 49.59 65.81 65.16 598.47 599.25 27.64 27.31 4.79 4.83
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S5 111.49 20.66 20.95 19.07 18.32 98.32 98.08 657.91 657.26 25.83 26.45 3.39 3.28
S6 122.09 10.46 10.39 15.09 14.54 20.64 20.86 757.15 756.24 12.33 12.85 5.48 5.11
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S9 125.11 21.33 20.80 13.61 13.82 100.54 100.63 693.29 694.62 28.52 28.08 7.61 7.55
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), ArticleFig(id=1154353353954943975, tenantId=1146029695717560320, journalId=1146119944283992078, articleId=1149789900721057930, language=CN, label=表 4, caption=一测多评法和外标法测定结果, figureFileSmall=null, figureFileBig=null, tableContent=
批号 连翘苷/ (μg/mL) (R, S)- 告依春 / (μg/mL) 芒果苷/ 连翘酯苷 连翘酯苷A/(μg/mL) 松脂素吡喃 葡糖糖苷/(μg/mL) 连翘酯素/ (μg/mL)
ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM
S1 95.07 24.37 24.85 52.43 52.71 46.53 46.99 679.89 680.33 23.17 23.46 5.87 5.95
S2 89.82 21.42 21.90 55.27 54.63 66.76 66.62 577.34 576.27 28.32 27.96 5.55 5.48
S3 88.74 37.34 36.08 50.38 49.59 65.81 65.16 598.47 599.25 27.64 27.31 4.79 4.83
S4 106.42 19.88 19.16 10.26 9.70 103.97 104.50 688.62 688.03 26.08 25.16 4.53 4.44
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S8 93.97 18.15 17.54 7.85 7.78 81.06 80.38 517.27 517.71 20.16 20.70 13.64 13.96
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S10 87.73 17.45 17.33 10.28 10.06 82.41 82.68 566.94 567.39 20.44 20.83 2.58 2.63
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一测多评法测定抗病毒口服液成分含量
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丁金有 * , 余中霞 , 徐鹏 , 江锐
实验室检测 | 评价与分析 2025,3(6): 120-123
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一测多评法测定抗病毒口服液成分含量
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丁金有* , 余中霞, 徐鹏, 江锐
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  • 上饶市检验检测认证院 上饶 334000

通讯作者:

*丁金有,工程师,研究方向为药物分析和实验室安全管理。E-mail:
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出版时间: 2025-03-23
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目的 建立一测多评法同时测定抗病毒口服液中(R,S)告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘苷、连翘酯苷A、松脂素吡喃葡萄糖苷和连翘脂素7个成分的含量。方法 采用高效液相色谱法测定,采用Hydrosphere C18色谱柱(4.6mm×250 mm, 5µm);以乙腈(A)0.01%磷酸溶液(B)为流动相梯度洗脱;检测波长为236nm;进样量10 µL。以连翘苷为内参物,计算(R,S) 告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘酯苷A、松脂素吡喃葡萄糖苷和连翘脂素的相对校正因子和含量,比较外标法和一测多评法的结果差异。结果 7种成分的色谱峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999; 样品加标平均回收率分别 为95.83%~100.27%;测定结果的相对标准偏差为0.11%~2.02%(n=6)。结论本研究建立的抗病毒口服液中7个成分的含量的测定方法准确,简单可行,可用于抗病毒口服液的质量控制。

一测多评法  /  高效液相色谱  /  抗病毒口服液  /  相对校正因子
丁金有, 余中霞, 徐鹏, 江锐. 一测多评法测定抗病毒口服液成分含量. 实验室检测, 2025 , 3 (6) : 120 -123 .
抗病毒口服液的组方选自东汉名医张仲景所著《伤寒论》“白虎汤”和清代名方 “清瘟败毒饮”,是一种根据悠久的传统中医实践理论, 经过多年的临床医学研究, 在近代药理趋于成熟的抗病毒处方药物, 处方由板蓝根、石膏、芦根、地黄、郁金、知母、石菖蒲、广藿香、连翘九味药材组成。具有清热祛湿,凉血解毒的作用, 用于风热感冒, 温病发热及上呼吸道感染, 流感、 腮腺炎病毒感染疾患[1]。毛鑫等[2-6]发现抗病毒口服液对甲型 H1N1 流感病毒体内外感染和流行性感冒有较好的治疗和预防作用。
抗病毒口服液现行标准《中华人民共和国药典》 2020 年版一部仅对连翘苷进行了含量测定。抗病毒口服液由九味中药材制备而成, 其中化学组分多, 采用多个对照品检验成本高。课题组将一测多评法 (Quantitative Analysis of Multi-components by Single Marker, QAMS)应用于抗病毒口服液中$\left( {\mathrm{R},\mathrm{S}}\right) -$告依春、芒果苷、 连翘酯苷 I、连翘苷、连翘酯苷 A、松脂素吡喃葡萄糖苷和连翘脂素 7 个成分的含量测定[7-8],并将一测多评法结果与外标法 (ESM) 进行比较,探讨一测多评法[9-11]在抗病毒口服液质量控制的可行性, 为抗病毒口服液的研究和质量控制奠定基础。
戴尔 Uitimate 3000 高效液相色谱仪(赛默飞公司);沃特斯 e2695 高效液相色谱仪(沃特斯公司);分析电子天平 (德国 Sartoriu 公司);超声仪(深圳市圳超科技有限公司)。 (R, S)- 告依春 (批号:111753-202007,含量 100%)、连翘苷(批号:110821-202117,含量 94.9%)、连翘酯苷 A (批号:111810-202108,含量 100%)均购于中国食品药品检定研究院;芒果苷(批号:wkq22022508,含量 98%)、 连翘酯苷 I(批号:wkq23031408,含量 98%)、松脂素吡喃葡萄糖苷(批号:wkq23021705,含量 98%)、连翘脂素(批号:wkq22110303,含量 98%)均购于四川省维克奇公司。水为自制超纯水, 乙腈为色谱级, 其余试剂均为分析纯。
采 用 Hydrosphere C18 色 谱 柱$({4.6}\mathrm{\;{mm}} \times {250}\mathrm{\;{mm}}$,${5\mu }\mathrm{m}$),以乙腈$\left( \mathrm{A}\right) - {0.01}\%$磷酸溶液(B)为流动相, 梯 度 洗 脱$(0 \sim {22}\mathrm{\;{min}},7\% \mathrm{\;A} \sim {18}\% \mathrm{\;A}$;${22} \sim {29}\mathrm{\;{min}}$, 18%A; 29~31 min, 18%A~23%A; 31~40 min, 23%A; 40~53 min,23%A~40%A; 53~60 min,40%A; 60~65 min,40%A~7%A),流速为${1.0}\mathrm{\;{mL}}/\mathrm{{min}}$,进样量为${10\mu }\mathrm{L}$,柱温为${30}^{ \circ }\mathrm{C}$,检测波长为${236}\mathrm{\;{nm}}$。
分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各${10\mu }\mathrm{L}$,分别按照 1.2 项下的色谱条件测定,出峰顺序依次为(R, S)- 告依春、芒果苷、连翘酯苷$\mathrm{I}$、连翘酯苷 A、松脂素吡喃葡糖糖苷、连翘苷、连翘酯素,结果见图 1~2
(1)线性关系:分别精密量取 1.3 项下各 6 个不同质量浓度对照品溶液各${10\mu }\mathrm{m}$,稀释成$\left( {\mathrm{R},\mathrm{S}}\right) -$告依春质量浓度为${0.2402} \sim {60.55\mu }\mathrm{g}/\mathrm{{mL}}$,按上述色谱条件,测定峰面积, 以质量浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制 (R, S)- 告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘苷、连翘酯苷A、松脂素吡喃葡萄糖苷和连翘脂素的标准曲线。结果表明, 7 个成分质量浓度在相应的范围内线性关系良好。结果见表 1
(2)精密度试验:精密吸取 1.3 项下混合对照品溶液, 按照 1.2 项下的色谱条件,连续测定 6 次,测得$\left( {\mathrm{R},\mathrm{S}}\right) -$告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘酯苷A、松脂素吡喃葡糖糖苷、连翘苷、连翘酯素峰面积的相对标准偏差 (RSD)值分别为 0.11%、0.20%、0.93%、0.56%、0.35%、 0.47%、0.82%,结果显示精密度良好。
(3)重复性试验:按照 1.3 项下方法制备供试品溶液 6 份, 按照 1.2 项下的色谱条件测定, 测得 (R, S)- 告依春、芒果苷、连翘酯苷Ⅰ、连翘酯苷A、松脂素吡喃葡糖糖苷、连翘苷、连翘酯素峰面积的 RSD 值分别为 0.40%、 0.52%、0.66%、0.28%、0.79%、0.56%、0.37%,结果显示重复性良好。
(4)稳定性试验:取 1.3 项下的供试品溶液,室温放置${24}\mathrm{\;h}$,按照 1.2 项下的色谱条件每隔$2\mathrm{\;h}$测定一次,测得(R, S)- 告依春、芒果苷、连翘酯苷$\mathrm{I}$、连翘酯苷$\mathrm{A}$、松脂素吡喃葡糖糖苷、连翘苷、连翘酯素峰面积的 RSD 值分别为 0.45%、0.68%、0.84%、1.1%、0.95%、0.71%、 0.88%,表明供试品溶液 24h 内稳定。
(5)加样回收率试验:取已知含量的供试品,精密量取 6 份, 分别加入与供试品 7 个成分含量的约 80%、 100%、120% 的对照品储备溶液,按照 1.3 项下方法制备供试品溶液, 按照 1.2 项下的色谱条件测定峰面积, 计算得到(R, S)- 告依春、芒果苷、连翘酯苷$\mathrm{I}$、连翘酯苷$\mathrm{A}$、 松脂素吡喃葡糖糖苷、连翘苷和连翘酯素的平均回收率在 95.85%~100.27% 范围内, RSD 在 0.11%~2.02% 范围内。
取 10 批样品, 按 1.3 项下方法制备供试品溶液, 按 1.2 项下色谱条件测定, 所测结果与外标法测得的结果比较,
RSD 值均小于 3.0%,无显著差异。结果见表 4,表明一测多评法测定含量可行。
经高效液相色谱仪的 DAD 检测器扫描${200} \sim {400}\mathrm{\;{nm}}$范围内的光谱图,结果显示 7 个成分在${236}\mathrm{\;{nm}}$均有较大吸收, 与其他峰分离度较好。流动相分别比较了乙腈-水、乙腈-0.01%磷酸溶液、甲醇-0.01%磷酸溶液; 柱温比较了室温、30、35${}^{ \circ }\mathrm{C}$。当流动相为乙腈 -0.01% 磷酸溶液梯度洗脱,柱温为${30}^{ \circ }\mathrm{C}$时主峰与其他成分峰分离度较好,可用于抗病毒口服液中 7 种成分的含量测定。
连翘苷是抗病毒口服液现行标准中含量测定的成分, 且稳定存在, 在本次试验测定的 7 个成分中, 发现连翘苷的含量较大, 连翘苷对照品相对价廉易得, 有利于其他成分色谱峰的相对保留时间的计算, 故选择连翘苷为内参物。
抗病毒口服液样品中含多种化学成分, 且对照品购买费用高周期长,为节约对照品,本试验以$\left( {\mathrm{R},\mathrm{S}}\right) -$告依春作内参物, 建立了内参物 (R, S) – 告依春与其他待测成分芒果苷、连翘酯苷 I、连翘酯苷 A、松脂素吡喃葡糖糖苷、连翘苷和连翘酯素的${f}_{\mathrm{s}/\mathrm{i}}$,采用相对保留值对样品中待测成分色谱峰进行准确的预测和定位。结果显示, 一测多评法与外标法测定结果无明显差异, 且与外标法相比操作简便, 成本较低, 在对照品难于取得的时候, 可以通过测定抗病毒口服液中$\left( {\mathrm{R},\mathrm{S}}\right) -$告依春的含量来计算其他 6 个成分的含量, 实现抗病毒口服液中多成分的含量测定, 为提高抗病毒口服液质量控制标准提供了科学、简便的方法。
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参考文献 引证文献
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种数
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species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae 2 11 5.26 鹅膏菌属 Amanita 10 4.78
小菇科 Mycenaceae 2 12 5.74 丝盖伞属 Inocybe 5 2.39
多孔菌科 Polyporaceae 8 14 6.70 蜡蘑属 Laccaria 5 2.39
红菇科 Russulaceae 3 23 11.00 小皮伞属 Marasmius 6 2.87
小菇属 Mycena 11 5.26
光柄菇属 Pluteus 5 2.39
红菇属 Russula 17 8.13
栓菌属 Trametes 5 2.39
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