实验室检测

杂质	范围/(mg/mL)	线性方程	相关系数	定量限	检测限
L-AMEH	0.0320~0.1501	$Y = {67.613X} + {0.5516}$	0.9982	0.0320	0.0128
L-AEEH	0.0120~0.1501	$Y = {235.04X} + {0.0957}$	0.9991	0.0120	0.0048
L-APEH	0.0016~0.1545	$Y = {1939.30X} + {4.4260}$	0.9991	0.0016	0.0010
L-AOEH	0.0039 ~0.1459	$Y = {641.99X} - {0.4493}$	0.9990	0.0039	0.0016

杂质	范围/(mg/mL)	线性方程	相关系数	定量限	检测限
L-AMEH	0.0320~0.1501	$Y = {67.613X} + {0.5516}$	0.9982	0.0320	0.0128
L-AEEH	0.0120~0.1501	$Y = {235.04X} + {0.0957}$	0.9991	0.0120	0.0048
L-APEH	0.0016~0.1545	$Y = {1939.30X} + {4.4260}$	0.9991	0.0016	0.0010
L-AOEH	0.0039 ~0.1459	$Y = {641.99X} - {0.4493}$	0.9990	0.0039	0.0016

杂质	浓度水平	加标量 /%	检出量 /%	回收率 /%	RSD/%
L-AMEH	低	0.0819	0.0715	87.3	1.9
0.0812	0.0724	89.2
0.0821	0.0706	86.0
中	0.1029	0.0997	96.9	1.7
0.1031	0.0979	95.0
0.1001	0.0984	98.3
高	0.1194	0.1248	104.5	1.9
0.1243	0.1252	100.7
0.1205	0.1249	103.7
L-AEEH	低	0.0819	0.0760	92.8	1.4
0.0812	0.0740	91.2
0.0821	0.0769	93.7
中	0.1029	0.0963	93.6	3.2
0.1031	0.0967	93.8
0.1001	0.0991	99.0
L-AEEH	高	0.1194	0.1095	91.7	0.9
0.1243	0.1160	93.3
0.1205	0.1113	92.4

杂质	浓度水平	加标量 /%	检出量 /%	回收率 /%	RSD/%
L-AMEH	低	0.0819	0.0715	87.3	1.9
0.0812	0.0724	89.2
0.0821	0.0706	86.0
中	0.1029	0.0997	96.9	1.7
0.1031	0.0979	95.0
0.1001	0.0984	98.3
高	0.1194	0.1248	104.5	1.9
0.1243	0.1252	100.7
0.1205	0.1249	103.7
L-AEEH	低	0.0819	0.0760	92.8	1.4
0.0812	0.0740	91.2
0.0821	0.0769	93.7
中	0.1029	0.0963	93.6	3.2
0.1031	0.0967	93.8
0.1001	0.0991	99.0
L-AEEH	高	0.1194	0.1095	91.7	0.9
0.1243	0.1160	93.3
0.1205	0.1113	92.4

杂质	浓度水平	加标量 /%	检出量 /%	回收率 /%	RSD/%
L-APEH	低	0.0843	0.0735	87.3	1.6
0.0835	0.0707	84.7
0.0844	0.0731	86.6
中	0.1059	0.0900	85.0	0.9
0.1061	0.0891	84.0
0.1030	0.0881	85.5
高	0.1229	0.1029	83.8	0.9
0.1280	0.1092	85.3
0.1240	0.1045	84.3
L-AOEH	低	0.0796	0.072	91.1	0.2
0.0788	0.072	90.9
0.0797	0.073	91.4
中	0.1000	0.090	90.0	2.6
0.1002	0.090	89.6
0.0973	0.091	93.9
高	0.1160	0.103	89.1	0.8
0.1208	0.109	90.6
0.1171	0.105	89.7

杂质	浓度水平	加标量 /%	检出量 /%	回收率 /%	RSD/%
L-APEH	低	0.0843	0.0735	87.3	1.6
0.0835	0.0707	84.7
0.0844	0.0731	86.6
中	0.1059	0.0900	85.0	0.9
0.1061	0.0891	84.0
0.1030	0.0881	85.5
高	0.1229	0.1029	83.8	0.9
0.1280	0.1092	85.3
0.1240	0.1045	84.3
L-AOEH	低	0.0796	0.072	91.1	0.2
0.0788	0.072	90.9
0.0797	0.073	91.4
中	0.1000	0.090	90.0	2.6
0.1002	0.090	89.6
0.0973	0.091	93.9
高	0.1160	0.103	89.1	0.8
0.1208	0.109	90.6
0.1171	0.105	89.7

样品	L-AMEH	L-AEEH	L-APEH	L-AOEH
1	0.074%	0.009%	0.004%	ND
2	0.033%	0.008%	0.004%	ND
3	0.034%	0.007%	0.004%	ND
4	0.039%	ND	0.007%	0.031%
5	0.021%	ND	0.001%	0.004%

样品	L-AMEH	L-AEEH	L-APEH	L-AOEH
1	0.074%	0.009%	0.004%	ND
2	0.033%	0.008%	0.004%	ND
3	0.034%	0.007%	0.004%	ND
4	0.039%	ND	0.007%	0.031%
5	0.021%	ND	0.001%	0.004%

碱化衍生-顶空气相色谱法测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐中的有关物质

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孙士真 , 刘金光 ^* , 田文静

实验室检测 | 创新应用 2025,3(6): 15-18

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实验室检测 | 创新应用 2025, 3(6): 15-18

碱化衍生-顶空气相色谱法测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐中的有关物质

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孙士真, 刘金光^*, 田文静

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烟台药物研究所烟台 264000

孙士真，硕士，工程师，研究方向为药品质量研究。

通讯作者:

^*刘金光，硕士，工程师，研究方向为药品质量研究。E-mail: 991214603@qq.com

Affiliations

出版时间: 2025-03-23

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摘要

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目的建立碱化衍生顶空气相色谱法同时测定L丙氨酸异丙酯盐酸盐中有关物质含量。方法色谱柱为 Agilent DB624 UI,进样口温度为200°C,分流比20:1,火焰离子化检测器(FID)温度为250℃。升温程序:起始柱温40℃,保持10 min,以40°C/min 速率升温至200℃,保持5min。以氮气为载气,流速为1.0 mL/min, 顶空平衡温度为80℃。结果 L丙氨酸甲酯盐酸盐、L丙氨酸乙酯盐酸盐、L丙氨酸正丙酯盐酸盐、L丙氨酸叔丁酯盐酸盐峰与相邻杂质峰分离度良好;定量限分别为0.0320、0.0120、0.0016、0.0039 mg/mL,检测限分别为0.0128、0.0048、0.0010、0.0016 mg/mL;在相应浓度范围内线性关系良好,相关系数r ≥ 0.998;3个水平下的平均回收率在85.0%~95.8%之间,相对标准偏差(RSD)均<5.0%。结论建立的方法准确、可靠、灵敏,可用于L丙氨酸异丙酯盐酸盐中4种有关物质同时快速测定。

关键词

碱化衍生 / L-丙氨酸异丙酯盐酸盐 / 杂质 / 顶空气相色谱法

引用本文

孙士真, 刘金光, 田文静. 碱化衍生-顶空气相色谱法测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐中的有关物质. 实验室检测, 2025 , 3 (6) : 15 -18 .

正文

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0 引言

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丙氨酸异丙酯盐酸盐(L-AIEH)是医药化工领域中一种重要的原料和中间体^[1]。L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐的有关物质包括 L- 丙氨酸甲酯盐酸盐 (L-AMEH)、L- 丙氨酸乙酯盐酸盐(L-AEEH)、L-丙氨酸正丙酯盐酸盐(L-APEH)、 L- 丙氨酸叔丁酯盐酸盐 (L-AOEH), 这类杂质的化学结构与主成分相似。这 4 种杂质会随主成分参与后续反应, 生成难以清除的衍生杂质。为确保药品安全, 必须对这些杂质进行充分研究。

到目前为止,针对$\mathrm{L} -$丙氨酸异丙酯盐酸盐中有关物质的测定研究主要有邻苯二甲醛(OPA)柱前在线衍生高效液相色谱法^[2]、高效液相色谱法^[3]。采用柱前衍生,通过自动化设备,使衍生试剂与待测试液在线混合和反应, 本方法对试验设备要求高, 操作复杂, 且衍生产物不稳定^[4-5]。高效液相色谱法多采用离子对试剂,因 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐及其相关杂质的紫外吸收较弱, 检测波长多选用${205}\mathrm{\;{nm}}$或${210}\mathrm{\;{nm}}$,低波长下杂质干扰较多,且离子对试剂可对色谱柱改性, 缩短使用寿命。因此建立一种能够准确检测 L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐中有关物质的方法很有必要。酯类化合物在碱性条件下易分解^[6],基于此类化合物的特点, 本工作利用 L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐中有关物质碱解衍生生成甲醇、乙醇、正丙醇、叔丁醇,衍生物性质稳定。目前, 关于甲醇、乙醇等衍生物检测的常用方法为气相色谱法^[7-8],因此本研究采用碱化衍生 - 顶空气相色谱法^[9]测定碱解后各衍生物的含量,并优化了顶空平衡温度、平衡时间和氢氧化钠浓度等试验条件, 考察了方法的各项特征指标, 为 L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐的质量研究提供参考。

1 材料与方法

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1.1 仪器与试剂

安捷伦 8890-7696A 型顶空 - 气相色谱仪, 配置氢火焰离子化检测器(FID)(美国安捷伦公司)；QUINTIX224-$1\mathrm{{CN}}$型分析天平 (德国赛多利斯公司)。L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐(H4013-231201,安徽红杉生物医药科技有限公司)；L- 丙氨酸甲酯盐酸盐(98.0%,上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；L- 丙氨酸乙酯盐酸盐(98.0%,萨恩化学技术 (上海) 有限公司); L- 丙氨酸正丙酯盐酸盐 (99.8%, 实验室自制)；L- 丙氨酸叔丁酯盐酸盐 (97.0%,上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；氢氧化钠(国药化学试剂股份有限公司); 水为超纯水。

1.2 色谱条件

DB-624UI 毛细管色谱柱$({30}\mathrm{\;m} \times {0.32}\mathrm{\;{mm}} \times {1.8\mu }\mathrm{m}$, 美国安捷伦公司)。升温程序: 起始柱温 40°C,保持${10}\mathrm{\;{min}}$,以${40}^{ \circ }\mathrm{C}/\mathrm{{min}}$速率升温至${200}^{ \circ }\mathrm{C}$,保持$5\mathrm{\;{min}}$；载气为氮气,流速${1.0}\mathrm{\;{mL}}/\mathrm{{min}}$,分流比${20} : 1$,进样口温度${200}^{ \circ }\mathrm{C}$,氢火焰离子化检测器(FID)温度${250}^{ \circ }\mathrm{C}$。顶空平衡温度${80}^{ \circ }\mathrm{C}$,定量环温度${110}^{ \circ }\mathrm{C}$,传输线温度${120}^{ \circ }\mathrm{C}$; 顶空平衡时间${20}\mathrm{\;{min}}$；$\mathrm{{GC}}$循环时间${27}\mathrm{\;{min}}$。

1.3 溶液配制

空白溶液:精密量取水 1.0 mL、10% 氢氧化钠溶液${1.0}\mathrm{\;{mL}}$,置${20}\mathrm{\;{mL}}$顶空瓶中,密封,作为空白溶液。

标准溶液:精密称取 4 种杂质对照品${25}\mathrm{{mg}}$,置于不同的${25}\mathrm{\;{mL}}$量瓶中,用水稀释制成含 L-AIEH、 L-AMEH、L-APEH、L-AOEH 各 1mg/mL 的杂质储备液。精密量取上述杂质储备液各${1.0}\mathrm{\;{mL}}$,置同一${10}\mathrm{\;{mL}}$量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液${1.0}\mathrm{\;{mL}}$、${10}\%$氢氧化钠溶液${1.0}\mathrm{\;{mL}}$,置${20}\mathrm{\;{mL}}$顶空瓶中, 密封, 作为标准溶液。

线性溶液:分别精密量取杂质储备液 0.5、0.8、1.0、${1.2}\text{、}{1.5}\mathrm{\;{mL}}$,置不同的${10}\mathrm{\;{mL}}$量瓶中,得到 5 种不同质量浓度系列混合标准溶液。精密量取上述溶液${1.0}\mathrm{\;{mL}}$、${10}\%$氢氧化钠溶液${1.0}\mathrm{\;{mL}}$,置${20}\mathrm{\;{mL}}$顶空瓶中,密封, 作为线性溶液。

供试品溶液: 精密称取$\mathrm{L} -$丙氨酸异丙酯盐酸盐约${100}\mathrm{{mg}}$,置${20}\mathrm{\;{mL}}$顶空瓶中,精密加入${1.0}\mathrm{\;{mL}}$水和${1.0}\mathrm{\;{mL}}$10% 氢氧化钠溶液,密封,摇匀。

供试品加标溶液: 精密称取$\mathrm{L} -$丙氨酸异丙酯盐酸盐约${100}\mathrm{{mg}}$,置${20}\mathrm{\;{mL}}$顶空瓶中,精密加入${1.0}\mathrm{\;{mL}}$标准溶液和${1.0}\mathrm{{mL}}{10}\%$氢氧化钠溶液,密封,摇匀。

2 结果与分析

收起

2.1 顶空参数的选择

2.1.1 顶空平衡温度

2.1.2 顶空平衡时间

2.1.3 氢氧化钠浓度

2.2 方法学考察

2.2.1 系统适用性试验

取标准溶液平行配制 6 份, 记录峰面积, 分别计算 4 种待测组分峰面积的 RSD。结果发现: 标准溶液中待测杂质的峰面积 RSD 为 0.62%~2.21%,均小于 5.0%。各待测杂质峰的理论板数最小为 42402, 待测杂质峰与相邻峰之间的分离度最小为 14.43, 方法系统适用性满足要求。

2.2.2 专属性试验

取 1.3 项下的空白溶液、供试品溶液以及供试品加标溶液, 进样分析。结果空白溶液和供试品溶液均无干扰; 供试品加标溶液中待测杂质峰与相邻峰的分离度均大于 1.5, 图 4显示方法专属性良好。

2.2.3 线性与范围

2.2.4 检出限与定量限

续表

2.2.5 准确度试验

2.2.6 重复性试验

按 1.3 项下方法, 平行制备 6 份供试品加标溶液。进行顶空气相检测, 记录峰面积, 计算 4 种杂质的含量 RSD。供试品加标溶液中各待测杂质的含量 RSD 均小于 3.0%,由结果可知,该方法具有较好的重复性。

2.2.7 耐用性

考察色谱参数微小改变对标准溶液、供试品溶液、供试品加标溶液中待测杂质测定的影响。由试验结果可知, 上述气相色谱参数的微小改变对标准溶液、供试品溶液、供试品加标溶液中各待测杂质的测定几乎无影响, 说明本方法具有良好的耐用性。

2.3 多批次样品检测

取 5 批供试品, 在已验证的顶空气相色谱条件下检测, 记录峰面积, 计算各待测组分的含量, 结果见表 3。由结果可知, 在 5 批样品中, 4 种待测杂质均有不同程度的检出。

3 讨论与结论

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结合物料及待测杂质的极性及理化性质, 试验中选择不同的色谱柱进行测定,选用安捷伦 DB-1701$\left( {{30}\mathrm{\;m} \times {0.25}\mathrm{\;{mm}} \times {0.25\mu }\mathrm{m}}\right)$柱时,$\mathrm{L} -$丙氨酸叔丁酯衍生峰与主峰的分离度不能满足要求。而使用安捷伦 DB-624UI$\left( {{30}\mathrm{\;m} \times {0.32}\mathrm{\;{mm}} \times {1.8\mu }\mathrm{m}}\right)$柱时,各待测杂质分离度均满足要求,故选择 DB-624UI 作为分析色谱柱。

L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐及待测杂质均易溶于水, 且价廉易得, 无毒无害, 所以选择水作为溶剂。待测杂质衍生后生成甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、正丙醇,5 种化合物的沸点范围为${60} \sim {100}{}^{ \circ }\mathrm{C}$,因此本试验采用起始柱温 40${}^{ \circ }\mathrm{C}$。

实验通过优化氢氧化钠浓度、顶空平衡温度和平衡时间等条件,确定碱化衍生 - 顶空气相色谱法测定 L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐中四种待测组分。本方法所设立的实验条件下,四种待测杂质的分离度满足要求、峰形良好, 在考察浓度范围内呈良好的线性关系 ($r$均大于 0.998 )。L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐中 4 种杂质在不同浓度水平下回收率均满足要求, 准确度良好。本方法样品前处理操作简便, 可减少目标组分的损失。方法具有检出限低、准确度高、重复性好等优点。采用拟定的方法, 对多批次样品进行测定, 结果 4 种待测杂质均有不同程度的检出。该方法的建立可以对 L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐中的相关杂质进行准确定量。

与现有分析方法相比, 本文建立的测定方法更加高效、操作简单,能够准确可靠地对$\mathrm{L} -$丙氨酸异丙酯盐酸盐中的 4 种杂质进行准确的定量分析。本方法的建立可以为 L- 丙氨酸异丙酯盐酸盐的质量控制提供有效的手段和参考,保证药品质量安全。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2025年第3卷第6期

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首发时间：2025-07-09
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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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杂质	范围/(mg/mL)	线性方程	相关系数	定量限	检测限
L-AMEH	0.0320~0.1501	$Y = {67.613X} + {0.5516}$	0.9982	0.0320	0.0128
L-AEEH	0.0120~0.1501	$Y = {235.04X} + {0.0957}$	0.9991	0.0120	0.0048
L-APEH	0.0016~0.1545	$Y = {1939.30X} + {4.4260}$	0.9991	0.0016	0.0010
L-AOEH	0.0039 ~0.1459	$Y = {641.99X} - {0.4493}$	0.9990	0.0039	0.0016

杂质

范围/(mg/mL)

线性方程