食品安全质量检测学报

物种	基因名称		序列	参考文献
牛	生长基数基因	F	5′-CCGATGGATGTGTTCAGAGCT-3′	GB 25165—2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法》
R	5′-GCCAAATGTCTGGGTGTAGATACC-3′
P	5′-(FAM)-TGGGCTTTAGGGCTTCCGAATGTGAA-(TAMRA)-3′
羊	DNA 复制蛋白A	F	CTGACACACGGGACACMTCTCC	[28]
R	AAGCTAAACATGGACCCACATG
P	TAAGCCAGCCTTGTGCGTGTGGTCC
猪	RPA1	F	ACCCAGACGAACTGCTCAA
R	TGGCGTCACTGATAGGTAAAT
P	TCACAGGCGTGGGCTTTCTGC

物种	基因名称		序列	参考文献
牛	生长基数基因	F	5′-CCGATGGATGTGTTCAGAGCT-3′	GB 25165—2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法》
R	5′-GCCAAATGTCTGGGTGTAGATACC-3′
P	5′-(FAM)-TGGGCTTTAGGGCTTCCGAATGTGAA-(TAMRA)-3′
羊	DNA 复制蛋白A	F	CTGACACACGGGACACMTCTCC	[28]
R	AAGCTAAACATGGACCCACATG
P	TAAGCCAGCCTTGTGCGTGTGGTCC
猪	RPA1	F	ACCCAGACGAACTGCTCAA
R	TGGCGTCACTGATAGGTAAAT
P	TCACAGGCGTGGGCTTTCTGC

试剂	牛	羊	猪
PCR反应液	10	10	10
ROX参比染料	0.4	0.4	0.4
10 μmol/L正向引物	1.6	0.8	1.6
10 μmol/L反向引物	1.6	0.8	1.6
10 μmol/L探针	0.4	0.4	0.8
DNA模板	2.0	2.0	2.0
无菌水	4	5.6	3.6

试剂	牛	羊	猪
PCR反应液	10	10	10
ROX参比染料	0.4	0.4	0.4
10 μmol/L正向引物	1.6	0.8	1.6
10 μmol/L反向引物	1.6	0.8	1.6
10 μmol/L探针	0.4	0.4	0.8
DNA模板	2.0	2.0	2.0
无菌水	4	5.6	3.6

组分	反应体系	最终浓度
4×dPCR 探针法预混液 (Cy5.5)	6 μL	1×
正向引物(10 μmol/L)	1 μL	-500 nmol/L
反向引物(10 μmol/L)	1 μL	-500 nmol/L
探针(10 μmol/L)	0.5 μL	-250 nmol/L
DNA模板	2 μL	1~5000拷贝/μL
无核酸酶水	9.5 uL	-
总反应体积	22 μL	-

组分	反应体系	最终浓度
4×dPCR 探针法预混液 (Cy5.5)	6 μL	1×
正向引物(10 μmol/L)	1 μL	-500 nmol/L
反向引物(10 μmol/L)	1 μL	-500 nmol/L
探针(10 μmol/L)	0.5 μL	-250 nmol/L
DNA模板	2 μL	1~5000拷贝/μL
无核酸酶水	9.5 uL	-
总反应体积	22 μL	-

步骤	温度/℃	时间	循环数
液滴稳定	60	5 min	1
酶激活	95	5 min	1
变性	95	10 s	45
复性/延伸	60	30 s
液滴识别通道: Cy5.5

步骤	温度/℃	时间	循环数
液滴稳定	60	5 min	1
酶激活	95	5 min	1
变性	95	10 s	45
复性/延伸	60	30 s
液滴识别通道: Cy5.5

实时荧光定量聚合酶链式反应与微滴式数字聚合酶链式反应结合在肉类掺假定量检测中的应用

PDF下载

郭雨湄 ¹ , 贾振军 ² , 樊宇航 ² , 刘瑞 ¹^,^*

食品安全质量检测学报 | 专题：食品安全风险评估与风险监测 2025,16(15): 167-173

收起

食品安全质量检测学报 | 专题：食品安全风险评估与风险监测 2025, 16(15): 167-173

实时荧光定量聚合酶链式反应与微滴式数字聚合酶链式反应结合在肉类掺假定量检测中的应用

全屏

郭雨湄¹, 贾振军², 樊宇航², 刘瑞¹^,^*

作者信息

¹ 中国人民公安大学侦查学院, 北京 100038

² 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所, 北京 100081

郭雨湄(2000—), 女, 硕士研究生, 主要研究方向为食品安全与品质检验鉴定。E-mail: 592887356@qq.com

通讯作者:

*刘瑞(1987—), 女, 博士, 讲师, 主要研究方向为食品安全检测。E-mail: liurui1987110@126.com

Application of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction and droplet digital polymerase chain reaction for quantitative detection of meat adulteration

Yu-Mei GUO¹, Zhen-Jun JIA², Yu-Hang FAN², Rui LIU¹^,^*

Affiliations

¹ School of Criminal Investigation, People's Public Security University of China, Beijing 100038, China

² Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China

出版时间: 2025-08-15 doi: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250411001

文章导航

摘要

收起

目的探究实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qPCR)与微滴式数字聚合酶链反应(droplet digital polymerase chain reaction, ddPCR)结合在肉类掺假定量检测中的应用。方法本研究采用qPCR和ddPCR技术, 针对牛、羊、猪等肉类样品建立特异性引物和探针检测体系, 以评估北京市肉类市场的掺假情况。结果 “昌5”样品存在羊肉和猪肉的掺杂, 且掺杂比例为17:10。qPCR在定性检测中表现出高灵敏度和特异性, 而ddPCR实现了掺假比例的绝对定量, 两者结合显著提高了检测准确性。结论本研究建立的qPCR-ddPCR联用方法具有高灵敏度和特异性, 适用于肉类掺假的快速精准检测, 为食品安全监管提供了可靠的技术支持。

关键词

肉类掺假 / 实时荧光定量聚合酶链反应 / 微滴式数字聚合酶链反应 / 羊肉 / 猪肉 / 食品安全

Abstract

收起

Objective To explore the application of the combination of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (qPCR) and droplet digital polymerase chain reaction (ddPCR) in the quantitative detection of meat adulteration. Methods This study employed qPCR and ddPCR technologies to develop a detection system with specific primers and probes for beef, lamb and pork samples, aiming to assess meat adulteration in the Beijing market. Results The experimental results revealed that the sample “Chang 5” contained adulteration of lamb and pork at a ratio of 17:10. qPCR demonstrated high sensitivity and specificity in qualitative detection, while ddPCR enabled absolute quantification of adulteration proportions. The combination of these 2 methods significantly improved detection accuracy. Conclusion The established qPCR-ddPCR combined method exhibits high sensitivity and specificity, making it suitable for rapid and precise detection of meat adulteration. This approach provides reliable technical support for food safety regulation.

Key words

meat adulteration / real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction / droplet digital polymerase chain reaction / mutton / pork / food safety

引用本文

郭雨湄, 贾振军, 樊宇航, 刘瑞. 实时荧光定量聚合酶链式反应与微滴式数字聚合酶链式反应结合在肉类掺假定量检测中的应用. 食品安全质量检测学报, 2025 , 16 (15) : 167 -173 . DOI: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250411001

Yu-Mei GUO, Zhen-Jun JIA, Yu-Hang FAN, Rui LIU. Application of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction and droplet digital polymerase chain reaction for quantitative detection of meat adulteration[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2025 , 16 (15) : 167 -173 . DOI: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250411001

正文

收起

0 引言

收起

近年来, 随着经济的快速发展和人们生活水平的不断提高, 食品安全问题日益受到广泛关注。肉类作为人们日常饮食中的重要组成部分, 其质量和安全性直接关系到消费者的健康和权益^[1]。然而, 由于利益驱动, 市场上肉类掺假、肉制品污染现象时有发生^[2-4]。2024年4月, 国务院食安办等部门部署各地开展严厉打击肉类产品违法犯罪专项整治行动^[5], 截至目前已查办一批肉类产品违法犯罪案件, 截至11月底, 全国共接到肉类产品相关举报1.4万起、查实举报4000余起; 行政执法立案1.4万起, 查获涉案物品9000余t; 查办假冒牛(羊、驴)肉制品违法案件1000余起; 公安机关刑事立案2400余起、抓获犯罪嫌疑人6000余人。

肉类掺假问题不仅对消费者的健康构成威胁, 还可能引发清真食品的信仰问题^[6], 进而影响民族团结和社会稳定^[7-8]。欧盟定量成分声明强制要求肉制品需要标识出所有成分及其净含量, 并规定肉的主要成分为骨骼肌, 结缔组织和脂肪等成分需单独列出且规定了最高含量^[9]。因此, 建立一种快速、准确、灵敏的肉类掺假检测方法, 对于保障食品安全、维护消费者权益具有重要意义。

当前, 肉类掺假的检测手段主要包括: 感官鉴定方法, 光谱分析技术^[10-11], 基于免疫学原理的检测技术^[12], 生物质谱技术^[13], 基于核酸层面的DNA扩增分析技术^[14-16]等。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qPCR)和微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction, ddPCR)是目前常用的核酸定量检测技术。qPCR技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点, 能够实现对目标核酸的定性检测^[17-18]。然而, qPCR的定量检测需要依赖标准曲线, 存在一定的局限性^[19], ddPCR技术则克服了这一缺点, 其通过将反应体系分割成数万个微滴, 实现对目标核酸的绝对定量检测, 目前已应用于基因表达量^[20]、微生物丰度^[21]、转基因产品含量^[22]及食品成分的定量检测^[23-24], 此技术具有更高的准确性和可靠性^[25-26]。将qPCR和ddPCR相结合, 可以充分发挥两种技术的优势, 实现对肉类掺假的快速、准确检测。

北京市作为中国的首都, 人口众多, 民族成分复杂, 清真食品需求量大。根据第七次全国人口普查数据, 北京市少数民族户籍人口数量为104.8万, 其中回族27.4万, 占北京市少数民族的26.1%^[27]。在某些区域, 如牛街、教子胡同、花市、长营、马甸、于家务等地, 以及大兴、昌平、顺义、密云等远郊区县, 清真居民相对集中。因此, 保障北京市肉类产品的质量和安全性, 对于维护清真食品的信仰和民族团结具有重要意义。近年来, 北京市市场监督管理局在打击食品领域违法行为, 特别是肉类掺假案件方面采取了严厉措施, 根据国务院食安办、公安部、农业农村部、市场监管总局的通知, 从2024年4月至11月, 全国将开展严厉打击肉类产品违法犯罪专项整治行动, 以生猪、肉牛、肉羊、肉鸡及其肉类产品为重点, 深挖违法犯罪源头线索, 对全链条开展专项整治。然而, 由于检测技术的局限性, 部分肉类掺假行为仍难以被及时发现和查处。因此, 建立一种适用于北京市肉类掺假检测的高效方法, 对于提高食品安全监管水平、保障消费者权益具有重要意义。

本研究旨在采用qPCR和ddPCR相结合的方法, 对北京市肉类样品中的掺假情况进行检测。通过对不同肉类样品的定性与定量分析, 揭示肉类掺假的现状和规律, 为食品安全监管部门提供技术支持和参考依据, 进一步推动食品安全监管工作的深入开展。

1 材料与方法

收起

1.1 材料与试剂

实际样品为北京市区内被市民举报掺假的5类肉类样品, 含牛、羊、猪等肉类样品以及羊肉卷、牛肉卷市售, 分别标注为“房7”“房6”“昌5”“丰7”“丰10”, 其中“房7”“丰7”标识为纯牛肉, “房6”“昌5”“丰10”标识为纯羊肉。

4×浓度即用型预混液、微滴生成专用油、微滴生成卡(苏州思纳福医疗科技有限公司); 血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司]; 引物、探针[生工生物工程(上海)股份有限公司]。

1.2 仪器与设备

ABI7500 qPCR仪(美国Thermo Fisher Scientific公司); DQ-24液滴式数字PCR仪(苏州思纳福医疗科技有限公司); 5420微量高速离心机(德国Eppendorf公司); QSJ-C04B1绞肉机(广东小熊电器有限公司); ME204E万分之一电子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

将送检的样品随机取样, 用绞肉机搅碎所取的样品, 并分别从5类样品中称取8小份(每份20 mg)的样品放入离心管中, 10000 r/min离心1 min, 倒尽上清, 加入200 μL裂解缓冲液, 振荡至彻底悬浮, 后续操作参照DNA提取试剂盒说明书进行DNA提取。

1.3.2 引物与探针的设计

从已经发表的文章和报告中查找对应的引物、探针序列, 并在美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)网站上通过BLAST将序列进行比对, 最终确定牛肉、羊肉和猪肉的特异性引物和探针, 如表1所示, 交由生工生物工程(上海)股份有限公司合成, 引物序列见表1。

1.3.3 引物和探针的特异性

在本研究中, 选取了羊肉、猪肉和牛肉的基因组DNA作为模板, 利用表1中列出的特定引物和探针进行PCR扩增反应。为了确保实验的准确性, 设置了无菌水作为阴性对照。实验过程中, 使用ABI 7500 qPCR仪进行扩增反应。通过该仪器的高灵敏度和特异性检测功能, 对所筛选的引物和探针的特异性进行了详细验证。这一过程有助于确保引物和探针在不同肉类样本中的特异性扩增能力, 为后续的实验可靠的基础。

1.3.4 qPCR检测体系建立

qPCR扩增反应体系见表2。反应条件为95 ℃预变性10 min; 95 ℃循环反应15 s, 60 ℃退火及延伸1 min; 45个循环。

1.3.5 ddPCR检测体系建立

ddPCR扩增反应体系见表3, 反应体系充分混匀后加入微滴生成卡中, 油包水微滴生成按照厂家的操作说明进行。

温控反应程序见表4。

1.4 数据处理

肉的质量与样品DNA溶液中RPA1的基因拷贝数及单位质量的基因拷贝数有关, 根据公式(1)计算。

(1)M=$\frac{Q}{C}$

式中: M为肉的质量; Q为基因拷贝数; C为单位质量肉的基因拷贝数。通过数字PCR测得的基因拷贝数(Q)数据统计分析使用DQ-24液滴式数字PCR自带系统进行。

实验中5份样本分别做3个平行重复, 每个样品都使用干净的仪器, 以防止交叉污染, 取平均值带入式(1)计算。

2 结果与分析

收起

2.1 引物和探针的特异性验证

以牛、羊、猪、鸡、鸭、马、驴等7种畜禽肉中提取的基因组DNA作为模板, 设置无菌水作为空白对照, 进行qPCR检测, 以确保实验的准确性和可靠性。如图1实验结果显示, 空白对照和非靶标肉中均未出现微滴扩增, 特异性扩增仅针对靶标肉, 能够满足实验的检测需求。

2.2 qPCR定性检测结果

通过qPCR对5种肉类样品进行DNA扩增分析, 如图2结果显示, 标识为纯牛肉的“房7”和“丰7”样品仅对牛的特异性引物产生扩增反应, 表明这两种样品符合其标识的纯牛肉特性。而标识为纯羊肉的“房6”“昌5”和“丰10”样品均对羊的特异性引物产生扩增反应, 显示其含有羊肉成分。“昌5”样品还对猪的特异性引物产生了扩增反应, 这一结果提示“昌5”样品存在肉类掺假的可能性。而“房6”“丰10”样品虽对猪的特异性引物产生了扩增反应, 但扩增Ct值较靠后, 接近35, 据此基本可判定这两个样品在生产或销售环节与猪肉存在一定程度的沾染, 而非故意掺假。

2.3 ddPCR定量检测结果

采用本研究建立的ddPCR检测方法对有肉类掺假可能性的“昌5”样品中羊肉和猪肉的相对含量进行定量分析。如图3、图4结果表明, 经DNA提取和ddPCR扩增后, 单位质量的羊肉与猪肉阳性液滴比值为850:913, 按照公式(2)进行计算^[22]。

(2)

$\frac{{M}_{\text{p}}}{{M}_{\text{m}}}=\frac{\frac{{Q}_{\text{p}}}{{C}_{\text{p}}}}{\frac{{Q}_{\text{m}}}{{C}_{\text{m}}}}=\frac{{C}_{\text{m}}}{{C}_{\text{p}}}\times \frac{{Q}_{\text{p}}}{{Q}_{\text{m}}}$

式中: Mp和Mm分别为猪肉和羊肉的质量; Qp和Qm分别为混合样品中猪肉和羊肉的基因拷贝数; Cp和Cm分别为单位质量猪肉和羊肉的基因拷贝数。

鉴于同一肉种的细胞密度和基因组大小保持恒定, 因此对于任意肉种, 其Cm/Cp比值均为固定值。任君安等^[28]利用数字PCR技术对含有1%、10%、50%、60%和80%猪肉含量的羊肉样品分别进行定量分析, 检测其中的RPA1基因拷贝数, 并计算Cm/Cp比值及其相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)。结果显示, 5种不同猪肉含量样品的Cm/Cp平均值为1.84, RSD为3.50%, 表明Cm/Cp具有较高的稳定性。此外, 反应生成的总微滴数均超过10000个, 满足泊松分布的统计学要求。因此, 可以计算得出“昌5”样品中羊肉和猪肉的掺杂比例为17:10。

3 讨论与结论

收起

本研究采用qPCR和ddPCR相结合的方法对北京市肉类样品中的掺假情况进行检测。qPCR方法在定性检测中显示出较高的灵敏度和特异性, 能够有效区分不同种类的肉类成分, 满足了公安机关对案件快速检测定性的需求。KÖPPEL等^[25]的研究显示实时荧光qPCR方法在最低含量为1%时的相对误差最高为65%, 而ddPCR方法在定量检测中具有显著优势, 其绝对定量能力能够直接测量目标核酸的绝对数量, 不受标准曲线的影响, 从而为肉类掺假的定量分析提供了更为精确的数据支持。

在对“昌5”样品的检测中, qPCR结果显示该样品中存在猪肉成分, 而ddPCR定量分析经过计算得出了羊肉和猪肉的掺杂比例为17:10。这一结果表明, 该样品中羊肉和猪肉的掺假程度较为严重, 可能对消费者的健康和权益造成影响。同时, 这也反映出市场上部分肉类产品的质量监管存在漏洞, 需要进一步加强肉类产品的质量控制和监管力度。

本研究建立的qPCR和ddPCR检测方法具有较高的灵敏度和特异性, 能够有效应用于肉类掺假的检测。该方法不仅适用于实验室环境, 还具有一定的现场快速检测潜力, 为食品安全监管部门提供了有力的技术支持。然而, 该方法在实际应用中也存在一些局限性。例如, 对于复杂的肉类混合样品, 可能存在多种肉类成分的相互干扰, 影响检测结果的准确性^[29-30]。此外, 实验过程中对DNA提取和扩增条件的要求较高, 操作不当可能导致假阳性或假阴性结果。因此, 在未来的研究中, 可以进一步优化实验条件和方法, 提高其在复杂样品中的检测性能, 同时探索与其他检测技术的联合应用, 以提高检测的准确性和可靠性。

本研究的结果为食品安全监管部门提供了重要的参考依据。首先, 监管部门应加强对肉类产品的质量监管, 特别是对高风险的肉类掺假行为进行重点监控^[31]。其次, 应加大对肉类生产、加工和销售环节的监督检查力度, 确保肉类产品的质量和安全。此外, 还应加强与科研机构的合作, 推广先进的检测技术和方法, 提高食品安全检测的水平和效率。通过多方面的努力, 共同维护消费者的食品安全和合法权益, 促进食品市场的健康发展。

基金

收起

中国人民公安大学刑事科学技术双一流创新研究专项(2023SYL06)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

[1]

李志强, 王济民. 我国畜产品消费及消费市场前景分析[J]. 中国农村经济, 2000(7): 46-51.

, WANG

. Analysis of China's livestock product consumption and consumption market prospects[J]. Chinese Rural Economy, 2000(7): 46-51.

[2]

金萍, 丁洪流, 李培, 等. 2013年苏州地区肉及其制品掺假情况调查[J]. 中国食品卫生杂志, 2014, 26(2): 168-172.

JIN

, DING

, LI

, et al. Analysis of meat products adulterated in Suzhou Area in 2013[J]. Chinese Journal of Food Hygiene, 2014, 26(2): 168-172.

[3]

邢莉丽, 田云龙, 杨建, 等. 烟台市肉与肉制品中食源性致病菌污染现状及风险评价[J]. 食品安全质量检测学报, 2025, 16(9): 138-143.

XING

, TIAN

, YANG

, et al. Research on current situation and risk assessment of foodborne pathogens contamination in meat and meat products in Yantai City[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2025, 16(9): 138-143.

[4]

钟石新. 海南省市场监管局公布肉类产品典型案例[J]. 中国食品工业, 2024(19): 20-22.

ZHONG

. Hainan Provincial market supervision administration announces typical cases of meat products[J]. China Food Industry, 2024(19): 20-22.

[5]

国务院食安办公安部农业农村部市场监管总局关于开展严厉打击肉类产品违法犯罪专项整治行动的通知[J]. 中华人民共和国公安部公报, 2024(3): 17-19.

Notice of the State Council Food Safety Commission Office, Ministry of Public Security, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, and State Administration for Market Regulation on carrying out special campaigns to crack down on illegal and criminal activities related to meat products[J]. Gazette of the Ministry of Public Security of the People's Republic of China, 2024(3): 17-19.

[6]

王超. 中国清真食品的标准与认证问题探析[J]. 中国穆斯林, 2010(5): 33-35.

WANG

. Research on the standards and identification of Chinese halal food[J]. China Muslim, 2010(5): 33-35.

[7]

NAKYINSIGE

, MAN

YBC

, SAZILI

. Halal authenticity issues in meat and meat products[J]. Meat Science, 2012, 91(3): 207-214.

[8]

SENTANDREU

MÁ

, SENTANDREU

. Authenticity of meat products: Tools against fraud[J]. Food Research International, 2014, 60: 19-29.

[9]

Europe: In official journal of the European communities. Method of analysis for the determination of constituents of animal origin for the official control of feed: EC152-2009 [Z]. Europe, 2009.

[10]

LEMONIA-CHRISTINA

, ALEXANDRA

, PANAGIOTIS

. Detection of meat adulteration using spectroscopy-based sensors[J/OL]. Foods, 2021. [2021-12-27]. https://doi.org/10.3390/foods10040861

[11]

雷裕, 胡新军, 蒋茂林, 等. 高光谱成像技术应用于畜禽肉品品质研究进展[J]. 食品安全质量检测学报, 2021, 12(21): 8404-8411.

LEI

, HU

, JIANG

, et al. Research progress on application of hyperspectral imaging technology in meat quality of livestock and poultry[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2021, 12(21): 8404-8411.

[12]

骆训国, 栗绍文, 周蕾蕾, 等, 夹心ELISA方法检测生肉混合物中的猪肉成分的研究[J]. 动物医学进展, 2010, 31(S1): 20-22.

LUO

, LI

, ZHOU

, et al. Research on sandwich ELISA test for detecting pork ingredients in raw meat mixture[J]. Progress in Veterinary Medicine, 2010, 31(S1): 20-22.

[13]

蒲科源, 丘嘉敏, 刘柏霖, 等. 蛋白质组学非靶向性质谱分析结合化学计量学在牛肉掺假初筛中的应用[J]. 食品与发酵工业, 2023, 49(3): 290-295.

, QIU

, LIU

, et al. Non-targeted proteomics mass spectrometry combined with chemometrics for beef product preliminary screening[J]. Food and Fermentation Industries, 2023, 49(3): 290-295.

[14]

陈颖, 钱增敏, 徐宝梁, 等. 保健品中牛羊源性成分的PCR检测[J]. 食品科学, 2004, 25(10): 215-218.

CHEN

, QIAN

, XU

, et al. Species-specific PCR for identification of horse and donkey materials in feedstuff[J]. Food Science, 2004, 25(10): 215-218.

[15]

李婷婷. 基于DNA检测的羊肉掺假鉴别技术研究[D]. 北京: 中国农业科学院, 2019.

. Research on DNA-based detection techniques for identification of mutton adulteration[D]. Beijing: Chinese Academy of Agricultural Sciences, 2019.

[16]

, ZHANG

, ZHOU

, et al. Recombinase polymerase amplification based multiplex lateral flow dipstick for fast id entification of duck ingredient in adulterated bee[J]. Animals, 2020, 10(10): 1765.

[17]

柳梦思, 时国强, 卢鑫, 等. 基于全自动核酸提取的荧光定量PCR鉴别羊肉制品真伪[J]. 食品安全质量检测学报, 2022, 13(10): 3148-3155.

LIU

, SHI

, LU

, et al. Identification of mutton products by flourescence quationtitative PCR based on automatic nucleic acid extration[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2022, 13(10): 3148-3155.

[18]

陈旭, 齐凤坤, 康立功, 等. 实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 东北农业大学学报, 2010, 41(8): 148-155.

CHEN

, QI

, KANG

, et al. Advance and application of real-time fluorescent quantitative PCR[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2010, 41(8): 148-155.

[19]

PARK

, RANA

, SUNG

, et al. Competitiveness of quantitative polymerase chain reaction (qPCR) and droplet digital polymerase chain reaction (ddPCR) technologies, with a particular focus on detection of antibiotic resistance genes (ARGs)[J]. Applied Microbiology, 2021, 1: 426-444.

[20]

GUO

, HUSS

, TONG

, et al. Resolution of cell fate decisions revealed by single-cell gene expression analysis from zygote to blastocyst[J]. Developmental Cell, 2010, 18(4): 675-685.

[21]

DREO

, PIRC

, RAMŠAK

, et al. Optimising droplet digital PCR analysis approaches for detection and quantification of bacteria: A case study of fire blight and potato brown rot[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2014, 406(26): 6513-6528.

[22]

MORISSET

, ŠTEBIH

, MILAVEC

, et al. Quantitative analysis of food and feed samples with droplet digital PCR[J]. PLoS ONE, 2013, 8(5): e62583.

[23]

FLOREN

, WIEDEMANN

, BRENIG

, et al. Species identification and quantification in meat and meat products using droplet digital PCR (ddPCR)[J]. Food Chemistry, 2015, 173(173): 1054-1058.

[24]

HINDSON

, NESS

, MASQUELIE

RDA

, et al. High-throughput droplet digital PCR system for absolute quantitation of DNA copy number[J]. Analytical Chemistry. 2011, 83(22): 8604-8610.

[25]

KÖPPEL

, RUF

, RENTSCH

. Multiplex real-time PCR for the detection and quantification of DNA from beef, pork, horse and sheep[J]. European Food Research and Technology, 2011, 232(1): 151155.

[26]

SANDERS

, HUGGETT

, BUSHELLC

, et al. Evaluation of digital PCR for absolute DNA quantification[J]. Analytical Chemistry, 2011, 83(17): 6474-6484.

[27]

国务院第七次全国人口普查领导小组办公室. 第七次全国人口普查公报(第二号)[EB/OL]. (2021-05-11) [2022-06-05]. http://www.stats.gov.cn/tjsj/zxfb/202105/t20210510_1817178.html http://www.stats.gov.cn/tjsj/zxfb/202105/t20210510_1817178.html

Office of the Leading Group for the Seventh National Population Census of the State Council. Bulletin of the Seventh National Population Census (No.2)[EB/OL]. (2021-05-11) [2022-06-05]. http://www.stats.gov.cn/tjsj/zxfb/202105/t20210510_1817178.html http://www.stats.gov.cn/tjsj/zxfb/202105/t20210510_1817178.html

[28]

任君安, 邓婷婷, 黄文胜, 等. 微滴式数字聚合酶链式反应精准定量检测羊肉中掺杂猪肉[J]. 食品科学, 2017, 38(2): 311-316.

REN

JAN

, DENG

, HUANG

, et al. A precise quantitative assay for measuring pork incorporated into mutton products by droplet digital PCR[J]. Food Science, 2017, 38(2): 311-316.

[29]

MOTALIB-HOSSAIN

, SITI-AIMI

SZA

, AISHAH

, et al. TaqMan multiplex qPCR for detecting animal species in meat and meat products: Development, recent advances and future prospects[J]. Food Control, 2023. https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2023.109761

[30]

NURHAYATIE

, SIE

, SUHAILI

, et al. Analytical approaches of meat authentication in food[J]. International Journal of Food Science and Technology, 2021: 1535-1543. https://doi.org/10.1111/ijfs.14797

[31]

黄红霞. 肉类食品安全监管存在的问题与对策研究[J]. 食品安全导刊, 2024(28): 4-6.

HUANG

. Research on the problems and countermeasures of meat food safety supervision[J]. China Food Safety Magazine, 2024(28): 4-6.

2025年第16卷第15期

PDF下载

210

引用本文

BibTeX

文章信息

doi: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250411001

接收时间：2025-04-11
首发时间：2026-01-09
出版时间：2025-08-15

补充材料

相关文章

文章信息

作者

出版历史

收稿日期：2025-04-11

基金

中国人民公安大学刑事科学技术双一流创新研究专项(2023SYL06)

作者信息

¹ 中国人民公安大学侦查学院, 北京 100038

² 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所, 北京 100081

通讯作者:

*刘瑞(1987—), 女, 博士, 讲师, 主要研究方向为食品安全检测。E-mail: liurui1987110@126.com

参考文献

分享链接

https://castjournals.cast.org.cn/joweb/spaq/CN/10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250411001

分享至

全文二维码

扫描看全文

引用本文

BibTeX

本文的引用情况

2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

关闭全屏

BibTeX
EndNote
RefWorks
TxT

物种	基因名称		序列	参考文献
牛	生长基数基因	F	5′-CCGATGGATGTGTTCAGAGCT-3′	GB 25165—2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法》
R	5′-GCCAAATGTCTGGGTGTAGATACC-3′
P	5′-(FAM)-TGGGCTTTAGGGCTTCCGAATGTGAA-(TAMRA)-3′
羊	DNA 复制蛋白A	F	CTGACACACGGGACACMTCTCC	[28]
R	AAGCTAAACATGGACCCACATG
P	TAAGCCAGCCTTGTGCGTGTGGTCC
猪	RPA1	F	ACCCAGACGAACTGCTCAA
R	TGGCGTCACTGATAGGTAAAT
P	TCACAGGCGTGGGCTTTCTGC

物种

基因名称

序列

参考文献

牛

生长基数基因

5′-CCGATGGATGTGTTCAGAGCT-3′

GB 25165—2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法》

5′-GCCAAATGTCTGGGTGTAGATACC-3′

5′-(FAM)-TGGGCTTTAGGGCTTCCGAATGTGAA-(TAMRA)-3′

羊

DNA 复制蛋白A

CTGACACACGGGACACMTCTCC

[28]

AAGCTAAACATGGACCCACATG

TAAGCCAGCCTTGTGCGTGTGGTCC

猪

RPA1

ACCCAGACGAACTGCTCAA

TGGCGTCACTGATAGGTAAAT

TCACAGGCGTGGGCTTTCTGC

试剂	牛	羊	猪
PCR反应液	10	10	10
ROX参比染料	0.4	0.4	0.4
10 μmol/L正向引物	1.6	0.8	1.6
10 μmol/L反向引物	1.6	0.8	1.6
10 μmol/L探针	0.4	0.4	0.8
DNA模板	2.0	2.0	2.0
无菌水	4	5.6	3.6

试剂

牛

羊

猪

PCR反应液

ROX参比染料

0.4

10 μmol/L正向引物

1.6

0.8

1.6

10 μmol/L反向引物

1.6

0.8

1.6

10 μmol/L探针

0.4

0.8

DNA模板

2.0

无菌水

5.6

3.6

组分	反应体系	最终浓度
4×dPCR 探针法预混液 (Cy5.5)	6 μL	1×
正向引物(10 μmol/L)	1 μL	-500 nmol/L
反向引物(10 μmol/L)	1 μL	-500 nmol/L
探针(10 μmol/L)	0.5 μL	-250 nmol/L
DNA模板	2 μL	1~5000拷贝/μL
无核酸酶水	9.5 uL	-
总反应体积	22 μL	-

组分

反应体系

最终浓度

4×dPCR 探针法预混液 (Cy5.5)

6 μL

1×

正向引物(10 μmol/L)

1 μL

-500 nmol/L

反向引物(10 μmol/L)

1 μL

-500 nmol/L

探针(10 μmol/L)

0.5 μL

-250 nmol/L

DNA模板

2 μL

1~5000拷贝/μL

无核酸酶水

9.5 uL

总反应体积

22 μL

步骤	温度/℃	时间	循环数
液滴稳定	60	5 min	1
酶激活	95	5 min	1
变性	95	10 s	45
复性/延伸	60	30 s
液滴识别通道: Cy5.5

步骤

温度/℃

时间

循环数

液滴稳定

5 min

酶激活

5 min

变性

10 s

复性/延伸

30 s

液滴识别通道: Cy5.5