食品安全质量检测学报

组分	母离子 (m/z)	子离子 (m/z)	锥孔电压 /V	碰撞能量 /eV
乳酸链球菌素A	671.6	810.9*	70	5
790.3	8
744.5	10
乳酸链球菌素Z	667.0	805.0*	70	5
739.0	10
644.0	15

组分	母离子 (m/z)	子离子 (m/z)	锥孔电压 /V	碰撞能量 /eV
乳酸链球菌素A	671.6	810.9*	70	5
790.3	8
744.5	10
乳酸链球菌素Z	667.0	805.0*	70	5
739.0	10
644.0	15

基质	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
牛奶	Y=1937.02X-207.74	0.995	0.05	0.15	Y=315.03X-64.76	0.995	0.10	0.30
面包	Y=1371.31X-113.64	0.995	0.05	0.15	Y=258.68X-89.57	0.998	0.10	0.30
醋	Y=2150.78X-1373.5	0.995	0.20	0.60	Y=227.22X-81.84	0.995	0.30	1.00
调味汁	Y=859.83X-207.81	0.995	0.20	0.60	Y=136.05X-47.60	0.999	0.30	1.00
牛肉干	Y=1122.07X-70.64	0.997	0.10	0.30	Y=169.00X-87.05	1.000	0.20	0.60

基质	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
牛奶	Y=1937.02X-207.74	0.995	0.05	0.15	Y=315.03X-64.76	0.995	0.10	0.30
面包	Y=1371.31X-113.64	0.995	0.05	0.15	Y=258.68X-89.57	0.998	0.10	0.30
醋	Y=2150.78X-1373.5	0.995	0.20	0.60	Y=227.22X-81.84	0.995	0.30	1.00
调味汁	Y=859.83X-207.81	0.995	0.20	0.60	Y=136.05X-47.60	0.999	0.30	1.00
牛肉干	Y=1122.07X-70.64	0.997	0.10	0.30	Y=169.00X-87.05	1.000	0.20	0.60

基质	添加浓度/(mg/kg)	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
牛奶	1.0	100.8	6.99	100.8	8.64
5.0	97.4	6.13	102.1	5.39
200.0	105.8	2.64	101.1	3.40
面包	1.0	94.9	7.59	98.3	8.85
5.0	87.1	2.92	90.5	3.47
200.0	107.9	3.37	91.8	1.54
醋	1.0	101.1	8.62	91.6	3.26
5.0	91.8	4.36	91.3	2.92
200.0	94.8	7.80	88.8	5.45
调味汁	1.0	99.6	4.92	98.4	8.45
5.0	105.8	4.66	106.2	2.55
200.0	106.2	3.41	101.7	1.45
牛肉干	1.0	99.1	8.63	98.4	6.24
5.0	96.8	2.42	104.5	3.40
200.0	98.5	1.27	94.2	1.32

基质	添加浓度/(mg/kg)	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
牛奶	1.0	100.8	6.99	100.8	8.64
5.0	97.4	6.13	102.1	5.39
200.0	105.8	2.64	101.1	3.40
面包	1.0	94.9	7.59	98.3	8.85
5.0	87.1	2.92	90.5	3.47
200.0	107.9	3.37	91.8	1.54
醋	1.0	101.1	8.62	91.6	3.26
5.0	91.8	4.36	91.3	2.92
200.0	94.8	7.80	88.8	5.45
调味汁	1.0	99.6	4.92	98.4	8.45
5.0	105.8	4.66	106.2	2.55
200.0	106.2	3.41	101.7	1.45
牛肉干	1.0	99.1	8.63	98.4	6.24
5.0	96.8	2.42	104.5	3.40
200.0	98.5	1.27	94.2	1.32

食品名称	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z	食品名称	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
标识添加乳酸链球菌素的食品	爆汁肉肠	—	15.9	调理面包	—	21.3
肉罐肠	—	27.7	乳酸菌面包	—	70.8
黑猪午餐肉	—	18.3	全麦面包	—	4.03
卤鸭胗	—	16.4	腌辣椒	—	17.8
脱骨凤爪	—	33.8	腌黄瓜	—	9.67
碳烤猪肉脯	—	25.4	即食酸菜	3.77	205
酱卤牛肉	—	15.4	乳酸菌饮料	—	14.7
水晶肘花	—	9.36	酸奶饮品	—	17.1
肘花火腿	—	18.9	果汁含乳饮品	—	23.8
五香肥肠	—	9.14	酱汁味小鱼	—	15.0
火腿肠	—	16.2	手撕鱼排	—	23.8
芋泥蛋糕	—	266	奶酪棒	—	10.7
未标识添加乳酸链球菌素的食品	酱油	—	—	梅菜扣肉	—	—
豆瓣	—	—	香辣榨菜	—	—
牛油火锅底料	—	—	甜面酱	—	—
鸡蛋干	—	—	柠檬茶饮料	—	—
卤鹌鹑蛋	—	—	优酸乳	—	—
乳粉	—	—	醪糟	—	—
老酸奶	—	—	乌梅干	—	—
鲜牛奶芝士酪	—	—	香辣豆皮卷	—	—
香辣金针菇	—	—	藤椒辣条	—	—
麻辣海带丝	—	—	虎皮凤爪	—	—
手撕豆干	—	—	麻辣卤藕	—	—
湿米粉	—	—	自热火锅	—	—
泡椒鱼皮	—	—	烟熏五花肉	—	—

食品名称	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z	食品名称	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
标识添加乳酸链球菌素的食品	爆汁肉肠	—	15.9	调理面包	—	21.3
肉罐肠	—	27.7	乳酸菌面包	—	70.8
黑猪午餐肉	—	18.3	全麦面包	—	4.03
卤鸭胗	—	16.4	腌辣椒	—	17.8
脱骨凤爪	—	33.8	腌黄瓜	—	9.67
碳烤猪肉脯	—	25.4	即食酸菜	3.77	205
酱卤牛肉	—	15.4	乳酸菌饮料	—	14.7
水晶肘花	—	9.36	酸奶饮品	—	17.1
肘花火腿	—	18.9	果汁含乳饮品	—	23.8
五香肥肠	—	9.14	酱汁味小鱼	—	15.0
火腿肠	—	16.2	手撕鱼排	—	23.8
芋泥蛋糕	—	266	奶酪棒	—	10.7
未标识添加乳酸链球菌素的食品	酱油	—	—	梅菜扣肉	—	—
豆瓣	—	—	香辣榨菜	—	—
牛油火锅底料	—	—	甜面酱	—	—
鸡蛋干	—	—	柠檬茶饮料	—	—
卤鹌鹑蛋	—	—	优酸乳	—	—
乳粉	—	—	醪糟	—	—
老酸奶	—	—	乌梅干	—	—
鲜牛奶芝士酪	—	—	香辣豆皮卷	—	—
香辣金针菇	—	—	藤椒辣条	—	—
麻辣海带丝	—	—	虎皮凤爪	—	—
手撕豆干	—	—	麻辣卤藕	—	—
湿米粉	—	—	自热火锅	—	—
泡椒鱼皮	—	—	烟熏五花肉	—	—

超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中乳酸链球菌素残留量

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张艳红 ¹ , 易倩 ¹ , 李德祥 ¹ , 张婷 ¹ , 杨洁 ¹ , 李红梅 ¹ , 杨欣怡 ¹ , 卢加文 ¹^,^* , 张凤枰 ¹^,²

食品安全质量检测学报 | 食品分析与检测 2025,16(15): 287-294

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食品安全质量检测学报 | 食品分析与检测 2025, 16(15): 287-294

超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中乳酸链球菌素残留量

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张艳红¹, 易倩¹, 李德祥¹, 张婷¹, 杨洁¹, 李红梅¹, 杨欣怡¹, 卢加文¹^,^*, 张凤枰¹^,²

作者信息

¹ 四川威尔检测技术股份有限公司, 成都 610041

² 宜宾学院质量管理与检验检测学部, 宜宾 644007

张艳红(1993—), 女, 工程师, 硕士, 主要研究方向为食品和农产品质量安全检测。E-mail: zhangyh@willtest.cn

通讯作者:

*卢加文(1980—), 男, 高级工程师, 主要研究方向为食品和农产品安全分析与检测。E-mail: 1756211563@qq.com

Determination of lactostreptococcin residues in food by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

Yan-Hong ZHANG¹, Qian YI¹, De-Xiang LI¹, Ting ZHANG¹, Jie YANG¹, Hong-Mei LI¹, Xin-Yi YANG¹, Jia-Wen LU¹^,^*, Feng-Ping ZHANG¹^,²

Affiliations

¹ Sichuan Willtest Technology Co., Ltd., Chengdu 610041, China

² Facuity of Quality Management and Inspection Quarantine, Yibin University, Yibin 644007, China

出版时间: 2025-08-15 doi: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250414003

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摘要

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目的建立一种超高效液相色谱-串联质谱法测定多种食品中乳酸链球菌素残留量的方法。方法样品用0.1%甲酸溶液+乙腈(80:20, V:V)提取、正己烷去脂, 以0.1%甲酸溶液和乙腈为流动相梯度洗脱, 经ZORBAX Eclipse Plus C₁₈(100 mm×2.1 mm, 1.8 μm)分离, 采用电喷雾离子源、正离子多反应监测模式检测, 基质匹配标准曲线外标法定量。结果乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z在0.5~50.0 μg/mL范围内线性关系良好, 相关系数大于0.995, 检出限和定量限分别为0.05~0.30 mg/kg和0.15~1.00 mg/kg, 在1.0、5.0、200.0 mg/kg 3个加标水平下, 回收率为88.8%~106.2%, 相对标准偏差为1.32%~8.85%。结论所建立的方法快速高效、重复性好、灵敏度高、定性定量准确, 可用于批量食品样品中乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z的测定。

关键词

乳酸链球菌素 / 残留量 / 超高效液相色谱-串联质谱法

Abstract

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Objective To develop an ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the determination of Nisin residues in various foods. Methods The samples were extracted with 0.1% formic acid solution+acetonitrile (80:20, V:V), delipid with n-hexane, eluted with 0.1% formic acid solution and acetonitrile as mobile phase gradient, and separated by ZORBAX Eclipse Plus C₁₈ (100 mm×2.1 mm, 1.8 μm). Electrospray ion source and positive ion multi-reaction monitoring mode were used for detection, and matrix matching standard curve external standard method was used for quantification. Results The linear relationship between Nisin A and Nisin Z was good in the range of 0.5 to 50.0 μg/mL, and the correlation coefficient was greater than 0.995. The limits of detection and quantitation were 0.05 to 0.30 mg/kg and 0.15 to 1.00 mg/kg, respectively. The recoveries ranged from 88.8% to 106.2% and the relative standard deviations were 1.32% to 8.85% at the 3 added levels of 1.0, 5.0 and 200.0 mg/kg. Conclusion The established method is fast, efficient, repeatable, sensitive and accurate, and can be used for the determination of Nisin A and Nisin Z in batch food samples.

Key words

lactistreptococcin / residual amount / ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

引用本文

张艳红, 易倩, 李德祥, 张婷, 杨洁, 李红梅, 杨欣怡, 卢加文, 张凤枰. 超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中乳酸链球菌素残留量. 食品安全质量检测学报, 2025 , 16 (15) : 287 -294 . DOI: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250414003

Yan-Hong ZHANG, Qian YI, De-Xiang LI, Ting ZHANG, Jie YANG, Hong-Mei LI, Xin-Yi YANG, Jia-Wen LU, Feng-Ping ZHANG. Determination of lactostreptococcin residues in food by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2025 , 16 (15) : 287 -294 . DOI: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250414003

正文

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0 引言

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乳酸链球菌素(Nisin)是由部分乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)或乳房链球菌(Streptococcus uberis)菌株产生的一种多肽物质, 属于I型羊毛硫菌素, 由5个硫醚环状结构和34个氨基酸组成, 分子量约为3500 Da^[1-2]。目前共发现14种乳酸链球菌素的天然变体(乳酸链球菌素A、Z、F、Q、S、U、U2、H、P、G、E、J、O1、2、3和O4), 乳酸链球菌素 A和乳酸链球菌素 Z是发现最早、研究最多的两个类型^[3-6]。乳酸链球菌素对革兰氏阳性菌表现出广泛的抑制作用, 如单增李斯特菌、葡萄球菌属、链球菌素、肠球菌属、芽孢杆菌属等^[7-12]。单独使用对革兰氏阴性菌无效, 但在高压、冷冻、降低pH、螯合剂处理等条件下, 对革兰氏阴性菌抑菌作用显著增强, 如沙门氏菌、大肠杆菌、假单胞杆菌等^[13-14]。乳酸链球菌素在胰凝乳蛋白酶的作用下迅速水解为氨基酸, 对人体安全无毒副作用^[2,15]。1969年被联合国粮食及农业组织/世界卫生组织(Food and Agriculture Organization of the United Nations/World Health Organization, FAO/WHO)批准作为食品防腐剂, 是世界上唯一被允许用作食品添加剂的细菌素, 广泛运用于乳及乳制品、肉及肉制品、水产制品、复合调味料等食品保鲜^[16]。欧盟、美国、英国和中国等80多个国家和地区针对乳酸链球菌素的使用制定了法律法规^[5,17]。GB 2760—2024《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》规定了乳酸链球菌素的使用范围和最大使用量, 但乳酸链球菌素尚未纳入国家食品安全监督抽检检验项目。鉴于脱氢乙酸及其钠盐禁止在淀粉制品、面包、糕点、预制肉制品等食品中使用, 食品生产企业将增加乳酸链球菌素的使用量, 为保证食品安全, 亟需建立食品中乳酸链球菌素残留检测方法, 规范食品生产企业合规使用乳酸链球菌素。

目前, 国内外有关食品中乳酸链球菌素测定方法主要有琼脂扩散法^[18]、比浊法^[19]、酶联免疫吸附法^[20]和生物荧光法^[21]等, 这些传统方法操作烦琐、检测时间长、抗基质干扰能力弱、灵敏度低、准确性和重复性差、不能定量乳酸链球菌素异构体; 近年来, 也有采用液相色谱法测定乳制品、酱制品和熟肉制品等食品中乳酸链球菌素^[22-23], 液相色谱-串联质谱法检测果汁饮料、鲜湿米粉、牛奶和奶酪等食品中乳酸链球菌素^[24-27], 这些文献多聚焦于基于单一基质开展方法研究, 未见多基质方法考察研究报道。鉴于食品种类多、基质复杂, 液相色谱-质谱串联技术灵敏度和选择性更高、抗干扰能力强、更适用于复杂基质^[28]等特点, 本研究采用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS), 系统考察优化样品前处理方法和色谱质谱条件, 研究建立超高效液相色谱-串联质谱法测定多种食品基质中乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z残留量, 旨在为食品中乳酸链球菌素安全监管提供检测方法依据, 引导食品生产企业乳酸链球菌素合规使用, 从源头保障我国食品质量安全。

1 材料与方法

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1.1 仪器、材料与试剂

1290-6470B超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪(配电喷雾离子源)、ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱(2.1 mm× 100 mm, 1.8 μm)(美国Agilent公司); KS-5200E超声波清洗器(昆山洁力美超声仪器有限公司); BSA224S-CW万分之一天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司]; SDC-2500多功能涡旋混合振荡器(深圳逗点生物技术有限公司); SF-TGL-18R冷冻离心机(上海菲恰尔分析仪器有限公司); Milli-Q超纯水发生器(美国Millipore公司)。

牛奶、面包、醋、调味汁、牛肉干、肉罐肠、酱腌菜、饮料等食品样品均为市售。

乳酸链球菌素A (CAS:1414-45-5)、乳酸链球菌素Z (CAS:137061-46-2)(纯度99.5%, 上海源叶生物科技有限公司); 乙腈、正己烷(色谱纯, 美国Fisher公司); 甲酸(色谱纯, 成都市科隆化学品有限公司); 微孔滤膜(有机系, 0.22 μm, 天津市津腾实验设备有限公司); 实验用水为Milli-Q制备的超纯水。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱: ZORBAX Eclipse Plus C₁₈(2.1 mm×100 mm, 1.8 μm); 柱温: 35 ℃; 流动相: A相为0.1%甲酸溶液, B相为乙腈, 流速: 0.25 mL/min, 梯度洗脱程序: 0~3.0 min, 80%~10% A; 3.0~6.0 min, 10% A; 6.0~6.1 min, 10%~80% A; 6.1~7.0 min, 80% A; 进样量: 5 μL。

1.2.2 质谱条件

离子源: 电喷雾离子源; 离子源温度: 350 ℃; 干燥气压力: 45 psi; 鞘气温度: 400 ℃; 鞘气流速: 12 L/min; 碰撞气流速: 7 L/min; 喷雾电压: 5000 V; 扫描方式: 正离子扫描; 检测方式: 多反应监测; 其他MS参数详见表1。

1.2.3 标准溶液配制

称取适量乳酸链球菌素A、乳酸链球菌素Z标准品, 分别用0.1%甲酸溶液+乙腈(80:20, V:V, 下同)配制成1000 μg/mL标准储备溶液; 准确移取10 mL乳酸链球菌素A、乳酸链球菌素Z标准储备溶液于100 mL容量瓶中, 用0.1%甲酸溶液+乙腈(80:20)稀释配制成100 μg/mL混合标准中间溶液。准确移取适量混合标准中间溶液, 用空白基质溶液稀释成质量浓度分别为0.01、0.05、0.20、1.00、2.00、5.00、10.00 μg/mL基质匹配混合标准系列溶液。临用现配。

1.2.4 样品前处理

高油脂试样: 准确称取试样5 g于50 mL离心管中, 加入20 mL 0.1%甲酸溶液+乙腈, 超声提取10 min, 5000 r/min离心5 min, 上清液转移至50 mL容量瓶中, 残渣再用20 mL 0.1%甲酸溶液+乙腈重复提取一次, 合并两次提取液, 用0.1%甲酸溶液+乙腈定容、混匀, 过0.22 µm微孔滤膜, 待上机测定。高油脂样品在提取步骤中加入20 mL正己烷去脂, 高蛋白样品加入2 mL 0.25 mol/L亚铁氰化钾和2 mL 1 mol/L乙酸锌溶液沉淀蛋白。

1.2.5 基质效应计算

基质效应(matrix effect, ME)计算公式为: ME=基质匹配标准溶液峰面积/溶剂标准溶液峰面积。

当ME>1时, 表示基质增强效应, 当ME<1时, 表示基质抑制效应。当在0.8≤ME≤1.2之间时, 表示ME不明显; 当0.5≤ME<0.8或1.2<ME≤1.5时, 表现为中等ME; 当ME<0.5或者ME>1.5时, 表现为强ME^[29-30]。

1.3 数据处理

采用MassHunter 10.0软件进行数据采集及定性定量分析; 用Excel 2019软件进行数据处理分析和图形绘制。

2 结果与分析

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2.1 色谱条件的优化

乳酸链球菌素是一种天然活性抗菌肽, 属于大分子化合物^[1-2], 其分离度受色谱柱影响很大, 在参考已报道文献资料^[22-24]基础上, 在相同参数条件下, 比较ZORBAX Eclipse Plus C₁₈(100 mm×2.1 mm, 1.8 μm)、InfinityLab Poroshell 120 EC-C₁₈(50 mm×3.0 mm, 2.7 μm)和ZORBAX Hilic Plus (50 mm×2.1 mm, 3.5μm)乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z的分离度、峰型和响应情况。结果表明, 3种色谱柱均能实现乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z的良好分离, 但ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱峰型尖锐、分离度更好、分析速度快, 因此本研究选用ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱。

乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z在正离子模式下采集, 流动相加酸提供H+, 促进其电离、提高目标化合物响应。分别考察甲醇、乙腈作为有机相, 0.05%甲酸溶液、0.1%甲酸溶液和2 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)溶液作为水相的分离效果。结果表明, 乙腈作为有机相时洗脱效果更好、色谱峰更尖锐, 0.1%甲酸溶液响应明显高于0.05%甲酸溶液, 2 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)溶液与0.1%甲酸溶液峰型、响应和分离度均无明显区别, 较低的盐浓度有助于延长色谱柱的使用寿命, 因此选用乙腈-0.1%甲酸溶液作为流动相。乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z混合标准溶液的总离子流图见图1。

2.2 质谱条件的优化

分别配制20 μg/mL 乳酸链球菌素A、乳酸链球菌素Z标准溶液, 在不接色谱柱模式下, 采用正离子和负离子两种模式扫描, 两种化合物在正离子模式下有较高的稳定性和响应值, 因此选择正离子模式, 与文献[24]的报道一致。母离子扫描后, 获得各化合物母离子[M+nH]n+, 并将最大以及次大的碎片离子分别选作定量离子和定性离子。在多反应监测模式下, 将化合物的母离子和2个碎片离子录入方法优化软件中, 获得各化合物的最佳碰撞能量、锥孔电压和雾化气流速等质谱参数, 详见表1。

2.3 提取溶剂的考察

乳酸链球菌素在中性和碱性条件下溶解性差, 在酸性条件下的溶解度随着pH的降低而升高。选择0.02%、0.05%、0.10%和0.20%甲酸溶液作为提取溶液, 考察牛奶、面包、醋、调味汁、牛肉干5种基质的提取效率。分别称取5 g试样, 加入适量乳酸链球菌素 A和乳酸链球菌素 Z混合标准溶液后按照1.2完成样品前处理和UPLC-MS/MS测定, 结果如图2所示。结果表明, 使用0.02%和0.05%甲酸作为提取溶剂的提取效果低于0.1%甲酸, 0.1%和0.2%甲酸提取效果基本一致, 为匹配流动相, 选用0.1%甲酸溶液+乙腈(80+20)作为提取溶剂。

2.4 提取方式的考察

选取牛奶、面包、醋、调味汁、牛肉干5种基质, 分别考察超声10、20、30 min, 涡旋振荡10、20、30 min不同提取方式的提取效率。称取5 g试样, 加入适量乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z混合标准溶液后按照1.2完成样品前处理和UPLC-MS/MS测定, 结果见图3。结果表明, 6种提取方式的提取效果无明显差异, 考虑提取效率及操作简便性, 确定提取方式为超声10 min。

2.5 提取次数的考察

选取牛奶、面包、醋、调味汁、牛肉干5种基质, 分别考察提取1、2、3次的提取效率。称取5 g试样, 加入适量乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z混合标准溶液后按照1.2完成样品前处理和UPLC-MS/MS测定, 结果见图4。结果表明, 不同样品基质提取2次结果明显高于提取1次, 且提取2次与3次结果基本一致, 因此确定提取次数为2次。

2.6 方法学评价

2.6.1 基质效应

由于食品样品基质复杂, 样品中非挥发性杂质组分对目标化合物的离子化效率产生影响, 导致响应增强或减弱。选取牛奶、面包、醋、调味汁和牛肉干基质, 按1.2进行样品前处理, 得到空白基质溶液, 配制得到标准工作溶液, 上机分析后, 按1.2.5计算MEs, 如图5所示。结果表明, 乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z的ME在0.43~0.88之间, 在5种食品基质中表现为基质抑制效应, 在调味汁基质中ME<0.5表现为强ME。已报道文献研究表明, 乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z吸附于C₁₈、HLB和PRIME HLB固相萃取柱上难以洗脱^[23], 无有效净化处理方式, 且目前尚无乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z同位素内标, 为减弱ME, 克服样品基质差异对目标化合物造成的影响, 本方法采用基质匹配标准曲线法开展定量分析工作。

2.6.2 线性范围、检出限和定量限

将1.2.3配制的基质混合标准系列溶液, 在1.2.1和1.2.2分析条件下, 浓度从低到高进样检测, 以乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z定量离子对的峰面积为纵坐标(Y), 以质量浓度为横坐标(X, μg/mL), 得到线性回归方程。以3倍信噪比确定方法的检出限, 10倍信噪比确定方法的定量限。结果如表2所示, 乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z在0.5~50.0 μg/mL范围内线性关系良好, 决定系数R²均大于0.995。在不同食品基质中, 乳酸链球菌素A的检出限和定量限分别在0.05~0.20 mg/kg和0.15~0.60 mg/kg之间, 乳酸链球菌素Z的检出限和定量限分别在0.10~0.30 mg/kg和0.30~1.00 mg/kg之间, 均满足检测需要。

2.6.3 回收率和精密度

本研究采用标准添加法验证方法的准确性和精密度, 分别取牛奶、面包、醋、调味汁和牛肉干样品, 按照1.0 mg/kg (定量限)、5.0 mg/kg (5倍定量限)、200.0 mg/kg (GB 2760—2024限量值)添加水平进行加标实验, 每个添加水平平行测定6次, 计算加标回收率和相对标准偏差。由表3可知, 使用所建立的方法定量测定乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z, 在5种基质中回收率在88.8%~106.2%之间, 相对标准偏差在1.32%~8.85%, 表明该方法定量准确、重复性好, 满足不同食品基质中乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素 Z的定性定量分析要求。

2.7 实际样品检测

随机抽取24批市售配料表中标识添加了乳酸链球菌素的食品和26批次未标识添加乳酸链球菌素的食品, 按照上述优化的条件和方法, 测定样品中的乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z残留量, 样品总离子流图见图6, 测定结果见表4。结果表明, 在上述实验条件下, 不同食品基质的色谱峰均峰型对称, 分离良好, 无杂质峰干扰。通过对50批实际样品的测定, 验证了该方法在高脂肪、高蛋白、高糖、高盐等复杂基质中的适用性; 24批次标注添加乳酸链球菌素的食品中, 乳酸链球菌素A检出1批次, 含量为3.77 mg/kg, 乳酸链球菌素Z检出24批次, 含量为4.03~266 mg/kg, 使用量均符合GB 2760—2024限量规定。此外, 26批未标注添加乳酸链球菌素的食品均未检出乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z, 不存在配料表与实际添加不符的情况。表明食品生产企业对乳酸链球菌素的使用符合相关法规要求, 未发现违规添加或标签标识不实的问题, 所建立的方法能够准确、高效测定不同食品基质中乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z的含量, 展现出良好的基质适应性和稳定性。

3 结论

收起

本研究建立了食品中乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z残留量的UPLC-MS/MS定性定量测定方法。与现有研究相比, 本方法通过考察多种食品基质, 对提取溶剂、提取方式和提取次数等样品前处理方法和条件、色谱质谱条件进行系统考察优化, 得到一种前处理简单、高效、灵敏度高的食品中乳酸链球菌素残留量定性定量检测方法。经验证, 该方法线性范围、检出限、定量限、回收率和精密度等方面均符合GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》规定要求。采用该法对市售50批食品样品进行测定, 结果表明, 不同食品基质的色谱峰峰型对称, 分离良好, 且无显著杂质峰干扰, 证明所建立的方法适用于多种食品基质中乳酸链球菌素A和乳酸链球菌素Z残留量的测定; 市售50批次样品检验结果表明, 当前乳酸链球菌素在允许使用的食品类别中有添加且使用量满足要求, 未发现超范围应用及标签信息虚假标注等情况。食品安全主管部门仍需进一步加强食品中乳酸链球菌素残留量的安全监管, 引导生产企业合规使用, 从源头保障食品安全, 守护人民群众的身体健康。

基金

收起

四川省2023年“天府菜油”支持建立科技创新团队奖补项目(2023TFR004)

参考文献

收起

文献

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2025年第16卷第15期

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doi: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.20250414003

接收时间：2025-04-14
首发时间：2026-01-09
出版时间：2025-08-15

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收稿日期：2025-04-14

基金

四川省2023年“天府菜油”支持建立科技创新团队奖补项目(2023TFR004)

作者信息

¹ 四川威尔检测技术股份有限公司, 成都 610041

² 宜宾学院质量管理与检验检测学部, 宜宾 644007

通讯作者:

*卢加文(1980—), 男, 高级工程师, 主要研究方向为食品和农产品安全分析与检测。E-mail: 1756211563@qq.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

组分	母离子 (m/z)	子离子 (m/z)	锥孔电压 /V	碰撞能量 /eV
乳酸链球菌素A	671.6	810.9*	70	5
790.3	8
744.5	10
乳酸链球菌素Z	667.0	805.0*	70	5
739.0	10
644.0	15

组分

母离子
(m/z)

子离子
(m/z)

锥孔电压
/V

碰撞能量
/eV

乳酸链球菌素A

671.6

810.9*

790.3

744.5

乳酸链球菌素Z

667.0

805.0*

739.0

644.0

基质	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
牛奶	Y=1937.02X-207.74	0.995	0.05	0.15	Y=315.03X-64.76	0.995	0.10	0.30
面包	Y=1371.31X-113.64	0.995	0.05	0.15	Y=258.68X-89.57	0.998	0.10	0.30
醋	Y=2150.78X-1373.5	0.995	0.20	0.60	Y=227.22X-81.84	0.995	0.30	1.00
调味汁	Y=859.83X-207.81	0.995	0.20	0.60	Y=136.05X-47.60	0.999	0.30	1.00
牛肉干	Y=1122.07X-70.64	0.997	0.10	0.30	Y=169.00X-87.05	1.000	0.20	0.60

基质

乳酸链球菌素A

乳酸链球菌素Z

回归方程

r²

检出限/(mg/kg)

定量限/(mg/kg)

回归方程

r²

检出限/(mg/kg)

定量限/(mg/kg)

牛奶

Y=1937.02X-207.74

0.995

0.05

0.15

Y=315.03X-64.76

0.995

0.10

0.30

面包

Y=1371.31X-113.64

0.995

0.05

0.15

Y=258.68X-89.57

0.998

0.10

0.30

醋

Y=2150.78X-1373.5

0.995

0.20

0.60

Y=227.22X-81.84

0.995

0.30

1.00

调味汁

Y=859.83X-207.81

0.995

0.20

0.60

Y=136.05X-47.60

0.999

0.30

1.00

牛肉干

Y=1122.07X-70.64

0.997

0.10

0.30

Y=169.00X-87.05

1.000

0.20

0.60

基质	添加浓度/(mg/kg)	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
牛奶	1.0	100.8	6.99	100.8	8.64
5.0	97.4	6.13	102.1	5.39
200.0	105.8	2.64	101.1	3.40
面包	1.0	94.9	7.59	98.3	8.85
5.0	87.1	2.92	90.5	3.47
200.0	107.9	3.37	91.8	1.54
醋	1.0	101.1	8.62	91.6	3.26
5.0	91.8	4.36	91.3	2.92
200.0	94.8	7.80	88.8	5.45
调味汁	1.0	99.6	4.92	98.4	8.45
5.0	105.8	4.66	106.2	2.55
200.0	106.2	3.41	101.7	1.45
牛肉干	1.0	99.1	8.63	98.4	6.24
5.0	96.8	2.42	104.5	3.40
200.0	98.5	1.27	94.2	1.32

基质

添加浓度/(mg/kg)

乳酸链球菌素A

乳酸链球菌素Z

平均
回收率/%

RSDs
/%

平均
回收率/%

RSDs
/%

牛奶

1.0

100.8

6.99

100.8

8.64

5.0

97.4

6.13

102.1

5.39

200.0

105.8

2.64

101.1

3.40

面包

1.0

94.9

7.59

98.3

8.85

5.0

87.1

2.92

90.5

3.47

200.0

107.9

3.37

91.8

1.54

醋

1.0

101.1

8.62

91.6

3.26

5.0

91.8

4.36

91.3

2.92

200.0

94.8

7.80

88.8

5.45

调味汁

1.0

99.6

4.92

98.4

8.45

5.0

105.8

4.66

106.2

2.55

200.0

106.2

3.41

101.7

1.45

牛肉干

1.0

99.1

8.63

98.4

6.24

5.0

96.8

2.42

104.5

3.40

200.0

98.5

1.27

94.2

1.32

食品名称	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z	食品名称	乳酸链球菌素A	乳酸链球菌素Z
标识添加乳酸链球菌素的食品	爆汁肉肠	—	15.9	调理面包	—	21.3
肉罐肠	—	27.7	乳酸菌面包	—	70.8
黑猪午餐肉	—	18.3	全麦面包	—	4.03
卤鸭胗	—	16.4	腌辣椒	—	17.8
脱骨凤爪	—	33.8	腌黄瓜	—	9.67
碳烤猪肉脯	—	25.4	即食酸菜	3.77	205
酱卤牛肉	—	15.4	乳酸菌饮料	—	14.7
水晶肘花	—	9.36	酸奶饮品	—	17.1
肘花火腿	—	18.9	果汁含乳饮品	—	23.8
五香肥肠	—	9.14	酱汁味小鱼	—	15.0
火腿肠	—	16.2	手撕鱼排	—	23.8
芋泥蛋糕	—	266	奶酪棒	—	10.7
未标识添加乳酸链球菌素的食品	酱油	—	—	梅菜扣肉	—	—
豆瓣	—	—	香辣榨菜	—	—
牛油火锅底料	—	—	甜面酱	—	—
鸡蛋干	—	—	柠檬茶饮料	—	—
卤鹌鹑蛋	—	—	优酸乳	—	—
乳粉	—	—	醪糟	—	—
老酸奶	—	—	乌梅干	—	—
鲜牛奶芝士酪	—	—	香辣豆皮卷	—	—
香辣金针菇	—	—	藤椒辣条	—	—
麻辣海带丝	—	—	虎皮凤爪	—	—
手撕豆干	—	—	麻辣卤藕	—	—
湿米粉	—	—	自热火锅	—	—
泡椒鱼皮	—	—	烟熏五花肉	—	—

食品名称

乳酸链球菌素A

乳酸链球菌素Z

食品名称

乳酸链球菌素A

乳酸链球菌素Z

标识添加乳酸链球菌素的
食品

爆汁肉肠

—

15.9

调理面包

—

21.3

肉罐肠

—

27.7

乳酸菌面包

—

70.8

黑猪午餐肉

—

18.3

全麦面包

—

4.03

卤鸭胗

—

16.4

腌辣椒

—

17.8

脱骨凤爪

—

33.8

腌黄瓜

—

9.67

碳烤猪肉脯

—

25.4

即食酸菜

3.77

205

酱卤牛肉

—

15.4

乳酸菌饮料

—

14.7

水晶肘花

—

9.36

酸奶饮品

—

17.1

肘花火腿

—

18.9

果汁含乳饮品

—

23.8

五香肥肠

—

9.14

酱汁味小鱼

—

15.0

火腿肠

—

16.2

手撕鱼排

—

23.8

芋泥蛋糕

—

266

奶酪棒

—

10.7

未标识添加乳酸链球菌素的食品

酱油

—

梅菜扣肉

—

豆瓣

—

香辣榨菜

—

牛油火锅底料

—

甜面酱

—

鸡蛋干

—

柠檬茶饮料

—

卤鹌鹑蛋

—

优酸乳

—

乳粉

—

醪糟

—

老酸奶

—

乌梅干

—

鲜牛奶芝士酪

—

香辣豆皮卷

—

香辣金针菇

—

藤椒辣条

—

麻辣海带丝

—

虎皮凤爪

—

手撕豆干

—

麻辣卤藕

—

湿米粉

—

自热火锅

—

泡椒鱼皮

—

烟熏五花肉

—