解放军医学杂志

组别	孕鼠(只)	胎鼠(只)	NTDs [只(%)]
对照组	9	72	0
模型组	9	73	59(80.8)⁽¹⁾
SCH组	9	89	19(21.4)^(1)(2)(3)
叶酸组	9	69	26(37.7)⁽¹⁾⁽²⁾

组别	孕鼠(只)	胎鼠(只)	NTDs [只(%)]
对照组	9	72	0
模型组	9	73	59(80.8)⁽¹⁾
SCH组	9	89	19(21.4)^(1)(2)(3)
叶酸组	9	69	26(37.7)⁽¹⁾⁽²⁾

五味子醇甲对小鼠神经管畸形的预防作用及其机制研究

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茹意 ¹ , 谢良骐 ¹ , 王新亮 ¹ , 肖保国 ² , 金小明 ³ , 马存根 ¹^,^* , 柴智 ¹ , 樊慧杰 ¹^,^*

解放军医学杂志 | 基础研究 2023,48(12): 1370-1377

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解放军医学杂志 | 基础研究 2023, 48(12): 1370-1377

五味子醇甲对小鼠神经管畸形的预防作用及其机制研究

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茹意¹, 谢良骐¹, 王新亮¹, 肖保国², 金小明³, 马存根¹^,^*, 柴智¹, 樊慧杰¹^,^*

作者信息

¹山西中医药大学多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心，山西晋中 030619

²复旦大学华山医院神经病学研究所，上海 200025

³美国印第安纳大学医学院，印第安纳波利斯 46202

茹意，硕士研究生，主要从事神经系统疾病的中西医结合防治研究

通讯作者:

樊慧杰，E-mail：fanhuijie@sxtcm.edu.cn

马存根，E-mail：macungen@sxtcm.edu.cn

Study on the preventive effect of schisandrin on neural tube defects in mice and its mechanism

Yi Ru¹, Liang-Qi Xie¹, Xin-Liang Wang¹, Bao-Guo Xiao², Xiao-Ming Jin³, Cun-Gen Ma¹^,^*, Zhi Chai¹, Hui-Jie Fan¹^,^*

Affiliations

¹Key Laboratory of Multiple Sclerosis Supplementing Qi and Promoting Blood Circulation/Neurobiology Research Center, Shanxi University of Chinese Medicine, Jinzhong, Shanxi 030619, China

²Institute of Neurology, Huashan Hospital, Fudan University, Shanghai 200025, China

³Indiana University School of Medicine, Indianapolis 46202, USA

出版时间: 2023-12-28 doi: 10.11855/j.issn.0577-7402.0333.2023.0828

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摘要

收起

目的探究五味子醇甲(SCH)对小鼠神经管畸形(NTDs)的预防作用及其机制。方法将C57BL/6小鼠按照雌雄2∶1比例合笼，将交配后有阴栓的雌鼠(孕鼠)随机分为对照组、模型组、SCH组与叶酸组，每组9只。除对照组外，在孕鼠妊娠7.5 d(E 7.5 d)时腹腔注射全反式维甲酸(atRA)(7.5 mg/kg)诱导胎鼠NTDs模型；在E 0.5 d-E 11.5 d，叶酸组孕鼠连续灌胃给予叶酸(61.0 μg/(kg·d)，SCH组孕鼠连续灌胃给予SCH(8.0 mg/(kg·d)，1次/d；在E 11.5 d实行剖宫产手术取出胎鼠。将PC12细胞分为对照组、模型组与SCH组，模型组采用atRA(20 μmol/L)处理12 h建立细胞损伤模型，SCH组再使用SCH(2.5 μmol/L)处理24 h。体视显微镜下鉴定胎鼠NTDs；HE染色观察胎鼠神经管闭合情况；Western blotting检测磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B (PI3K/Akt)信号通路p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果与对照组比较，模型组胎鼠NTDs发病率明显升高(P<0.01)；与模型组比较，叶酸组和SCH组胎鼠NTDs发病率降低(P<0.01)；与叶酸组比较，SCH组胎鼠NTDs发病率降低(P<0.01)。Western blotting检测结果显示，与对照组比较，模型组胎鼠组织p-PI3K、p-Akt蛋白表达均明显降低(P<0.01，P<0.05)；与模型组比较，叶酸组胎鼠组织p-PI3K、p-Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)，SCH组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显增高(P<0.05)。与对照组比较，模型组PC12细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平降低(P<0.05)；与模型组比较，SCH组PC12细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平增高(P<0.05)。结论 SCH可降低atRA导致的胎鼠NTDs发病率，其预防效果优于叶酸，这可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

关键词

神经管畸形 / 五味子醇甲 / PI3K/Akt信号通路 / 预防

Abstract

收起

Objective To investigate the preventive effect of schisandrin (SCH) on fetal neural tube defects (NTDs) of mice and its mechanism. Methods C57BL/6 mice were mated with female and male at a ratio of 2:1. Pregnant female mice with vaginal plug after mating were randomly divided into control group, model group, SCH group, and folic acid group, with 9 mice in each group. The NTDs fetal mice model was induced by intraperitoneal injection of all-trans retinoic acid (atRA) (7.5 mg/kg) on embryonic day 7.5 (E 7.5 d). During E 0.5 d-E 11.5 d, pregnant rats in folic acid group were given folic acid [61.0 μg/(kg·d)] by gavage once a day, and pregnant rats in SCH group were given SCH [8.0 mg/(kg·d)] by gavage once a day. Fetal mice were removed by cesarean section on E 11.5 d. PC12 cells were divided into control group, model group and SCH group. PC12 cells were treated with atRA (20 μmol/L) for 12 hours to establish cell damage model in model group, and treated with SCH (2.5 μmol/L) for 24 hours in SCH group. Fetuses were identified NTDs by stereoscopic microscopy. HE staining was used to observe the closure of the neural tube. The expression levels of p-PI3K, Akt and p-Akt molecules in PI3K/Akt signaling pathway were detected by Western Blotting. Results Compared with control group, the incidence of NTDs was significantly increased in mice of model group (P<0.01); compared with model group, the incidence of NTDs was decreased in folic acid group and SCH group (P<0.01); compared with folic acid group, SCH group had a lower incidence of NTDs (P<0.01). Western Blotting results showed that compared with control group, the expression of p-PI3K and p-Akt protein in fetal tissues of model group was significantly decreased (P<0.01, P<0.05); compared with model group, there was no significant difference in expression of p-PI3K and p-Akt in fetal tissues of folic acid group (P>0.05), while the expression of p-PI3K and p-Akt protein in SCH group was significantly higher (P<0.05). Compared with control group, PC12 cells in model group showed lower expression levels of p-PI3K and p-Akt (P<0.05); compared with model group, PC12 cells in SCH group showed higher expression levels of p-PI3K and p-Akt (P<0.05). Conclusions SCH can reduce the incidence of atRA-induced NTDs in fetal mice, and its preventive effect is better than folic acid, which may be related to the activation of the PI3K/Akt signaling pathway.

Key words

neural tube defects / schisandrin / PI3K/Akt signaling pathway / prevention

引用本文

茹意, 谢良骐, 王新亮, 肖保国, 金小明, 马存根, 柴智, 樊慧杰. 五味子醇甲对小鼠神经管畸形的预防作用及其机制研究. 解放军医学杂志, 2023 , 48 (12) : 1370 -1377 . DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.0333.2023.0828

Yi Ru, Liang-Qi Xie, Xin-Liang Wang, Bao-Guo Xiao, Xiao-Ming Jin, Cun-Gen Ma, Zhi Chai, Hui-Jie Fan. Study on the preventive effect of schisandrin on neural tube defects in mice and its mechanism[J]. Medical Journal of Chinese People’s Liberation Army, 2023 , 48 (12) : 1370 -1377 . DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.0333.2023.0828

正文

收起

神经管畸形(neural tube defects，NTDs)是常见的严重出生缺陷性疾病之一^[1]。据世界卫生组织统计，全球每年约有9万例NTDs患儿死亡，860万例患儿残疾^[2]。目前叶酸(folic acid)是预防NTDs的唯一用药，但仍有约30%的NTDs不能被预防^[3-4]，因此，亟需寻找更有效的药物来弥补该不足。NTDs的发病机制尚不明确，但大量研究显示，磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)信号通路与NTDs的发生密切相关^[5]。有研究显示，激活PI3K/Akt信号通路可降低NTDs的发生率^[6]。

五味子醇甲(schisandrin，SCH)是中药五味子中可通过血脑屏障的二苯并环辛二烯(dibenzocycloo-ctadiene lignans)木脂素类成分^[7-8]，具有抗凋亡、抗氧化、神经保护等多种药理作用^[9-11]。有临床研究报道，SCH对人体健康不会造成危害^[12-13]。研究显示，SCH对多种神经系统疾病(如阿尔茨海默病、帕金森病等)有一定的治疗作用^[14-15]，但其能否预防全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，atRA)诱导的NTDs仍不明确。本研究利用atRA建立NTDs小鼠模型和PC12细胞损伤模型，观察SCH对NTDs是否有预防作用，并探讨其可能的作用机制。

1 材料与方法

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1.1 材料

1.1.1 实验动物

8~10周龄SPF级未经产近交系C57BL/6小鼠58只(雌性40只，雄性18只)，体重(18±2) g，购自北京维通利华实验动物科技有限公司[实验动物生产许可证号：SCXK(京)2021-0006]。饲养于恒温(22±2) ℃、相对湿度40%~60%、12 h/12 h昼夜循环的标准实验室条件下。所有动物实验均按照《实验动物-动物福利伦理审查指南》的伦理标准进行。本研究方案经山西中医药大学实验动物伦理委员会批准(AWE20200319)。

1.1.2 细胞

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)由山西中医药大学益气活血国家中医药管理局重点实验室提供，培养于含有10%胎牛血清、1%青链霉素的DMEM高糖培养基中，于37 ℃、5% CO₂培养箱中培养。

1.1.3 药物

(1)SCH购自成都普菲德生物技术有限公司，白色粉末状，纯度≥99%；分子式C₂4H₃₂O₇；分子量432.51；批号20120205。SCH药液配制：①动物实验，将SCH粉末溶解于5%羧甲基纤维素钠中配制成浓度8 mg/kg的药液，采用超声使其充分溶解，于4 ℃冰箱中保存，使用前恢复至室温并充分摇匀。②细胞实验，将SCH粉末溶解于DMSO中，用移液枪反复吹打至药物粉末完全溶解，配置成浓度8000 μmol/L的母液分装放置于-20 ℃保存，避免反复冻融。使用时用完全培养基稀释为2.5 μmol/L的浓度。

(2)叶酸购自北京斯利安药业有限公司；规格0.4 mg/片；批号S181112。避光密封保存。叶酸药液配制：将叶酸药片在研磨钵中研磨成粉末状，于电子天平上精确称量，用生理盐水作为溶剂溶解，将其配制成终浓度为2.44 μg/ml的叶酸药液，再经超声进一步充分溶解，将配好的药液分装，避光保存于4℃冰箱中。使用前恢复至室温并充分摇匀。根据人(60 kg)︰小鼠(20 g)=1︰9.1确定小鼠的叶酸用药剂量为61.0 μg/kg。

(3)atRA购自美国Sigma公司，避光密封置于-20 ℃保存；批号WXBD1910V。atRA混悬液配制：①动物实验中，atRA的用药剂量为7.5 mg/kg，如小鼠体重为20 g，则注射含有atRA粉末0.15 mg的混悬液。精确称取atRA粉末，用无水乙醇和橄榄油的混合液(无水乙醇体积︰橄榄油体积=8︰92)作为溶剂，将配好的药液分装，避免反复冻融，避光存储在-20℃冰箱中。使用时提前取出，恢复至室温并充分摇匀。②细胞实验，将atRA粉末溶解于DMSO中，用移液枪反复吹打至药物粉末完全溶解，配置成为浓度为5000 μmol/L的母液分装、避光放置于-20 ℃保存，使用前用完全培养基稀释为2.5 μmol/L浓度。

1.1.4 试剂与仪器

磷酸化PI3K(p-PI3K)抗体(#4228S)、p-Akt抗体(#4060)、Akt抗体(#4685)购自美国Cell Signaling Technology公司；β-actin抗体(AP0060)和羊抗兔IgG(ZJ2020-R)购自南京Bioworld科技有限公司。

HE染色试剂盒(20201016)购自北京索莱宝科技有限公司；体视显微镜(EZ4D)、荧光显微镜(DM4000B LED)、冰冻切片机(CM1950)购自德国Leica公司；显微镜(DP72)购自日本OLYMPUS公司；电泳仪(PowerPac^TM)、转膜仪(PowerPac^TM)购自美国Bio-Rad公司；凝胶成像分析仪(Azure C300)购自美国Azure Biosystems公司。

1.2 实验分组与造模

(1)动物实验：在小鼠适应性喂养1周后，雌鼠与雄鼠交配过夜(下午7时至早晨7时)，次日早晨7时取出雌鼠检查阴道栓，将有阴道栓的雌鼠随机分为对照组、模型组、叶酸组与SCH组，每组9只。将发现阴道栓当天中午记为胚胎(embryo，E)0.5 d(E 0.5 d)。在E 7.5 d时，除对照组外各组孕鼠腹腔注射atRA(7.5 mg/kg)，对照组孕鼠给予等体积橄榄油腹腔注射；在E 0.5 d-E 11.5 d，叶酸组孕鼠持续灌胃给予叶酸[61.0 μg/(kg·d)]，SCH组持续灌胃给予SCH[8.0 mg/(kg·d)]干预，对照组和模型组孕鼠则灌胃给予等体积的生理盐水。

E 11.5 d麻醉脱颈处死孕鼠，剖宫产分离胚胎。

(2)细胞实验：将PC12细胞分为对照组、模型组与SCH组。使用atRA(20 μmol/L)处理PC12细胞12 h，建立PC12细胞损伤模型。在atRA处理12 h后，使用浓度为2.5 μmol/L的SCH继续处理24 h。

1.3 指标检测

1.3.1 胎鼠NTDs发病率

在E 11.5 d实行剖宫产、取出胎鼠后，于体视显微镜下辨别是否发生NTDs及其畸形类型，记录、拍照并计算NTDs发病率。

1.3.2 胎鼠组织冷冻切片制备

每组随机取出整个胎鼠组织，置于1×PBS溶液中洗涤(3 min×3次)，后置于4%多聚甲醛溶液中4 ℃固定6~12 h；置于10%、20%、30%蔗糖溶液中进行梯度脱水处理各24 h；3 d后用1×PBS溶液洗涤，使用OCT(optimum cutting temperature)包埋胶制作整个胎鼠组织包块，置于液氮中快速冷冻，保存于-80℃冰箱，用于制作冷冻切片(于胎鼠冠状位进行7 μm的连续切片)，切片晾干后保存于-80 ℃冰箱，以备后续HE染色。

1.3.3 HE染色观察胎鼠神经管闭合情况

取出冷冻切片，按照HE染色试剂盒说明书进行HE染色操作，待切片自然晾干后中性树胶封片。在显微镜下观察各组胎鼠神经管的发育闭合情况并拍照。

1.3.4 Western blotting检测胎鼠脑组织和PC12细胞中p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平

提取各组胎鼠脑组织和PC12细胞的蛋白，计算30 μg蛋白样本量，用合适的SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白。电泳完毕后，将分离好的蛋白凝胶用湿转膜法转移到硝酸纤维(PVDF)膜上，5%脱脂奶粉摇床上封闭2 h；充分洗涤后分别加入相应稀释后抗体，p-PI3K抗体(1︰1000)、p-Akt抗体(1︰1000)、Akt抗体(1︰1000)、β-actin抗体(1︰5000)，4 ℃孵育过夜；次日洗涤后加入相应的IgG(1︰5000)，置于摇床上慢速室温孵育2 h。使用化学发光凝胶成像系统进行化学发光反应曝光条带，ImageJ软件进行灰度值比较。

1.4 统计学处理

采用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料以$\bar{x}±s$表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。计数资料以例(%)表示，组间比较采用χ²检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

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2.1 atRA干预孕鼠建立NTDs胎鼠模型

体视显微镜下观察各组胎鼠形态，可见正常胎鼠后脑部及后颈部外观饱满光滑，后脑神经上皮完全融合，形成前、中、后脑泡，眼、耳泡，尾弯曲细长；atRA干预后，部分胎鼠表现出不同的畸形类型(图1)。

2.2 SCH对胎鼠NTDs发病率的影响

与对照组比较，其他各组胎鼠NTDs发病率均明显升高(P<0.01)；与模型组比较，叶酸组和SCH组胎鼠NTDs发病率降低(P<0.01)；与叶酸组比较，SCH组胎鼠NTDs发病率降低(P<0.01，表1)。

HE染色结果显示，对照组、SCH组、叶酸组胎鼠中脑、后脑、末脑、间脑、端脑、四脑室等各结构发育良好，外观光滑，发育状态良好；模型组胎鼠只见中脑、间脑、端脑，而后脑、末脑被破坏，神经组织外露；对照组、SCH组、叶酸组胎鼠神经管管腔规则，闭合良好，各结构清晰，细胞排列整齐；模型组胎鼠神经管呈现未闭合状态(图2)。

2.3 SCH对胎鼠脑组织中p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达的影响

Western blotting检测结果显示，与对照组比较，模型组胎鼠脑组织中p-PI3K、p-Akt蛋白表达均明显降低(P<0.01，P<0.05)；与模型组比较，叶酸组p-PI3K、p-Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)，SCH组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显增高(P<0.05)；与叶酸组比较，SCH组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显增高(P<0.05，图3)。

2.4 SCH对各组PC12细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达的影响

Western blotting检测结果显示，与对照组比较，模型组p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.05)；与模型组比较，SCH组p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平明显增高(P<0.05，图4)。

3 讨论

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NTDs是常见的出生缺陷性疾病^[16]，主要包括脊柱裂(spinal bifida)、无脑儿(anencephaly)和其他畸形类型^[17]，在世界范围内发病率为0.5‰~2.0‰^[18]。中国出生缺陷防治报告指出，我国目前出生缺陷发生率为5.6%，每年新增出生缺陷患儿约90万例，其中NTDs占2%左右^[19]。我国的NTDs发病呈现明显的地域差异，北方地区是NTDs的高发区，其中山西吕梁的发病率达5.57‰^[20-21]。有报道指出，NTDs患儿呈现明显的性别差异，女患儿发病率∶男患儿发病率=3∶1^[22]。NTDs呈现高病死率和高致残率，患儿一般在孕期即流产，仅小部分患儿可出生，出生后大部分会在短时间内死亡，平均寿命不到1年^[23-24]，是导致死胎、死产和新生儿死亡的主要诱因，给家庭和社会带来了沉重负担^[25]。目前NTDs发病机制尚不完全清楚，且其主要预防药物叶酸仍然存在不足。因此，寻找更加有效的NTDs预防药物显得尤为重要。近年来，草本植物的提取物由于其突出的生物活性越来越受到关注。

atRA作为一种维生素A的生物活性形式，在神经系统发育过程中发挥重要作用^[26]，是诱导小鼠NTDs的常用药物^[27-28]。本课题组前期研究显示，五子衍宗丸(WYP)可较好地预防atRA诱导的NTDs胎鼠发病^[29]。大量研究显示，SCH可发挥多种药理作用，如神经保护、抗神经细胞凋亡、抗氧化应激、增强小鼠的学习与认知能力等^[30]。此外，本课题组利用网络药理学构建了“药物WYP主要单体成分—NTDs关键靶点”网络，提示SCH与NTDs关系密切^[31]；2022年中国药典显示，SCH是WYP的主要质控成分之一^[32-33]。因此，虽未有SCH预防NTDs的相关报道，但基于前期研究，推测SCH可能具有预防NTDs的作用。本研究观察到，SCH可明显降低atRA诱导的NTDs胎鼠模型的发病率，并且SCH组胎鼠NTDs发病率低于叶酸组，提示SCH对胎鼠NTDs具有更好的预防作用。

NTDs的发病机制复杂，涉及多条信号通路，如PI3K/Akt信号通路^[6]、经典Wnt/β-catenin信号通路^[34]、平面细胞极性(planar cell polarity，PCP)信号通路^[35]、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)信号通路^[36]、音猬因子(sonic hedgehog，Shh)信号通路^[37]、维甲酸代谢通路^[38]等。其中PI3K/Akt信号通路更受关注，被认为是神经信号转导的关键通路，与神经发育密切相关；通过激活该通路的关键分子，可增强或抑制其下游因子，进而减少NTDs的发生^[6]。同时，PI3K/Akt信号通路也是一条抗细胞凋亡保护性通路，其激活能够促进细胞增殖和抑制细胞凋亡^[39]，而这正与NTDs的基本发病机制(神经细胞过度凋亡)相契合^[40]。因此，激活PI3K/Akt信号通路成为多种药物治疗疾病的作用靶点^[41-42]。Akt为PI3K下游重要的靶激酶，也是调节神经细胞凋亡的重要因子^[43]。Akt激酶的磷酸化是PI3K/Akt信号通路被激活的主要表现^[44]。事实上，SCH通过正向激活PI3K/Akt信号通路减轻疾病症状，已在多种神经系统疾病模型中得到验证，如SCH激活PI3K/Akt信号通路改善帕金森病小鼠运动障碍^[45]。

本研究的小鼠体内实验结果显示，SCH可影响PI3K/Akt信号通路主要蛋白的表达，上调p-PI3K和p-Akt表达水平，降低NTDs的发病率；采用SCH进一步干预损伤后的神经元样细胞，可增强p-PI3K、p-Akt的表达，提示SCH可能激活PI3K/Akt信号通路。由此可见，SCH降低NTDs发病率的作用机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路而实现的。

综上所述，SCH可降低小鼠NTDs发病率，且其预防作用优于叶酸；这种预防作用可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

基金

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国家自然科学基金(81703978)
山西省自然科学基金(20210302124293)
山西中医药大学科技创新能力培育项目(2020PY-JC-03)
山西中医药大学科技创新能力培育项目(2022PY-TH-16)

参考文献

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文献

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排序方式：

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2023年第48卷第12期

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doi: 10.11855/j.issn.0577-7402.0333.2023.0828

接收时间：2023-03-03
首发时间：2025-11-24
出版时间：2023-12-28

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收稿日期：2023-03-03
录用日期：2023-04-06

基金

National Natural Science Foundation of China(81703978)

国家自然科学基金(81703978)

Natural Science Foundation of Shanxi Province(20210302124293)

山西省自然科学基金(20210302124293)

Science and Technology Innovation Ability Cultivation Project of Shanxi University of Chinese Medicine(2020PY-JC-03)

山西中医药大学科技创新能力培育项目(2020PY-JC-03)

Science and Technology Innovation Ability Cultivation Project of Shanxi University of Chinese Medicine(2022PY-TH-16)

山西中医药大学科技创新能力培育项目(2022PY-TH-16)

作者信息

¹山西中医药大学多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心，山西晋中 030619

²复旦大学华山医院神经病学研究所，上海 200025

³美国印第安纳大学医学院，印第安纳波利斯 46202

通讯作者:

樊慧杰，E-mail：fanhuijie@sxtcm.edu.cn

马存根，E-mail：macungen@sxtcm.edu.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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