解放军医学杂志

项目	非DR组 (n=35)	DR组 (n=35)	P
性别[例(%)]			0.631
男	18(51.4)	20(57.1)
女	17(48.6)	15(42.9)
年龄(岁, $\bar{x}±s$)	58.84±8.92	59.02±9.16	0.934
糖尿病病程(年, $\bar{x}±s$)	0	3.10±1.25	<0.001
BMI(kg/cm², $\bar{x}±s$)	25.13±2.70	24.98±2.81	0.821
空腹血糖(mmol/L, $\bar{x}±s$)	5.54±0.68	9.67±1.14	<0.001
糖化血红蛋白(%, $\bar{x}±s$)	5.39±0.58	9.54±0.92	<0.001
血肌酐(μmol/L, $\bar{x}±s$)	67.46±8.12	65.73±9.05	0.403
血尿素氮(μmol/L, $\bar{x}±s$)	5.58±0.63	5.82±0.85	0.184
三酰甘油(μmol/L, $\bar{x}±s$)	1.50±1.25	1.71±1.36	0.504
高密度脂蛋白(mmol/L, $\bar{x}±s$)	1.64±0.58	1.80±0.87	0.369
低密度脂蛋白(mmol/L, $\bar{x}±s$)	2.79±0.62	2.85±0.79	0.725

项目	非DR组 (n=35)	DR组 (n=35)	P
性别[例(%)]			0.631
男	18(51.4)	20(57.1)
女	17(48.6)	15(42.9)
年龄(岁, $\bar{x}±s$)	58.84±8.92	59.02±9.16	0.934
糖尿病病程(年, $\bar{x}±s$)	0	3.10±1.25	<0.001
BMI(kg/cm², $\bar{x}±s$)	25.13±2.70	24.98±2.81	0.821
空腹血糖(mmol/L, $\bar{x}±s$)	5.54±0.68	9.67±1.14	<0.001
糖化血红蛋白(%, $\bar{x}±s$)	5.39±0.58	9.54±0.92	<0.001
血肌酐(μmol/L, $\bar{x}±s$)	67.46±8.12	65.73±9.05	0.403
血尿素氮(μmol/L, $\bar{x}±s$)	5.58±0.63	5.82±0.85	0.184
三酰甘油(μmol/L, $\bar{x}±s$)	1.50±1.25	1.71±1.36	0.504
高密度脂蛋白(mmol/L, $\bar{x}±s$)	1.64±0.58	1.80±0.87	0.369
低密度脂蛋白(mmol/L, $\bar{x}±s$)	2.79±0.62	2.85±0.79	0.725

miR-373-3p在糖尿病视网膜病变中的作用及其机制

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贾佳 , 张林昌 ^* , 张海霞

解放军医学杂志 | 基础研究 2025,50(1): 76-82

收起

解放军医学杂志 | 基础研究 2025, 50(1): 76-82

miR-373-3p在糖尿病视网膜病变中的作用及其机制

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贾佳, 张林昌^*, 张海霞

作者信息

天津市第五中心医院/北京大学滨海医院眼科，天津 300450

贾佳，硕士研究生，主治医师，主要从事眼科学方面的研究

通讯作者:

张林昌，E-mail：zyzlc686868@sina.com

Effect and mechanism of miR-373-3p in diabetic retinopathy

Jia Jia, Lin-Chang Zhang^*, Hai-Xia Zhang

Affiliations

Department of Ophthalmology, Tianjin Fifth Central Hospital/Peking University Binhai Hospital, Tianjin 300450, China

出版时间: 2025-01-28 doi: 10.11855/j.issn.0577-7402.0422.2024.0104

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摘要

收起

目的探讨miR-373-3p在糖尿病视网膜病变(DR)中的作用及其机制。方法收集2021年2月－2022年2月在天津市第五中心医院就诊的35例DR患者及35例非DR患者的血清，qRT-PCR检测miR-373-3p和血管内皮生长因子A(VEGFA) mRNA的表达情况。采用高糖(HG)处理人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)构建体外DR模型。将HRMEC分为对照组(5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇处理)、HG组(30 mmol/L葡萄糖处理)、HG+miR-373-3p模拟物阴性对照(miR-con)组(转染miR-con后用30 mmol/L葡萄糖处理)、HG+miR-373-3p组(转染miR-373-3p后用30 mmol/L葡萄糖处理)、HG+miR-373-3p+vector组(转染miR-373-3p和vector后用30 mmol/L的葡萄糖处理)和HG+miR-373-3p+VEGFA组(转染miR-373-3p和VEGFA后用30 mmol/L葡萄糖处理)。采用qRT-PCR和Western blotting分析各组miR-373-3p和VEGFA mRNA及蛋白表达水平。采用CCK-8法、免疫荧光、Transwell实验、血管形成实验和Western blotting检测HRMEC的增殖、迁移及血管生成能力。采用双荧光素酶测定miR-373-3p与VEGFA之间的关系。结果与非DR患者比较，DR患者血清中miR-373-3p表达水平明显降低(P<0.05)，VEGFA mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较，HG组HRMEC miR-373-3p表达水平明显降低(P<0.05)，VEGFA mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)，细胞活力、细胞增殖率以及增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)水平均增高(P<0.05)，迁移细胞数量和血管形成能力上升(P<0.05)。与HG+miR-con组比较，HG+miR-373-3p组HRMEC中miR-373-3p表达水平升高(P<0.05)，VEGFA表达水平降低(P<0.05)，细胞活力、细胞增殖率以及PCNA、Cyclin D1蛋白水平降低(P<0.05)，迁移细胞数量和血管形成能力下降(P<0.05)。与HG+miR-373-3p+vector组比较，HG+miR-373-3p+VEGFA组HRMEC VEGFA表达水平升高(P<0.05)，细胞活力、细胞增殖率以及PCNA、Cyclin D1蛋白水平均增高(P<0.05)，迁移细胞数量和血管形成能力上升(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示，miR-373-3p和VEGFA序列共转染后，HRMEC中荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论 miR-373-3p在DR患者血清中低表达，其可能的机制是通过靶向VEGFA抑制HG诱导的HRMEC功能障碍。

关键词

miR-373-3p / 糖尿病视网膜病变 / 血管内皮生长因子A / 高糖 / 人视网膜微血管内皮细胞

Abstract

收起

Objective To investigate the effect of miR-373-3p in diabetic retinopathy (DR), as well as the underlying mechanisms. Methods Serum samples from 35 DR patients and 35 non-DR patients visiting Tianjin Fifth Central Hospital from February 2021 to February 2022 were collected, and expression levels of miR-373-3p and vascular endothelial growth factor A (VEGFA) mRNA were detected using quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). An in vitro DR model was constructed using high glucose (HG)-treated human retinal microvascular endothelial cells (HRMEC). HRMECs were divided into control group (5 mmol/L glucose and 25 mmol/L mannitol treatment), HG group (30 mmol/L glucose treatment), HG+miR-373-3p mimic-negative control (miR-con) group (30 mmol/L glucose treatment after transfection with miR-con), HG+miR-373-3p mimic group (30 mmol/L glucose treatment after transfection with miR-373-3p), HG+miR-373-3p+vector group (30 mmol/L glucose treatment after co-transfection with miR-373-3p and vector), and HG+miR-373-3p+vascular endothelial growth factor A (VEGFA) group (30 mmol/L glucose treatment after co-transfection with miR-373-3p and VEGFA). The expression levels of miR-373-3p, VEGFA mRNA and protein were analyzed by qRT-PCR and Western blotting. CCK-8, immunofluorescence, Transwell assay, angiogenesis assay, and Western blotting were used to evaluate HRMEC proliferation, migration and angiogenesis abilities. The relationship between miR-373-3p and VEGFA was determined by dual luciferase reporter assay. Results Compared with non-DR patients, DR patients exhibited significantly lower expression levels of miR-373-3p (P<0.05) and higher expression levels of VEGFA mRNA (P<0.05) in serum. Compared with control group, HG group showed decreased expression of miR-373-3p (P<0.05), increased expressions of the mRNA and protein of VEGFA (P<0.05), higher cell viability, proliferation rate, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and Cylin D1 protein, and numbers of migrating cells and angiogenesis ability (P<0.05) in HRMECs. Compared with HG+miR-con group, HG+miR-373-3p group showed increased expression of miR-373-3p (P<0.05), decreased expressions of VEGFA (P<0.05), lower cell viability, proliferation rate, PCNA and Cylin D1 protein (P<0.05), and lower numbers of migrating cells and angiogenesis ability (P<0.05) in HRMECs. Compared with HG+miR-373-3p+vector group, HG+miR-373-3p+VEGFA group showed increased expression of VEGFA (P<0.05), higher cell viability, proliferation rate, PCNA and Cylin D1 protein, and numbers of migrating cells and angiogenesis ability (P<0.05) in HRMECs. The results of dual luciferase reporter assay showed decreased enzymatic activity of luciferase after cotransfection of miR-373-3p and VEGFA sequence (P<0.05). Conclusion MiR-373-3p is lowly expressed in the serum of DR patients, and its potential mechanism may involve targeting VEGFA to inhibit HG-induced HRMEC dysfunction.

Key words

miR-373-3p / diabetic retinopathy / vascular endothelial growth factor A / high glucose / retinal microvascular endothelial cells

引用本文

贾佳, 张林昌, 张海霞. miR-373-3p在糖尿病视网膜病变中的作用及其机制. 解放军医学杂志, 2025 , 50 (1) : 76 -82 . DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.0422.2024.0104

Jia Jia, Lin-Chang Zhang, Hai-Xia Zhang. Effect and mechanism of miR-373-3p in diabetic retinopathy[J]. Medical Journal of Chinese People’s Liberation Army, 2025 , 50 (1) : 76 -82 . DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.0422.2024.0104

正文

收起

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病的常见并发症，也是糖尿病患者视力障碍和失明的重要病因^[1]。DR的早期特征包括血-视网膜屏障(blood-retina barrier，BRB)破坏、毛细血管无细胞性和周细胞丢失，高糖是导致DR进展的主要因素之一^[2-3]。近年来DR的诊断和治疗取得了重要进展，但仍是视力丧失的主要病因之一。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类小而短的非编码RNA，可与信使RNA(mRNA)的3'-UTR结合，参与各种生理和病理过程的调控^[4]。血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)是血管生成的主要驱动力^[5]，VEGFA高表达会促进DR发展^[6]。我们采用生物信息学(Targetscan，https://www.targetscan.org/vert_72/)分析结果显示VEGFA为miR-373-3p的潜在靶基因，据此推测miR-373-3p可能通过靶向VEGFA抑制高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)损伤。本研究选择高糖诱导的HRMEC作为DR的体外细胞模型，探究miR-373-3p在DR发展中的作用及其潜在机制，以期为DR的靶向治疗提供参考。

1 材料与方法

收起

1.1 材料

1.1.1 研究对象

选取2021年2月－2022年2月在天津市第五中心医院就诊并被诊断为DR的35例患者，收集其血清样本。排除年龄<18岁、从其他医院转院、患有癌症、患有血液系统恶性肿瘤、怀孕或哺乳期的患者。另外，采集同一时期在本院健康体检的非DR患者(n=35)的血清样本作为对照。本研究方案获天津市第五中心医院伦理委员会的批准(20210103)，所有研究对象均知情同意。

1.1.2 细胞与主要试剂

HRMEC(ACBRI 181)购自美国Cell System；TRIzol(R401-01)、CCK-8细胞增殖检测试剂盒(A311-01)购自南京Vazyme；SuperSYBR One Step qRT-PCR检测试剂盒购自北京百奥莱博科技公司；青霉素-链霉素混合溶液(GD-Y1033)购自上海古朵生物公司；DMEM培养基(QSRA5497)购自上海钦诚生物科技有限公司；miR-373-3p模拟物(miR-373-3p)与其阴性对照(miR-con)、pcDNA3.1-VEGFA过表达(VEGFA)与其空白载体质粒pcDNA3.1(vector)均由上海GenePharma制备合成；RIPA裂解液(89900)、电化学发光(electrochemical luminescent，ECL)试剂盒(WP20005)购自美国ThermoFisher公司；兔抗VEGFA多克隆抗体(ab46154)、兔抗增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)单克隆抗体(ab92552)、兔抗细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)单克隆抗体(ab16663)、兔抗β-actin多克隆抗体(ab8227)、兔抗转化生长因子-β₁(transforming growth factor-β₁，TGF-β₁)单克隆抗体(ab215715)、兔抗血管生成素1(angiopoietin 1，Ang-1)单克隆抗体(ab183701)、兔抗β-tubulin多克隆抗体(ab6046)、兔抗Ki-67多克隆抗体(ab15580)均购自英国Abcam公司；基质胶(356234)、Transwell(3421)均购自美国Corning公司；双荧光素酶报告基因分析系统(GM-040502A)购自上海泽叶生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与分组

HRMEC细胞于37 ℃，5% CO₂环境在含有10%胎牛血清、1%抗生素的DMEM培养基中培养。将HRMEC细胞分为对照组(5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇处理)^[7]、高糖(HG)组(30 mmol/L葡萄糖处理)^[8]、HG+miR-con组(转染miR-con后30 mmol/L葡萄糖处理)、HG+miR-373-3p组(转染miR-373-3p后30 mmol/L葡萄糖处理)、HG+miR-373-3p+vector组(转染miR-373-3p和vector后30 mmol/L葡萄糖处理)和HG+miR-373-3p+VEGFA组(转染miR-373-3p和VEGFA后30 mmol/L葡萄糖处理)，所有细胞均处理48 h。

1.2.2 qRT-PCR检测miR-373-3p和VEGFA mRNA表达

用TRIzol试剂提取总RNA，将RNA经反转录获得cDNA；使用ProFlex PCR系统(美国Thermo Fisher公司)按照SuperSYBR One Step试剂盒通过特异性引物、cDNA进行qRT-PCR检测。用2^-ΔΔct法分析mRNA和miRNA的表达水平。GAPDH和U6分别用作mRNA或miRNA的内参照。引物序列如下：miR-373-3p(5'-3')：正向GGCGGAAGTGCTTCGATTTT，反向GTGCAGGGTCCGAGGTATTC；VEGFA(5'-3')：正向AGGGCAGAATCATCACGAAGT，反向AGGGTCTCGATTGGATGGCA；GAPDH(5'-3')：正向CCGTTGAATTTGCCGTGA，反向TGATGACCCTTTTGGCTCCC；U6(5'-3')：正向CTCGCTTCGGCAGCACA，反向AACGCTTCACGAATTTGCGT。

1.2.3 Western blotting检测VEGFA、PCNA、Cyclin D1、TGF-β₁、Ang-1蛋白水平

使用RIPA裂解液收集细胞裂解物，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，并将蛋白质转移到膜上。将膜与VEGFA(1∶1000)、PCNA(1∶1000)、Cyclin D1(1∶500)、β-actin(1∶1000)、TGF-β₁(1∶1000)、Ang-1(1∶1000)和β-tubulin(1∶500)的一抗在4℃下孵育过夜。随后将膜与二抗(1∶5000)在室温下孵育2 h。β-actin和β-tubulin分别用作内参照。最后通过ECL法对蛋白质进行可视化，采用Image J软件进行定量分析。

1.2.4 CCK-8法测定细胞活力

将各组HRMEC细胞接种于96孔板(5×10³个/孔)，孵育24 h后在每孔中添加10 μl CCK-8溶液，孵育4 h后在450 nm处检测各孔细胞的吸光度(OD)值，用于表示细胞活力。

1.2.5 免疫荧光分析细胞增殖情况

将各组HRMEC细胞接种于24孔板(1×10⁴个/孔)，24 h后4%多聚甲醛溶液固定15 min，5%胎牛血清封闭1 h。将细胞与兔抗Ki-67一抗(1:500)在4 ℃下孵育过夜。添加山羊抗兔IgG二抗(1:200)，在室温下孵育1 h。最后，经DAPI染色5 min后用甘油固定。采用荧光显微镜分析细胞增殖情况。细胞增殖率(%)=Ki-67染色细胞/DAPI染色总细胞×100%。

1.2.6 Transwell实验检测细胞迁移情况

将各组HRMEC细胞数通过无血清培养基调整为1×10⁵个/ml。吸取200 μl接种到Transwell小室上室中，并在下室中添加500 μl正常培养基，48 h后将进入下室的细胞经甲醇固定，用结晶紫染色。最后在Eclipse Ti倒置显微镜(日本Nikon公司)下观察并统计视野中迁移的细胞数。

1.2.7 血管形成实验检测血管形成能力

将300 μl基质胶置于24孔板底部，并将按照上述处理的各组HRMEC(2×10⁴个/孔)细胞接种到孔中。20 h后，在倒置显微镜下观察毛细血管样的结构。最后采用ImageJ软件评估毛细管状结构的分支长度。

1.2.8 双荧光素酶报告基因检测miR-373-3p和VEGFA的相互作用

将经过Targetscan预测含有miR-373-3p结合位点(WT)或突变位点(MUT)的VEGFA序列分别克隆到psiCHECK2载体中，构建VEGFA-WT或VEGFA-MUT。将这些构建的载体分别与miR-373-3p或miR-con共同转染至HRMEC中48 h，最后通过双荧光素酶报告基因分析系统检测荧光素酶活性。

1.3 统计学处理

采用SPSS 22.0软件进行统计分析。计量资料符合正态分布，以$\bar{x}±s$表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验。计数资料以例(%)表示，组间比较采用χ²检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

收起

2.1 两组临床资料及血清miR-373-3p、VEGFA mRNA表达水平比较

DR组糖尿病病程、空腹血糖、糖化血红蛋白均明显高于非DR组，差异有统计学意义(P<0.05)，其他指标比较差异无统计学意义(P>0.05，表1)。qRT-PCR检测结果显示，与非DR患者比较，DR患者血清miR-373-3p表达水平明显降低(0.48±0.09 vs. 1.05±0.12，P<0.05)，VEGFA mRNA表达水平明显升高(1.64±0.18 vs. 1.02±0.13，P<0.05)。

2.2 各组HRMEC细胞转染效率分析

qRT-PCR和Western blotting检测结果显示，与对照组比较，HG组HRMEC中miR-373-3p表达水平降低，VEGFA表达水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与HG+miR-con组比较，HG+miR-373-3p组HRMEC中miR-373-3p表达水平升高，VEGFA表达水平降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；与HG+miR-373-3p+vector组比较，HG+miR-373-3p+VEGFA组HRMEC中miR-373-3p表达水平差异无统计学意义(P>0.05)，VEGFA表达水平升高(P<0.05，图1)。

2.3 miR-373-3p抑制HRMEC中HG诱导的细胞增殖

结果显示，与对照组比较，HG组HRMEC细胞活力、细胞增殖率以及PCNA、Cyclin D1蛋白水平均明显上调(P<0.05)；与HG+miR-con组比较，HG+miR-373-3p组HRMEC细胞活力、细胞增殖率以及PCNA、Cyclin D1蛋白水平均明显下调(P<0.05)；与HG+miR-373-3p+vector组比较，HG+miR-373-3p+VEGFA组HRMEC细胞活力、细胞增殖率以及PCNA、Cyclin D1蛋白水平均明显上调(P<0.05，图2)。

2.4 miR-373-3p对HRMEC中HG诱导的细胞迁移和血管生成的影响

Transwell实验、血管形成实验和Western blotting结果显示，与对照组比较，HG组HRMEC迁移细胞数量、血管形成能力及TGF-β₁、Ang-1蛋白水平均明显上调(P<0.05)；与HG+miR-con组比较，HG+miR-373-3p组HRMEC迁移细胞数量、血管形成能力以及TGF-β₁、Ang-1蛋白水平均明显下调(P<0.05)；与HG+miR-373-3p+vector组比较，HG+miR-373-3p+VEGFA组HRMEC迁移细胞数量、血管形成能力以及TGF-β₁、Ang-1蛋白水平均明显上调(P<0.05，图3)。

2.5 miR-373-3p与VEGFA表达的关系

Targetscan软件的预测结果显示，miR-373-3p与VEGFA 3'-UTR存在结合位点(图4)。双荧光素酶报告基因检测结果显示，与miR-con组比较，miR-373-3p组HRMEC中共转染VEGFA-WT后荧光素酶相对活性明显降低(0.34±0.05 vs. 1.05±0.04，P<0.05)；而共转染VEGFA-MUT后荧光素酶活性变化无统计学意义(0.95±0.08 vs. 0.98±0.07，P>0.05)。

3 讨论

收起

DR可发生于大多数糖尿病患者，是成人失明的重要病因^[2]。目前可用于减缓DR发展的临床治疗方法选择很少，因此迫切需要了解DR的调控机制，开发新的延缓DR进展的治疗方法。在DR早期，在高糖的不利影响下HRMEC受损后可导致BRB功能障碍并加速DR进展^[9]。因此，高糖处理的HRMEC被用作DR的体外模型来探索特定基因对DR的影响^[10]。miRNA在DR的发生和发展中可发挥关键作用。例如，miR-124-3p可靶向GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白2(GTPase activating protein SH3 binding protein 2，G3BP2)抑制高糖诱导的HRMEC功能障碍^[10]。既往研究发现，miR-373-3p可在宫颈癌等多种人类癌症中发挥抗肿瘤基因的作用^[11]；miR-373-3p在糖尿病患者中的差异性表达与血管生成有关^[12]。miR-138-5p通过调节核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)信号通路对DR大鼠发挥保护作用^[13]。循环miR-3197和miR-2116-5p与DR相关^[14]。miR-181通过靶向Krüppel样因子6增强视网膜内皮细胞的增殖和迁移能力，进而促进DR的发展^[15]。近期研究报道miR-373-3p可参与多种疾病的调控，如癌症和骨关节炎等^[11,16]。

本研究检测miR-373-3p在DR患者及高糖诱导的HRMEC(一种DR的体外模型)中的表达，观察miR-373-3p对HRMEC增殖、迁移和血管生成的影响，并试图揭示这些现象背后的调控机制。结果显示，miR-373-3p在DR患者血清及高糖处理的HRMEC中下调；细胞功能实验结果显示，miR-373-3p过表达可抑制HRMEC细胞增殖、迁移和血管形成，同时抑制细胞增殖相关蛋白(PCNA、Cyclin D1)^[11]和血管生成相关蛋白(TGF-β₁和Ang-1)^[9]的表达，从而减轻高糖诱导的HRMEC损伤。既往研究显示，miR-373-3p在多种疾病中具有抑制细胞损伤的作用，与本研究结果一致。例如，miR-373-3p的过表达可降低滋养层细胞的迁移和侵袭能力^[17]；上调miR-373-3p可减轻脓毒症诱导的急性肝细胞损伤^[18]。以上结果提示miR-373-3p可减轻高糖诱导的HRMEC损伤，可能成为DR的潜在干预靶点。

miRNA通过与靶基因的3'-非翻译区(3'-UTR)结合，可引起靶基因表达水平的改变，调节多种细胞过程。本研究通过在线生物信息学数据库对miR-373-3p的靶基因进行预测，结果显示VEGFA的3'-UTR与miR-373-3p存在互补的结合位点，VEGFA被鉴定为HRMEC中miR-373-3p的下游靶标。VEGFA是VEGF家族中分布广泛的成员，是一种促血管生成的糖蛋白，可参与内皮细胞的增殖、迁移^[9]。在增殖性DR中，VEGFA可作为miR-203a-3p的靶基因参与视网膜血管生成^[19]。此外，VEGFA在DR患者及高糖处理的HRMEC中明显高表达，介导糖尿病视网膜微血管病变的恶化^[20]，与本研究结果一致。本研究结果还显示，VEGFA可调控PCNA、Cyclin D1、TGF-β₁和Ang-1蛋白水平，促进HRMEC增殖、迁移和血管生成，进而削弱miR-373-3p对高糖诱导的HRMEC损伤的保护作用。上述结果提示miR-373-3p可能通过靶向VEGFA来减轻高糖诱导的HRMEC损伤。

本研究采用高糖处理HRMEC 48 h作为DR模型，考虑到DR的进展涉及长期的高血糖，这一模型可能难以全面反映DR的相关机制，故而这种DR细胞模型虽被广泛使用和接受，仍存在局限性^[21]。因此，未来的DR细胞模型有必要采用长时间(甚至可能超过10年)、高水平(波动水平)的葡萄糖处理，但目前尚难以实现。

综上所述，本研究结果显示，miR-373-3p可通过靶向VEGFA来减轻高糖处理的HRMEC细胞损伤，具有开发DR新疗法的潜力。然而，由于DR的发展涉及多基因、多靶点、多途径，仍需要更多的相关研究以进一步探究和验证。

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

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2025年第50卷第1期

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doi: 10.11855/j.issn.0577-7402.0422.2024.0104

接收时间：2023-03-21
首发时间：2025-11-10
出版时间：2025-01-28

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收稿日期：2023-03-21
录用日期：2023-11-16

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天津市第五中心医院/北京大学滨海医院眼科，天津 300450

通讯作者:

张林昌，E-mail：zyzlc686868@sina.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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