中国新药与临床杂志

组别	存活率/%	克隆形成数/个	凋亡率/%
对照	100.00±0.00	117.00±4.55	8.32±0.26
模型	46.28±1.98^b	53.33±2.05^b	25.50±0.94^b
藏红花素低浓度	48.92±2.35^d	55.33±2.49^d	24.75±1.03^d
藏红花素中浓度	62.35±2.38^eh	74.67±2.97^eh	19.27±0.73^eh
藏红花素高浓度	85.02±2.94^ehk	93.67±3.30^ehk	13.20±0.46^ehk

组别	存活率/%	克隆形成数/个	凋亡率/%
对照	100.00±0.00	117.00±4.55	8.32±0.26
模型	46.28±1.98^b	53.33±2.05^b	25.50±0.94^b
藏红花素低浓度	48.92±2.35^d	55.33±2.49^d	24.75±1.03^d
藏红花素中浓度	62.35±2.38^eh	74.67±2.97^eh	19.27±0.73^eh
藏红花素高浓度	85.02±2.94^ehk	93.67±3.30^ehk	13.20±0.46^ehk

组别	miR-877-5p	p-P38	occludin	ZO-1
对照	1.00±0.04	0.14±0.01	0.73±0.06	0.88±0.06
模型	4.58±0.12^b	0.54±0.05^b	0.15±0.01^b	0.13±0.01^b
藏红花素低浓度	4.56±0.09^d	0.54±0.05^d	0.16±0.01^d	0.14±0.01^d
藏红花素中浓度	3.32±0.10^eh	0.37±0.04^eh	0.33±0.03^eh	0.32±0.03^eh
藏红花素高浓度	2.29±0.07^ehk	0.24±0.02^ehk	0.58±0.04^ehk	0.63±0.05^ehk

组别	miR-877-5p	p-P38	occludin	ZO-1
对照	1.00±0.04	0.14±0.01	0.73±0.06	0.88±0.06
模型	4.58±0.12^b	0.54±0.05^b	0.15±0.01^b	0.13±0.01^b
藏红花素低浓度	4.56±0.09^d	0.54±0.05^d	0.16±0.01^d	0.14±0.01^d
藏红花素中浓度	3.32±0.10^eh	0.37±0.04^eh	0.33±0.03^eh	0.32±0.03^eh
藏红花素高浓度	2.29±0.07^ehk	0.24±0.02^ehk	0.58±0.04^ehk	0.63±0.05^ehk

组别	存活率/%	克隆形成数/个	凋亡率/%	p-P38	occludin	ZO-1
anti-miR-NC	46.16±2.14	53.00±2.16	25.33±1.03	0.54±0.05	0.14±0.01	0.14±0.01
miR-877-5p抑制剂	89.13±3.28^b	101.33±3.86^b	10.63±0.34^b	0.17±0.02^b	0.64±0.04^b	0.69±0.06^b
藏红花素+miR-NC	85.51±2.95	94.33±3.40	13.16±0.36	0.24±0.02	0.58±0.04	0.62±0.06
藏红花素+miR-877-5p mimic	53.17±1.89^e	61.33±2.49^e	22.51±0.97^e	0.44±0.04^e	0.24±0.01^e	0.23±0.02^e

组别	存活率/%	克隆形成数/个	凋亡率/%	p-P38	occludin	ZO-1
anti-miR-NC	46.16±2.14	53.00±2.16	25.33±1.03	0.54±0.05	0.14±0.01	0.14±0.01
miR-877-5p抑制剂	89.13±3.28^b	101.33±3.86^b	10.63±0.34^b	0.17±0.02^b	0.64±0.04^b	0.69±0.06^b
藏红花素+miR-NC	85.51±2.95	94.33±3.40	13.16±0.36	0.24±0.02	0.58±0.04	0.62±0.06
藏红花素+miR-877-5p mimic	53.17±1.89^e	61.33±2.49^e	22.51±0.97^e	0.44±0.04^e	0.24±0.01^e	0.23±0.02^e

藏红花素调控miR-877-5p对氯吡格雷诱导胃黏膜上皮细胞损伤的影响

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杨凌霞 , 王伟 , 刘萍 , 向丹

中国新药与临床杂志 | 论著 2024,43(6): 454-459

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中国新药与临床杂志 | 论著 2024, 43(6): 454-459

藏红花素调控miR-877-5p对氯吡格雷诱导胃黏膜上皮细胞损伤的影响

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杨凌霞, 王伟, 刘萍, 向丹

作者信息

荆门市中医医院消化内科，湖北荆门　448000

杨凌霞，女，主治医师，学士，主要从事消化内科相关的基础研究，E-mail：smdo55@163.com

Effects of crocin on clopidogrel-induced gastric epithelial cells injury by regulating miR-877-5p

Ling-xia YANG, Wei WANG, Ping LIU, Dan XIANG

Affiliations

Department of Gastroenterology, Jingmen Hospital of Traditional Chinese Medicine, Jinmen HUBEI 448000, China

出版时间: 2024-06-25 doi: 10.14109/j.cnki.xyylc.2024.06.12

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摘要

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目的

探讨藏红花素对氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞损伤的作用及分子机制。

方法

将人胃黏膜上皮细胞GES-1分为对照组，模型组（0.5 mmol·L^-1氯吡格雷）和藏红花素低、中、高浓度（0.1、1、10 nmol·L^-1）组，另设anti-miR-NC组、miR-877-5p抑制剂组、藏红花素（10 nmol·L^-1）+miR-NC组和藏红花素（10 nmol·L^-1）+miR-877-5p mimic组。采用MTT法、克隆形成实验检测细胞存活率和克隆形成数，流式细胞术检测细胞凋亡，qRT-PCR检测miR-877-5p表达水平，Western blot法检测闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白（ZO-1）、p-P38蛋白表达。

结果

与对照组相比，模型组细胞存活率、克隆形成数下降，凋亡率和miR-877-5p、p-P38表达升高，occludin和ZO-1表达降低（P<0.05）。与模型组相比，藏红花素中、高浓度组细胞存活率、克隆形成数增加，凋亡率和miR-877-5p、p-P38表达降低，occludin和ZO-1表达升高（P<0.05）。与anti-miR-NC组相比，miR-877-5p抑制剂组细胞存活率、克隆形成数及occludin、ZO-1表达增加，凋亡率和miR-877-5p、p-P38表达降低（P<0.05）。与藏红花素+miR-NC组相比，藏红花素+miR-877-5p mimic组胃黏膜上皮细胞存活率、克隆形成数及occludin、ZO-1表达下降，凋亡率和miR-877-5p、p-P38表达升高（P<0.05）。

结论

藏红花素可能通过下调miR-877-5p抑制氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞凋亡，促进细胞增殖。

关键词

藏红花素 / miR-877-5p / 氯吡格雷 / 胃黏膜 / 上皮细胞 / 细胞增殖 / 细胞凋亡

Abstract

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AIM

To explore the effect of crocin on gastric mucosal epithelial cells injury induced by clopidogrel and the molecular mechanism.

METHODS

The gastric mucosal epithelial cells GES-1 were divided into control group, model group (0.5 mmol ·L^-1 clopidogrel), and crocin low, medium, and high concentration (0.1, 1, 10 nmol·L^-1) groups, and additionally divided into anti-miR-NC group, miR-877-5p inhibitor group, crocin (10 nmol·L^-1) + miR-NC group, crocin (10 nmol·L^-1) + miR-877-5p mimic group. MTT and colony formation assays were used to detect cell survival rate and the number of colony formation. Flow cytometry was used to detect cell apoptosis. qRT-PCR was used to detect the expression level of miR-877-5p. Western blot was used to detect the expression of occludin, zonula occluden-1 (ZO-1), and p-P38 protein.

RESULTS

Compared with the control group, the survival rate and the number of cell clone formation in model group were decreased, the apoptosis rate and the expression of miR-877-5p and p-P38 were increased, and the expressions of occludin and ZO-1 were decreased (P<0.05). Compared with the model group, the survival rate and the number of cell clone formation in the crocin medium and high concentration groups were increased, the apoptosis rate and the expression of miR-877-5p and p-P38 were decreased, and the expression of occludin and ZO-1 were increased (P<0.05). Compared with the anti-miR-NC group, the survival rate, the number of cell clone formation, and expression of occludin and ZO-1 were increased in the miR-877-5p inhibitor group, and apoptosis rate and expression of miR-877-5p and p-P38 were decreased (P<0.05).Compared with the crocin+miR-NC group, the survival rate, the number of cell clone formation, and the expression of occludin and ZO-1 were decreased in the crocin+miR-877-5p mimic group, while the apoptosis rate and the expression of miR-877-5p and p-P38 were increased (P<0.05).

CONCLUSION

Crocin may inhibit clopidogrel-induced apoptosis of gastric epithelial cells and promote cell proliferation by down-regulating miR-877-5p.

Key words

crocin / miR-877-5p / clopidogrel / gastric mucosal / epithelial cells / cell proliferation / apoptosis

引用本文

杨凌霞, 王伟, 刘萍, 向丹. 藏红花素调控miR-877-5p对氯吡格雷诱导胃黏膜上皮细胞损伤的影响. 中国新药与临床杂志, 2024 , 43 (6) : 454 -459 . DOI: 10.14109/j.cnki.xyylc.2024.06.12

Ling-xia YANG, Wei WANG, Ping LIU, Dan XIANG. Effects of crocin on clopidogrel-induced gastric epithelial cells injury by regulating miR-877-5p[J]. Chinese Journal of New Drugs and Clinical Remedies, 2024 , 43 (6) : 454 -459 . DOI: 10.14109/j.cnki.xyylc.2024.06.12

正文

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氯吡格雷是一种血小板聚集抑制剂，临床广泛用于治疗缺血性心脑血管疾病，但其可引发胃肠道损伤的不良反应^[1]。而传统中药对氯吡格雷引起的胃黏膜损伤具有一定的保护作用，因此，筛选高效低毒的中药用于治疗氯吡格雷引起的胃黏膜损伤具有重要意义^[2]。藏红花素是从鸢尾科番红花属植物藏红花中提取的一种有效成分，具有调节免疫功能、防治心血管疾病等作用^[3,4]。研究显示，藏红花素可通过抑制PI3K/Akt信号通路激活减轻大鼠胃缺血再灌注损伤^[5]，对吲哚美辛诱导的大鼠胃部损伤也有保护作用^[6]。但笔者尚未见藏红花素对氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞损伤的研究报道。miR-877-5p是miRNA中的一员，可抑制胃癌、胰腺癌、肺癌等多种癌细胞的增殖和侵袭^[7-9]。近期研究发现，敲低miR-877-5p可通过抑制凋亡减轻阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞GES-1的损伤^[10]。本研究旨在探讨藏红花素通过调控miR-877-5p对氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞损伤的影响。

材料与方法

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药品、试剂和仪器

氯吡格雷（HY-15283，规格75 mg，纯度99.13%，国药准字J20180029，上海嵘崴达实业有限公司），藏红花素（纯度>98%，dasf01988，南京道斯夫生物）。DMEM培养基（PW0180，美国sciencell公司），Lipofectamine^TM 2000试剂（美国Invitrogen公司），荧光定量试剂盒（SR2110，北京索莱宝），MTT试剂盒（BYX588C，常州贝源鑫生物），凋亡检测试剂盒（BA1120，南京恩晶生物），RIPA蛋白裂解液（00000190，上海北诺生物），兔抗人磷酸化的P38（p-P38）、闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白（ZO-1）抗体及羊抗兔二抗（英国abcam）。酶标仪（iMark，美国Bio-Rad），流式细胞仪（Attune NxT，美国Thermo Fisher Scientific）。

细胞培养与分组

人胃黏膜上皮细胞GES-1（SAc0122，上海澳音生物科技有限公司），用DMEM培养液常规培养，取对数生长期细胞，分为对照组，模型组，藏红花素低、中、高浓度组，除对照组外，给予终浓度为0.5 mmol·L^-1氯吡格雷，藏红花素组分别加入终浓度为0.1、1、10 nmol·L^-1的藏红花素培养48 h。

将anti-miR-NC、miR-877-5p抑制剂、miR-877-5p mimic与50 μL无血清培养液混匀，同时取Lipofectamine^TM 2000转染试剂5 μg与无血清培养液50 μL混匀，静置5 min后混匀静置20 min，然后加入培养好的GES-1细胞，混匀，转染6 h后给予终浓度为0.5 mmol·L^-1的氯吡格雷，分为anti-miR-NC组、miR-877-5p抑制剂组、藏红花素（10 nmol·L^-1）+miR-NC组和藏红花素+miR-877-5p mimic组。

细胞增殖

采用MTT法检测细胞存活率。GES-1细胞接种在96孔板上，每孔2×10⁵个细胞、200 μL。24 h后去掉血清，依据不同分组的方法进行处理，然后加入MTT溶液反应4 h，再加DMSO反应10 min，用酶标仪检测490 nm处吸光度（A）值，计算细胞存活率。存活率=实验组A值/对照组A值×100%。

采用克隆形成实验检测克隆形成数。各组处理后细胞接种于六孔板，每孔100个细胞，培养2周后终止培养，用甲醇固定15 min，再用吉姆萨染色30 min，在光学显微镜下计数>50个细胞的集落。

细胞凋亡

采用流式细胞术检测。GES-1细胞接种在6孔板上，每孔2×10⁵个细胞、2 mL，依据不同分组方法进行处理，48 h后按试剂盒说明操作，加10 μL Annexin V-FITC和PI，避光孵育10 min；用流式细胞仪检测细胞凋亡率。

miR-877-5p表达

采用qRT-PCR检测。GES-1细胞（2×10⁵/孔）接种在6孔板上，每孔2×10⁵个细胞、2 mL，依据不同分组方法进行处理，48 h后提取细胞总RNA，反转录成cDNA后进行荧光定量PCR，相对表达量采用2^-△△Ct法计算。miR-877-5p上游引物序列：5’-GTAGAGGA GAT GGCGCAGGG-3’，下游引物序列：5’-CAGTGCG TGTCGTGGAGT-3’；U6上游引物序列：5’-CTCGCT TCGGCAGCACA-3’，下游引物序列：5’-AACGCTTCAC GAATTTGCGT-3’。

p-P38、occludin、ZO-1蛋白表达

采用Western blot法检测。各组细胞培养48 h，加RIPA蛋白裂解液，提取细胞的总蛋白，将蛋白样品煮沸变性，并用定量试剂盒进行定量，制备分离胶和浓缩胶，然后置于电泳槽中，每孔取50 μg蛋白样品上样，以电压120 V进行电泳，蛋白条带跑至胶的底端后停止电泳，120 V、1.5 h转至PVDF膜，转膜结束后将膜浸于5 %的牛血清蛋白中进行封闭，缓慢摇晃1 h；封闭结束后加入一抗（1∶1 000）孵育4 h，洗膜后加入二抗（1∶1 200）孵育1 h，加化学发光试剂，曝光显影，成像后检测各蛋白条带的灰度水平。

统计学分析

采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，计量资料用均数±标准差（

）表示，两组比较行t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为有显著差异。

结果

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细胞增殖

与对照组相比，模型组细胞存活率、克隆形成数降低（P<0.05）；与模型组相比，藏红花素中、高浓度组细胞存活率、克隆形成数升高（P<0.05），而低浓度组细胞存活率及克隆形成数无显著差异（P>0.05），呈浓度依赖性。见表1。

细胞凋亡

与对照组相比，模型组胃黏膜上皮细胞凋亡率升高（P<0.05）；与模型组相比，藏红花素中、高浓度组胃黏膜上皮细胞凋亡率降低（P<0.05），低浓度组细胞凋亡率无显著差异，呈浓度依赖性。见表1、图1。

miR-877-5p表达及p-P38、occludin、ZO-1蛋白表达

与对照组相比，模型组胃黏膜上皮细胞中miR-877-5p表达和p-P38蛋白表达上调，occludin、ZO-1蛋白表达下调（P<0.05）；与模型组相比，藏红花素中、高浓度组细胞中miR-877-5p表达和p-P38蛋白表达显著降低，occludin、ZO-1蛋白表达显著升高（P<0.05），而低浓度组均无显著差异（P>0.05），呈浓度依赖性。见表2、图2。

抑制miR-877-5p对氯吡格雷诱导胃黏膜上皮细胞增殖和凋亡的影响

与anti-miR-NC组相比，miR-877-5p抑制剂组细胞存活率升高，克隆形成数增加，细胞凋亡率降低，p-P38表达水平降低，occludin和ZO-1表达水平升高（P<0.05）。见图3、表3。

过表达miR-877-5p对氯吡格雷诱导胃黏膜上皮细胞增殖和凋亡的影响

与藏红花素+miR-NC组相比，藏红花素+miR-877-5p mimic组细胞存活率降低，克隆形成数减少（P<0.05），occludin和ZO-1表达水平降低，细胞凋亡率、p-P38表达水平升高（P<0.05），见图4、表3。

讨论

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研究表明氯吡格雷可抑制人胃黏膜上皮细胞增殖^[11]。本实验用氯吡格雷处理GES-1后，发现细胞存活率、克隆形成数降低，凋亡率增加，说明氯吡格雷诱导胃黏膜上皮细胞损伤模型建立成功。藏红花素又名西红花苷、藏红花苷或番红花苷，具有抗炎、抗氧化、保肝利胆等作用^[12-14]。研究报道藏红花素通过抑制内质网应激反应，保护人脐静脉内皮细胞免受高糖诱导的损伤^[15]。本研究结果显示，中、高浓度藏红花素处理后，细胞存活率升高，细胞克隆形成数增加，凋亡率降低，说明中、高浓度藏红花素可促进胃黏膜上皮细胞存活，抑制氯吡格雷诱导的细胞凋亡，可减轻氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞损伤。

紧密连接蛋白与黏膜屏障受损相关，而跨膜蛋白occludin和胞质附着蛋白ZO-1是紧密连接蛋白的重要组成，occludin与ZO-1可调控黏膜通透性，影响黏膜损伤^[16]。氯吡格雷可通过降低occludin和ZO-1蛋白表达造成小鼠小肠黏膜损伤^[17,18]。本研究结果发现氯吡格雷诱导GES-1损伤后，occludin和ZO-1表达水平降低，而中、高浓度藏红花素可使occludin和ZO-1表达水平升高，说明藏红花素可能通过调节相关蛋白表达保护胃黏膜细胞免受损伤。

本实验结果显示，氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞中miR-877-5p表达水平升高；抑制miR-877-5p表达可减轻氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞凋亡和黏膜损伤，与研究^[10]结果相似。此外，藏红花素可降低miR-877-5p表达水平，而过表达miR-877-5p逆转了藏红花素对氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞损伤的影响，说明藏红花素可能通过调控miR-877-5p表达影响氯吡格雷诱导的胃黏膜损伤。此外，研究报道miR-877-5p的表达下调可抑制阿司匹林诱导的胃黏膜上皮细胞损伤，而KEGG通路富集分析结果显示p38/MAPK信号通路可能是miR-877-5p下游靶点^[19]。故本研究推测P38/MAPK信号通路在氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞损伤过程中被miR-877-5p调控。本实验结果显示，藏红花素抑制miR-877-5p表达后，p-P38表达水平降低，说明藏红花素可能是通过抑制miR-877-5p表达进而抑制p38/MAPK信号通路激活。

综上所述，藏红花素可能通过下调miR-877-5p抑制氯吡格雷诱导的胃黏膜上皮细胞损伤。

参考文献

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文献

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2024年第43卷第6期

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doi: 10.14109/j.cnki.xyylc.2024.06.12

接收时间：2022-12-27
首发时间：2026-03-20
出版时间：2024-06-25

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收稿日期：2022-12-27
录用日期：2024-03-20

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荆门市中医医院消化内科，湖北荆门　448000

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

组别	存活率/%	克隆形成数/个	凋亡率/%
对照	100.00±0.00	117.00±4.55	8.32±0.26
模型	46.28±1.98^b	53.33±2.05^b	25.50±0.94^b
藏红花素低浓度	48.92±2.35^d	55.33±2.49^d	24.75±1.03^d
藏红花素中浓度	62.35±2.38^eh	74.67±2.97^eh	19.27±0.73^eh
藏红花素高浓度	85.02±2.94^ehk	93.67±3.30^ehk	13.20±0.46^ehk

组别

存活率/%

克隆形成数/个

凋亡率/%

对照

100.00±0.00

117.00±4.55

8.32±0.26

模型

46.28±1.98^b

53.33±2.05^b

25.50±0.94^b

藏红花素低浓度

48.92±2.35^d

55.33±2.49^d

24.75±1.03^d

藏红花素中浓度

62.35±2.38^eh

74.67±2.97^eh

19.27±0.73^eh

藏红花素高浓度

85.02±2.94^ehk

93.67±3.30^ehk

13.20±0.46^ehk

组别	miR-877-5p	p-P38	occludin	ZO-1
对照	1.00±0.04	0.14±0.01	0.73±0.06	0.88±0.06
模型	4.58±0.12^b	0.54±0.05^b	0.15±0.01^b	0.13±0.01^b
藏红花素低浓度	4.56±0.09^d	0.54±0.05^d	0.16±0.01^d	0.14±0.01^d
藏红花素中浓度	3.32±0.10^eh	0.37±0.04^eh	0.33±0.03^eh	0.32±0.03^eh
藏红花素高浓度	2.29±0.07^ehk	0.24±0.02^ehk	0.58±0.04^ehk	0.63±0.05^ehk

组别

miR-877-5p

p-P38

occludin

ZO-1

对照

1.00±0.04

0.14±0.01

0.73±0.06

0.88±0.06

模型

4.58±0.12^b

0.54±0.05^b

0.15±0.01^b

0.13±0.01^b

藏红花素低浓度

4.56±0.09^d

0.54±0.05^d

0.16±0.01^d

0.14±0.01^d

藏红花素中浓度

3.32±0.10^eh

0.37±0.04^eh

0.33±0.03^eh

0.32±0.03^eh

藏红花素高浓度

2.29±0.07^ehk

0.24±0.02^ehk

0.58±0.04^ehk

0.63±0.05^ehk

组别	存活率/%	克隆形成数/个	凋亡率/%	p-P38	occludin	ZO-1
anti-miR-NC	46.16±2.14	53.00±2.16	25.33±1.03	0.54±0.05	0.14±0.01	0.14±0.01
miR-877-5p抑制剂	89.13±3.28^b	101.33±3.86^b	10.63±0.34^b	0.17±0.02^b	0.64±0.04^b	0.69±0.06^b
藏红花素+miR-NC	85.51±2.95	94.33±3.40	13.16±0.36	0.24±0.02	0.58±0.04	0.62±0.06
藏红花素+miR-877-5p mimic	53.17±1.89^e	61.33±2.49^e	22.51±0.97^e	0.44±0.04^e	0.24±0.01^e	0.23±0.02^e

组别

存活率/%

克隆形成数/个

凋亡率/%

p-P38

occludin

ZO-1

anti-miR-NC

46.16±2.14

53.00±2.16

25.33±1.03

0.54±0.05

0.14±0.01

miR-877-5p抑制剂

89.13±3.28^b

101.33±3.86^b

10.63±0.34^b

0.17±0.02^b

0.64±0.04^b

0.69±0.06^b

藏红花素+miR-NC

85.51±2.95

94.33±3.40

13.16±0.36

0.24±0.02

0.58±0.04

0.62±0.06

藏红花素+miR-877-5p mimic

53.17±1.89^e

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22.51±0.97^e

0.44±0.04^e

0.24±0.01^e

0.23±0.02^e