药学学报

姜黄素逆转胃癌细胞赫赛汀耐药机制研究

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刘文虎 ¹^,²^,^# , 袁江北 ³^,^# , 杨兰 ¹ , 常晋霞 ²^,^*

药学学报 | 药理学 2018,53(11): 1817-1824

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姜黄素逆转胃癌细胞赫赛汀耐药机制研究

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刘文虎¹^,²^,^#, 袁江北³^,^#, 杨兰¹, 常晋霞²^,^*

作者信息

1.川北医学院药学院, 四川南充 637100

2.川北医学院基础医学院基础医学创新平台, 四川南充 637100

3.重庆大学药学院, 重庆 401331

通讯作者:

* 常晋霞, Tel:86-817-3352013, E-mail:jinxiachang@163.com

Mechanisms of curcumin to reverse herceptin resistance in gastric cancer cells

Wen-hu LIU¹^,², Jiang-bei YUAN³, Lan YANG¹, Jin-xia CHANG²^,^*

Affiliations

1. School of Pharmacy, North Sichuan Medical College, Nanchong 637100, China

2. Innovative Platform of Basic Medical Sciences, School of Basic Medical Sciences, North Sichuan Medical College, Nanchong 637100, China

3. School of Pharmaceutical Sciences, Chongqing University, Chongqing 401331, China

出版时间: 2018-11-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2018-0651

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摘要

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探讨胃癌细胞NCI N87赫赛汀耐药及姜黄素逆转耐药的可能机制。采用Western blot检测姜黄素对耐药细胞IκBα、NF-κBp65、HER-2、caspase-3、Bcl-2及Bax表达的影响；Annexin V-FITC/PI评价姜黄素对耐药细胞凋亡的影响；试剂盒检测姜黄素对caspase-3、8、9活性的影响。结果显示，NCI N87/R细胞IκBα在胞浆中低表达、NF-κBp65在核内高表达，NF-κB通路抑制剂EVP4593偏好性抑制NCI N87/R细胞增殖，提示耐药细胞NF-κB通路被激活。姜黄素能够降低NCI N87/R细胞活力，抑制NF-κB通路，下调HER-2、Bcl-2表达，上调Bax表达，增加caspase-3、8、9活性。表明NF-κB通路激活与NCI N87赫赛汀耐药有关。姜黄素能够逆转NCI N87细胞赫赛汀耐药，其机制可能与抑制NF-κB信号通路、诱导细胞凋亡有关。

关键词

姜黄素 / 胃癌 / 赫赛汀耐药 / NF-κB信号通路 / 细胞凋亡

Abstract

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This study is aimed to investigate the potential mechanisms of herceptin-acquired resistance and curcumin to reverse resistance in NCI N87/R gastric cancer cells. Western blot was used to evaluate the effect of curcumin on the expression of IκBα, NF-κBp65, HER-2, caspase-3, Bcl-2 and Bax in herceptin resistant cells; Annexin V-FITC/PI was exploited to analyze the effect of curcumin on cell apoptosis; Caspase kit was used to evaluate the effect of curcumin on the enzymatic activity of caspase-3, 8 and 9. The results showed a low expression of IκBα in the cytoplasm and a high expression of NF-κBp65 in the nucleus of NCI N87/R cells. Correspondingly, inhibition of NF-κB pathway by EVP4593, a specific NF-κB inhibitor, preferentially reduced cell viability of NCI N87/R cells, indicating the activation of NF-κB pathway in NCI N87/R cells. Curcumin preferentially reduced cell proliferation and inhibited NF-κB signaling pathway of NCI N87/R cells, downregulated the expression of HER-2 and Bcl-2, upregulated the expression of Bax, increased the activity of caspase-3, 8 and 9. Taken together, our study demonstrates the correlation between herceptin resistance acquirement of NCI N87 cells and the activation of NF-κB pathway. Moreover, curcumin reverses herceptin resistance of NCI N87 cells possibly by inhibiting NF-κB pathway and inducing cell apoptosis.

Key words

curcumin / gastric cancer / trastuzumab resistance / NF-κB signaling pathway / apoptosis

引用本文

刘文虎, 袁江北, 杨兰, 常晋霞. 姜黄素逆转胃癌细胞赫赛汀耐药机制研究. 药学学报, 2018 , 53 (11) : 1817 -1824 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2018-0651

Wen-hu LIU, Jiang-bei YUAN, Lan YANG, Jin-xia CHANG. Mechanisms of curcumin to reverse herceptin resistance in gastric cancer cells[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2018 , 53 (11) : 1817 -1824 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2018-0651

正文

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胃癌是严重威胁人类健康的消化系统恶性肿瘤, 其发病率、死亡率在所有癌症中位居前列。据统计, 约20%胃癌患者存在受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2 (receptor tyrosine-protein kinase erbB-2, ErbB2)基因扩增和(或)人表皮生长因子受体2 (human epidermal growth factor receptor 2, HER-2)的过度表达^[1]。HER-2过表达易自发形成同源或异源二聚体, 引发胞内激酶区活化, 诱发受体自身或交互磷酸化, 引起下游PI3K/AKT信号通路激活, 参与细胞周期的调控^{[2, 3]}。多项研究显示, HER-2过表达与胃癌增殖、侵袭、转移、耐药及预后不良密切相关^{[4, 5]}。因此, HER-2已成为胃癌治疗的重要治疗靶标。

赫赛汀(注射用曲妥珠单抗)是特异性靶向HER-2的单克隆抗体药物, 通过拮抗HER-2信号转导及抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)发挥抗肿瘤作用。该药于1998年首次批准用于HER-2过表达(IHC3⁺或IHC2⁺/FISH⁺)转移性乳腺癌的二线治疗, 2010年又获批用于HER-2过表达转移性胃癌或胃食管交界癌的治疗。尽管赫赛汀抗癌机制明确, 疗效可靠, 然而随之而来的肿瘤耐药问题, 已成为制约其临床有效治疗的科学问题。因此, 明确其耐药机制及开展逆转耐药研究已成为当务之急。对乳腺癌研究发现, 联合小分子药物来那替尼(neratinib)、抗体类药物(帕妥珠单抗)能够有效延迟或逆转赫赛汀耐药^{[6, 7]}, 然而由于小分子药物毒副作用大、抗体类药物价格昂贵, 导致其临床使用受限, 且乳腺癌赫赛汀联合用药方案是否适用于胃癌赫赛汀耐药的治疗, 尚无明确定论。由于赫赛汀用于胃癌治疗时间尚短, 胃癌赫赛汀耐药机制及其逆转耐药研究尚未广泛开展, 因此, 研究胃癌赫赛汀耐药及其逆转策略具有重要理论及现实意义。

姜黄素(curcumin)是从姜黄、郁金等植物的根茎中提取得到的多酚类化合物。现代药理证实, 姜黄素具有抗癌、抗病毒、抗菌及促进伤口愈合等作用^[8-10]。多项研究显示, 姜黄素能够逆转多种肿瘤细胞耐药, 包括通过抑制NF-κB通路逆转胃癌5-氟尿嘧啶耐药^[11]; 通过调节CXC趋化因子/NF-κB通路逆转直肠癌奥沙利铂耐药^[12]; 调节上皮-间质转化(epithelial- mesenchymal transition, EMT)逆转结肠癌伊立替康耐药^[13]; 抑制NF-κB通路下调Lin28逆转人肝癌细胞紫杉醇耐药^[14]。亦有文献^[15]证实, 姜黄素通过下调人急性粒细胞白血病细胞耐药基因MDR1、LRP、ABCG2/BCRP、P-gp及MRP-1的表达逆转肿瘤多药耐药。然而姜黄素可否逆转胃癌细胞赫赛汀耐药, 尚未见文献报道。

肿瘤获得性耐药是一个及其复杂的过程, 需要启动一系列生物学事件, 包括信号通路的活化和生存信号的转变, 以及某些调控基因和(或)蛋白的异常表达。前期研究表明, mTOR、MAPK/ERK、Wnt/ β-catenin、NF-κB、IL-2等多条信号通路在NCI N87/R细胞中呈现异常变化(P < 0.001), 且已证实mTOR、MAPK/ERK和Wnt/β-catenin信号激活与赫赛汀耐药有关^[16-18]。虽然NF-κB信号在赫赛汀耐药细胞中异常改变, 但这种变化是否对其耐药具有贡献, 尚不明确。本实验以前期研究为基础, 以胃癌赫赛汀敏感细胞NCI N87和耐药细胞NCI N87/R为对象, 探究NF-κB通路改变与其耐药的关系, 在此基础上初步阐释姜黄素逆转耐药的效果及可能机制。

材料与方法

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细胞株及细胞培养 NCI N87和NCI N87/R细胞由军事医学科学院第四研究室施明研究员惠赠。NCI N87/R细胞的耐药属性在前期研究中已证实^[16-18]。NCI N87和NCI N87/R细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养液中, 于37 ℃、5% CO₂的孵箱中培养, 根据细胞生长状态换液、清洗和传代。为了保持NCI N87/R细胞的耐药属性, 其培养液中需加入终质量浓度为40 μg·mL^-1赫赛汀。

药品及主要试剂 赫赛汀(罗氏制药公司); 胰酶、胎牛血清(Gibco公司); DMEM培养基(BioInd公司); 牛血清白蛋白、双抗、caspase-3、8、9试剂盒(编号分别为C1115、C1151和C1157)、RIPA裂解液(P0013B) (碧云天生物技术公司); CCK-8试剂盒(同仁化学研究所); EVP4593 (MedChemExpress公司, HY-13812)。姜黄素(国家药品标准物质, LD- 1109680, 使用前用DMSO配成母液, -20 ℃保存)。所用抗体: IκBα (sc-203)、NF-κBp65 (sc-109)、NF-κB (sc-109)、Bax (sc-4239)、Alexa Fluor^® 488二抗(sc-3895) (Santa Cruz公司); HER-2 (Abcam公司, 16901); caspase-3 (9662)、Bcl-2 (2872)、β-actin (12620) (Cell Signaling公司); HRP标记二抗(中杉金桥生物技术有限公司, ZB-2301, ZB-7074)。Bradford蛋白定量试剂盒及高灵敏化学发光检测试剂(天根生物科技有限公司)。DMSO (Sigma公司, D2650), Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒(上海前尘生物科技有限公司, 40302ES60)。

主要仪器 超净工作台、细胞培养箱、超低温离心机、酶标仪(Thermo公司); 荧光倒置显微镜(Leica公司, DMi8);倒置显微镜(Olympus公司); 垂直电泳仪(Bio-Rad); 制冰机(雪花)、优普超纯水制造系统。

CCK-8检测细胞活力 取对数期生长的NCI N87和NCI N87/R细胞, 吹打制备单细胞悬液, 按照5×10³个细胞/孔接种于96孔培养板中。培养过夜, 每孔加入新鲜完全培养液100 μL。实验设空白组、对照组(DMSO)、赫赛汀组、姜黄素组、赫赛汀+姜黄素组, 每组设定3个复孔。细胞培养72 h后弃去培养液, 每孔加入10% CCK-8的无血清培养液100 μL, 避光孵育3 h, 酶标仪检测450 nm吸光度值(A), 计算细胞活力。细胞活力(%) = (A_药物组-A_空白组)/(A_对照组-A_空白组)×100%。

Western blot检测相关蛋白的表达 待细胞融合度达80%时, 收割细胞, 细胞沉淀用PBS洗涤2次, 加入4倍体积细胞沉淀的RIPA裂解液和1%蛋白酶抑制剂, 振荡混匀, 冰上裂解5 min, 12 000 ×g离心15 min (4 ℃), 取上清, Bradford法测蛋白浓度。取等量蛋白(20~30 μg), 每个样品加入上样缓冲液10 μL, 95 ℃煮5 min, 上样, 聚丙烯酰胺凝胶电泳, 湿法转膜, 5%脱脂牛奶室温封闭1 h, 加入相应抗体(IκBα、NF-κBp65、NF-κB、HER-2、caspase-3、Bax、Bcl-2、β-actin, 按照商家推荐倍数稀释), 4 ℃孵育过夜, TBS-T漂洗5次, 每次5 min, 加入相应二抗(稀释倍数1：3 000~1：5 000), 室温孵育0.5 h, TBS-T漂洗5次, 每次5 min, 加入化学发光检测试剂, 暗室曝光, 冲洗胶片, 扫描图像, Image J进行灰度值分析。

免疫荧光染色 单细胞悬液分别种植于12孔板中, 含细胞数为1×10⁴个/孔。待细胞融合至30%~40%时, PBS浸洗细胞3次, 每次3 min, 10%甲醛固定细胞20 min, PBS浸洗3次, 每次3 min, 0.5% Triton X-100透化20 min, PBS清洗3次, 每次3 min。用无菌棉球吸干PBS, 加入5% BSA, 室温封闭1 h, 加入抗体NF-κBp65 (稀释倍数1：100), 4 ℃孵育过夜, PBS-T浸洗细胞3次, 每次3 min, 加入Alexa Fluor^® 488二抗(稀释倍数1：500), 37 ℃避光孵育1 h, PBS-T漂洗细胞3次, 每次3 min, 加入DAPI (1 μg·mL^-1), 避光孵育2 min, PBS-T清洗4次, 每次3 min, 加入PBS, 荧光显微镜观察图像并拍照。

平板集落形成实验 对数期生长的NCI N87和NCI N87/R细胞分别接种于6孔板中, 按实验方法分为对照组和药物组(赫赛汀组、姜黄素组、赫赛汀+姜黄素组), 用不同浓度药物分别处理细胞48 h后, 终止培养。重悬细胞后计数, 取对照组和药物处理组细胞, 按照5×10³个/孔接种于12孔板中, 每组设定3个重复, 加入新鲜完全培养液, 培养细胞14天。胰酶消化, 终止培养, 弃去上清, PBS清洗细胞2次。10%甲醛常温固定20 min, 结晶紫染色10 min, PBS漂洗染液, 自然风干, 倒置显微镜拍照并计数分析。

细胞凋亡检测 取对数期生长的NCI N87和NCI N87/R细胞, 分别接种于96孔板中, 每孔含细胞数约为5×10³个, 细胞培养24 h。按上述方法分组, 每组设定3个复孔, 加入相应药物(对照组加入DMSO), 继续培养24 h, 收集细胞, PBS清洗2次, 重悬制成单细胞悬液, 加入50 mg·L^-1 Annexin V-FITC和PI试剂各5 μL, 常规培养1 h, 流式细胞术检测每组中细胞凋亡。

Caspase相关酶活性检测 按照上述方法分组, 每组设定3个复孔。依据试剂盒使用说明检测caspase-3、8和9活性, 酶标仪检测每孔405 nm处的吸光度值, 计算酶活性变化。

统计学方法 数据分析采用SPSS21.0软件进行分析, 数据用mean ± SEM表示, 多组均数比较采用单因素方差分析, 组间两两比较用LSD法, 以P < 0.05为差异有统计学意义, P < 0.01为差异有显著统计学意义, P < 0.001为差异极具显著统计学意义。

结果

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1 NCI N87/R细胞NF-κB信号通路呈激活状态

为了进一步证实NCI N87细胞赫赛汀耐药与NF- κB通路激活有关, 采用Western blot检测了NF-κB通路标志性蛋白IκBα及核转录因子NF-κBp65在细胞质和细胞核中的表达。结果显示, IκBα在NCI N87/R细胞质下调(图 1A), NF-κBp65在核内上调(图 1B), 胞浆中NF-κBp65的表达差异无统计学意义(图 1C)。免疫荧光实验表明, 敏感细胞NF-κBp65偶联的绿色荧光弥散分布在胞浆, 而耐药细胞中荧光向核内集聚(图 1D), 提示耐药细胞NF-κBp65发生了核易位。进一步采用NF-κB通路特异性抑制剂EVP4593共培养敏感和耐药细胞各72 h, 发现EVP4593能够剂量依赖性抑制细胞增殖, 且对耐药细胞表现为偏好性抑制作用(图 1E), 表明抑制NF-κB通路能够降低NCI N87/R细胞活力, 提示NF-κB通路激活与赫赛汀耐药有关。

2 姜黄素逆转NCI N87/R细胞赫赛汀耐药

采用CCK-8检测了不同浓度的姜黄素(0、10、20、40、60和80 μmol·L^-1)和赫赛汀(0、2.5、5、10、20和40 μg·mL^-1)单独或联合使用对细胞增殖的影响。结果显示, 赫赛汀、姜黄素单独或联合处理细胞72 h后, 细胞活力呈现不同程度降低, 且具有剂量依赖性(耐药细胞赫赛汀组除外)。当姜黄素浓度达80 μmol·L^-1时, NCI N87细胞活力为63.64%, 与高剂量赫赛汀组(40 μg·mL^-1)相比差异无统计学意义(P = 0.13), 与姜黄素联合赫赛汀组相比, 差异具有统计学意义(P = 0.01) (图 2A); 对于NCI N87/R细胞, 姜黄素浓度达80 μmol·L^-1时, 细胞活力为48.86%, 与高剂量赫赛汀组(40 μg·mL^-1)相比, 差异极具统计学意义(P = 0.003), 与姜黄素联合赫赛汀组相比, 差异具有统计学意义(P = 0.02) (图 2B)。表明姜黄素对NCI N87/R细胞的增殖具有偏好性抑制作用, 联合使用姜黄素能够提高NCI N87/R细胞对赫赛汀的敏感性。

3 姜黄素偏好性抑制了NCI N87/R细胞集落形成

细胞集落形成实验直观反映细胞群体依赖性和增殖潜能, 肿瘤细胞的集落形成直接反映了其增殖能力和恶性程度。结果显示, 实验剂量下, 姜黄素单独使用对NCI N87和NCI N87/R细胞的集落形成具有抑制作用, 且呈剂量依赖性, 但对耐药细胞的抑制效果更加显著(P < 0.01, P < 0.001), 姜黄素联合赫赛汀进一步增强其抑制效果, 提示姜黄素能够偏好性抑制NCI N87/R细胞的增殖(图 3)。

4 姜黄素抑制了耐药细胞NF-κB信号通路

采用不同浓度的姜黄素(0、20、40、80 μmol·L^-1)处理NCI N87/R细胞24 h, 分别提取胞浆及核蛋白, 利用Western blot检测姜黄素处理后IκBα、NF-κB和NF-κBp65表达的变化。结果表明, 随姜黄素浓度增加, 胞浆中IκBα的表达呈现浓度依赖性上调, 当姜黄素达40 μmol·L^-1时, 与对照组相比差异具有统计学意义(P < 0.05), 达80 μmol·L^-1时, 差异具有显著统计学意义(P < 0.01) (图 4A)。核内NF-κB和NF-κBp65表达随姜黄素浓度增加呈剂量依耐性下调, 与对照组相比, 差异具有统计学或显著统计学意义(P < 0.05, P < 0.01) (图 4B)。表明姜黄素能够剂量依耐性抑制NCI N87/R细胞活化的NF-κB信号通路。

5 姜黄素下调HER-2的表达

为了进一步明确姜黄素是否抑制HER-2的表达, 基于Western blot检测了不同浓度的姜黄素(0、40、80 μmol·L^-1)分别作用于NCI N87和NCI N87/R细胞24 h后HER-2的表达。结果表明, 不论NCI N87还是NCI N87/R细胞, 姜黄素均能够下调HER-2的表达, 然而在实验条件下, HER-2的变化与姜黄素浓度并没有明显的剂量依赖关系(图 5)。

6 姜黄素抑制NCI N87/R细胞NF-κB通路, 上调了caspase-3、Bax和下调了Bcl-2

采用流式细胞术检测了姜黄素、姜黄素联合EVP4593、赫赛汀、姜黄素联合赫赛汀作用细胞24 h后其凋亡率的变化。结果显示, 与对照组相比, 40 μmol·L^-1姜黄素使NCI N87/R的凋亡率增加了3.6倍(P < 0.01), 而姜黄素联合EVP4593 (90 nmol·L^-1)较姜黄素组降低了47.7% (P < 0.05), 姜黄素联合赫赛汀较姜黄素组增加了60% (P < 0.05), 较赫赛汀组增加了2.8倍(P < 0.01) (图 6A)。对于NCI N87细胞, 与对照组相比, 40 μmol·L^-1姜黄素使其凋亡率增加了40% (P = 0.1, 图 6B)。进一步采用Western blot检测了药物作用NCI N87/R细胞24 h后凋亡相关蛋白caspase-3、Bax及Bcl-2的表达变化, 与对照组相比, cleaved caspase-3 (p17亚基)及Bax在姜黄素组、姜黄素+赫赛汀组上调, 而Bcl-2下调(图 6C、D)。与姜黄素组相比, EVP4593联合姜黄素组中cleaved caspase-3 (p17亚基)、Bax和Bcl-2的表达发生不同程度转归(图 6C、E), 提示姜黄素诱导NCI N87/R细胞凋亡与抑制NF-κB通路、激活caspase-3、上调Bax和下调Bcl-2有关。

7 姜黄素增加NCI N87/R细胞caspase-3、8和9的活性

为了明确姜黄素对NCI N87/R细胞caspase凋亡相关酶活性的影响, 采用凋亡试剂盒检测了药物单独或联合作用细胞24 h后caspase-3、8和9活性的改变。结果表明, 与对照组相比, 40 μmol·L^-1姜黄素使NCI N87/R细胞caspase-3、8和9的酶活性分别增加了2.71、1.19和0.95倍。与姜黄素组相比, 姜黄素联合EVP4593 (90 nmol·L^-1)使酶活性分别降低了54.6% (caspase-3)、44.1% (caspase-8)和40.2% (caspase-9);姜黄素联合赫赛汀组较姜黄素组分别增加了3.10 (caspase-3)、1.42 (caspase-8)和0.87倍(caspase-9) (图 7)。表明姜黄素诱导NCI N87/R细胞凋亡与抑制NF-κB通路和激活caspase途径有关。

讨论

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姜黄素可通过多种途径抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤耐药^[11-14]。然而, 姜黄素可否逆转胃癌NCI N87细胞赫赛汀耐药, 尚不明确。本实验证实, NF-κB通路激活是胃癌NCI N87细胞赫赛汀获得性耐药的重要机制, 姜黄素能够抑制NCI N87/R细胞的增殖, 并诱导其凋亡, 其机制可能与抑制NF-κB通路、激活caspase途径、上调Bax、下调Bcl-2、增加Bax/Bcl-2比例, 进而诱导细胞凋亡有关, 提示抑制NF-κB通路, 激活caspase途径, 诱导细胞凋亡可能是姜黄素逆转NCI N87/R细胞赫赛汀耐药的重要机制。

NF-κB通路在维持肿瘤细胞增殖、分化及凋亡中发挥重要调节作用^[19]。通常情况下, NF-κB (p50/p65)与抑制性蛋白IκB结合成三聚体, 以“静息状态”存在于胞浆, 当细胞受到某种刺激后(如IL-1、TNF-α、药物等), 受体迅速寡聚化, 招募形成蛋白复合体I, 从而激活IκB激酶(IKK)复合物, 导致IκBα磷酸化, 经泛素化在26S蛋白水解酶作用下降解, 使游离的NF-κB (p50/p65)释放入核, 与基因组κB位点特异性结合, 参与细胞功能调节(图 8)。作为炎症反应的关键信号因子, NF-κB通路在肿瘤炎症发展阶段发挥了重要作用, 既可通过诱导炎性因子(TNF-α、IL-1、IL-6)、趋化因子、黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)的表达放大炎性反应, 又可以促进肿瘤增殖、抑制肿瘤凋亡、增强肿瘤转移及诱导肿瘤耐药^[20-23]。NF-κB信号异常活化可诱导抗凋亡基因的表达, 导致肿瘤细胞抗凋亡能力增强。因此, 抑制其信号能够启动肿瘤细胞的凋亡机制^[24]。

在乳腺癌研究中发现, 姜黄素通过抑制HER-2的磷酸化, 导致HER-2与其分子伴侣GRP94解离, 导致HER-2消耗增加, 引起下游AKT去磷酸化, 造成MAPK/AKT及PI3K/AKT通路被抑制。AKT去磷酸化还可以抑制IKK激酶的活性, 从而间接降低NF-κB活性, 促使细胞凋亡^{[25, 26]}。本研究结果显示, 姜黄素对敏感和耐药细胞HER-2的表达都能够降低, 但没有明显的剂量依赖关系, 这种作用是否与抑制NF-κB通路有关, 尚需进一步证实。

众所周知, caspase家族成员在细胞凋亡过程中发挥了重要调控作用, 是细胞凋亡的直接参与者和执行者。caspase-3作为caspase级联反应下游的主要效应分子, 其激活对诱导细胞凋亡起关键作用。经典的细胞凋亡包括胞外途径和线粒体途径。在胞外途径, 死亡配体和相应的受体结合形成死亡信号, 继而与caspase-8结合, 形成死亡诱导复合物, 激活caspase-8, 引起caspase-8和caspase-3直接作用, 诱导细胞凋亡。在线粒体途径, 凋亡刺激因子与凋亡蛋白酶激活因子结合形成复合物, 然后在胞浆与caspase-9前体结合, 促使caspase-9活化, 激活caspase-3, 引起下游级联反应, 诱导细胞凋亡^[27]。Western blot及酶活性检测表明, 姜黄素既可以激活caspase-3, 导致cleaved caspase 3表达上调, 又可以增加caspase-3、8和9的活性, 提示姜黄素逆转赫赛汀耐药可能与caspase参与调控的胞外途径和线粒体途径有关, 进而诱导耐药细胞凋亡(图 8)。

作为Bcl-2家族重要成员, 抗凋亡基因Bcl-2与促凋亡基因Bax在维持细胞生存、调控细胞凋亡中发挥关键性作用。因此, 抑制Bcl-2和促进Bax表达成为诱导肿瘤细胞凋亡的有效途径^{[28, 29]}。在细胞凋亡阶段, Bax被激活移位至线粒体膜, 形成多聚体从而影响线粒体膜的完整性, 使线粒体通道开放, caspase活化因子释放增多, 启动线粒体依赖的凋亡信号, 增强caspase家族凋亡蛋白表达, 加速细胞凋亡进程^[30]。Bcl-2作为抗凋亡蛋白, 其表达下调能够诱导肿瘤细胞凋亡, 发挥协同促凋亡作用。结果表明, 姜黄素能够上调Bax、下调Bcl-2, 导致Bax/Bcl-2比率增加, 这可能是姜黄素诱导NCI N87/R细胞凋亡的另一个重要机制(图 8)。

综上所述, NF-κB通路激活是胃癌赫赛汀耐药的重要机制。姜黄素逆转NCI N87/R细胞赫赛汀耐药可能与抑制NF-κB信号、激活caspase途径、上调Bax和下调Bcl-2表达、诱导细胞凋亡有关。

基金

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博士科研项目(CBY17-QD05)
四川省教育厅项目(17ZB0170)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2018年第53卷第11期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2018-0651

接收时间：2018-07-16
首发时间：2026-01-15
出版时间：2018-11-12

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出版历史

收稿日期：2018-07-16
修回日期：2018-08-06

基金

博士科研项目(CBY17-QD05)

四川省教育厅项目(17ZB0170)

作者信息

1.川北医学院药学院, 四川南充 637100

2.川北医学院基础医学院基础医学创新平台, 四川南充 637100

3.重庆大学药学院, 重庆 401331

通讯作者:

* 常晋霞, Tel:86-817-3352013, E-mail:jinxiachang@163.com

参考文献

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2018-0651

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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