药学学报

近红外光介导的尺寸可逆转变超声造影剂的制备及其性质

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侯婉晴 ¹^,² , 郭晓萌 ¹ , 罗利华 ¹ , 范玉玲 ²^,^* , 游剑 ¹^,^*

药学学报 | 研究论文 2017,52(9): 1458-1465

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药学学报 | 研究论文 2017, 52(9): 1458-1465

近红外光介导的尺寸可逆转变超声造影剂的制备及其性质

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侯婉晴¹^,², 郭晓萌¹, 罗利华¹, 范玉玲²^,^*, 游剑¹^,^*

作者信息

1.浙江大学药学院, 浙江杭州 310058

2.哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心, 黑龙江哈尔滨 150028

通讯作者:

* 范玉玲, Tel:86-571-88981651, Fax:86-571-88208439, E-mail: youjiandoc@zju.edu.cn;

游剑, Tel:86-451-84844242, E-mail: 429776474@qq.com

The formulation and characterization of near infrared-mediated size reversible ultrasound contrast agent

Wan-qing HOU¹^,², Xiao-meng GUO¹, Li-hua LUO¹, Yu-ling FAN²^,^*, Jian YOU¹^,^*

Affiliations

1. College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China

2. Research Center of Life Science and Environmental Science, Harbin University of Commerce, Harbin 150028, China

出版时间: 2017-09-15 doi: 10.16438/j.0513-4870.2017-0161

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摘要

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制备一种纳米级的载药超声造影剂，该纳米粒可有效累积分布至肿瘤深层部位，且体外实验证明，在升高温度或近红外光辐照下可实现纳米粒尺寸的纳米-微米转变：评价其体外粒径变化规律、体外超声显像效果及体内分布情况。所制备的纳米粒呈球形，脂质膜中可见中空金纳米球（hollow gold nanoparticle，HAuNS）的负载，粒径为302 ±5 nm，分散性指数为0.195 ±0.018，分布较均匀。在近红外光辐照（1或2 W·cm^-2）下导致含有该纳米粒的溶液（以HAuNS计，0.2、0.04和0.02 g·L^-1）升温迅速，利用激光粒度仪的控温功能，发现升温至52℃左右时即可检测到一定量的微米级粒子产生；在体外超声显像实验中，纳米粒经近红外光辐照后超声诊断仪检测到大量上扬的微泡，可增强体外超声显像的效果；体内分布实验表明，该纳米粒可因肿瘤的高渗透及滞留效应（EPR效应）在肿瘤中大量累积。本研究制备了可在肿瘤内部大量累积的纳米-微米可逆转变的超声显像纳米粒，为实现肿瘤病灶部位的超声显像同时结合光热-化学治疗提供了一种可行的方案。

关键词

超声造影剂 / 体外超声成像 / 全氟己烷 / 中空金纳米球 / 光热转化 / 相转变

Abstract

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The drug-loaded ultrasound (US) contrast nanoparticles, which can effectively accumulate in the tumor to penetrate into its deep section, were prepared. After being heated or under the near infrared (NIR) light irradiation, the size of nanoparticles would transform from nanometer-scale to micrometer-scale in vitro, which can vastly enhance the effect of US imaging. We evaluated the size changes of the nanoparticles in vitro, investigating their effect in ultrasound imaging and distribution in vivo. Liposomes containing hydrophobic modified hollow gold nanospheres (HAuNS), doxorubicin (DOX) and perfluorohexane (PFH), which were referred to DOX and HAuNS loaded PFH liposome (DHPL), were prepared by thin film evaporation and ultrasonic technique. The morphology and size of DHPL were measured by transmission electron microscopy and particle size analyzer with dynamic light scattering (DLS) method. The agar gel pore model was used to investigate the enhanced effect of nanoparticles in vitro US imaging under the NIR light irradiation. The biodistribution of DHPL in 4T1 tumor-bearing mice after intravenous injection was measured by the in vivo imaging system. The DHPL were spherical at a particle size of 302 ±5 nm and polydispersity index of 0.195 ±0.018. The HAuNS loaded on phospholipid membrane was observed in transmission electron microscope (TEM) image. Under the NIR light irradiation (1 or 2 W·cm^-2), the temperature of the solution containing the DHPL (0.2, 0.04, 0.02 g·L^-1 in terms of HAuNS) rose rapidly. And a certain amount of micrometer-sized particles could be detected by the particle size analyzer when the temperature of the analyzer was raised to 52℃. The abundant microbubbles, which would enhance the effect of US imaging, were detected by ultrasonic diagnostic apparatus when the nanoparticles were irradiated by NIR light in the in vitro US imaging experiment. The in vivo distribution experiment showed that the DHPL could effectively accumulate in the tumor due to the enhanced permeability and retention effect (EPR effect) of the tumor. In this study, we successfully made a nanometer-micrometer reversible nanoparticles that can accumulate inside the tumor to provide a feasible scheme for US imaging in the tumor site and the combinational photothermal-chemotheraphy simultaneously.

Key words

ultrasound contrast agent / in vitro ultrasound imaging / perfluorohexane / hollow gold nanosphere / photo-thermal conversion / phase shift

引用本文

侯婉晴, 郭晓萌, 罗利华, 范玉玲, 游剑. 近红外光介导的尺寸可逆转变超声造影剂的制备及其性质. 药学学报, 2017 , 52 (9) : 1458 -1465 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2017-0161

Wan-qing HOU, Xiao-meng GUO, Li-hua LUO, Yu-ling FAN, Jian YOU. The formulation and characterization of near infrared-mediated size reversible ultrasound contrast agent[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2017 , 52 (9) : 1458 -1465 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2017-0161

正文

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超声作为一种成熟的无创检查技术, 已应用到临床多种疾病的诊断^[1-5], 为增强超声造影效果, 目前临床上常用超声微泡造影剂^[6,7], 如SonoVue^®。当超声造影时, 接收到的超声强度是入射强度和反射体的散射截面的函数, 而散射截面与超声频率的4次方和散射体半径的6次方成正比^[8]。因此, 临床上为获得较高的超声显像效果, 微泡造影剂的粒径一般控制在1~10 μm^[9]。这种微泡可随血流到达检测部位, 实现血池造影; 但这类造影剂由于尺寸较大, 无法穿过血管屏障, 无法到达病灶组织深层, 且很快会随血流被清除, 因此超声成像时间仅几分钟^[10,11]。这些缺陷限制了此类造影剂对血管外病变的探测能力, 更不适合于实现药物病灶部位(如肿瘤)的定向输送。为了解决上述问题, 近年纳米尺寸的液态氟碳造影剂成为研究的热门^[12-15]。并且由于纳米级造影剂尺寸较小, 可以利用实体瘤的高渗透及滞留效应(EPR效应), 使其累积到肿瘤部位^[16], 但其自身回声性能较弱, 无法获得满意的造影效果, 如何解决造影剂的组织渗透能力与回声信号之间的矛盾是目前研究的热点及难点。

基于此, 本研究制备出一种粒径可变的超声成像纳米粒:采用磷脂包裹沸点58℃的全氟己烷(perfluorohexane, PFH), 将近红外光(NIR)热转化材料中空金纳米球(hollow gold nanoparticle, HAuNS)及化疗药物多柔比星共同装载到纳米粒脂质膜层; 利用HAuNS的光热转化特性, 即经近红外光辐照后可以将光能高效转化成热能, 一方面实现肿瘤的光热消融治疗^[17]; 另一方面通过升高纳米粒的温度使包裹的PFH气化以得到粒径达微米级的微泡, 实现增强的超声成像效果。

材料与方法

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试剂柠檬酸钠(sodium citrate, Acros Organics, USA); 硼氢化钠(sodium borohydride, NaBH₄)、氯化钴(Ⅱ)六水合物(cobalt (Ⅱ) chloride hexahydrate) (Sigma Aldrich Co., USA); 高纯氩气(argon, Ar, 浙江今工特种气体有限公司); 3-巯基丙酸十八烷酯(octadecyl 3-mercaptopionate, OMP, Tokyo Chemical Industry Co., Japan); 盐酸多柔比星(doxorubicin hydrochloride, DOX·HCl, 浙江海正药业有限公司); 硬脂酸(stearic acid, SA, 上海阿拉丁生化科技股份有限公司); 氯金酸(chloroauric acid, HAuCl₄)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC) (Thermo Fisher Scientific, USA); 大豆卵磷脂(S100)、DSPE-PEG2000 (德国Lipoid公司); 葡聚糖凝胶G50 (Sephadex G50, 北京天恩泽生物技术公司); 1, 1'-Dioctadecyl-3, 3, 3', 3'-tetramethylindotricarbocyanine iodide (DiR, Carlsbad, USA); 细胞培养基RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institute 1640)、DMEM高糖细胞培养基(Dulbecco's modified eagle high glucose medium)、胰蛋白酶(trypsin) (Gibco BRL, USA); 胎牛血清、新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司); 琼脂粉(国药集团化学试剂有限公司); 其余试剂均为分析纯。

仪器冷冻高速离心机(ST16R, ThermoFisher scientific CO., Germany); 超声波细胞粉碎仪(92-IIDN, 宁波新芝生物科技股份有限公司); Milli-Q超纯水仪(Milli-Q, Millipore Co., USA); 激光粒度仪(ZS90, Malvern Co., UK); 透射电子显微镜(JEOLJEM-1230, Japan); 激光治疗仪(Diomed 15 plus 01810, No: 1592651, 英国迪马公司); 共聚焦显微镜(Nikon A1 Ti, Nikon Co., Japan), 超声诊断仪(IU22型, 荷兰飞利浦公司); 小动物活体成像仪(Maestro EX, CRI Inc., USA)。

细胞及实验动物 选择人源乳腺癌细胞MCF-7和鼠源乳腺癌细胞4T1 (上海中国科学院细胞库), 分别使用含10%新生牛血清的RPMI 1640细胞培养基和10%胎牛血清的DMEM高糖细胞培养基(青霉素、链霉素各100 u·mL^-1), 置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养, 常规胰酶/EDTA消化传代。BALB/c雌性小鼠(20 ± 2 g, 上海斯莱克公司, SPF级, 合格证号: SCXK (沪) 2012-0002)。

中空金纳米球的合成 在26℃水浴环境及氩气的保护下, 向1 L去离子水中加入1 mol·L^-1柠檬酸钠2.8 mL作为稳定剂, 再依次加入硼氢化钠(NaBH₃) 0.168 g及0.1 mol·L^-1氯化钴溶液(CoCl₂) 1 mL, 快速搅拌下, 硼氢化钠将Co²⁺还原成钴原子, 30 min后形成较稳定均匀的钴纳米粒模板; 在氩气保护及搅拌的条件下, 以得到的钴纳米粒为模板, 加入氯金酸(HAuCl₄) 200~300 μL, 钴纳米粒表面发生氧化还原反应, 30 min后得到表面为金壳、内部为钴粒子的纳米粒。此时, 撤去氩气保护装置, 利用空气将上述得到的纳米粒缓慢氧化, 内部的Co被逐渐氧化为Co²⁺, 最终得到内部中空的金纳米球。

中空金纳米球的表面疏水性修饰 上述样品(5 mg)经高速离心的方式除去反应介质水, 沉淀即得HAuNS。将其均匀分散到少量的N, N-二甲基甲酰胺(N, N-dimethylformamide, DMF)中, 备用, 快速称取OMP 50 mg溶于10 mL DMF中, 氩气保护下加入HAuNS, 密闭条件下, 温和搅拌反应过夜。反应结束后, 高速离心, 弃上清, 除去DMF及未反应的OMP, 得到的沉淀即为OMP修饰的HAuNS (OMP modified HAuNS, OMP-HAuNS), 可均匀分散到氯仿中。

硬脂酸结合的多柔比星的制备 向10 mL二甲亚砜(dimethylsulfoxide, DMSO)中加入HCl (pH 2) 500 μL, 得到pH约为5的混合液。称取SA 5.4 mg和EDC 36.4 mg分别溶于2 mL酸化后DMSO中, 60 ℃水浴中将EDC溶液加入到SA溶液中, 磁力搅拌反应30 min后, 用三乙胺将反应液调节到pH 8左右, 加入DOX·HCl 10 mg, 60 ℃水浴下, 温和搅拌反应24 h。以上得到的反应液采用透析方法纯化, 于透析袋(3 400 Da)中, 用纯净水透析48 h, 除去DMSO及未反应的反应物, 得到的产物硬脂酸结合的多柔比星(stearic acid bound doxorubicin, SA-DOX), 并采用冻干法收集。

载药和中空金纳米球超声造影脂质体的制备 称取15 mg S100、5.58 mg DSPE-PEG2000和2 mg SA-DOX, 置于100 mL茄型瓶中, 加入约5 mL氯仿溶解, 待完全溶解后, 加入约0.4 mg OMP-HAuNS, 采用薄膜水化法得到载药脂质体, 然后利用探头超声的方法得到粒径均匀的载药脂质体; 冰浴下加入PFH 60 μL, 并在冰浴下利用探头超声将其包载到脂质体内, 得到载SA-DOX和HAuNS的超声造影脂质体(DOX and HAuNS loaded PFH liposome, DHPL)。按上述方法制备不含HAuNS仅负载SA-DOX的脂质体(DOX loaded PFH liposome, DPL)。得到的DHPL通过G50凝胶柱法进行纯化, 除去未包载的药物, 整个制备过程在避光下进行。应用激光粒度仪检测载药脂质体的粒径, 应用透射电子显微镜观察载体形态及OMP-HAuNS的包载情况。

为了进行后续体内分布的研究, 进一步制备了近红外荧光染料DiR标记的DHPL (DiR labeled DHPL, DiR@DHPL):取DiR、S100、DSPE-PEG 2000、SA-DOX和OMP-HAuNS参照上述操作进行制备。

光热转化 取稀释不同倍数的DHPL溶液各0.5 mL加入到4 mL玻璃比色皿中, 采用808 nm的近红外激光对其持续照射, 功率为2 W·cm^-2, 辐照时间5 min, 每隔20 s记录1次溶液温度, 绘制光热转换曲线。

体外粒径随温度变化的规律 DHPL用pH 7.4磷酸缓冲液(phosphate buffer, PBS)稀释50倍, 置于冰浴环境中, 分别于4 ℃、25℃、37℃、42℃、47℃、52 ℃、57℃、62℃、67℃、72 ℃、77℃、82℃、87℃和92℃下采用激光粒度仪测试DHPL的粒径, 同时检测DHPL在37℃、42℃、62℃和92℃时经历3次升温-降温循环过程中的粒径变化规律。

细胞摄取 将MCF-7细胞接种到直径约10 mm的小圆玻璃片上, 置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养24 h, 待细胞贴壁后, 分别加入1 μmol·L^-1 (以DOX计)的SA-DOX、DPL及DHPL, 每种样品设3个复孔。于加药后2 h时收集上述玻璃片, 核染后固定到载玻片上, 利用共聚焦显微镜观察摄取情况, 并用Image J软件进行半定量分析比较3种样品的摄取。

体外超声成像实验设计 将DPL和DHPL置于4 ℃冰箱中储存备用。选用1%琼脂糖凝胶作为成像基质, 制作孔径约1 cm的孔洞模型。取DPL与HAuNS (0.04 mg)物理混合200 μL, 放置于孔洞模型内, 以PBS作为阴性对照, 采用不同条件的NIR光对样品进行照射, 同时超声成像仪检测样品的超声信号变化。另取DHPL参照上述操作, 进行相同实验, 考察近红外光介导下的超声成像规律。整个实验在冰浴环境下完成, 并用Image J软件分析超声图像兴趣区的灰度值。

DHPL在4T1荷瘤小鼠体内的经时分布 待接种细胞采用胰酶/EDTA消化收集后, 1 000 r·min^-1离心5 min, 弃去上清液用适量无血清DMEM培养基稀释, 并将上述细胞悬液以细胞数2×10⁶个接种到BALB/c雌性小鼠腹部乳房脂肪垫, 获得4T1荷瘤小鼠模型。选取肿瘤大小适中的4T1荷瘤小鼠, 尾静脉注射DiR标记的DHPL溶液(500 μg·mL^-1, 以SA-DOX计) 0.2 mL, 于注射后6、24和48 h时, 用10%水合氯醛麻醉小鼠, 活体成像仪拍摄DiR在荷瘤小鼠体内的分布情况, 并于48 h处死小鼠, 剖出肿瘤及主要脏器, 称重并用活体成像仪拍摄脏器的荧光照片, 以5%注射剂量为对照, 采用荧光半定量的方式计算每克组织中DHPL的大致含量。

结果及讨论

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1 HAuNS的基本特性

HAuNS的光谱吸收如图 1A所示, 其在近红外光808 nm左右有最大吸收, 表明合成的HAuNS在近红外光区域具备良好的表面等离子共振光学特性, 图 1B是HAuNS的透射电镜图, 其平均粒径为35.8 ± 1.2 nm, 平均分散性指数(polydispersed index, PDI)为0.007 ± 0.004 (n = 3), 是一种粒径较小、分布均匀的优良的光热转换材料。如图 1C所示, 经OMP疏水修饰后的HAuNS在氯仿中有良好的分散性, 在乙醇中分散不良, 说明疏水性修饰效果较好。

2 DHPL基本特性及其形态

透射电镜图可以看到脂质体膜上有少量的HAuNS (图 2A)。所制备的DHPL粒径为302 ± 5 nm, PDI为0.195 ± 0.018, 放置1周粒径无明显变化(图 2B)。升温曲线可以看出, 升温速度及所能达到的最高温度与HAuNS浓度、近红外光照射功率及辐照时间有直接的关系(图 3)。以质量浓度为0.2 g·L^-1 HAuNS的DHPL为例, 经输出功率为2 W的近红外光辐照时升温速度极快, 160 s内制剂溶液温度从室温升至94 ℃以上, 且局部有沸腾情况发生, 但当NIR光功率降至1 W时, 制剂升温速度明显减慢, 照射320 s时制剂温度达到最高值(68.4 ℃); 同等功率下, 降低制剂中HAuNS浓度, 近红外光照射引起的升温速度减慢:近红外光1 W功率照射600 s后, 对于质量浓度为0.04和0.02 g·L^-1 HAuNS的DHPL溶液最终温度仅分别升高至48和43℃。而PBS样品光照后溶液升温最小。

3 粒径随温度升高变化的规律

根据DHPL在近红外光辐照下温度的升高情况, 利用激光粒度仪的升温功能, 模拟光热带来的升温效应, 检测温度升高时DHPL的粒径变化情况。图 4A为不同温度下DHPL的粒径, 随着温度升高粒径由小到大的变化。激光粒度仪温度在4 ℃、42℃、72 ℃和92℃时, DHPL的粒径分别为180.2、380、702.1及906 nm, 且在外界温度高于52 ℃时, 就开始有微米级的粒子出现; 如图 4B, 揭示了DHPL粒径纳米-微米可逆转变的可能性:待测制剂温度经历了3次反复升温和降温过程, DHPL粒径也随之出现了3次由小到大的变化, 但随着升温次数的增加, 粒子粒径增大的幅度稍有减弱, 且升高的温度越高, 粒径减弱的幅度越大, 推测是温度反复升降导致DHPL中PFH有少量损失所致; 图 4C显示的是图 4B中升温为62℃时, 经历升温-降温过程时DHPL粒径的具体分布情况, 在反复的升温-降温过程中, DHPL的粒径也会反复地由小到大再变小。以上说明, 所制备的超声显像纳米粒的粒径有温度依赖性, 且随着温度的反复升降, 而发生纳米-微米可逆的转变。

4 载药脂质体的细胞摄取

SA-DOX、DPL和DHPL以1 μmol·L^-1 (按DOX计)浓度与MCF-7细胞共同孵育2 h后, 细胞的共聚焦显微镜照片如图 5A, 红色荧光代表DOX, 蓝色荧光代表细胞核, 孵育2 h时, 3个样品组均可见较强的红色荧光, 细胞对3种样品的摄取均较快。荧光半定量分析见图 5B: SA-DOX、DPL和DHPL组的荧光强度分别为15.2 ± 1.0、16.86 ± 0.26和11.4 ± 0.6 (n = 3), 且SA-DOX组与DPL组的荧光强度比较没有明显差异(P > 0.05), 但DHPL组与SA-DOX组和DPL组的荧光强度比较均有明显差异(P < 0.05), 可能是HAuNS对DOX荧光淬灭所致^[18]。

5 琼脂糖凝胶模型的超声显像

自制琼脂糖凝胶孔洞模型注入制剂200 μL后, 体外超声显像的图像如图 6所示, 不论是物理混合(DPL+HAuNS)组还是DHPL组, 经NIR辐照后超声信号均明显增加, 其中DHPL组在冰浴下冷却后超声信号又重新降低到辐照前的水平, 说明所制备的DHPL可以在NIR辐照下, 粒径增大, 导致超声信号的增强; 关闭照射后, 粒径减小, 引起超声信号的下降。NIR辐照后, DPL和DHPL会逐渐膨胀, 当包载的PFH完全气化时会产生上扬的微泡。因此, 选定NIR辐照后微泡产生的部位作为兴趣区(region of interest, ROI), 利用Image J软件分析ROI区域的灰度值, 比较辐照NIR前后的灰度值变化, 灰度值越高说明超声信号越强, 生成的微泡越多。图 6中每组图像右侧的折线图对应相应图像中ROI区域的灰度值, 4组实验组辐照过程中, 灰度值变化的大致趋势基本一致。值得注意的是, DHPL组ROI区域灰度值增加的幅度比DPL组稍大; 当停止辐照后, 超声图像又恢复到辐照前的状态。以上进一步说明, DHPL可以在NIR辐照时通过HAuNS的光热转化, 实现粒径由小至大的转变, 从而增加超声显像效果, 而停止辐照后, 纳米粒又会逐渐恢复到辐照前的纳米状态。

6 DHPL在4T1皮下荷瘤小鼠模型中的分布情况

以尾静脉注射的方式, 给予4T1皮下荷瘤小鼠DIR标记的DHPL, 考察DHPL在荷瘤BALB/c小鼠体内的分布情况。如图 7A所示, 给药6 h后, 在肿瘤部位可以明显检测到DHPL的荧光信号, 但制剂在肝脏累积最多, 随着时间的推移, 给药24和48 h后, 制剂在肝脏中的累积有所减少, 在肿瘤部位的累积明显增加; 在48 h时, 处死并解剖小鼠, 利用活体荧光成像仪对心、肝、脾、肺、肾及肿瘤进行荧光半定量分析, 计算各组织器官中制剂的累积量(图 7B), 从荧光半定量的结果可以看出制剂在肝、脾、肺中分布较多, 可能是粒子粒径稍大所致, 在肿瘤中同样存在大量DiR的荧光信号, 说明所制备的超声显像纳米粒在体内可以借助肿瘤的EPR效应, 在肿瘤部位达到满意的分布量。

结论

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本研究制备了一种粒径可变的超声显像纳米粒, 这种纳米粒在温度较低时包裹的PFH会保持液态, 同时显像剂保持纳米状态, 升温时PFH会慢慢气化, 粒子也会随之膨胀, 52 ℃左右时检测到一定量的微米级粒子。在脂质膜表面负载高光热转化效率的HAuNS, 经NIR辐照后可以高效地将光能转化成热能, 使纳米粒膨胀。体外粒径转变实验及超声显像实验证明了本研究的可行性。体内分布实验说明纳米粒可以在肿瘤部位达到一定的累积量, 为后续体内研究奠定了基础。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

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[1]

Fu WX, Wang Q, Zhang YS, et al. Application of ultrasound technology in the diagnosis and treatment of digestive tract diseases[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2015, 19:602-606.

[2]

Sorensen MD, Harper JD, Hsi RS, et al. B-mode ultrasound versus color doppler twinkling artifact in detecting kidney stones[J]. J Endourol, 2013, 27:149-153.

[3]

Selbekk T, Jakola AS, Solheim O, et al. Ultrasound imaging in neurosurgery:approaches to minimize surgically induced image artefacts for improved resection control[J]. Acta Neurochir, 2013, 155:973-980.

[4]

Dimcevski G, Erchinger FG, Havre R, et al. Ultrasonography in diagnosing chronic pancreatitis:new aspects[J]. World J Gastroentero, 2013, 19:7247-7257.

[5]

Fan J, Tang J, Fang JB, et al. Ultrasound imaging in the diagnosis of benign and suspicious adrenal lesions[J]. Med Sci Monit, 2014, 20:2132-2141.

[6]

Gramiak R, Shah PM. Echocardiography of the aortic root[J]. Invest Radiol, 1968, 3:356-366.

[7]

Blomley MJ, Cooke JC, Unger EC, et al. Science, medicine, and the future:microbubble contrast agents:a new era in ultrasound[J]. Br Med J, 2001, 322:1222-1225.

[8]

Sirsi S, Feshitan J, Kwan J, et al. Effect of microbubble size on fundamental mode high frequency ultrasound imaging in mice[J]. Ultrasound Med Biol, 2010, 36:935-948.

[9]

Tu J, Swalwell JE, Giraud D, et al. Microbubble sizing and shell characterization using flow cytometry[J]. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control, 2011, 58:955-963.

[10]

Martin KH, Dayton PA. Current status and prospects for microbubbles in ultrasound theranostics[J]. Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol, 2013, 5:329-345.

[11]

Qin S, Caskey CF, Ferrara KW. Ultrasound contrast microbubbles in imaging and therapy:physical principles and engineering[J]. Phys Med Biol, 2009, 54:R27-R57.

[12]

Luo B, Liang H, Zhang S, et al. Novel lactoferrin-conjugated amphiphilic poly (aminoethyl ethylene phosphate)/poly(L-lactide) copolymer nanobubbles for tumor-targeting ultrasonic imaging[J]. Int J Nanomedicine, 2015, 10:5805-5817.

[13]

Kiessling F, Fokong S, Bzyl J, et al. Recent advances in molecular, multimodal and theranostic ultrasound imaging[J]. Adv Drug Deliv Rev, 2014, 72:15-27.

[14]

Foroutan F, Jokerst JV, Gambhir SS, et al. Sol-gel synthesis and electrospraying of biodegradable (P₂O₅)₅₅-(CaO)₃₀-(Na₂O)₁₅ glass nanospheres as a transient contrast agent for ultrasound stem cell imaging[J]. ACS nano, 2015, 9:1868-1877.

[15]

Yin T, Wang P, Zheng R, et al. Nanobubbles for enhanced ultrasound imaging of tumors[J]. Int J Nanomedicine, 2012, 7:895-904.

[16]

Gao HL, Jiang XG. The development of novel tumor targeting delivery strategy[J]. Acta Pharm Sin (药学学报), 2016, 51:272-280.

[17]

O'Neal DP, Hirsch LR, Halas NJ, et al. Photo-thermal tumor ablation in mice using near infrared-absorbing nanoparticles[J]. Cancer Lett, 2004, 209:171-176.

[18]

Jahan S, Mansoor F, Kanwal S. Polymers effects on synthesis of AuNPs, and Au/Ag nanoalloys:indirectly generated AuNPs and versatile sensing applications including anti-leukemic agent[J]. Biosens Bioelectron, 2014, 53:51-57.

2017年第52卷第9期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2017-0161

接收时间：2017-02-22
首发时间：2026-01-14
出版时间：2017-09-15

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收稿日期：2017-02-22
修回日期：2017-03-21

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1.浙江大学药学院, 浙江杭州 310058

2.哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心, 黑龙江哈尔滨 150028

通讯作者:

* 范玉玲, Tel:86-571-88981651, Fax:86-571-88208439, E-mail: youjiandoc@zju.edu.cn;

游剑, Tel:86-451-84844242, E-mail: 429776474@qq.com

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2017-0161

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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