药学学报

No.	δ_H	δ_C	No.	δ_H	δ_C
1	-	111.2	1′	-	140.6
2	-	159.6	2′/6′	7.22 (m, 2H)	128.3
3	-	109.0	3′/5′	7.23 (m, 2H)	128.1
4	-	156.8	4′	7.12 (m, 1H)	125.6
5	-	110.6	1″	4.56 (d, J = 7.8 Hz, 1H)	105.1
6	-	162.4	2″	3.30 (m, 1H)	74.0
7	3.89 (s, 2H)	27.5	3″	3.22 (m, 1H)	76.3
8	10.14 (s, 1H)	195.1	4″	3.15 (m, 1H)	69.7
9	2.14 (s, 3H)	9.6	5″	3.08 (m, 1H)	76.9
2-OH	12.52 (s, 1H)	-	6″	3.40 (m, 1H) 3.58 (m, 1H)	60.9
6-OH	9.93 (s, 1H)	-	4″-OH	4.97 (d, J = 4.8 Hz, 1H)	-
2″-OH	5.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H)	-	6″-OH	4.34 (t, J = 4.8 Hz, 1H)	-
3″-OH	5.09 (d, J = 3.0 Hz, 1H)	-	-

No.	δ_H	δ_C	No.	δ_H	δ_C
1	-	111.2	1′	-	140.6
2	-	159.6	2′/6′	7.22 (m, 2H)	128.3
3	-	109.0	3′/5′	7.23 (m, 2H)	128.1
4	-	156.8	4′	7.12 (m, 1H)	125.6
5	-	110.6	1″	4.56 (d, J = 7.8 Hz, 1H)	105.1
6	-	162.4	2″	3.30 (m, 1H)	74.0
7	3.89 (s, 2H)	27.5	3″	3.22 (m, 1H)	76.3
8	10.14 (s, 1H)	195.1	4″	3.15 (m, 1H)	69.7
9	2.14 (s, 3H)	9.6	5″	3.08 (m, 1H)	76.9
2-OH	12.52 (s, 1H)	-	6″	3.40 (m, 1H) 3.58 (m, 1H)	60.9
6-OH	9.93 (s, 1H)	-	4″-OH	4.97 (d, J = 4.8 Hz, 1H)	-
2″-OH	5.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H)	-	6″-OH	4.34 (t, J = 4.8 Hz, 1H)	-
3″-OH	5.09 (d, J = 3.0 Hz, 1H)	-	-

番石榴果实化学成分研究

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于悦 , 孙兴妍 , 徐凯玲 , 李创军 , 王金华 , 张东明 ^*

药学学报 | 研究论文 2022,57(8): 2416-2422

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药学学报 | 研究论文 2022, 57(8): 2416-2422

番石榴果实化学成分研究

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于悦, 孙兴妍, 徐凯玲, 李创军, 王金华, 张东明^*

作者信息

北京协和医学院、中国医学科学院药物研究所, 北京 100050

通讯作者:

*张东明, Tel: 86-10-63165227, E-mail: zhangdm@imm.ac.cn

Study on the chemical constituents of the fruits of Psidium guajava

Yue YU, Xing-yan SUN, Kai-ling XU, Chuang-jun LI, Jin-hua WANG, Dong-ming ZHANG^*

Affiliations

Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China

出版时间: 2022-08-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2022-0285

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摘要

收起

番石榴果实95%乙醇提取物的二氯甲烷和乙酸乙酯萃取部位使用硅胶柱色谱、MCI柱色谱、中压液相色谱以及制备液相色谱进行系统的分离纯化, 从中分离得到1个新的番石榴苷(1), 通过MS、NMR、IR等谱学技术确定了其结构, 并命名为番石榴苷A (1)。同时分离得到3个已知的混源萜类化合物(2~4) 和9个已知的苷类化合物(5~13), 通过MS、NMR技术确定了其结构, 鉴定为guajadial (2)、4, 5-diepipsidial A (3)、psidial A (4)、白杨素8-C-β-D-葡萄糖苷(5)、2, 6-二羟基-3, 5-二甲基苯甲酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、槲皮素-3-O-木糖苷(8)、番石榴苷(9)、广寄生苷(10)、guavinoside E (11)、guavinoside B (12)、guajaphenone A (13)。通过CCK-8比色法测定了化合物2~4对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231) 和人神经胶质瘤细胞(U87) 的抑制活性, 发现化合物3对U87细胞具有抑制活性, IC₅₀值为8.379 μmol·L^-1。

关键词

番石榴 / 果实 / 化学成分 / 混源萜 / 抗肿瘤

Abstract

收起

Psidium guajava Linn. is an evergreen shrub or small tree of Psidium Linnaeus in the Myrtaceae family. One new glycoside (1) together with 3 known meroterpenoids (2-4) and 9 known glycosides (5-13) were isolated from the fruits of Psidium guajava Linn.. The structure of the new compound was elucidated by the spectroscopic data analysis of HR-ESIMS, 1D- and 2D-NMR, and it was named psiguaoside A (1). The known compounds were identified as guajadial (2), 4, 5-diepipsidial A (3), psidial A (4), chrysin-8-C-β-D-glucoside (5), 2, 6-dihydroxy-3, 5-dimethyl-4-O-β-D-glucopyranosyl-benzophenone (6), quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside (7), quercetin-3-O-xyloside (8), guaijaverin (9), avicularin (10), guavinoside E (11), guavinoside B (12), guajaphenone A (13). In the bioactivity assay, compound 3 exhibited significant inhibitory activitiy of U87 with IC₅₀ values of 8.379 μmol·L^-1.

Key words

Psidium guajava / fruit / chemical constituent / meroterpenoid / anti-tumor

引用本文

于悦, 孙兴妍, 徐凯玲, 李创军, 王金华, 张东明. 番石榴果实化学成分研究. 药学学报, 2022 , 57 (8) : 2416 -2422 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2022-0285

Yue YU, Xing-yan SUN, Kai-ling XU, Chuang-jun LI, Jin-hua WANG, Dong-ming ZHANG. Study on the chemical constituents of the fruits of Psidium guajava[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2022 , 57 (8) : 2416 -2422 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2022-0285

正文

收起

番石榴(Psidium guajava Linn.) 为桃金娘科番石榴属的常绿灌木或小乔木^[1], 是许多热带和亚热带国家重要的粮食作物和药用植物^[2]。番石榴因富含多种营养成分而被称为“超级水果”, 比如膳食纤维、维生素A、维生素C、叶酸以及微量元素钾、铜、锰等^[2]。除此之外, 也具有广泛的药物价值, 不同的部位有不同的功效。花蕾可缓解消化功能障碍^[3]; 叶及根的汤剂具有退热和解痉作用^[4]; 树皮能用于止血和治疗小儿腹泻^[5]; 果实可以作为营养滋补剂和止泻剂^[6]等。番石榴果实含有类倍半萜烯醇、混源萜、三萜、黄酮以及苷类等多种化学成分^[2]。多样的化学成分为其药理学研究提供了坚实的基础。目前的研究现状显示, 番石榴的叶、果实、种子、根等都有进行研究, 其中以叶的研究最为深入, 应用也最为广泛, 而果实研究则相对较少。本研究对番石榴果实的95%乙醇提取物的二氯甲烷和乙酸乙酯萃取部位进行了系统研究, 分离得到了3个已知的混源萜类化合物(2~4)、1个新的苷类化合物(1) 和9个已知的苷类化合物(5~13), 丰富了番石榴果实的化学成分, 具体结构见图 1。在生物活性研究中, 通过CCK-8比色法测定了化合物2~4的细胞毒活性, 化合物3对U87细胞具有抑制活性, IC₅₀值为8.379 μmol·L^-1。

结果与讨论

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1 结构鉴定

化合物1为棕色油状物。高分辨质谱给出分子离子峰为443.130 4 [M+Na]⁺ (计算值为C₂₁H₂₄O₉Na, 443.131 3), 推断其分子式为C₂₁H₂₄O₉, 计算得出不饱和度为10。根据¹H NMR (表 1)、¹³C NMR (表 1)、DEPT和HSQC谱图所提供的信息, 化合物1的结构中含有6个羟基[δ_H 12.52 (1H, s), δ_H 9.93 (1H, s), δ_H 5.61 (1H, d, J = 4.8 Hz), δ_H 5.09 (1H, d, J = 3.0 Hz), δ_H 4.97 (1H, d, J = 4.8 Hz), δ_H 4.34 (1H, t, J = 4.8 Hz)]; 1个醛基[δ_H 10.14 (1H, s), δ_C 195.1]; 1个六取代苯环[δ_C 162.4、159.6、156.8、111.2、110.6和109.0]; 1个单取代苯环[δ_H 7.23 (2H, m), δ_C 128.1×2; δ_H 7.22 (2H, m), δ_C 128.3×2; δ_H 7.12 (1H, m), δ_C 125.6; δ_C 140.6]; 1个甲基[δ_H 2.14 (3H, s), δ_C 9.6]; 2个亚甲基[δ_H 3.89 (2H, s), δ_C 27.5; δ_H 3.58 (1H, m), δ_H 3.40 (1H, m), δ_C 60.9]; 5个次甲基[δ_H 4.56 (1H, d, J = 7.8 Hz), δ_C 105.1; δ_H 3.30 (1H, m), δ_C 74.0; δ_H 3.22 (1H, m), δ_C 76.3; δ_H 3.15 (1H, m), δ_C 69.7; δ_H 3.08 (1H, m), δ_C 76.9]。通过上述信息可以得出, 化合物1中含有1个糖类单元。

通过综合解析¹H-¹H COSY谱(H-1″/H-2″/H-3″/H-4″/H-5″/H-6″, 2″-OH/H-2″, 3″-OH/H-3″, 4″-OH/H-4″, 6″-OH/H-6″, 图 2) 和HMBC谱(H-5″与C-1″相关, 图 2) 所提供的信息确定了化合物1中糖单元的结构。然后, 在HMBC谱中, 观察到H-7与C-1、C-2、C-6、C-1′、C-2′和C-6′位的相关信息, 表明单取代苯环与六取代苯环通过C-1-C-7-C-1′键相互连接构成一个二苯基甲烷。而2-OH与C-1、C-2和C-3相关, 6-OH与C-1、C-5和C-6相关, H-8与C-2相关, H-9与C-4、C-5和C-6相关以及H-1″与C-4位的相关信息则阐明了六取代苯环上各取代基的连接位置, 糖单元通过氧苷键与二苯基甲烷的C-4位相连。化合物1中糖的端基碳(C-1″) 的核磁数据为[δ_H 4.56 (1H, d, J = 7.8 Hz), δ_C 105.1], 据此, 推断化合物1中的糖单元为β-D-葡萄糖^[7]。化合物1与2, 6-dihydroxy-3-formaldehyde-5-methyl-4-O-(6″-O-galloyl-β-D-glucopyranosyl)-diphenylmethane^[8]相比, 两者差异在于化合物1的C-6″位羟基氢未被没食子酰基取代, 对两者所含糖单元的碳氢化学位移, 端基氢的耦合常数以及旋光值进行仔细对比, 最终确定化合物1中的糖单元为β-D-葡萄糖, 确定为新化合物, 并命名为番石榴苷A (psiguaoside A)。

2 抗肿瘤活性

采用CCK-8比色法测定了化合物2~4在10 μmol·L^-1浓度下对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231) 和人神经胶质瘤细胞(U87) 的抑制活性。化合物3对U87细胞具有较高的抑制率(55.5%), 复筛后计算IC₅₀值为8.379 μmol·L^-1。

实验部分

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Themo Q Exactive Focus组合型四级杆Orbitrap质谱仪; Bruker AVANCE-Ⅲ HD 600 MHz核磁共振波谱仪; 中科牛津WNMR-I 500 MHz核磁共振波谱仪; Bruker AVANCE-Ⅲ HD 400 MHz核磁共振波谱仪; JASCO J-815型圆二色光谱仪; Buchi Rotavapor R-300旋转蒸发仪; JASCO V-650型紫外光谱仪; Thermo Nicolet 5700型傅立叶变换红外光谱仪; Agilent 1100型高效液相色谱仪(HPLC) (DAD紫外吸收检测器); Buchi C-600中压液相相色谱仪(MPLC); Shimadzu LC-16P双波长制备液相色谱仪; 硅胶柱色谱填料(100~200目, 200~300目, 青岛海洋化工有限公司); MCI柱色谱填料(CHP120, 日本三菱化学公司); ODS半制备型色谱柱(日本YMC公司); Lux-cellulose-4半制备型色谱柱(美国Phenomenex公司); 色谱甲醇、乙腈及氘代试剂(百灵威科技有限公司); 分析纯试剂(北京化工); 实验用水(娃哈哈集团有限公司)。

新鲜番石榴果实于2019年7月购买自广西省玉林市, 经北京协和医学院 & 中国医学科学院药物研究所马林副研究员鉴定为番石榴果实, 干燥标本保存在中国医学科学院药物研究所标本室(ID-S-2976)。

1 提取分离

新鲜番石榴果实(60 kg) 自然晒干(28.3 kg), 使用95%乙醇回流提取(140 L, 2×2 h), 合并提取液并减压浓缩后获得11.3 kg浸膏。将浸膏混悬于水中并依次使用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取获得4部分粗提物。根据粗提物的薄层色谱和HPLC的分析结果, 将二氯甲烷萃取部位(35.1 g) 和乙酸乙酯萃取部位(130.2 g) 进行合并, 合并部位使用硅胶柱色谱经石油醚∶乙酸乙酯= 2∶1 (v/v)、乙酸乙酯和甲醇梯度洗脱获得石油醚∶乙酸乙酯= 2∶1部位(14.0 g)、乙酸乙酯部位(15.2 g)和甲醇部位(110.0 g)。石油醚∶乙酸乙酯= 2∶1部位使用硅胶柱色谱经石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯(5∶1∶0-1∶1∶0-0∶1∶0-0∶50∶1-0∶10∶1, v/v/v) 体系梯度洗脱获得29个流分(A1~A29), A5~A11合并后经MPLC (ODS-C₁₈, 80%~100%甲醇, 5 h, 100%甲醇, 2.5 h) 进一步分离获得24个流分(A5-11-1~A5-11-24)。A5-11-13经制备液相分离(ODS-C₁₈, 95%乙腈) 获得化合物2 (23 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 42 min) 和化合物3 (8 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 37 min); A5-11-14~A5-11-15合并后经制备液相分离(ODS-C₁₈, 97%乙腈) 并进一步纯化(Lux cellulose-4, 85%乙腈) 后获得化合物4 (2 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 96 min); 甲醇部位使用MCI柱色谱经95%乙醇-水体系(1∶4-2∶3-3∶2-4∶1-1∶0, v/v) 梯度洗脱获得5个流分(B1~B5), B2~B4合并后经MPLC (ODS-C₁₈, 30%、40%、45%、50%、55%、75%、100%甲醇, 每个梯度4 L) 进一步分离获得60个流分(B2-4-1~B2-4-60), B2-4-22~B2-4-23合并后经制备液相分离(ODS-C₁₈, 20%乙腈, 三氟乙酸) 获得化合物5 (2 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 46 min) 和化合物6 (5 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 77 min); B2-4-24~B2-4-26合并后经制备液相分离(ODS-C₁₈, 17%乙腈) 获得化合物7 (2 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 55 min) 和化合物8 (3 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 68 min); B2-4-27~B2-4-29合并后经制备液相分离(ODS-C₁₈, 21%乙腈, 三氟乙酸) 获得化合物9 (3 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 17 min), 化合物10 (3 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 19 min), 化合物11 (3 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 35 min), 化合物12 (8 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 63 min) 和化合物13 (52 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 48 min); B2-4-43~B2-4-46合并后经制备液相分离(ODS-C₁₈, 32%乙腈, 三氟乙酸) 获得化合物1 (0.5 mg, 4 mL·min^-1, t_R = 19 min)。

2 结构鉴定

化合物1为棕色油状物, HR-ESIMS [M+Na]⁺ m/z = 443.130 4 (计算值443.131 3, C₂₁H₂₄O₉Na); 旋光值为$ {\left[\alpha \right]}_{\mathrm{D}}^{20} $ -7.0 (c 0.071, CH₃OH); UV (CH₃OH) λ_max (log ε)204 (4.26), 226 (4.08), 290 (3.92) nm; IR υ_max 3 344, 2 927, 2 854, 1 682, 1 628, 1 095 cm^-1; ¹H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) 和¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) 数据见表 1。

化合物2为白色粉末, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 475.247 7 (计算值475.247 9, C₃₀H₃₅O₅), 分子式为C₃₀H₃₄O₅。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ_H: 1.89 (1H, m, H-1); 1.45 (1H, m, H-2a), 1.89 (1H, m, H-2b); 1.89 (1H, m, H-3a), 2.16 (1H, m, H-3b); 2.23 (1H, t, J = 7.4 Hz, H-5); 1.56 (2H, m, H-6); 1.67 (1H, m, H-7a), 1.89 (1H, m, H-7b); 2.33 (1H, q, J = 9.0 Hz, H-9); 1.56 (1H, m, H-10a), 1.97 (1H, m, H-10b); 1.01 (3H, s, H-12); 0.98 (3H, s, H-13); 1.26 (3H, s, H-14); 4.04 (1H, s, H-15a), 4.54 (1H, s, H-15b); 3.38 (1H, d, J = 10.3 Hz, H-1′); 7.18 (5H, m, H-9′/10′/11′/12′/13′); 10.09 (1H, s, H-14′); 10.06 (1H, s, H-15′); 13.43 (1H, s, 5-OH); 13.05 (1H, s, 7-OH); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 53.3 (C-1); 22.2 (C-2); 37.1 (C-3); 84.3 (C-4); 43.4 (C-5); 30.4 (C-6); 35.4 (C-7); 150.7 (C-8); 41.3 (C-9); 36.7 (C-10); 33.8 (C-11); 30.4 (C-12); 22.0 (C-13); 21.2 (C-14); 110.2 (C-15); 43.4 (C-1′); 105.5 (C-2′); 163.4 (C-3′); 104.2 (C-4′); 168.3 (C-5′); 104.3 (C-6′); 169.5 (C-7′); 143.7 (C-8′); 128.7 (C-9′/13′); 127.9 (C-10′/12′); 126.2 (C-11′); 192.1 (C-14′); 191.5 (C-15′)。以上数据与文献^[9]中报道的guajadial基本一致, 故鉴定化合物2为guajadial。

化合物3为白色粉末, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 475.247 5 (计算值475.247 9, C₃₀H₃₅O₅), 分子式为C₃₀H₃₄O₅。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ_H: 1.55 (1H, m, H-1); 1.55 (2H, m, H-2); 1.80 (1H, m, H-3a), 2.15 (1H, m, H-3b); 2.30 (1H, dt, J = 10.1, 4.9 Hz, H-5); 1.47 (1H, m, H-6a), 1.69 (1H, m, H-6b); 1.06 (1H, m, H-7a), 2.04 (1H, m, H-7b); 2.21 (1H, m, H-9); 1.55 (1H, m, H-10a), 1.64 (1H, dd, J = 10.6, 8.1 Hz, H-10b); 0.99 (3H, s, H-12); 0.99 (3H, s, H-13); 1.20 (3H, s, H-14); 4.59 (1H, s, H-15a), 4.60 (1H, s, H-15b); 3.42 (1H, d, J = 10.2 Hz, H-1′); 7.19 (3H, m, H-9′/13′/11′); 7.28 (2H, m, H-10′/12′); 10.08 (1H, s, H-14′); 10.08 (1H, s, H-15′); 13.47 (1H, s, 5′-OH); 13.08 (1H, s, 7′-OH); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 57.4 (C-1); 22.4 (C-2); 38.3 (C-3); 84.7 (C-4); 43.8 (C-5); 33.6 (C-6); 37.2 (C-7); 154.9 (C-8); 42.2 (C-9); 38.7 (C-10); 33.2 (C-11); 29.2 (C-12); 22.4 (C-13); 20.1 (C-14); 109.6 (C-15); 44.3 (C-1′); 105.0 (C-2′); 163.6 (C-3′); 104.2 (C-4′); 168.4 (C-5′); 104.2 (C-6′); 169.4 (C-7′); 144.1 (C-8′); 128.1 (C-9′/13′); 128.4 (C-10′/12′); 126.4 (C-11′); 192.2 (C-14′); 191.5 (C-15′)。以上数据与文献^[10]中报道的4, 5-diepipsidial A基本一致, 故鉴定化合物3为4, 5-diepipsidial A。

化合物4为白色粉末, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 475.247 9 (计算值475.247 9, C₃₀H₃₅O₅), 分子式为C₃₀H₃₄O₅。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ_H: 1.38 (1H, m, H-1); 0.87 (1H, m, H-2a), 1.60 (1H, m, H-2b); 1.53 (1H, m, H-3a), 2.11 (1H, dd, J = 13.8, 9.4 Hz, H-3b); 2.06 (1H, m, H-5); 1.60 (1H, m, H-6a), 1.79 (1H, t, J = 10.4 Hz, H-6b); 2.25 (1H, d, J = 13.7 Hz, H-7a), 2.58 (1H, td, J = 13.6, 3.3 Hz, H-7b); 2.43 (1H, q, J = 9.4 Hz, H-9); 1.60 (2H, m, H-10); 0.96 (3H, s, H-12); 0.98 (3H, s, H-13); 1.17 (3H, s, H-14); 5.01 (1H, s, H-15a), 5.03 (1H, s, H-15b); 4.18 (1H, d, J = 5.6 Hz, H-1′); 7.15 (2H, d, J = 7.1 Hz, H-9′/13′), 7.24 (3H, m, H-10′/12′/11′); 10.14 (1H, s, H-14′); 10.11 (1H, s, H-15′); 13.05 (1H, s, 5′-OH); 13.43 (1H, s, 7′-OH); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 59.3 (C-1); 23.9 (C-2); 47.9 (C-3); 88.1 (C-4); 39.7 (C-5); 36.1 (C-6); 35.5 (C-7); 150.8 (C-8); 42.2 (C-9); 24.4 (C-10); 34.7 (C-11); 29.7 (C-12); 21.7 (C-13); 22.2 (C-14); 111.2 (C-15); 35.0 (C-1′); 107.5 (C-2′); 164.1 (C-3′); 104.7 (C-4′); 167.5 (C-5′); 104.2 (C-6′); 168.5 (C-7′); 138.6 (C-8′); 129.9 (C-9′/13′); 128.0 (C-10′/12′); 127.0 (C-11′); 192.0 (C-14′); 191.6 (C-15′)。以上数据与文献^[11]中报道的psidial A基本一致, 故鉴定化合物4为psidial A。

化合物5为黄色针状物, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 417.117 6 (计算值417.118 0, C₂₁H₂₁O₉), 分子式为C₂₁H₂₀O₉。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ_H: 6.99 (1H, s, H-3); 6.32 (1H, s, H-6); 8.19 (2H, d, J = 7.8 Hz, H-2′/6′); 7.55 (2H, t, J = 8.2 Hz, H-3′/5′); 7.63 (1H, t, J = 6.8 Hz, H-4′); 4.69 (1H, m, H-1″); 3.84 (1H, m, H-2″); 3.25 (2H, m, H-3″/5″); 3.40 (1H, m, H-4″); 3.56 (1H, m, H-6″a), 3.77 (1H, m, H-6″b); 13.03 (1H, s, 5-OH); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 163.3 (C-2); 104.6 (C-3); 182.1 (C-4); 160.3 (C-5); 98.2 (C-6); 162.8 (C-7); 104.7 (C-8); 156.0 (C-9); 104.2 (C-10); 130.9 (C-1′); 126.8 (C-2′/6′); 128.9 (C-3′/5′); 131.9 (C-4′); 73.2 (C-1″); 70.7 (C-2″); 78.5 (C-3″); 70.4 (C-4″); 81.8 (C-5″); 61.2 (C-6″)。以上数据与文献^[12]中报道的chrysin-8-C-β-D-glucoside基本一致, 故鉴定化合物5为白杨素-8-C-β-D-葡萄糖苷。

化合物6为黄色粉末, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 421.149 1 (计算值421.149 3, C₂₁H₂₅O₉), 分子式为C₂₁H₂₄O₉。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ_H: 2.09 (6H, s, H-8/9); 7.69 (2H, d, J = 7.5 Hz, H-2′/6′); 7.48 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-3′/5′); 7.58 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-4′); 4.54 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-1″); 3.29 (1H, m, H-2″); 3.24 (1H, m, H-3″); 3.15 (1H, m, H-4″); 3.06 (1H, m, H-5″); 3.44 (1H, m, H-6″a), 3.63 (1H, m, H-6″b); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 113.0 (C-1); 151.9 (C-2); 110.9 (C-3); 156.0 (C-4); 110.9 (C-5); 151.9 (C-6); 196.8 (C-7); 9.9 (C-8); 9.9 (C-9); 138.8 (C-1′); 128.7 (C-2′/6′); 128.2 (C-3′/5′); 132.3 (C-4′); 104.1 (C-1″); 74.1 (C-2″); 76.3 (C-3″); 69.8 (C-4″); 76.7 (C-5″); 61.0 (C-6″)。以上数据与文献^[13]中报道的2, 6-dihydroxy-3, 5-dimethyl-4-O-β-D-glucopyranosyl-benzophenone基本一致, 故鉴定化合物6为2, 6-二羟基-3, 5-二甲基苯甲酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7为黄色粉末, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 465.102 8 (计算值465.102 8, C₂₁H₂₁O₁₂), 分子式为C₂₁H₂₀O₁₂。¹H NMR (500 MHz, DMSO- d₆) δ_H: 6.40 (1H, s, H-6); 6.20 (1H, s, H-8); 7.57 (1H, s, H-2′); 7.57 (1H, m, H-5′); 6.84 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6′); 5.46 (1H, d, J = 5.8 Hz, H-1″); 12.64 (1H, s, 5-OH); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 156.0 (C-2); 133.2 (C-3); 177.3 (C-4); 161.1 (C-5); 98.5 (C-6); 164.0 (C-7); 93.4 (C-8); 156.2 (C-9); 103.9 (C-10); 121.0 (C-1′); 115.1 (C-2′); 144.7 (C-3′); 148.3 (C-4′); 121.5 (C-5′); 116.1 (C-6′); 100.7 (C-1″); 74.0 (C-2″); 76.4 (C-3″); 69.8 (C-4″); 77.5 (C-5″); 60.9 (C-6″)。以上数据与文献^[14]中报道的槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷基本一致, 故鉴定化合物7为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8为黄色针状物, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 435.092 1 (计算值435.092 2, C₂₀H₁₉O₁₁), 分子式为C₂₀H₁₈O₁₁。¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 156.2 (C-2); 133.2 (C-3); 177.3 (C-4); 161.2 (C-5); 98.7 (C-6); 164.2 (C-7); 93.5 (C-8); 156.3 (C-9); 103.9 (C-10); 120.9 (C-1′); 115.3 (C-2′); 144.9 (C-3′); 148.6 (C-4′); 116.1(C-5′); 121.4 (C-6′); 101.7 (C-1″); 73.6 (C-2″); 76.0 (C-3″); 69.4 (C-4″); 66.0 (C-5″)。以上数据与文献^[15]中报道的quercetin 3-O-xyloside基本一致, 故鉴定化合物8为槲皮素-3-O-木糖苷。

化合物9为黄色针状物, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 435.092 3 (计算值435.092 2, C₂₀H₁₉O₁₁), 分子式为C₂₀H₁₈O₁₁。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ_H: 6.40 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-8); 6.20 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-6); 7.51 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2′); 6.84 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-5′); 7.66 (1H, dd, J = 2.0, 8.7 Hz, H-6′); 5.28 (1H, d, J = 5.1 Hz, H-1″); 12.65 (1H, s, 5-OH); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 156.2 (C-2); 133.6 (C-3); 177.4 (C-4); 161.1 (C-5); 98.5 (C-6); 164.0 (C-7); 93.4 (C-8); 156.2 (C-9); 103.8 (C-10); 120.8 (C-1′); 115.2 (C-2′); 144.9 (C-3′); 148.5 (C-4′); 115.6 (C-5′); 122.0 (C-6′); 101.3 (C-1″); 70.6 (C-2″); 71.7 (C-3″); 65.9 (C-4″); 64.1 (C-5″)。以上数据与文献^[16]中报道的番石榴苷基本一致, 鉴定化合物9为番石榴苷(guaijaverin)。

化合物10为黄褐色粉末, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 435.092 3 (计算值435.092 2, C₂₀H₁₉O₁₁), 分子式为C₂₀H₁₈O₁₁。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ_H: 6.21 (1H, s, H-6); 6.41 (1H, s, H-8); 7.48 (1H, s, H-2′); 6.85 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5′); 7.55 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-6′); 5.59 (1H, m, H-1″); 12.63 (1H, s, 5-OH); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 156.8 (C-2); 133.3 (C-3); 177.6 (C-4); 161.1 (C-5); 98.5 (C-6); 164.1 (C-7); 93.4 (C-8); 156.2 (C-9); 103.8 (C-10); 120.8 (C-1′); 115.4 (C-2′); 145.0 (C-3′); 148.3 (C-4′); 115.4 (C-5′); 121.6 (C-6′); 107.7 (C-1″); 82.0 (C-2″); 76.8 (C-3″); 85.7 (C-4″); 60.5 (C-5″)。以上数据与文献^[17]中报道的广寄生苷基本一致, 故鉴定化合物10为广寄生苷。

化合物11为黄色粉末, HR-ESIMS [M+Na]⁺ m/z = 443.131 0 (计算值443.131 3, C₂₁H₂₄O₉Na), 分子式为C₂₁H₂₄O₉。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ_H: 2.09 (3H, s, H-8); 2.04 (3H, s, H-9); 7.57 (2H, d, J = 7.4 Hz, H-2′/6′); 7.40 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-3′/5′); 7.51 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-4′); 4.18 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-1″); 3.32 (1H, m, H-2″); 3.00 (1H, m, H-3″); 2.85 (1H, m, H-4″); 3.50 (2H, m, H-6″); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 113.5 (C-1); 153.9 (C-2); 108.3 (C-3); 157.5 (C-4); 109.9 (C-5); 151.1 (C-6); 198.4 (C-7); 9.2 (C-8); 8.8 (C-9); 131.4 (C-1′); 127.5 (C-2′/6′); 128.9 (C-3′/5′); 140.5 (C-4′); 103.6 (C-1″); 73.3 (C-2″); 76.3 (C-3″); 69.8 (C-4″); 76.0 (C-5″); 61.3 (C-6″)。以上数据与文献^[18]中报道的guavinoside E基本一致, 故鉴定化合物11为guavinoside E。

化合物12为褐色粉末, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 573.160 6 (计算值573.160 3, C₂₈H₂₉O₁₃), 分子式为C₂₈H₂₈O₁₃。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ_H: 2.04 (6H, s, H-8/9); 7.66 (2H, d, J = 7.5 Hz, H-2′/6′); 7.46 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-3′/5′); 7.57 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-4′); 4.63 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-1″); 3.36 (1H, m, H-2″); 3.31 (1H, m, H-3″); 3.42 (1H, m, H-4″); 3.42 (1H, m, H-5″); 4.24 (1H, d, J = 10.6 Hz, H-6″a); 4.33 (1H, d, J = 11.9 Hz, H-6″b); 6.97 (2H, s, H-2‴/6‴); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 113.0 (C-1); 151.9 (C-2); 110.9 (C-3); 155.7 (C-4); 110.9 (C-5); 151.9 (C-6); 196.8 (C-7); 9.7 (C-8); 9.7 (C-9); 138.7 (C-1′); 128.7 (C-2′/6′); 128.2 (C-3′/5′); 132.3 (C-4′); 104.0 (C-1″); 74.1 (C-2″); 76.0 (C-3″); 69.1 (C-4″); 73.3 (C-5″); 62.5 (C-6″); 119.4 (C-1‴); 108.5 (C-2‴/6‴); 145.4 (C-3‴/5‴); 138.3 (C-4‴); 165.7 (C-7‴)。以上数据与文献^[19]中报道的guavinoside B基本一致, 故鉴定化合物12为guavinoside B。

化合物13为黄褐色粉末, HR-ESIMS [M+H]⁺ m/z = 407.133 5 (计算值407.133 7, C₂₀H₂₃O₉), 分子式为C₂₀H₂₂O₉。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ_H: 6.27 (1H, s, H-5); 1.95 (3H, s, H-8); 7.61 (2H, d, J = 7.4 Hz, H-2′/6′); 7.41 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-3′/5′); 7.52 (1H, t, J = 7.3 Hz, H-4′); 4.67 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-1″); 2.53 (1H, m, H-2″); 3.12 (1H, m, H-3″); 3.01 (1H, m, H-4″); 3.12 (1H, m, H-5″); 3.48 (1H, dd, J = 11.7, 4.9 Hz, H-6″a), 3.65 (1H, d, J = 11.3 Hz, H-5″); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 107.4 (C-1); 158.0 (C-2); 104.5 (C-3); 160.1 (C-4); 94.1 (C-5); 155.3 (C-6); 197.1 (C-7); 7.9 (C-8); 140.1 (C-1′); 128.5 (C-2′/6′); 127.7 (C-3′/5′); 131.4 (C-4′); 100.0 (C-1″); 72.8 (C-2″); 76.4 (C-3″); 69.1 (C-4″); 76.9 (C-5″); 60.5 (C-6″)。以上数据与文献^[20]中报道的guajaphenone A基本一致, 故鉴定化合物13为guajaphenone A。

文中化合物核磁数据在不同机器上进行测定, 所以¹H NMR和¹³C NMR的兆赫数有所差异。

3 细胞毒活性测试实验

利用CCK-8比色法测定化合物2~4对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231) 和人神经胶质瘤细胞(U87) 的抑制率, 5-氟尿嘧啶为阳性对照药。简要实验过程如下: 选用对数生长期细胞, 胰酶消化后用含10%胎牛血清DMED培养液接种在96孔培养板中, 每孔细胞密度为每100 μL 3 000个。在37 ℃、5% CO₂条件下培养24 h后, 弃去培养基, 然后加入不含血清的培养基饥饿培养24 h。测试前换液, 加入190 μL新鲜培养基。实验组加入初筛浓度的样品10 μL (化合物浓度5 μg·mL^-1, DMSO溶解), 对照组则加入等体积溶剂的培养液。两组在37 ℃、5% CO₂条件下培养3天后, 弃去培养基, 在每孔加入100 μL含10% CCK-8的无血清培养基, 然后将培养板在培养箱内孵育4 h, 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度, 根据公式[肿瘤细胞生长抑制率(%) = (A_对照-A_实验) / (A_对照-A_空白) × 100%] 计算抑制率。对抑制率较好的化合物进行复筛, 使用GraphPad prism 9.0计算IC₅₀值, 复筛浓度设置为100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01 μmol·L^-1。最终结果显示, 化合物3对U87细胞具有抑制活性(图 3), 抑制率为55.5%, IC₅₀值为8.379 μmol·L^-1。

作者贡献: 于悦是本文第一作者, 负责化合物的分离、鉴定和文章撰写; 孙兴妍、徐凯玲、李创军对提取分离和结构鉴定提供了一定帮助; 王金华负责对化合物的细胞毒活性进行筛选; 张东明为本文通讯作者。

利益冲突: 本文不存在任何利益冲突。

基金

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国家自然科学基金资助项目(21772234)
中国医学科学院创新工程资助项目(2021-I2M-1-028)
天然药物生物活性物质与功能国家重点实验室独立课题(GTZA201803)

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2022年第57卷第8期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2022-0285

接收时间：2022-03-04
首发时间：2025-12-23
出版时间：2022-08-12

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收稿日期：2022-03-04
修回日期：2022-03-21

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国家自然科学基金资助项目(21772234)

中国医学科学院创新工程资助项目(2021-I2M-1-028)

天然药物生物活性物质与功能国家重点实验室独立课题(GTZA201803)

作者信息

北京协和医学院、中国医学科学院药物研究所, 北京 100050

通讯作者:

*张东明, Tel: 86-10-63165227, E-mail: zhangdm@imm.ac.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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