药学学报

No.	δ_H	δ_C
1	4.57 (1H, d, J = 11.5), 4.32 (1H, d, J = 11.5)	69.1, t
2		73.4, s
3	4.00 (1H, dd, J = 8.0. 2.5)	73.8, d
4	4.70 (1H, dd, J = 12.0, 2.5), 4.48 (1H, dd, J = 12.0, 8.0)	66.3, t
5	1.37 (3H, s)	20.2, q
1′		129.6, s
2′, 6′	8.03-8.06, m	129.8, d
3′, 5′	7.41-7.46, m	128.6, d
4′	7.55-7.59, m	133.4, d
7′		167.1, s
1′′		129.8, s
2′′, 6′′	8.03-8.06, m	129.9, d
3′′, 5′′	7.41-7.46, m	128.7, d
4′′	7.55-7.59, m	133.6, d
7′′		167.3, s
	2.81 (s), 3.12 (s)	2×OH

No.	δ_H	δ_C
1	4.57 (1H, d, J = 11.5), 4.32 (1H, d, J = 11.5)	69.1, t
2		73.4, s
3	4.00 (1H, dd, J = 8.0. 2.5)	73.8, d
4	4.70 (1H, dd, J = 12.0, 2.5), 4.48 (1H, dd, J = 12.0, 8.0)	66.3, t
5	1.37 (3H, s)	20.2, q
1′		129.6, s
2′, 6′	8.03-8.06, m	129.8, d
3′, 5′	7.41-7.46, m	128.6, d
4′	7.55-7.59, m	133.4, d
7′		167.1, s
1′′		129.8, s
2′′, 6′′	8.03-8.06, m	129.9, d
3′′, 5′′	7.41-7.46, m	128.7, d
4′′	7.55-7.59, m	133.6, d
7′′		167.3, s
	2.81 (s), 3.12 (s)	2×OH

Compd.	IC₅₀/μmol·L^-1		Compd.	IC₅₀/μmol·L^-1
1	> 100^*		8	11.87 ± 2.70^*
2	> 100^*	9	10.48 ± 7.91
3	28.16 ± 4.1	10	32.41 ± 3.16^*
4	10.45 ± 5.77	12	32.76 ± 4.8
5	5.88 ± 3.97^*	16	71.08 ± 4.18^*
6	16.80 ± 8.25	Indomethacin	19.21 ± 6.1
7	21.16 ± 3.13

Compd.	IC₅₀/μmol·L^-1		Compd.	IC₅₀/μmol·L^-1
1	> 100^*		8	11.87 ± 2.70^*
2	> 100^*	9	10.48 ± 7.91
3	28.16 ± 4.1	10	32.41 ± 3.16^*
4	10.45 ± 5.77	12	32.76 ± 4.8
5	5.88 ± 3.97^*	16	71.08 ± 4.18^*
6	16.80 ± 8.25	Indomethacin	19.21 ± 6.1
7	21.16 ± 3.13

壮药红花青藤中抑制NO生成的活性成分研究

PDF下载

甘杰 , 韦微 , 谭锦妮 , 沈梦如 , 谭钦刚 ^*

药学学报 | 研究论文 2022,57(6): 1849-1854

收起

药学学报 | 研究论文 2022, 57(6): 1849-1854

壮药红花青藤中抑制NO生成的活性成分研究

全屏

甘杰, 韦微, 谭锦妮, 沈梦如, 谭钦刚^*

作者信息

桂林医学院, 广西桂林 541199

通讯作者:

*谭钦刚, Tel: 86-773-2303433, E-mail: qgtan@glmc.edu.cn

The NO inhibitory constituents from Illigera rhodantha

Jie GAN, Wei WEI, Jin-ni TAN, Meng-ru SHEN, Qin-gang TAN^*

Affiliations

Guilin Medical University, Guilin 541199, China

出版时间: 2022-06-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2022-0035

文章导航

摘要

收起

采用硅胶、ODS柱色谱、Sephadex LH-20等分离方法对红花青藤藤茎醇提物的化学成分进行分离纯化, 通过其理化性质及波谱数据对分离得到的化合物进行结构表征。从红花青藤藤茎醇提物中共分离得到16个化合物: (2R, 3R)-2, 3-dihydroxy-2-methylbutane-1, 4-diyldibenzoate (1)、反式-阿魏酸对羟基苯乙酯(2)、4-O-benzoyl-2-C-methyl-D-erythritol (3)、N-反式阿魏酰基-3-甲基多巴胺(4)、tribulusamide A (5)、柳杉二醇(6)、teuclatriol (7)、齐墩果酸(8)、icario A₂ (9)、香草酸(10)、对羟基苯甲酸(11)、没食子酸(12)、没食子酸乙酯(13)、大黄酚(14)、D-1-O-甲基-肌醇(15) 和十六烷酸(16)。其中1为新化合物, 其绝对构型采用Mosher法并结合ROESY法确定; 除10、11和14外, 其他化合物均是首次从青藤属中分离得到。与阳性对照药吲哚美辛相比, 化合物4~6、8和9对LPS诱导RAW264.7细胞生成NO均有显著的抑制作用。

关键词

莲叶桐科 / 红花青藤 / 化学成分 / NO抑制活性

Abstract

收起

Sixteen compounds were isolated from the ethanol extract of Illigera rhodantha by silica gel, ODS, and Sephadex LH-20 column chromatographies. These compounds were identified as (2R, 3R)-2, 3-dihydroxy-2-methylbutane-1, 4-diyldibenzoate (1), p-hydroxyphenethyl trans-ferulate (2), 4-O-benzoyl-2-C-methyl-D-erythritol (3), N-trans feruloyl-3-methyldopamine (4), tribulusamide A (5), cryptomeridiol (6), teuclatriol (7), oleanolic acid (8), icario A₂ (9), vanillic acid (10), p-hydroxybenzoic acid (11), gallic acid (12), ethyl gallate (13), chrysophanol (14), D-1-O-methyl-inositol (15), and hexadecanoic acid (16) based on their spectral data and physico-chemical properties. Compound 1 is an undescribed compound, of which its absolute configurations were determined by Mosher and ROESY methods; all the compounds except 10, 11 and 14 were isolated from Illigera genus for the first time. Compared with the positive control indomethacin, compounds 4-6, 8 and 9 inhibited significantly against the NO production in LPS-induced RAW 264.7 cells.

Key words

Hernandiaceae / Illigera rhodantha / chemical constituent / NO inhibitory activity

引用本文

甘杰, 韦微, 谭锦妮, 沈梦如, 谭钦刚. 壮药红花青藤中抑制NO生成的活性成分研究. 药学学报, 2022 , 57 (6) : 1849 -1854 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2022-0035

Jie GAN, Wei WEI, Jin-ni TAN, Meng-ru SHEN, Qin-gang TAN. The NO inhibitory constituents from Illigera rhodantha[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2022 , 57 (6) : 1849 -1854 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2022-0035

正文

收起

红花青藤(Illigera rhodantha Hance) 又名毛青藤, 为莲叶桐科(Hernandiaceae) 青藤属植物, 产自广东、广西、云南等地, 具鲜艳的红色花, 易与其他种区别^[1]。红花青藤味甘、辛、涩、温, 以其药用部位藤茎为主药的成药—风湿药酒和加味风湿酒被《广西药品标准》收载^[2], 具有祛风、镇痛、活血通络之功效, 常用于治疗风湿性关节炎、头风痛、跌打瘀肿等, 在广西壮族民间中具有广泛的应用历史^[3]。现代研究表明, 红花青藤含有生物碱、黄酮、甾体和萜类等成分^[4], 其提取物具有抗炎镇痛作用^{[5, 6]}。为了深入挖掘红花青藤的抗炎活性成分, 本文对红花青藤藤茎乙醇提取物的化学成分及其抑制NO的活性进行了研究, 通过硅胶、ODS、凝胶等柱色谱法和波谱法, 分离鉴定了16个化合物(图 1), 其中化合物1为新化合物, 化合物4~6、8和9对LPS诱导RAW264.7细胞生成NO均有显著的抑制作用。

结果与讨论

收起

1 结构鉴定

化合物1, 白色粉末, mp 133~135 ℃; [α]_D²⁰-2.55 (c 0.12, CHCl₃); UV (CHCl₃) λ_max: 232、274 nm; IR (KBr) ν_max/cm^-1: 3 458 (OH)、1 696 (C=O)、1 280 (C=C); HR-ESI-MS m/z [M+Na]⁺ 367.115 5 (计算值367.115 8) 提示其分子式为C₁₉H₂₀O₆, 不饱和度为10。¹³C NMR和DEPT谱仅显示15个碳信号, 根据化学位移值δ_C 167.3、167.1、128.6~133.6及δ_H 8.03~8.06 (m, 4H)、7.55~7.59 (m, 2H) 和7.41~7.46 (m, 4H) (表 1), 推测分子中含有单取代的苯甲酰基系统。与已知化合物bonianol^[7]相比, 化合物1比该化合物多了1个季碳(δ_C 73.4)、1个甲基(δ_C 20.2), 少了4个次甲基信号, 推测化合物1中没有直链双键且其中的1个季碳和次甲基上有羟基取代, 该推测由HBMC图谱中δ_H 4.00 (1H, dd, J = 8.0, 2.5 Hz, H-3) 与δ_H 1.37 (3H, s) 与δ_C 73.4 (s) 的相关得到证实(图 2)。此外, HMBC图谱中δ_H 8.03~8.06 (4H, m, H-2′, 6′, 2″, 6″) 与δ_C 167.1 (s) 和167.3 (s) 的相关证实了单取代苯甲酰基的存在。采用改进的Mosher's法确定C-3位的绝对构型为R (图 3)。ROESY谱中, δ_H 2.81(1H, s, OH) 和δ_H 3.12 (1H, s, OH) 两个宽单峰与δ_H 4.00 (1H, dd, J = 8.0, 2.5 Hz, H-3) 均相关, 其中一个必为处于同侧的氢原子相关信号, 据此推测δ_H 1.37 (3H, s, H-5) 与C-3位的OH位于同侧, 由此确定C-2位的绝对构型为R, 故该化合物命名为(2R, 3R)-2, 3-dihydroxy-2-methylbutane-1, 4-diyldibenzoate。

2 化合物对RAW264.7细胞的毒性和产生NO的影响

采用MTT比色法检测化合物对RAW264.7细胞存活率的影响。分别设置6.25、12.5、25、50、100和200 μmol·L^-1等6个浓度, 孵育24 h后, 各化合物的各剂量组随着药物浓度的减少, RAW264.7细胞活力显著提高, 实验结果表明, 化合物10和16的浓度在200 μmol·L^-1及以下时细胞存活率在90%以上, 表明上述两个化合物对RAW264.7细胞无毒。此外, 化合物7和12的浓度在100 μmol·L^-1及以下时, 化合物1~3和9的浓度在50 μmol·L^-1及以下时, 化合物4~6和8的浓度在25 μmol·L^-1及以下时对RAW264.7细胞无毒, 其他化合物11、13和14则对该细胞有较大的毒性。

使用Griess法测定红花青藤中部分单体化合物的抗炎活性。经过毒性筛选, 选择具有较大安全浓度范围的部分化合物进行NO抑制率实验, 分别设置化合物对细胞无毒的几个浓度梯度, 孵育24 h测定化合物抑制NO的IC₅₀值, 结果如表 2所示。由表 2可知, 与阳性对照药吲哚美辛相比, 化合物4~6、8和9能显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞生成NO。

实验部分

收起

Bruker DRX-500, DRX-400核磁共振仪(Bruker公司, 瑞士); 低分辨质谱LCMS-8030 (岛津公司, 日本); 高分辨质谱(Agilent 6200 Series TOF and 6500 Series Q-TOF LC/MS System, 美国); 红外用Nicolet iS10测定(Thermo Scientific公司, KBr压片法); UV-1600 (上海美谱达公司); 旋光仪Model 341 LC polarimeter (Perkin Elmer公司, 英国); 柱色谱及薄层色谱所用硅胶(青岛海洋化工); 葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 (瑞典Pharmacia公司); RP-18 (10~65 μm, 德国Merck公司); 小孔树脂CHP20 (日本Mitsubishi公司); 薄层色谱用硅胶板(GF254, 烟台江友硅胶开发有限公司); 显色剂5% H₂SO₄-EtOH溶液(喷洒后适当加热); 胎牛血清(FBS)、基础培养基(DMEM)、青链霉素混合液(Gibco公司); DMSO、四甲基偶氮唑盐(MTT)、脂多糖(LPS)、吲哚美辛(Solarbio公司); RAW264.7细胞购自ATCC细胞库, 由本实验自行传代培养。4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES, Biosharp公司)。

红花青藤藤茎于2018年10月采自广西桂林永福县罗锦镇, 由广西植物所黄俞淞副研究员鉴定为莲叶桐科(Hernandiaceae) 青藤属(Illigera) 植物红花青藤(I. rhodantha), 标本(编号Tir-2018-2)保存于桂林医学院药学院实验中心。

1 提取与分离

干燥的红花青藤藤茎粗粉20 kg用100 L 75%乙醇室温提取(7天×3次), 过滤, 滤液减压回收得浸膏1.6 kg, 将浸膏分散于4 L蒸馏水中, 等体积乙酸乙酯萃取3次, 减压回收溶剂得乙酸乙酯层209 g, 水层1.2 kg。

乙酸乙酯层(209 g) 经硅胶柱色谱, 氯仿-甲醇(50∶1~0∶1) 梯度洗脱, TLC检测合并相同部分, 得到9个组分Fr.Ⅰ~Ⅸ。Fr.Ⅳ经MCI柱色谱(85%→100%甲醇), 硅胶柱色谱(石油醚-丙酮= 20∶1→8∶1) 得化合物1 (200.0 mg) 和4 (4.5 mg)。Fr.Ⅴ经MCI柱色谱(75%→100%甲醇), 得Fr.Ⅴ 1和Fr.Ⅴ 2, Fr.Ⅴ 1依次经LH-20柱色谱(甲醇), 硅胶柱色谱(石油醚-丙酮= 10∶1), 得化合物10 (5.8 mg); Fr.Ⅴ 2经硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯= 4∶1) 得化合物6 (11.9 mg)。Fr.Ⅵ经MCI柱色谱(70%→100%甲醇) 得Fr.Ⅵ 1~5, 其中Fr.Ⅵ 2经过LH-20柱色谱(甲醇), 硅胶柱色谱(石油醚-丙酮= 6∶1) 得化合物7 (6.6 mg); Fr.Ⅵ 3经LH-20柱色谱(甲醇) 和硅胶柱色谱(氯仿-甲醇= 35∶1) 得化合物9 (5.2 mg); Fr.Ⅶ经MCI柱色谱(60%→100%甲醇) 得到的FrⅦ 1经硅胶柱色谱(氯仿-甲醇= 100∶1) 后, 得化合物3 (5.5 mg)。Fr.Ⅷ经MCI柱色谱(45%→100%甲醇) 得Fr.Ⅷ 1~6, Fr.Ⅷ 3经LH-20柱色谱(甲醇) 和硅胶柱色谱(氯仿-丙酮= 3∶1) 得化合物11 (1.8 mg) 和化合物16 (2.3 mg); Fr.Ⅷ 5经硅胶柱色谱(氯仿-丙酮= 12∶1) 得化合物2 (8.9 mg); Fr. Ⅷ 6经LH-20柱色谱(甲醇) 和硅胶柱色谱(氯仿-甲醇= 40∶1, 30∶1) 得化合物5 (1.8 mg) 和14 (10.0 mg)。Fr.Ⅸ经MCI柱色谱(35%→100%甲醇) 得Fr.Ⅸ 1~11, Fr.Ⅸ 11经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇= 28∶1) 得化合物8 (3.0 mg)。

水层部分经正相柱色谱二氯甲烷-甲醇(30∶1→1∶1) 得8个组分(Fr.W.Ⅰ~Ⅷ), Fr.W.Ⅲ经硅胶柱色谱(氯仿-甲醇= 20∶1) 洗脱得化合物15 (9.8 mg); Fr.W.Ⅶ经硅胶柱色谱(氯仿-甲醇= 80∶1), 再经LH-20 (甲醇), 得化合物13 (14.5 mg); Fr.Ⅷ经硅胶柱色谱(氯仿-甲醇= 30∶1) 得化合物12 (10.2 mg)。

2 结构鉴定

化合物1 白色粉末, mp 133~135 ℃; [α]_D²⁰-2.55 (c 0.12, CHCl₃); UV (CHCl₃) λ_max: 232、274 nm。IR (KBr) ν_max/cm^-1: 3 458 (OH)、1 696 (C=O)、1 280 (C=C)。HR-ESI-MS m/z [M+Na]⁺ 367.115 5 (计算值367.115 8)。¹H NMR和¹³C NMR数据见表 1。

化合物2 淡黄色油状, C₁₈H₁₈O₅。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.44 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-7), 7.12 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2), 7.06 (2H, d, J = 9.5 Hz, H-2′, 6′), 7.02 (1H, dd, J = 2.0, 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.80 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5), 6.72 (2H, d, J = 11.5 Hz, H-3′, 5′), 6.41 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-8), 3.88 (3H, s, -OCH₃), 3.47 (2H, t, J = 8 Hz, H-1′′), 2.75 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-2′′); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 169.2 (C=O), 156.9 (C-4′), 149.8 (C-4), 149.3 (C-3), 142.0 (C-7), 131.3 (C-1′), 130.7 (C-2′), 128.3 (C-1), 123.2 (C-6), 118.7 (C-8), 116.5 (C-5), 116.3 (C-3′), 111.5 (C-2), 56.4 (-OCH₃), 42.5 (C-1′′), 35.8 (C-2′′)。以上数据结合文献^[8]确定该化合物为反式-阿魏酸对羟基苯乙酯。

化合物3 白色粉末, mp 110~113 ℃; C₁₂H₁₆O₅; HR-ESI-MS m/z 263.088 5 [M+Na]⁺。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 8.08~8.10 (2H, m, H-3′, 7′), 7.60~7.63 (2H, m, H-4′, 6′), 7.47~7.50 (1H, m, H-5′), 4.64 (1H, dd, J = 11.5, 2.5 Hz, H-4b), 4.36 (1H, dd, J = 11.5, 8.5 Hz, H-4a), 3.98 (1H, dd, J = 8.5, 2.5 Hz, H-3), 3.60 (1H, d, J = 11.0 Hz, H-1a), 3.49 (1H, d, J = 11.0 Hz, H-1b), 1.20 (3H, s, CH₃); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 168.4 (C=O), 134.2 (C-5′), 131.6 (C-2′), 130.6 (C-3′, 7′), 129.5 (C-4′, 6′), 74.7 (C-2), 73.6 (C-3), 68.5 (C-4), 67.6 (C-1), 19.3 (-CH₃)。以上数据结合文献^[9]确定该化合物为4-O-benzoyl-2-C-methyl-D-erythritol。

化合物4 无色油状物, C₁₉H₂₁NO₅。¹H NMR [500 MHz, (CD₃)₂CO] δ_H: 8.00 (1H, s, -OH), 7.34 (1H, s, -OH), 7.14 (1H, br s, -NH); Feruloyl: 7.33 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-3), 7.02 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2′), 6.91 (1H, dd, J = 8.5, 2.0 Hz, H-6′), 6.70 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5′), 6.38 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-2), 3.74 (3H, s, -OCH₃); Amine: 6.72 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2′), 6.61 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5′), 6.50 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 3.69 (3H, s, -OCH₃), 3.38 (2H, m, H-1), 2.63 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-2)。¹³C NMR [125 MHz, (CD₃)₂CO] δ_C: Feruloyl: 166.5 (C-1), 149.2 (C-4′), 148.6 (C-3′), 140.4 (C-3), 128.2 (C-1′), 122.5 (C-6′), 120.0 (C-2), 116.1 (C-5′), 111.2 (C-2′), 56.2 (OCH₃); Amine: 148.2 (C-3′), 145.9 (C-4′), 131.7 (C-1′), 122.0 (C-6′), 115.7 (C-5′), 113.1 (C-2′), 56.2 (OCH₃), 41.8 (C-1), 36.1 (C-2)。以上数据结合文献^[10]确定该化合物为N-反式-阿魏酰基-3-甲基多巴胺。

化合物5 白色粉末, mp 265~267 ℃; C₃₆H₃₆N₂O₈。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.42 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-7), 6.67~7.08 (13H, Ar-H), 6.38 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-8), 5.88 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-7′′), 4.16 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-8′′), 3.85 (3H, s, 3-OCH₃), 3.79 (3H, s, 3′′-OCH₃), 3.47 (4H, m, H-1′, 2′′′), 2.75 (4H, m, H-2′, 2′′′)。¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 172.9 (C-9′′), 169.0 (C-9), 156.9 (C-6′), 156.8 (C-6′′′), 151.1 (C-4), 149.2 (C-4′′), 148.1 (C-3′′), 146.0 (C-3), 141.8 (C-7), 132.6 (C-1′′), 131.2 (C-3′), 131.0 (C-3′′′), 130.9 (C-4′, 8′), 130.7 (C-4′′′, 8′′′), 130.4 (C-1), 129.3 (C-5), 120.0 (C-8), 119.4 (C-6′′), 118.1 (C-6), 116.5 (C-5′, 7′), 116.3 (C-5′′′, 7′′′), 113.0 (C-2), 110.5 (C-2′′), 90.0 (C-7′′), 58.6 (C-8′′), 56.7 (3-OCH₃), 56.4 (3′′-OCH₃), 42.6 (C-1′), 42.2 (C-1′′′), 35.7 (C-2′), 35.3 (C-2′′′)。以上数据结合文献^[11]确定该化合物为tribulusamide A。

化合物6 白色粉末, mp 138~140 ℃; C₁₅H₂₈O₂。¹H NMR [500 MHz, (CD₃)₂CO] δ_H: 3.03, 3.01 (2×OH), 1.14 (each 3H, s, H-12, 13), 1.11 (1H, dd, J = 12.5, 3.0 Hz, H-5), 1.06 (3H, s, H-15), 0.87 (3H, s, H-14)。¹³C NMR [125 MHz, (CD₃)₂CO] δ_C: 72.2 (C-11), 71.6 (C-4), 55.6 (C-5), 51.1 (C-7), 45.9 (C-9), 44.4 (C-3), 42.2 (C-1), 35.2 (C-10), 28.0 (C-13), 27.7 (C-12), 23.3 (C-8), 23.1 (C-15), 22.4 (C-6), 21.0 (C-2), 19.2 (C-14)。以上数据结合文献^[12]确定该化合物为柳杉二醇。

化合物7 白色粉末, mp 256~258 ℃; C₁₅H₂₈O₃。¹H NMR [500 MHz, (CD₃)₂CO] δ_H: 4.10, (br, OH), 4.06 (1H, t, J = 5.5 Hz), 3.20, 3.13 (s, 2×OH), 1.22, 1.17 (each 3H, s, H-14, 15), 1.01, 0.94 (each 3H, d, J = 6.5 Hz, H-12, 13)。¹³C NMR [125 MHz, (CD₃)₂CO] δ_C: 81.5 (C-4), 74.9 (C-10), 71.7 (C-6), 56.2 (C-5), 53.1 (C-1), 49.2 (C-9), 46.4 (C-7), 42.1 (C-3), 30.7 (C-11), 24.1 (C-8), 23.3 (C-12), 22.4 (C-13), 22.0 (C-2), 21.6 (C-14), 21.6 (C-15)。以上数据结合文献^[13]确定该化合物为teuclatriol。

化合物8 白色粉末, mp 265~266 ℃; C₃₀H₄₈O₃; HR-ESI-MS m/z 455.353 6 [M-H]^-。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ_H: 5.23 (1H, t, J = 3.6 Hz, H-12), 3.14 (1H, m, H-3), 2.83 (1H, dd, J = 14.0, 4.8 Hz, H-18), 1.14, 0.96, 0.92, 0.89, 0.80, 0.76 (each 3H×7, s, H-23, 24, 25, 26, 27, 29, 30)。¹³C NMR (100 MHz, CD₃OD) δ_C: 181.9 (C-28), 145.2 (C-13), 123.7 (C-12), 79.7 (C-3), 56.8 (C-5), 49.8 (C-9), 47.6 (C-17), 47.2 (C-19), 42.9 (C-14), 42.7 (C-18), 40.5 (C-8), 40.4 (C-4), 39.8 (C-1), 38.2 (C-10), 34.9 (C-21), 34.0 (C-7), 33.8 (C-22), 33.6 (C-29), 31.6 (C-20), 28.8 (C-15), 28.7 (C-23), 27.9 (C-2), 26.4 (C-27), 24.5 (C-16), 24.0 (C-11, C-30), 19.5 (C-6), 17.7 (C-26), 16.3 (C-24), 15.9 (C-25)。以上数据结合文献^[14]确定该化合物为齐墩果酸。

化合物9 淡黄色粉末, mp 91~93 ℃; C₂₂H₂₈O₉; HR-ESI-MS m/z 417.155 2 [M-H₂O-H]^-。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 6.76 (4H, s, H-2, 2′, 6, 6′), 4.98 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-7, 7′), 3.88 (12H, s, 4-OCH₃), 3.73 (2H, dd, J = 11.5, 3.5 Hz, H-9*), 3.64 (2H, dd, J = 11.5, 5.0 Hz, H-9′*), 2.33 (2H, m, H-8, 8′)。¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 149.3 (C-3, 3′, 5, 5′), 136.2 (C-4, 4′), 134.2 (C-1, 1′), 104.8 (C-2, 2′, 6, 6′), 84.6 (C-7, 7′), 61.7 (C-9, 9′), 56.8 (-OCH₃), 55.2 (C-8, 8′)。以上数据结合文献^[15]确定该化合物为icario A₂。

化合物10 白色粉末, mp 218~221 ℃; C₈H₈O₄。¹H NMR [500 MHz, (CD₃)₂CO] δ_H: 7.59 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-6), 7.56 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2), 6.91 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5), 3.91 (3H, s, 4-OCH₃)。¹³C NMR [125 MHz, (CD₃)₂CO] δ_C: 167.5 (-COOH), 152.0 (C-4), 148.0 (C-3), 124.9 (C-6), 122.9 (C-1), 115.4 (C-2), 113.4 (C-5), 56.3 (-OCH₃)。以上数据结合文献^[16]确定该化合物为香草酸。

化合物11 白色粉末, mp 214~216 ℃; C₇H₆O₃; HR-ESI-MS m/z 248.962 2 [2M-CO]⁺。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.88 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-2, 6), 6.82 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-3, 5)。¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 170.1 (C=O), 163.4 (C-4), 133.0 (C-2, 6), 122.8 (C-1), 116.0 (C-3, 5)。以上数据结合文献^[17]确定该化合物为对羟基苯甲酸。

化合物12 白色粉末, mp 240~241 ℃; C₇H₆O₅。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.02 (2H, s, H-2, 6)。¹³C NMR (100 MHz, CD₃OD) δ_C: 170.4 (C=O), 146.4 (C-3, 5), 139.6 (C-4), 121.9 (C-1), 110.3 (C-2, 6)。以上数据结合文献^[18]确定该化合物为没食子酸。

化合物13 白色粉末, mp 156~158 ℃; C₉H₁₀O₅。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.03 (2H, s, H-2, 6), 4.25 (2H, q, J = 7.2 Hz, -CH₂-), 1.32 (3H, t, J = 7.2 Hz, -CH₃)。¹³C NMR (100 MHz, CD₃OD) δ_C: 168.5 (C-7), 146.4 (C-3, 5), 139.7 (C-4), 121.7 (C-1), 110.0 (C-2, 6), 61.7 (-CH₂), 14.6 (-CH₃)。以上数据结合文献^[19]确定该化合物为没食子酸乙酯。

化合物14 黄色粉末, mp 198~200 ℃; C₁₅H₁₀O₄; HR-ESI-MS m/z 621.433 7 [2M+CF₃COO]^-。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 12.11, 12.00 (2×OH), 7.81 (1H, dd, J = 7.6, 1.2 Hz, H-5), 7.67 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6), 7.64 (1H, d, J = 1.2 Hz, H-4), 7.28 (1H, dd, J = 8.4, 1.2 Hz, H-7), 7.08 (1H, m, H-2), 2.46 (3H, s, -CH₃)。¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 192.6 (C-9), 182.1 (C-10), 162.8 (C-8), 162.5 (C-1), 149.5 (C-3), 137.1 (C-6), 133.8 (C-10′), 133.4 (C-4′), 124.7 (C-2), 124.5 (C-7), 121.5 (C-4), 120.1 (C-5), 116.0 (C-8′), 113.9 (C-9′), 22.4 (CH₃)。以上数据结合文献^[20]确定该化合物为大黄酚。

化合物15 白色结晶, mp 196~197 ℃; C₇H₁₄O₆; HR-ESI-MS m/z 239.076 9 [M+COOH]^-。¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 81.1 (C-1), 73.3 (C-5), 72.3 (C-3), 72.1 (C-6), 70.5 (C-4), 68.1 (C-2), 57.1 (-OCH₃)。以上数据结合文献^[21]确定该化合物为D-1-O-甲基-肌醇。

化合物16 白色粉末, mp 70~72 ℃; C₁₆H₃₂O₂; HR-ESI-MS m/z 485.282 0 [2M-CO+H]⁺。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 2.35 (2H, d, J = 7.6 Hz, H-2), 1.64 (2H, m), 1.25 (24H, br), 0.88 (3H, t, J = 6.8 Hz, -CH₃)。¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 178.8 (C=O), 22.9~34.0 (-CH₂-), 14.3 (-CH₃)。以上数据结合文献^[22]确定该化合物为十六烷酸。

3 细胞毒性及NO抑制实验

本实验中MTT法检测细胞毒性, Giress试剂法测定NO含量均采用参考文献^[23]中的方法。所有实验均重复3次, 应用SPSS22统计软件进行统计学分析, 采用单因素ANOVA分析样本间的均数比较。

作者贡献: 甘杰负责样品采集、提取与分离、活性测试; 韦微协助对分离得到的化合物进行活性测试; 谭锦妮协助化合物的结构鉴定; 沈梦如协助提取与分离; 谭钦刚负责选题、研究方案的设计及稿件修改等。

利益冲突: 本文不存在利益冲突。

基金

收起

国家自然科学基金资助项目(82060783)
广西自然科学基金资助项目(2020GXNSFAA259001)
国家级大学生创新创业训练计划项目(202010601019)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

[1]

Flora of China Editorial Committee of Chinese Academy of Science . Flora of China (中国植物志). Vol 31[M]. Beijing: Science Press, 1982: 472.

[2]

The Health Department of Guangxi Zhuang Autonomous Region . Guangxi Drug Standards (广西药品标准)[M]. Nanning: Guangxi Science and Technology Press, 1984: 41.

[3]

Jia

, Li

. Introduction of Chinese Ethnic Medicinal Plants (中国民族药志要)[M]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2005: 342.

[4]

, Cai

. Research advances of the ethnic medicinal plants Illigera rhodantha[J]. Acta Med Sin (华夏医学), 2009, 22: 992-994.

[5]

, Zhang

, Bai

et al . Study on anti-inflammatory and analgesic effects of Illigera rhodantha Hance extract by transdermal administration[J]. Lishizhen Med Mater Med Res (时珍国医国药), 2020, 31: 2843-2846.

[6]

, Cai

, Luo

et al . Study on the anti-inflammatory active fraction of Illigera rhodantha Hance[J]. Lishizhen Med Mater Med Res (时珍国医国药), 2013, 24: 2623-2624.

[7]

Chen

, Liu

, Xu

et al . New polyoxygenated cyclohexene and polyoxygenated seco-cyclohexene from Uvaria boniana[J]. J Asian Nat Prod Res, 2013, 15: 53-58.

https://doi.org/10.1080/10286020.2012.743529

[8]

Darwish

FMM

, Reinecke

. Ecdysteroids and other constituents from Sida spinosa L.[J]. Phytochemistry, 2003, 62: 1179-1184.

https://doi.org/10.1016/S0031-9422(03)00021-9

[9]

Yamaura

, Suzuki

, Tagami

et al . Synthesis of 2, 3-O-isopropylidene- and 3-O-benzoyl-2-O-benzyl-2-C-methyl-L-glyceraldehyde[J]. Carbohydr Res, 1988, 181: 267-272.

https://doi.org/10.1016/0008-6215(88)84046-1

[10]

Ren

, Shen

, Dai

. Studies on flavonoids and amides from herbs of Solanum lyratum[J]. China J Chin Mater Med (中国中药杂志), 2009, 34: 721-723.

[11]

Feng

, Hu

, Jin

et al . Radical scavenging constituents from leaf of Humulus scandens[J]. Asian J Chem, 2016, 28: 1820-1822.

https://doi.org/10.14233/ajchem.2016.19841

[12]

Werner

, Mucaji

, Presser

et al . Sesquiterpenes and phenolic compounds from Achillea clypeolata[J]. Z Naturforsch B, 2007, 62: 267-271.

https://doi.org/10.1515/znb-2007-0219

[13]

, Yu

, Wu

et al . Chemical constituents in ethyl acetate extract from Rabdosia flexicaulis[J]. Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2015, 46: 339-343.

[14]

Zhang

, Zhang

et al . Chemical constituents of Crepis flexuosa[J]. Chin J Appl Environ Biol (应用与环境生物学报), 2011, 17: 509-511.

[15]

, Long

, Wang

et al . Chemical constituents of Oxyria digyna[J]. Nat Prod Res Dev (天然产物研究与开发), 2008, 20: 816-820.

[16]

, Yang

, Zhang

et al . A new compound from Senecio cannabifolius var integrifolius[J]. Acta Pharm Sin (药学学报), 2008, 43: 626-629. http://www.yxxb.com.cn:8081/apsCN/abstract/abstract7212.shtml

[17]

Lee

, Kim

, Lee

et al . A new flavonol glycoside from Hylomecon vernalis[J]. Arch Pharm Res, 2012, 35: 415-421.

https://doi.org/10.1007/s12272-012-0303-8

[18]

Zhou

, Yang

. Phenolic constituents of the fresh leaves of Myrica nana[J]. Acta Bot Yunnan (云南植物研究), 2000, 22: 219-224.

[19]

Shu

, Duan

, Liu

et al . Chemical constituents from flowers of Paeonia lactiflora[J]. J Chin Med Mater (中药材), 2014, 37: 66-69.

[20]

Zhang

, Lou

, Li

et al . A new triterpenoid from Entodon okamurae Broth[J]. J Asian Nat Prod Res, 2003, 5: 189-195.

https://doi.org/10.1080/1028602031000082016

[21]

, Luo

, Zheng

. Studies on chemical constituents in seed of Litchi chinensis[J]. Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2002, 33: 300-303.

[22]

Ren

, Xia

, Li

. Chemical constituents of Stenoloma chusanum (Ⅱ)[J]. Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2009, 40: 104-106.

[23]

Chen X. Studies on the Chemical Constituents and Anti-inflammatory of Yao Medicine Pothos chinensis (Raf. ) Merr. (瑶药石柑子的化学成分及抗炎活性研究)[D]. Guangzhou: Guangzhou University of Chinese Medicine, 2017.

2022年第57卷第6期

PDF下载

177

引用本文

BibTeX

文章信息

doi: 10.16438/j.0513-4870.2022-0035

接收时间：2022-01-07
首发时间：2025-12-23
出版时间：2022-06-12

补充材料

相关文章

文章信息

作者

出版历史

收稿日期：2022-01-07
修回日期：2022-02-11

基金

国家自然科学基金资助项目(82060783)

广西自然科学基金资助项目(2020GXNSFAA259001)

国家级大学生创新创业训练计划项目(202010601019)

作者信息

桂林医学院, 广西桂林 541199

通讯作者:

*谭钦刚, Tel: 86-773-2303433, E-mail: qgtan@glmc.edu.cn

参考文献

分享链接

https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2022-0035

分享至

全文二维码

扫描看全文

引用本文

BibTeX

本文的引用情况

2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

关闭全屏

BibTeX
EndNote
RefWorks
TxT