药学学报

Pop. ID	Voucher specimens	Locality	GenBank ID	Remark	Pop. ID	Voucher specimens	Locality	GenBank ID	Remark
ZP1	2020YN001	Lijiang, Yunnan	N	Cultivated	XZ2	XZ201214	Dingqing, Tibet	KY595458	Wild
ZP2	2020YN003	Lijiang, Yunnan	N	-	GS	GS201601	Maqu, Gansu	KY595459	-
YN1	2020YN005	Lijiang, Yunnan	N	Wild	GZ	GZ201601	Weining, Guizhou	KY595460	-
ZP	YN201301	Lijiang, Yunnan	KJ676538	Cultivated	SC1	SC201601	Kangding, Sichuan	KY595461	-
YN	YN201601	Lijiang, Yunnan	KY595463	Wild	SC2	SC201602	Daofu, Sichuan	KY595462	-
XZ1	2016XZ011	Changdu, Tibet	KY595457	-	QH	QH201405	Banma, Qinghai	KY606171	-

Pop. ID	Voucher specimens	Locality	GenBank ID	Remark	Pop. ID	Voucher specimens	Locality	GenBank ID	Remark
ZP1	2020YN001	Lijiang, Yunnan	N	Cultivated	XZ2	XZ201214	Dingqing, Tibet	KY595458	Wild
ZP2	2020YN003	Lijiang, Yunnan	N	-	GS	GS201601	Maqu, Gansu	KY595459	-
YN1	2020YN005	Lijiang, Yunnan	N	Wild	GZ	GZ201601	Weining, Guizhou	KY595460	-
ZP	YN201301	Lijiang, Yunnan	KJ676538	Cultivated	SC1	SC201601	Kangding, Sichuan	KY595461	-
YN	YN201601	Lijiang, Yunnan	KY595463	Wild	SC2	SC201602	Daofu, Sichuan	KY595462	-
XZ1	2016XZ011	Changdu, Tibet	KY595457	-	QH	QH201405	Banma, Qinghai	KY606171	-

Sample ID	Processing base	"Sweating"	Whole root	Slices	Natural air drying	Stoving	Remark
A	In the locality	N	Y	N	N	Y	Triennial
B	-	N	N	Y	N	Y	-
C	-	N	Y	N	Y	N	-
D	-	N	N	Y	Y	N	-
E	-	N	Y	N	N	Y	Biennial
F	In factory in Shanghai	N	Y	N	N	Y	Triennial
G	-	N	N	Y	N	Y	-
H	-	Y	Y	N	Y	N	-
I	-	Y	N	Y	Y	N	-
J	-	N	Y	N	Y	N	-
K	-	N	N	Y	Y	N	-
L	-	N	N	N	Y	N	- (Rhizoma)

Sample ID	Processing base	"Sweating"	Whole root	Slices	Natural air drying	Stoving	Remark
A	In the locality	N	Y	N	N	Y	Triennial
B	-	N	N	Y	N	Y	-
C	-	N	Y	N	Y	N	-
D	-	N	N	Y	Y	N	-
E	-	N	Y	N	N	Y	Biennial
F	In factory in Shanghai	N	Y	N	N	Y	Triennial
G	-	N	N	Y	N	Y	-
H	-	Y	Y	N	Y	N	-
I	-	Y	N	Y	Y	N	-
J	-	N	Y	N	Y	N	-
K	-	N	N	Y	Y	N	-
L	-	N	N	N	Y	N	- (Rhizoma)

Locus	Sequence (5' to 3')	Locus	Sequence (5' to 3')
trnC-GCA-petN	GGCGGCATGGCCGAGTGGTAAGGC	ndhB-rps7	GATCATCAGAAGAAGAATTAGGCC
	TCCACTTCTTCCCCATACTACGA		TGTCACGTCGAGGTACTGCAGAAG
atpB-rbcL	TTTCCTAATAATTGCTGTACC	ycf1	CGATGAGCCGAAGAACACC
	ACAGTTGTCCATGTACCAGTAG		GACGGGAATGAATGAGGAAATA
psbN	GAATTAGATCGTGCTACTTTGAA		AAGCATCGCCCCATCTCA
	CATTGCGACACCCATCAAAGGA		GACAACTTTTTCTCGACCCAATAA

Locus	Sequence (5' to 3')	Locus	Sequence (5' to 3')
trnC-GCA-petN	GGCGGCATGGCCGAGTGGTAAGGC	ndhB-rps7	GATCATCAGAAGAAGAATTAGGCC
	TCCACTTCTTCCCCATACTACGA		TGTCACGTCGAGGTACTGCAGAAG
atpB-rbcL	TTTCCTAATAATTGCTGTACC	ycf1	CGATGAGCCGAAGAACACC
	ACAGTTGTCCATGTACCAGTAG		GACGGGAATGAATGAGGAAATA
psbN	GAATTAGATCGTGCTACTTTGAA		AAGCATCGCCCCATCTCA
	CATTGCGACACCCATCAAAGGA		GACAACTTTTTCTCGACCCAATAA

Sample ID	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J	K	L
Loganic acid	2.568	2.379	2.653	2.263	2.347	2.501	2.335	2.588	2.684	2.336	2.503	0.410
Gentiopicroside	5.665	5.777	5.496	5.783	4.976	5.572	6.26	5.787	6.263	6.132	6.173	4.096
Total	8.232	8.156	8.149	8.046	7.323	8.074	8.595	8.375	8.947	8.468	8.675	4.506

Sample ID	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J	K	L
Loganic acid	2.568	2.379	2.653	2.263	2.347	2.501	2.335	2.588	2.684	2.336	2.503	0.410
Gentiopicroside	5.665	5.777	5.496	5.783	4.976	5.572	6.26	5.787	6.263	6.132	6.173	4.096
Total	8.232	8.156	8.149	8.046	7.323	8.074	8.595	8.375	8.947	8.468	8.675	4.506

云南丽江产粗茎秦艽溯源及道地药材初加工方法评价

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季文静 ^#^,¹ , 张玉萱 ^#^,¹ , 赵志礼 ¹^,^* , 倪梁红 ¹^,^* , 李尉涛 ¹ , 竺琛欣 ² , 陈翔 ² , 杨少华 ³

药学学报 | 研究论文 2022,57(2): 507-513

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药学学报 | 研究论文 2022, 57(2): 507-513

云南丽江产粗茎秦艽溯源及道地药材初加工方法评价

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季文静^#^,¹, 张玉萱^#^,¹, 赵志礼¹^,^*, 倪梁红¹^,^*, 李尉涛¹, 竺琛欣², 陈翔², 杨少华³

作者信息

1.上海中医药大学, 上海 201203

2.上海康桥中药饮片有限公司, 上海 201315

3.云南省农业科学院高山经济植物研究所, 云南丽江 674100

通讯作者:

*赵志礼, Tel: 86-21-51322202, E-mail: zhilzhao@sohu.com;

倪梁红, Tel: 86-21-51322202, E-mail: nlhtcm@126.com

DNA barcoding of Gentiana crassicaulis in Lijiang and evaluation of root processing methods

Wen-jing JI¹, Yu-xuan ZHANG¹, Zhi-li ZHAO¹^,^*, Liang-hong NI¹^,^*, Wei-tao LI¹, Chen-xin ZHU², Xiang CHEN², Shao-hua YANG³

Affiliations

1. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China

2. Shanghai Kangqiao Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Shanghai 201315, China

3. Institute of Alpine Economic Plants, Yunnan Academy of Agricultural Sciences, Lijiang 674100, China

出版时间: 2022-02-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2021-1163

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摘要

收起

种质来源、药材产地及其产出药材的加工炮制方法，是临床优质药材（饮片）生产的基本要素。秦艽为多来源品种，云南丽江为其基原之一——粗茎秦艽Gentiana crassicaulis道地药材产区。在药材传统栽培区确定试验样地，对所产药材进行加工炮制处理，即分别在产地、饮片厂进行平行初加工，分为切片或不切片（原个子）两大类，发汗处理或不经发汗处理，干燥方式为自然晾晒或加热烘干。分别测定其指标性成分，构建HPLC指纹图谱；同时，在课题组前期物种分类学鉴定及遗传背景分析基础上，筛选DNA片段，测定各加工炮制组药材样品以及丽江产野生植株的相关序列，以构建云南丽江道地产区药材的DNA条形码。结果显示：①试验样地样品及野生植株均为龙胆科龙胆属粗茎秦艽G.crassicaulis；②共得到270条trnC-GCA-petN、atpB-rbcL、psbN、ndhB-rps7及ycf1相关序列，丽江产栽培品分3个基因型，其中Ⅲ型与野生居群共享，由此构建云南丽江产粗茎秦艽（野生与栽培品）的DNA条形码；③各组马钱苷酸、龙胆苦苷的总含量均大于《中国药典》规定的2.5%；④ HPLC指纹图谱中，确定9个共有峰，各组内相似度均大于0.999；⑤ PCA得分图中，所有切片样品聚为一簇；而原个子样品分布较为分散。本工作可为生产临床质量稳定且优的秦艽药材（饮片）、多来源中药品种的科学评价及道地药材溯源及生产等提供科学资料。

关键词

粗茎秦艽 / 道地药材 / 加工方法 / DNA条形码 / HPLC指纹谱

Abstract

收起

The key factors for producing the best quality Chinese herbal medicines are high-quality germplasm, suitable cultivation area and the proper processing methods for herbal raw materials. Gentiana crassicaulis in Gentiana (Sect. Cruciata), Gentianaceae is one of the original plants of the Chinese herb Qinjiao (Gentianae Macrophyllae Radix), and its type specimen was collected in Lijiang, Yunnan. There is a long planting history of the herb in this area. In this study a sampling plot was designated in these traditional planting areas. G. crassicaulis was planted and herbal raw materials were harvested from the plot. The raw materials were prepared locally and at a pharmaceutical factory in Shanghai using processing methods such as "sweating" or "no sweating", "slicing" or "no slicing" (whole root), and "stoving" or "no stoving" (air drying). The quality of all processed samples was evaluated. In addition, molecular markers were determined for identifying cultivated and wild samples from Lijiang, Yunnan. The results are as follows: ① Samples from the sampling plot and the field are taxonomically identified as Gentiana crassicaulis. ② A total of 270 sequences of trnC-GCA-petN, atpB-rbcL, psbN, ndhB-rps7 and ycf1 were obtained, and three genotypes were determined from the cultivated samples; the type Ⅲ was shared by both cultivated and wild plants. Based on the molecular markers, a DNA barcoding method to identify cultivated and wild samples of G. crassicaulis from Lijiang, Yunnan was established. ③ Total content of loganic acid and gentiopicroside in all samples was ≥ 2.5%, and above the Chinese Pharmacopoeia (2020) limit. ④ In HPLC fingerprinting, 9 common peaks were assigned and similarity between all samples was > 0.999; and ⑤ In a PCA score plot all slice samples were clustered, while whole root samples were scattered. Therefore, our studies could provide basic data for optimizing the processing method, producing best quality Gentianae Macrophyllae Radix, and evaluating the quality of different ecotype varieties and the multiple origin of herbal medicines.

Key words

Gentiana crassicaulis / Daodi Chinese herbal material / processing method / DNA barcoding / HPLC fingerprinting

引用本文

季文静, 张玉萱, 赵志礼, 倪梁红, 李尉涛, 竺琛欣, 陈翔, 杨少华. 云南丽江产粗茎秦艽溯源及道地药材初加工方法评价. 药学学报, 2022 , 57 (2) : 507 -513 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2021-1163

Wen-jing JI, Yu-xuan ZHANG, Zhi-li ZHAO, Liang-hong NI, Wei-tao LI, Chen-xin ZHU, Xiang CHEN, Shao-hua YANG. DNA barcoding of Gentiana crassicaulis in Lijiang and evaluation of root processing methods[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2022 , 57 (2) : 507 -513 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2021-1163

正文

收起

中药诸品种基原的多样性及药材道地性是中药鲜明特色之一, 具有丰富的中医药文化及科学内涵。同时, 种质来源、药材产地及其产出药材的加工炮制方法, 是临床优质药材(饮片) 生产的基本要素。秦艽为多来源品种, 基原涉及龙胆科龙胆属秦艽组(Sect. Cruciata) 秦艽Gentiana macrophylla Pall.、麻花秦艽G. straminea Maxim.、粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.或小秦艽G. dahurica Fisch. 4种植物, 根入药, 可祛风湿, 清湿热, 止痹痛, 退虚热^[1]。上述植物形态彼此相近而不同, 花色亦有蓝紫色及黄白色之分, 加之各物种自然分布区有所不同, 取4种植物根部做临床中药秦艽入药, 药效学的一致性如何, 是一个必需回答的科学问题。同时, 各物种自然分布区或不同栽培区内, 地理种群(栽培品系) 生长小生态环境多样, 同一物种内个体形态变化及药效学差异程度与具体产地的相关性如何(道地性), 是值得深入探讨的又一科学问题。

秦艽基原植物之一——粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk., 我国特有物种, 自然分布区广泛, 涉及西藏、云南、四川、贵州、青海及甘肃等省区, 多见于海拔2 100~4 500 m的高山草甸、林下及林缘^[2]。云南丽江为粗茎秦艽的模式标本产地^[2], 同时, 该地区具有悠久的规模化栽培生产(粗茎) 秦艽药材的历史^[3]。课题组前期开展了秦艽组(Sect. Cruciata) 秦艽G. macrophylla Pall.、麻花秦艽G. straminea Maxim.、粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.及小秦艽G. dahurica Fisch.等多种植物的遗传背景分析及生药学研究工作^[4-14], 在此基础上, 拟进一步聚焦丽江产秦艽的溯源及品质评价工作, 确定试验样地, 种质分类学鉴定; 鉴于中药材加工炮制方法是影响其质量的重要因素, 并设置产地及饮片厂药材加工组别, 评价道地药材不同初加工方法, 构建具有种下不同产地特征的DNA条形码, 以期为生产临床质量稳定且优的秦艽药材(饮片)、多来源中药品种的科学评价及道地药材溯源及生产等提供科学资料。

材料与方法

收起

试验样地 在丽江市玉龙县粗茎秦艽传统种植区域选择试验样地一块(图 1)。

原药材基原植物分类学鉴定 试验样地已种植3年生粗茎秦艽药材, 采集样地栽培植物花期标本, 采集日期: 2020年8月20日, 采集号: 赵志礼、张玉萱等2020YN001。另确定当地栽培环境相近的二年生粗茎秦艽种植地一块, 采集二年生栽培植株标本, 采集日期: 2020年8月20日, 采集号: 赵志礼、张玉萱等2020YN003。同时, 考察并采集丽江粗茎秦艽野生居群样本, 样点: 丽江市玉龙县白沙镇, 山坡草地, 海拔3 090 m, 采集日期: 2020年8月21日, 采集号: 赵志礼、张玉萱等2020YN005 (图 1, 表 1)。凭证标本均经植物分类学鉴定后存放于上海中医药大学中药学院药物植物标本室。

原药材初加工方法 2020年12月3~4日试验样地三年生药材采挖; 同时取二年生粗茎秦艽药材适量做对比, 产地与饮片厂分别加工处理。干燥方式为自然晾晒或加热烘干(温度不高于45 ℃); 炮制加工方法: ①发汗处理或不经发汗处理; ②切片或不切片; ③饮片厂加工处理时, 去芦头。实验分组情况: 饮片厂处理: 晾晒组(原个子, 切片)、烘干组(原个子, 切片)、发汗组(原个子, 切片)。产地处理: 三年生晾晒组(原个子, 切片)、三年生烘干组(原个子, 切片)、二年生烘干组(原个子)。所有样品含水量均低于10%, 入饮片厂常温药材库房贮藏备用。详见表 2。

丽江产药材的DNA条形码 为确保溯源工作的准确性及可操作性, 构建粗茎秦艽物种DNA条形码(另文发表) 及云南丽江产粗茎秦艽DNA条形码。步骤: ①基于课题组前期已获得粗茎秦艽自然分布区8个样点标本及丽江栽培植株标本的叶绿体基因组9条完整序列(GenBank登录号见表 1), 筛选出位于trnC-GCA-petN、atpB-rbcL、psbN、ndhB-rps7及ycf1片段上的鉴定位点。②取上述丽江试验样地A~K各药材样品, 各平行制备3份, 2020YN005丽江野生植物3株, 分别测定相关序列; 同时, 再分别制备西藏、四川、青海、甘肃、贵州、云南丽江栽培品及野生样品各2份(前期已获得各自相关序列1组, 总计3份), 测序进行验证, 以构建丽江产药材的DNA条形码; 引物见表 3, 样品及相关序列GenBank登录号等见表 1、2。

药品与试剂 对照品龙胆苦苷(批号Y30J9Q66926)、马钱苷酸(批号K17S11B124207), 獐牙菜苦苷(批号Y25J10H91429)、獐牙菜苷(批号P25010F101344)、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷(批号P07D9S76867), 质量分数均 > 98%, 购于上海研谨生物科技有限公司; 乙腈和冰醋酸为色谱纯, 其他试剂为分析纯, 购自国药集团化学试剂有限公司。

不同方法处理后各组药材的指标性成分含量测定 参考《中国药典》秦艽项下相关方法^[1]进行指标性成分含量测定。

HPLC指纹图谱构建 供试品溶液制备: 各组样品粉碎后过三号筛, 具体步骤参考相关文献^[1]; 各组样品分别平行制备3份供试品溶液。混合对照品溶液制备: 精密称取马钱苷酸、龙胆苦苷、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷5种对照品适量, 分别加甲醇溶解。各吸取上述对照品母液适量, 加甲醇制成含马钱苷酸0.228 4 mg·mL^-1、龙胆苦苷0.642 4 mg·mL^-1、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷0.123 6 mg·mL^-1、獐牙菜苦苷0.091 2 mg·mL^-1、獐牙菜苷0.020 04 mg·mL^-1的混合对照品溶液。色谱条件: 参考课题组前期工作^[15]。指纹图谱分析: 精密吸取混合对照品溶液10 μL, 注入液相色谱仪, 每个样品重复2次进样检测, 进样量均为10 μL。中药指纹图谱相似度系统评价软件(2012A) 对样品的HPLC色谱图进行分析。

主成分分析(PCA) 将所有样品数据共有峰的相对峰面积作为变量导入SIMCA 14.1统计软件进行PCA建模, 提取出2个贡献率较大的主成分, 解释了原始数据的80.4%, 以此2个新变量对样品进行分析。

结果

收起

1 试验样地的确定

丽江鲁甸乡拉美荣确定长方形样地一块, 海拔2 858 m, 地理坐标N27°9.513′, E99°29.055′, 面积约450 m²; 已种植粗茎秦艽(三年生)。

2 药材基原植物分类学位置

经查阅模式标本、参考相关分类学文献并进行分类学鉴定, 丽江鲁甸乡拉美荣试验样地栽培植物及丽江野生居群标本的系统学位置: 龙胆科龙胆属Gentiana秦艽组Sect. Cruciata粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.。

3 种下不同产地样品DNA条形码的构建

共得到trnC-GCA-petN、atpB-rbcL、psbN、ndhB-rps7及ycf1相关序列: 丽江试验样地A~K各药材样品, 2020YN005丽江野生植物(平行3份), 36组180条; 另测定西藏、四川、青海、甘肃、贵州、云南丽江栽培品及野生粗茎秦艽样品(平行2份), 18组90条; 共计: 270条相关序列。结合课题组前期获得的粗茎秦艽自然分布区8个样点标本及丽江栽培植株标本的叶绿体基因组9条完整序列(GenBank登录号见表 1) 资料, 结果显示: 6个丽江产野生粗茎秦艽样本, 序列相互一致, 且在atpB-rbcL具一11 bp长度的特征性缺失, 与粗茎秦艽分布区内其他植株明显不同; 36个丽江产粗茎秦艽栽培品样本, 分3个基因型, 其中Ⅲ型与野生居群共享(表 4)。由此构建云南丽江产粗茎秦艽(野生与栽培品) 的DNA条形码(图 2)。

4 不同加工方法处理的样品龙胆苦苷、马钱苷酸含量

各组内马钱苷酸、龙胆苦苷含量的RSD值均分别 < 3%。按干燥品计算各组样品中指标性成分的含量见表 5。结果显示, 各组马钱苷酸、龙胆苦苷的总含量均大于《中国药典》规定的2.5%; 其中芦头组的总含量相对最低, 但也高达4.506%, 其中马钱苷酸的含量仅为0.410%; 其次为二年生的样品, 总含量为7.32%, 其中龙胆苦苷的含量小于5%, 低于所有三年生药材; 其余各组的总含量均大于8%, 龙胆苦苷的含量均在5%以上。所有组别中, 总含量最大的是发汗切片组(I)。与产地加工相比, 饮片厂加工样品的总含量整体稍高, 可能与其去除芦头有关。

5 HPLC指纹图谱与PCA得分图

将各组数据分别导入中药指纹图谱相似度系统评价软件(2012A) 进行分析, 时间窗宽度为0.3 s, 采用多点校正后进行自动匹配, 获得A~L组参照指纹图谱, 并依据各组参照指纹图谱生成共有模式, 确定9个共有峰(图 3)。将所有数据用相同方法获得整体共有模式, 同样可确定该9个共有峰。通过对照品定位, 指认其中2号峰为马钱苷酸、4号峰为獐牙菜苦苷、5号峰为6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、6号峰为龙胆苦苷、7号峰为獐牙菜苷(图 3)。将共有峰的相对峰面积进行相似度评价, 各组内相似度均大于0.999; 各组参照指纹图谱与共有模式相比, 芦头组(L) 为0.973, 二年生组(E) 为0.994, 其余各组均≥ 0.997。

PCA得分图见图 4。结果显示, 芦头组(L) 为单独一类; 所有切片样品聚为一簇; 而原个子样品分布较为分散。

讨论

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植物物种在形成与进化过程中, 不断应对环境胁迫; 同时, 物种自然分布区内多样的地形地貌、地理种群间小生态环境的差异性及植株的适应性应答等, 使道地药材形成成为可能。道地药材是人们传统公认且来源于特定产地的名优正品药材, 进一步揭示中药材道地性的科学内涵, 有许多工作要做^[16]。

秦艽基原植物之一——粗茎秦艽G. crassicaulis, 我国西南及西北为其自然分布区。云南丽江具有悠久的规模化栽培生产(粗茎) 秦艽药材的历史。本文在云南丽江栽培品、野生样品植物系统学位置溯源基础上, 对云南丽江粗茎秦艽道地药材遗传背景进行分析, 其栽培品分出3个基因型, 其中III型与野生居群共享。推断当地长期对野生种质栽培驯化, 栽培品系出现分化, 在遗传背景方面得到一定体现。下一步, 可开展不同基因型或品系之间的转录组与代谢组学等分析, 为揭示道地药材的科学内涵以及优质种质选育提供更为有力的证据。同时, 进一步扩大样品量, 验证、完善丽江产粗茎秦艽(野生与栽培品) 的DNA条形码方法, 使其在该药材生产、流通及临床应用中发挥应有的作用。

中药材的科学炮制与加工, 对临床药材的增效、减毒作用不言而喻。目前, 2020年版《中国药典》粗茎秦艽的加工炮制方法较为笼统: “鲜原药材-去泥沙-发汗或否-晒干; 干燥原药材洗净-润透-切厚片-干燥”^[1]。有报道, 秦艽药材中龙胆苦苷的保存量趁鲜清洗高于先干燥后清洗^[17], 干燥温度保持100 ℃, 龙胆苦苷的损失量最小^[18]。同时, 不同加工方法对药材整体化学谱的影响, 尚需要深入探讨。本文开展产地、饮片厂分别加工炮制, 分组比较工作, 结果显示, 纯芦头组马钱苷酸、龙胆苦苷总量低于饮片厂去芦头各组样品近50%, 其中马钱苷酸含量相对极低, 两种成分的比例为0.10; 而去芦头各组样品为0.37~0.45。由于产地各组样品均未去除芦头, 因此, 其各组样品的总量多低于饮片厂去芦头的各组样品。为提升药材品质, 建议将“去芦头”步骤列入粗茎秦艽道地药材的加工方法中。另外, 饮片厂发汗切片组, 马钱苷酸、龙胆苦苷总量为各组之首, 其成因值得进一步探讨。

PCA分析中, 无论是否发汗处理、干燥方式如何, 切片各组均聚为一簇, 而原个子各组(完整根) 散在分布。推测, 药材采挖后, 趁鲜切制, 干燥, 次生代谢产物谱的稳定性较好。

云南丽江产粗茎秦艽药材的生产模式常为一年育苗, 二年或三年采收药材。就二年生与三年生所测药材样品而言, 其指标性成分含量均高于《中国药典》标准; 指纹图谱亦显示两者之间次生产物的高度相似性。因此, 可视栽培成本及市场价格波动等具体情况, 适时采挖。

作者贡献: 季文静、张玉萱是本文的共同第一作者, 负责分子生物学实验、药材品质评价工作及稿件撰写; 李尉涛承担部分分子生物学实验; 竺琛欣、陈翔负责原药材饮片厂初加工处理工作; 杨少华负责原药材产地初加工处理工作; 赵志礼、倪梁红为本文的共同通讯作者, 负责样品采集、分类学鉴定, 研究工作总体设计及稿件修改等工作。

利益冲突: 本文的研究内容无任何利益冲突。

基金

收起

国家自然科学基金面上项目(82073959)
国家自然科学基金面上项目(81173654)
上海市卫生健康委员会中医药传承和科技创新项目(ZYCC2019012)

参考文献

收起

文献

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参考文献引证文献

排序方式：

[1]

Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China: Vol I (中华人民共和国药典: 一部)[S]. Beijing: China Medical Science Press, 2020: 282.

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2022年第57卷第2期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2021-1163

接收时间：2021-08-10
首发时间：2025-12-22
出版时间：2022-02-12

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作者

出版历史

收稿日期：2021-08-10
修回日期：2021-09-08

基金

国家自然科学基金面上项目(82073959)

国家自然科学基金面上项目(81173654)

上海市卫生健康委员会中医药传承和科技创新项目(ZYCC2019012)

作者信息

1.上海中医药大学, 上海 201203

2.上海康桥中药饮片有限公司, 上海 201315

3.云南省农业科学院高山经济植物研究所, 云南丽江 674100

通讯作者:

*赵志礼, Tel: 86-21-51322202, E-mail: zhilzhao@sohu.com;

倪梁红, Tel: 86-21-51322202, E-mail: nlhtcm@126.com

参考文献

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

Pop. ID	Voucher specimens	Locality	GenBank ID	Remark	Pop. ID	Voucher specimens	Locality	GenBank ID	Remark
ZP1	2020YN001	Lijiang, Yunnan	N	Cultivated	XZ2	XZ201214	Dingqing, Tibet	KY595458	Wild
ZP2	2020YN003	Lijiang, Yunnan	N	-	GS	GS201601	Maqu, Gansu	KY595459	-
YN1	2020YN005	Lijiang, Yunnan	N	Wild	GZ	GZ201601	Weining, Guizhou	KY595460	-
ZP	YN201301	Lijiang, Yunnan	KJ676538	Cultivated	SC1	SC201601	Kangding, Sichuan	KY595461	-
YN	YN201601	Lijiang, Yunnan	KY595463	Wild	SC2	SC201602	Daofu, Sichuan	KY595462	-
XZ1	2016XZ011	Changdu, Tibet	KY595457	-	QH	QH201405	Banma, Qinghai	KY606171	-

Pop.
ID

Voucher specimens

Locality

GenBank
ID

Remark

Pop.
ID

Voucher specimens

Locality

GenBank
ID

Remark

ZP1

2020YN001

Lijiang, Yunnan

Cultivated

XZ2

XZ201214

Dingqing, Tibet

KY595458

Wild

ZP2

2020YN003

Lijiang, Yunnan

GS201601

Maqu, Gansu

KY595459

YN1

2020YN005

Lijiang, Yunnan

Wild

GZ201601

Weining, Guizhou

KY595460

YN201301

Lijiang, Yunnan

KJ676538

Cultivated

SC1

SC201601

Kangding, Sichuan

KY595461

YN201601

Lijiang, Yunnan

KY595463

Wild

SC2

SC201602

Daofu, Sichuan

KY595462

XZ1

2016XZ011

Changdu, Tibet

KY595457

QH201405

Banma, Qinghai

KY606171

Sample ID	Processing base	"Sweating"	Whole root	Slices	Natural air drying	Stoving	Remark
A	In the locality	N	Y	N	N	Y	Triennial
B	-	N	N	Y	N	Y	-
C	-	N	Y	N	Y	N	-
D	-	N	N	Y	Y	N	-
E	-	N	Y	N	N	Y	Biennial
F	In factory in Shanghai	N	Y	N	N	Y	Triennial
G	-	N	N	Y	N	Y	-
H	-	Y	Y	N	Y	N	-
I	-	Y	N	Y	Y	N	-
J	-	N	Y	N	Y	N	-
K	-	N	N	Y	Y	N	-
L	-	N	N	N	Y	N	- (Rhizoma)

Sample ID

Processing base

"Sweating"

Whole root

Slices

Natural air drying

Stoving

Remark

In the locality

Triennial

Biennial

In factory in Shanghai

Triennial

- (Rhizoma)

Locus	Sequence (5' to 3')	Locus	Sequence (5' to 3')
trnC-GCA-petN	GGCGGCATGGCCGAGTGGTAAGGC	ndhB-rps7	GATCATCAGAAGAAGAATTAGGCC
	TCCACTTCTTCCCCATACTACGA		TGTCACGTCGAGGTACTGCAGAAG
atpB-rbcL	TTTCCTAATAATTGCTGTACC	ycf1	CGATGAGCCGAAGAACACC
	ACAGTTGTCCATGTACCAGTAG		GACGGGAATGAATGAGGAAATA
psbN	GAATTAGATCGTGCTACTTTGAA		AAGCATCGCCCCATCTCA
	CATTGCGACACCCATCAAAGGA		GACAACTTTTTCTCGACCCAATAA

Locus

Sequence (5' to 3')

Locus

Sequence (5' to 3')

trnC-GCA-petN

GGCGGCATGGCCGAGTGGTAAGGC

ndhB-rps7

GATCATCAGAAGAAGAATTAGGCC

TCCACTTCTTCCCCATACTACGA

TGTCACGTCGAGGTACTGCAGAAG

atpB-rbcL

TTTCCTAATAATTGCTGTACC

ycf1

CGATGAGCCGAAGAACACC

ACAGTTGTCCATGTACCAGTAG

GACGGGAATGAATGAGGAAATA

psbN

GAATTAGATCGTGCTACTTTGAA

AAGCATCGCCCCATCTCA

CATTGCGACACCCATCAAAGGA

GACAACTTTTTCTCGACCCAATAA

Sample ID	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J	K	L
Loganic acid	2.568	2.379	2.653	2.263	2.347	2.501	2.335	2.588	2.684	2.336	2.503	0.410
Gentiopicroside	5.665	5.777	5.496	5.783	4.976	5.572	6.26	5.787	6.263	6.132	6.173	4.096
Total	8.232	8.156	8.149	8.046	7.323	8.074	8.595	8.375	8.947	8.468	8.675	4.506

Sample ID

Loganic acid

2.568

2.379

2.653

2.263

2.347

2.501

2.335

2.588

2.684

2.336

2.503

0.410

Gentiopicroside

5.665

5.777

5.496

5.783

4.976

5.572

6.26

5.787

6.263

6.132

6.173

4.096

Total

8.232

8.156

8.149

8.046

7.323

8.074

8.595

8.375

8.947

8.468

8.675

4.506