药学学报

No.	δ_C	δ_H
1	127.4	-
2	112.9	7.77, d (1.9)
3	146.0	-
4	147.2	-
5	114.0	6.88, d (8.2)
6	125.8	7.10, dd (8.2; 2.0)
7	143.8	6.79, d (12.9)
8	117.0	5.81, d (12.9
9	166.8	-
OCH₃	56.1	3.93, s
1′	64.1	1.66-1.62, m
22′	14.3	0.88, t
2′-21′	22.8-32.1	1.2-1.7, m

No.	δ_C	δ_H
1	127.4	-
2	112.9	7.77, d (1.9)
3	146.0	-
4	147.2	-
5	114.0	6.88, d (8.2)
6	125.8	7.10, dd (8.2; 2.0)
7	143.8	6.79, d (12.9)
8	117.0	5.81, d (12.9
9	166.8	-
OCH₃	56.1	3.93, s
1′	64.1	1.66-1.62, m
22′	14.3	0.88, t
2′-21′	22.8-32.1	1.2-1.7, m

草麻黄根中一个新软木脂类化合物

PDF下载

张博文 ¹^,² , 李孟 ¹^,² , 王小兰 ¹^,² , 杨颖 ¹^,² , 周诗琪 ¹^,² , 陶思琦 ¹^,² , 杨梦 ¹^,² , 朱登辉 ¹^,² , 徐雅桐 ¹^,² , 冯卫生 ¹^,² , 郑晓珂 ¹^,²^,^*

药学学报 | 研究论文 2024,59(3): 661-666

收起

药学学报 | 研究论文 2024, 59(3): 661-666

草麻黄根中一个新软木脂类化合物

全屏

张博文¹^,², 李孟¹^,², 王小兰¹^,², 杨颖¹^,², 周诗琪¹^,², 陶思琦¹^,², 杨梦¹^,², 朱登辉¹^,², 徐雅桐¹^,², 冯卫生¹^,², 郑晓珂¹^,²^,^*

作者信息

1.河南中医药大学药学院, 河南郑州 450046

2.河南省中药开发工程技术研究中心, 河南郑州 450046

通讯作者:

^*郑晓珂, Tel / Fax: 86-371-60190296, E-mail: zhengxk.2006@163.com

A new suberin from roots of Ephedra sinica Stapf

Bo-wen ZHANG¹^,², Meng LI¹^,², Xiao-lan WANG¹^,², Ying YANG¹^,², Shi-qi ZHOU¹^,², Si-qi TAO¹^,², Meng YANG¹^,², Deng-hui ZHU¹^,², Ya-tong XU¹^,², Wei-sheng FENG¹^,², Xiao-ke ZHENG¹^,²^,^*

Affiliations

1. School of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China

2. The Engineering and Technology Center for Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China

出版时间: 2024-03-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-0729

文章导航

摘要

收起

采用硅胶柱色谱、薄层色谱和半制备液相等多种色谱学技术从草麻黄根中分离得到6个化合物。根据理化性质与波谱数据鉴定其结构, 分别为(Z)-阿魏酸二十二酯(1)、(E)-阿魏酸二十二酯(2)、邻苯二甲酸-双(2′-乙基庚基)酯(3)、2, 2′-氧代双(1, 4-二叔丁苯) (4)、邻苯二甲酸二异丁酯(5)、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(6)。其中化合物1为新化合物, 化合物2~4是首次从麻黄植物中分离得到。采用皮质酮诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC-12细胞) 细胞损伤模型进行化合物活性筛选, 结果表明, 化合物1和5能显著改善皮质酮诱导的PC-12细胞损伤, 并且显著升高细胞中5-HT₇ (5-hydroxytryptamine 7) 受体蛋白的表达, 具有潜在的抗抑郁活性。

关键词

麻黄根 / 化学成分 / 软木脂类 / (Z)-阿魏酸二十二酯 / 抗抑郁活性

Abstract

收起

Six compounds were isolated from the roots of Ephedra sinica Stapf using various chromatographic techniques such as silica gel column chromatography, thin layer chromatography and semi-preparative HPLC. Their chemical structures were identified by analysis of physicochemical properties and spectral data, and determined as (Z)-docosanylferulate (1), (E)-docosanylferulate (2), bis (2-ethylheptyl) phythalate (3), 2, 2′-oxybis (1, 4-di-tert-butylbenzene) (4), diisobutyl phthalate (5), bis (2-ethylhexyl) phthalate (6). Among them, compound 1 is a new compound, compounds 2-4 were first isolated from Ephedra. A corticosterone-induced PC-12 cell injury model was used for compound activity screening. The results showed that compounds 1 and 5 significantly improved corticosterone-induced PC-12 cell injury and significantly increased 5-HT₇ receptor protein expression in the cells, indicating potential antidepressant activity.

Key words

root of Ephedra sinica Stapf / chemical constituent / suberin / (Z)-docosanylferulate / antidepressant activity

引用本文

张博文, 李孟, 王小兰, 杨颖, 周诗琪, 陶思琦, 杨梦, 朱登辉, 徐雅桐, 冯卫生, 郑晓珂. 草麻黄根中一个新软木脂类化合物. 药学学报, 2024 , 59 (3) : 661 -666 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-0729

Bo-wen ZHANG, Meng LI, Xiao-lan WANG, Ying YANG, Shi-qi ZHOU, Si-qi TAO, Meng YANG, Deng-hui ZHU, Ya-tong XU, Wei-sheng FENG, Xiao-ke ZHENG. A new suberin from roots of Ephedra sinica Stapf[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (3) : 661 -666 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-0729

正文

收起

麻黄根别名苦椿菜, 为麻黄科植物草麻黄(Ephedra sinica Stapf) 或中麻黄(Ephedra intermedia Schrenk et C. A. Mey.) 的干燥根和根茎, 为传统中药, 收载于《中华人民共和国药典》^[1]。麻黄根的现代药理活性主要表现为降压^{[2, 3]}、抗肿瘤^{[4, 5]}、抗炎^[6]和抗氧化^[7]。此外, 相关研究表明, 麻黄根的化学成分主要为生物碱类^{[8, 9]}、黄酮类^{[10, 11]}、酚酸类^[12]和多糖类^[13]等。由于目前对麻黄根化学成分研究较少, 其活性研究也相当薄弱, 这严重遏制了麻黄根的开发利用。为了充分利用我国丰富的麻黄资源, 进一步开发麻黄新的药用价值, 寻找新的活性成分, 本实验选取麻黄根作为研究对象, 对其化学成分进行系统分离与鉴定, 从中分离得到了6个化合物, 包括2个软木脂类化合物, 结构见图 1。化合物1为新化合物, 命名为(Z)-阿魏酸二十二酯, 化合物2~4是首次从麻黄植物中分离得到。化合物1和5对皮质酮诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用。

结果与讨论

收起

1 结构鉴定

化合物1白色无定形粉末, 易溶于二氯甲烷。UV (MeOH) λ_max (log ε) 202 (1.11)、321 (1.67) nm; IR图谱中显示有甲基(2 925, 2 851 cm^-1) 和羰基(1 713 cm^-1) 基团特征吸收峰。HR-ESI-MS给出m/z 525.392 6 [M+Na]⁺ (计算值为525.392 0), 确定分子式为C₃₂H₅₄O₄, 计算不饱和度为6。¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) 谱中, δ_H 7.77 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 7.10 (1H, dd, J = 8.2, 2.0 Hz, H-6), 6.88 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5) 为苯环ABX偶合的3个芳香氢质子信号, 提示化合物1具有1, 3, 4三取代苯环; δ_H 6.79 (1H, d, J = 12.9 Hz, H-7) 和5.81 (1H, d, J = 12.9 Hz, H-8) 为顺式烯烃上的两个氢质子信号; δ_H 3.93 (3H, s, -OCH₃) 和δ_H 0.88 (3H, t, H-22′) 提示结构中含有1个甲氧基和1个甲基基团; 另外在δ_H 1.2~1.7为多个亚甲基的氢质子信号, 提示该化合物中可能含有脂肪链的结构片段。¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) 谱中, 显示16个碳信号, 结合DEPT-135和HSQC谱发现, 其中包括4个季碳信号[δ_C 166.8 (C-9), 147.2 (C-4), 146.0 (C-3), 127.4 (C-1)]、5个叔碳信号[δ_C 143.8 (C-7), 125.8 (C-6), 117.0 (C-8), 114.0 (C-5), 112.9 (C-2)]、2个伯碳信号[δ_C 56.1 (C-10), 14.3 (C-22′)] 以及多个仲碳信号。其中, δ_C 166.8 (C-9) 为羰基碳信号, δ_C 64.1 (C-1′) 为1个含氧亚甲基碳信号, δ_C 56.1 (C-10) 为一个甲氧基的碳信号, δ_C 14.3 (C-22′) 为1个甲基的碳信号。在HMBC谱中, δ_H 6.79 (H-7) 与C-2/C-8/C-6相关, 结合δ_H 5.81 (H-8) 与C-1/C-7/C-9相关, 可推测出顺式烯烃的C-7与苯环的C-1位相连, C-8与C-9位的羰基相连。另外, δ_H 3.93 (-OCH₃) 与C-3有直接相关, 可推测甲氧基连接在C-3位。此外, 结合HR-ESI-MS给出的化合物的分子式, 除去已知的分子骨架和脂肪链末端的甲基, 可推测脂肪链亚甲基的个数为20。化合物1的核磁数据与文献报道的已知化合物阿魏酸二十二酯的核磁数据对比^[14], 主要区别在于化合物1的C-7和C-8位的偶合常数不同(化合物1中J_{7, 8} = 12.9, 文献^[14]中阿魏酸二十二酯的J_{7, 8} = 16.0), 说明两者的C-7和C-8双键构型不同。基于以上分析, 确定化合物1结构为新化合物, 命名为(Z)-阿魏酸二十二酯, 数据归属见表 1。

2 抗抑郁活性研究

2.1 化合物1~6对皮质酮诱导的PC-12细胞损伤模型中细胞存活率的影响

通过使用CCK8法检测化合物1~6对皮质酮诱导的PC-12细胞损伤模型中细胞存活率, 结果如图 2所示。模型组与正常对照组相比, 细胞活力明显下降(P < 0.01); 与模型组相比, 化合物1和5可以明显地提高细胞活力(P < 0.05或P < 0.01), 改善皮质酮对PC-12细胞的损伤。

2.2 化合物1和5对皮质酮诱导的PC-12细胞损伤模型中5-HT₇蛋白表达的影响

5-HT₇受体为抑郁症、精神分裂症、偏头痛等疾病的重要治疗靶点^[15], 通过使用细胞免疫荧光法检测5-HT₇蛋白的表达, 结果如图 3A、B所示。与正常对照组相比, 模型组5-HT₇表达明显降低(P < 0.01); 与模型组相比, 化合物1和5在1 μmol·L^-1剂量下, 5-HT₇蛋白表达明显升高(P < 0.01), 提示化合物1和5有潜在的抗抑郁活性。

3 讨论

本研究从草麻黄根中分离得到的化合物3、5和6属于邻苯二甲酸酯类化合物, 查阅相关文献^[16-18], 在麻黄和其他植物中也见有相关报道, 这类化合物有可能是在分离过程中引入乙酸乙酯溶剂所带来^[19]。

实验部分

收起

Bruker AVANCE Ⅲ 500型核磁共振仪(TMS内标); Bruker maxis HD型飞行时间质谱(德国Bruker公司); LC-52型高压制备液相色谱仪(中国赛谱锐思北京科技有限公司); Thermo EVO300紫外分光光度计(美国Thermo Scientific公司); N-1300型旋转蒸发仪、A-1000S型水流抽气机、CA-1115型冷冻水循环装置(中国上海爱朗仪器有限公司); 酶标仪(美国BioTek公司), 高内涵成像分析系统(美国PerkinElmer公司); 薄层色谱硅胶GF254和硅胶G、柱色谱硅胶(100~200目, 200~300目, 青岛海洋化工厂); 制备型薄层层析硅胶板(中国烟台江友硅胶开发有限公司); 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC-12, 购于中国科学院上海细胞库; 皮质酮(中国上海阿拉丁生化, B2302817); 氟西汀(美国Med Chem Express公司, 251273); CCK8 (美国GLPBIO公司, 43); 5-HT₇抗体(中国武汉三鹰生物科技有限公司, 00058665); Tubulin抗体(GR3398636-5)、DAPI染色剂(GR3445296-5), 美国ABCAM公司。

山羊抗兔IgG H&L (Alexa Fluor^®488) 预吸附二抗(GR3449096-1); 山羊抗小鼠IgG H&L (Alexa Fluor^® 594) 预吸附二抗(美国ABCAM公司GR3413419-1); RPMI1640培养基(美国Invitrogen公司2315381); 胎牛血清(南美ExCell Bio公司12A218); 化合物1~6经检测纯度均为98%以上, 且使用DMSO溶解并低温保存; 甲醇(色谱纯, 天津四友精细化学品有限公司); 所用其他分析纯试剂均为天津市富宇精细化工有限公司及天津市致远化学试剂有限公司生产。

草麻黄根于2021年5月购自亳州药材市场, 经过河南中医药大学药学院董诚明教授鉴定为麻黄科植物草麻黄(Ephedra sinica Stapf) 的干燥根与根茎, 植物标本(No. 20210517) 保存于河南省中药资源与中药化学重点实验室。

1 提取分离

草麻黄根40 kg, 经水煎煮后, 药渣用95%乙醇提取2次, 提取液减压浓缩, 冷冻干燥, 得药渣提取物干重为727.7 g。提取物用水分散溶解, 依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取, 回收溶剂后得到石油醚部位211.6 g、二氯甲烷部位245.1 g、乙酸乙酯部位335.5 g、正丁醇部位62.5 g。

将二氯甲烷部位(170.0 g) 经硅胶柱色谱(100~200目) 分离, 先以不同体积比例的石油醚-乙酸乙酯洗脱(10∶1→1∶1), 继续以氯仿-甲醇梯度洗脱(100∶0→20∶1), TLC检识并合并相同流分得到15个组分, 即M1~M15。M13 (39.83 g) 经硅胶柱色谱(200~300目) 分离, 以石油醚-乙酸乙酯(20∶1→1∶1) 梯度洗脱, TLC检识并合并相同流分得到7个组分, 即M13-1~M13-7。M13-2 (1.25 g) 经硅胶柱色谱(200~300目) 分离, 以石油醚-乙酸乙酯(40∶1→30∶1) 梯度洗脱, TLC检识并合并相同流分得到6个组分, 即M13-2-1~13-2-6; M13-2-3制备薄层进一步分离纯化, 得到化合物1 (15.95 mg) 和2 (4.05 mg)。M13-1经硅胶柱色谱(200~300目) 分离, 以石油醚-乙酸乙酯(80∶1→20∶1) 梯度洗脱, TLC检识并合并相同流分得到化合物5 (20.96 mg)。M13-5经硅胶柱色谱(200~300目) 分离, 以二氯甲烷-甲醇(50∶1→30∶1) 梯度洗脱, TLC检识并合并相同流分得到2个组分, 即M13-5-1和M13-5-2; M13-5-1 (158.59 mg) 经硅胶柱色谱(200~300目) 分离, 以石油醚-乙酸乙酯(10∶1→3∶1) 梯度洗脱, TLC检识并合并相同流分得到5个组分, 即M13-5-1-1~13-5-1-5; M13-5-1-2 (37.57 mg) 经半制备型高效液相(甲醇-水80∶20) 得到化合物3 (0.99 mg, t_R = 28.5 min) 和化合物4 (1.35 mg, t_R = 39.9 min)。M13-6经硅胶柱色谱(200~300目) 分离, 以石油醚-乙酸乙酯洗脱(10∶1→3∶1), 继续以氯仿-甲醇梯度洗脱(100∶0→5∶1), TLC检识并合并相同流分得到10个组分, 即M13-6-1~13-6-10; M13-6-10 (4.02 g) 经Toyopearl HW-40C凝胶柱色谱分离, 以二氯甲烷-甲醇(50∶50) 等度洗脱, TLC检识并合并相同流分得到5个组分, 即M13-6-10-1~M13-6-10-5; M13-6-10-4 (46.74 mg) 经半制备型高效液相(甲醇-水90∶10) 得到化合物6 (0.76 mg, t_R = 21.9 min)。

2 结构鉴定

化合物1, 白色无定形粉末, 易溶于二氯甲烷; HR-ESI-MS m/z 525.392 6 [M+Na]⁺ (Calcd. 525.392 0), 分子式为C₃₂H₅₄O₄; IRν_max: 2 925, 2 851, 1 713, 1 472, 1 284 cm^-1; UV (MeOH) λ_max (logε): 202 (1.69), 323 (1.91) nm。¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) 和¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) 数据见表 1。

化合物2, 白色无定形粉末, 易溶于二氯甲烷, HR-ESI-MS m/z 525.392 1 [M+Na]⁺ (Calcd. 525.392 0), 分子式为C₃₂H₅₄O₄。¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 7.03 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 7.07 (1H, dd, J = 8.2, 1.9 Hz, H-6), 6.92 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5), 7.61 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7), 6.29 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8), 4.19 (2H, m, H-1′), 3.93 (3H, s, H-10), 0.88 (3H, t, H-22′), 1.2~1.7 (40H, m, (CH₂)₂₀); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 127.2 (C-1), 109.4 (C-2), 148.0 (C-3), 146.9 (C-4), 114.8 (C-5), 115.9 (C-6), 144.8 (C-7), 123.2 (C-8), 167.5 (C-9), 64.8 (C-1′), 56.1 (C-10), 14.3 (C-22′), 22.8~32.1 ((CH₂)₂₀)。以上数据与化合物1进行对比, 确定化合物为(E)-阿魏酸二十二酯。

化合物3, 无色无定形粉末, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z 441 [M+Na]⁺, 分子式为C₂₆H₄₂O₄。¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 7.71 (2H, dd, J = 5.7, 3.3 Hz, H-3, 6), 7.53 (2H, dd, J = 5.7, 3.3 Hz, H-4, 5), 4.22 (4H, m, H-1′, 1″), 1.68 (2H, m, H-2′, 2″), 1.42 (20H, m, 10×CH₂), 0.91 (12H, m, 4×CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 167.9 (C=O), 132.6 (C-1, 2), 131.0 (C-3, 6), 129.0 (C-4, 5), 68.3 (C-1′, 1″), 38.9 (C-2′, 2″), 30.5 (C-3′, 3″), 29.9 (C-4′, 4″), 29.0 (C-5′, 5″), 23.9 (C-6′, 6″), 23.1 (C-a′, a″), 14.2 (C-7′, 7″), 11.1 (C-b′, b″)。以上数据与文献^[20]进行对比, 确定化合物3为邻苯二甲酸-双(2′-乙基庚基)酯。

化合物4, 无色蜡状物, 易溶于二氯甲烷, ESI-MS m/z 417 [M+Na]⁺, 分子式为C₂₈H₄₂O。¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 7.53 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-6, 6′), 7.36 (2H, d, J = 2.2 Hz, H-3, 3′), 7.13 (2H, d, J = 8.6, 2.2 Hz, H-5, 5′), 1.33 (18H, s), 1.28 (18H, s); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 147.8 (C-1, 1′), 147.2 (C-2, 2′), 138.7 (C-4, 4′), 124.6 (C-3, 3′), 124.1 (C-5, 5′), 119.3 (C-6, 6′), 35.0 (C-7, 7′), 34.7 (C-11′, 11″), 31.6 (C-8, 8′, 9, 9′, 10, 10′), 30.4 (C-12, 12′, 13, 13′, 14, 14′)。以上数据与文献^[21]报道对照基本一致, 故鉴定化合物4为2, 2′-氧代双(1, 4-二叔丁苯)。

化合物5, 白色无定形粉末, 易溶于二氯甲烷, ESI-MS m/z 279 [M+H]⁺, 分子式为C₁₆H₂₂O₄。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ_H 7.74 (2H, d, J = 5.7, 3.3 Hz, H-2, 5), 7.36 (2H, d, J = 5.7, 3.3 Hz, H-3, 4), 4.07 (2H, d, J = 6.6 Hz, H-1′, 1″), 2.03 (2H, m, H-2′, 2″), 1.00 (12H, s, H-3′, 3″, 4′, 4″); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) δ_C 169.2 (C=O), 133.4 (C-1, 6), 132.2 (C-3, 4), 129.9 (C-2, 5), 72.9 (C-1, 1′), 29.0 (C-2, 2′), 19.5 (C-3, 3′, 4, 4′)。以上数据与文献^[22]报道对照基本一致, 故鉴定化合物5为邻苯二甲酸二异丁酯。

化合物6, 黄色油状物, 易溶于二氯甲烷, ESI-MS m/z 391 [M+H]⁺, 分子式为C₂₄H₃₈O₄。¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 7.70 (2H, dd, J = 5.7, 3.3 Hz, H-3, 6), 7.53 (2H, dd, J = 5.7, 3.3 Hz, H-4, 5), 4.22 (4H, m, H-9, 9′), 1.68 (2H, m, H-10, 10′), 1.35 (16H, m, H-11, 11′, 12, 12′, 13, 13′, 1′, 1″), 0.91 (12H, m, H-14, 14′, 2′, 2″); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 166.7 (C-7, 7′), 131.43 (C-1, 2), 129.8 (C-3, 6), 127.8 (C-4, 5), 67.1 (C-9, 9′), 37.7 (C-10, 10′), 29.3 (C-11, 11′), 27.9 (C-12, 12′), 22.7 (C-1′, 1″), 22.0 (C-13, 13′), 13.0 (C-14, 14′), 9.9 (C-2′, 2″)。以上数据与文献^[23]报道对照基本一致, 故鉴定化合物6为邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯。

3 抗抑郁症活性实验

3.1 CCK8法检测细胞存活率

PC-12细胞置于5% CO₂、37 ℃恒温培养箱中, 同时使用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液进行培养, 从中选取最佳生长期的细胞, 用0.25%的胰蛋白酶消化, 终止消化后, 用含10%胎牛血清的RPMI1640配制成浓度为每毫升1×10⁴个的细胞悬液, 接种于96孔板上, 每孔100 μL细胞悬液, 放入培养箱中, 待细胞贴壁后, 将培养基换为不含血清的培养基。饥饿24 h后, PC-12细胞分为6组: 正常组(control, RPMI1640培养基中培养)、模型组(model, 皮质酮)、阳性对照组(氟西汀, 0.4 μmol·L^-1)、给药组(1~6) 高、中、低3个剂量实验组(1、0.5、0.25 μmol·L^-1)。每组6个复孔, 各组均培养24 h后, 更换新的培养基后, 每孔加入10 μL的CCK8溶液, 37 ℃孵育1.5 h后, 酶标仪450 nm下检测吸光度OD值。细胞存活率= (给药组OD值-空白组OD值)/(正常对照组OD值-空白组OD值)×100%。

3.2 细胞免疫荧光检测5-HT₇蛋白的表达

细胞接种方法同上, 化合物1和5给药剂量为1 μmol·L^-1, 该浓度为细胞存活率检测结果下的最佳浓度。每组6个复孔, 各组均培养24 h后弃培养基, PBS洗3次, 每次5 min。采用4%的多聚甲醛固定细胞20 min, PBS洗3次, 每次5 min; 采用含有0.1% Triton X-100的PBS室温孵育20 min对细胞进行通透, PBS洗3次, 每次5 min。用PBST配制的10%山羊血清室温封闭20 min, PBS洗3次, 每次3 min。加入一抗5-HT₇ (1∶500) 与Tubulin (1∶1 000)。4 ℃过夜, 回收一抗, PBST洗5次, 每次5 min。加入山羊抗兔IgG H&L (Alexa Fluor^®488) 预吸附二抗与山羊抗小鼠IgG H&L (Alexa Fluor^®594) 预吸附二抗(1∶1 000), 37 ℃下孵育1 h, PBST洗5次, 每次5 min。DAPI复染细胞核, PBS洗5次, 每次5 min。高内涵细胞成像系统488与597通道观测细胞荧光强度。

3.3 统计学分析

实验数据采用SPSS 18.0数据处理软件进行统计分析, 以平均值±标准差(

$ \overline{x} $

± s) 表示, 单因素ANOVA方差分析方法进行显著性检验, 以P < 0.05表示具有显著性差异, P < 0.01表示具有极显著性差异。

作者贡献: 张博文为本文第一作者, 负责实验实施、数据处理和论文撰写; 郑晓珂和李孟负责论文的审阅和提出写作的建议; 王小兰负责对化合物的活性进行筛选; 杨颖、周诗琪、陶思琦、杨梦、朱登辉、徐雅桐对提取分离和结构鉴定提供了一定帮助; 郑晓珂和冯卫生负责实验设计。

利益冲突: 所有作者均声明不存在利益冲突。

基金

收起

国家重点研发计划－中医药现代化研究(2019YFC1708802)
中央引导地方科技发展专项资金([2016]149)
河南省高层次人才特殊支持计划(ZYQR201810080)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

[1]

Yue LL, Wang LS, Cheng DY, et al. Research progress in Chinese medicine Ephedrae Radix et Rhizoma [J]. China Pharm (中国药师), 2015, 18: 1383-1386.

[2]

Yang YF, Lu Y, Wu GF, et al. Experimental study on the hypotensive effect of Ephedra root extracts on the spontaneously hypertensive rats [J]. Chin Hosp Pharm (中国医院药学杂志), 2010, 30: 1434-1436.

[3]

Yang YF, Lu Y, Wu GF, et al. Pharmacological screening of antihypertensive active sites of Ephedrae root [J]. Her Med (医药导报), 2010, 29: 860-862.

[4]

Tao HM, Wang LS, Cui Z, et al. Dimeric proanthocyanidins from the roots of Ephedra sinica [J]. Planta Med, 2008, 29: 1823-1825.

[5]

Tao HM. The Chemical Constituents of the Roots of Ephedra sinica Stapf and Asparagus filicinus Buch-Ham (麻黄根及羊齿天门冬化学成分研究) [D]. Changchun: Jilin University, 2009.

[6]

Kim IS, Park YJ, Sung SJ, et al. Ephedrannin A and B from roots of Ephedra sinica inhibit lipopolysaccharide-induced inflammatory mediators by suppressing nuclear factor-κB activation in RAW 264.7 macrophages [J]. Int Immunopharmacol, 2010, 10: 1616-1625.

[7]

Khan A, Jan G, Khan A, et al. In vitro antioxidant and antimicrobial activities of Ephedra gerardiana (root and stem) crude extract and fractions [J]. BMC Complement Altern Med, 2017, 2017: 4040254.

[8]

Tian NN, Yong XH, Zhu YX, et al. Mahuang (herbaceous stem of Ephedra spp. ): chemistry, pharmacodynamics, and pharmacokinetics [J]. China J Chin Mater Med (中国中药杂志), 2022, 47: 3409-3424.

[9]

Wu HZ, Lu Y, Ai LQ, et al. Research advance on chemical constituents and pharmacologicalactivites of Radix Ephedrae [J]. Asian Pac Tradit Med (亚太传统医药), 2008, 4: 150-153.

[10]

Tao HM, Zhu QH, Liu YH. Flavonoids from roots of Ephedra sinica [J]. Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2011, 42: 1678-1682.

[11]

Qi Y. Research on ultrasonic extraction process of total flavonoids from the roots of Ephedra sinica Stapf [J]. China Mod Med (中国当代医药), 2017, 24: 85-88.

[12]

Li ZJ, Li F, Fei L, et al. Extraction process of polyphenols from Ephedre sinica root [J]. Anim Feed Sci Technol (畜牧与饲料科学), 2020, 41: 87-91.

[13]

Tao HM, Wang DS, Cui ZC, et al. Chemical constituents from Ephedra root [J]. Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2010, 41: 533-536.

[14]

Sonar VP, Fois B, Distinto S, et al. Ferulic acid esters and with anolides: in search of Withania somnifera GABA_A receptor modulators [J]. J Nat Prod, 2019, 82: 1250-1257.

[15]

Huang S, Xu P, Shen DD, et al. GPCRs steer G_i and G_s selectivity via TM5-TM6 switches as revealed by structures of serotonin receptors [J]. Mol Cell, 2022, 82: 2681-2695.

[16]

E HC, Zhou W, Liu BS, et al. Secondary metabolites from the fungus Engyodontium album associated with the South China Sea starfish Anthenea pentagonula [J]. Chin J Mar Drugs (中国海洋药物), 2013, 32: 7-12.

[17]

Liu YB, Cheng XR, Tan JJ, et al. Chemical constituents of Toona ciliata var. pubescens [J]. Chin J Nat Med, 2011, 9: 115-119.

[18]

Miao SM, Zhang XB, Wang JL, et al. A review of the phytochemistry and pharmacological activities of Ephedra herb [J]. Chin J Nat Med, 2020, 18: 321-344.

[19]

Sun GB, Sun JR. Discussion about the natural existence and safety of phthalic acid esters [J]. J Chin Inst Food Sci Technol (中国食品学报), 2011, 11: 1-8.

[20]

Ma Y, Gui W. Chemical constituents from Dryopteris cryoitoana Kurata [J]. Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2006, 37: 1315-1317.

[21]

Zhang YY, Gan JY, Lu CS, et al. Studies on chemical constituents of Zhuang Medicine Alysicarpu svagnalis Herb [J]. J Chin Med Mater (中药材), 2021, 44: 1138-1141.

[22]

Feng WS, Li Q, Zheng XK. Studies on chemical constituents of Lysionotus pauciflorus [J]. Chin Pharm J (中国药学杂志), 2007, 42: 337-338.

[23]

Nu F, Xie GB, Cui Z, et al. Chemical constituents from roots of Semiaquilegia adoxoides [J]. J Chin Pharm Sci, 2006, 15: 251-254.

2024年第59卷第3期

PDF下载

106

引用本文

BibTeX

文章信息

doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-0729

接收时间：2023-06-08
首发时间：2025-11-28
出版时间：2024-03-12

补充材料

相关文章

文章信息

作者

出版历史

收稿日期：2023-06-08
修回日期：2023-08-21

基金

国家重点研发计划－中医药现代化研究(2019YFC1708802)

中央引导地方科技发展专项资金([2016]149)

河南省高层次人才特殊支持计划(ZYQR201810080)

作者信息

1.河南中医药大学药学院, 河南郑州 450046

2.河南省中药开发工程技术研究中心, 河南郑州 450046

通讯作者:

^*郑晓珂, Tel / Fax: 86-371-60190296, E-mail: zhengxk.2006@163.com

参考文献

分享链接

https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2023-0729

分享至

全文二维码

扫描看全文

引用本文

BibTeX

本文的引用情况

2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

关闭全屏

BibTeX
EndNote
RefWorks
TxT