药学学报


8a	-H	-H	> 32	-
8b	-CH₃	-H	1.7	-
8c	-CH₂CH₃	-H	> 32	-
8d	-H	-CH₂CH₃	1.1	-
8e	-H		2.0	-
8f	-H		4.0	-
8g	-H		0.3	> 64
8h	-H		0.4	> 64
8i	-H		1.0	-
8j	-H		> 32	-
8k	-H		> 32	-
8l	-H	-F	31.7	-
8m	-H	-Cl	14.2	-
8n	-H	-Br	6.8	-
8o	-CH₃	-F	1.9	-
8p	-F	-F	> 32	-
8q	-Cl	-Cl	0.2	> 64
8r	-Cl	-F	0.5	> 64
8s	-H	-OH	> 32	-
8t	-H	-OCH₃	> 32	-
8u	-H	-CF₃	32.0	-
8v	-H		0.9	> 64
8w	-H		0.5	-
8x	-H		3.9	-
INH	-	-	0.07	-

Compd.

R₂

R₃

H₃₇Rv MIC/μg·mL^-1

Vero IC₅₀/μg·mL^-1

-H

> 32

-CH₃

-H

1.7

-CH₂CH₃

-H

> 32

-H

-CH₂CH₃

1.1

-H

2.0

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4.0

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0.3

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0.4

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> 32

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31.7

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0.9

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8a	-H	-H	> 32	-
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H₃₇Rv MIC/μg·mL^-1

Vero IC₅₀/μg·mL^-1

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-H

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-CH₂CH₃

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-Cl

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> 32

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32.0

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0.9

> 64

-H

0.5

-H

3.9

INH

0.07


9a		0.2	> 64
9b		32.0	-
9c		1.0	> 64
9d		0.9	42.8
9e		0.5	39.3
9f		0.2	> 64
9g		7.7	-
INH	-	0.07	-

Compd.

R₁

H₃₇Rv MIC/μg·mL^-1

Vero IC₅₀/μg·mL^-1

0.2

> 64

32.0

1.0

> 64

0.9

42.8

0.5

39.3

0.2

> 64

7.7

INH

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Compd.

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H₃₇Rv MIC/μg·mL^-1

Vero IC₅₀/μg·mL^-1

0.2

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> 64

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42.8

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INH

0.07

No.	Mouse		Human		CYP inhibition IC₅₀/μmol·L^-1	hERG K⁺ IC₅₀/μmol·L^-1
8g	7.2	5.6		33.6	53.8		-	-	-
8h	> 93.2	80.1	40.6	59.9	> 50	> 50	> 10
8q	29.5	49.4	53.5	67.8	> 50	> 50	> 10
9f	< 4.5	0.1	14.2	23.1	-	-	> 10

No.

Mouse

Human

CYP inhibition
IC₅₀/μmol·L^-1

hERG K⁺
IC₅₀/μmol·L^-1

t_1/2/min

% remaining

t_1/2/min

% remaining

3A4/5

2C9

7.2

5.6

33.6

53.8

> 93.2

80.1

40.6

59.9

> 50

> 10

29.5

49.4

53.5

67.8

> 50

> 10

< 4.5

0.1

14.2

23.1

> 10

No.	Mouse		Human		CYP inhibition IC₅₀/μmol·L^-1	hERG K⁺ IC₅₀/μmol·L^-1
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CYP inhibition
IC₅₀/μmol·L^-1

hERG K⁺
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% remaining

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2-芳基取代苯并硫代吡喃酮类化合物的设计、合成及其抗结核活性研究

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唐霞霞 ¹ , 李文艺 ¹ , 李鹏 ¹ , 王彬 ² , 陆宇 ² , 黄海洪 ¹^,^* , 李刚 ¹^,^*

药学学报 | 研究论文 2024,59(4): 987-996

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药学学报 | 研究论文 2024, 59(4): 987-996

2-芳基取代苯并硫代吡喃酮类化合物的设计、合成及其抗结核活性研究

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唐霞霞¹, 李文艺¹, 李鹏¹, 王彬², 陆宇², 黄海洪¹^,^*, 李刚¹^,^*

作者信息

1.中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 中国医学科学院抗耐药结核创新药物研究重点实验室, 活性物质发现与适药化研究北京市重点实验室, 北京 100050

2.北京市结核病胸部肿瘤研究所, 耐药结核病研究北京市重点实验室, 北京 101149

通讯作者:

^*黄海洪, Tel/Fax: 86-10-63165244, E-mail: joyce@imm.ac.cn;

李刚, Tel/Fax: 86-10-63165254, E-mail: ligang@imm.ac.cn

Design, synthesis and antituberculosis activity of 2-aryl substituted benzothiopyranone compounds

Xia-xia TANG¹, Wen-yi LI¹, Peng LI¹, Bin WANG², Yu LU², Hai-hong HUANG¹^,^*, Gang LI¹^,^*

Affiliations

1. Chinese Academy of Medical Sciences Key Laboratory of Anti-DR TB Innovative Drug Research, Beijing Key Laboratory of Active Substance Discovery and Druggability Evaluation, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China

2. Beijing Key Laboratory of Drug Resistance Tuberculosis Research, Beijing Tuberculosis and Thoracic Tumor Research Institute, Beijing 101149, China

出版时间: 2024-04-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-1380

文章导航

摘要

收起

本研究基于前期获得的具有显著抗结核活性的苯并硫代吡喃酮骨架, 设计合成了一系列2位芳基取代的苯并硫代吡喃酮类化合物, 并对其进行抗结核活性及初步成药性评价。结果表明, 大多数化合物对结核分枝杆菌H₃₇Rv具有良好的抑制活性, 其中化合物8g、8h、8q和9f的抗结核活性较强(MIC = 0.2~0.4 μg·mL^-1)。另外, 活性化合物无明显细胞毒性和心脏毒性风险, 化合物8h和8q具有良好的肝微粒体代谢稳定性, 对肝药酶CYP 3A4/5和CYP 2C9无明显抑制作用, 适用于结核病治疗的联合用药方案。

关键词

2-芳基取代苯并硫代吡喃酮 / 设计合成 / 抗结核活性 / 初步成药性评价

Abstract

收起

A novel series of 2-aryl substituted benzothiopyranone compounds was designed and synthesized based on our previously obtained benzothiopyranone scaffold with significant antituberculosis activity. All target compounds were evaluated for their antimycobacterial activity and preliminary druggability was subsequently investigated for some selected compounds with good activity. The results indicated that most compounds showed good activity against Mycobacterium tuberculosis H₃₇Rv. Among them, compounds 8g, 8h, 8q and 9f showed potent activity with MIC ranged from 0.2 to 0.4 μg·mL^-1. Furthermore, some active compounds exhibited low cytotoxicity and cardiotoxicity risk. It is worth noting that compounds 8h and 8q with good liver microsome stability and low inhibition of CYPs 3A4/5 and 2C9 were suitable for combination drug regimen to treat tuberculosis.

Key words

2-aryl substituted benzothiopyranone / design and synthesis / antituberculosis activity / preliminary druggability evaluation

引用本文

唐霞霞, 李文艺, 李鹏, 王彬, 陆宇, 黄海洪, 李刚. 2-芳基取代苯并硫代吡喃酮类化合物的设计、合成及其抗结核活性研究. 药学学报, 2024 , 59 (4) : 987 -996 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-1380

Xia-xia TANG, Wen-yi LI, Peng LI, Bin WANG, Yu LU, Hai-hong HUANG, Gang LI. Design, synthesis and antituberculosis activity of 2-aryl substituted benzothiopyranone compounds[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (4) : 987 -996 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-1380

正文

收起

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, M. tuberculosis) 引起的一种危害人类健康和导致人类死亡的重大传染性疾病。世界卫生组织(WHO) 全球结核病报告显示, 2022年全球新发结核病患者约1 060万, 因结核病死亡的人数约130万人, 新冠疫情扭转了结核病死亡人数下降的趋势^[1]。中国是全球结核病高负担和耐多药结核病严重流行的国家之一, 结核病发病数排世界第三位。多药联用是治疗结核病的主要手段, 异烟肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇和利福平相继出现, 使得治疗敏感结核病疗程缩短到6个月。然而, 多药耐药结核病(multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB) 和利福平耐药结核病(rifampicin-resistant tuberculosis, RR-TB) 等耐药问题日渐严峻。据估计, 新发结核病患者中有3.3%为MDR/RR-TB患者, 2020年MDR/RR-TB患者治愈率仅为63%^[1], 临床亟需具有新型骨架和新颖作用机制的抗结核药物以治疗与控制耐药结核病^[2]。

全球抗耐药结核药物研发进展缓慢, 自1960s利福平上市以来, 至今仅有3个新药用于耐药结核的治疗, 即美国强生公司的贝达喹啉(bedaquiline)、日本大冢制药公司的德拉马尼(delamanid) 以及全球结核病药物研发联盟与比尔盖茨基金共同开发的普瑞马尼(pretomanid)^[3]。其中贝达喹啉作为结核分枝杆菌ATP合成酶抑制剂与多种抗结核药物联用都显示出良好的协同杀菌作用, 德拉马尼主要通过抑制分枝杆菌细胞壁的合成发挥作用, 对多种临床分离耐药菌株均有效, 普瑞马尼可以与贝达喹啉和利奈唑胺联用, 治疗特定高度耐药肺结核患者, 但贝达喹啉和德拉马尼均具有可能引起心脏QT间期延长等不良反应^[4]。目前, 中国还没有自主研发的抗耐药结核新药上市。

具有结核分枝杆菌抑制活性的天然产物结构类型多样, 包括有萜类、生物碱和黄酮等多类化合物, 对研发抗结核病新药具有重要意义^[5]。黄酮类化合物在自然界中广泛存在, 其抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗过敏、抗血栓形成和保护肝脏等多种生物活性已被广泛研究^[6-12]。Koysomboon等^[13]对Derris indica的根和茎进行提取分离, 得到了4种新的黄酮类化合物, 其中化合物1对结核分枝杆菌H₃₇Ra具有良好的抑制作用(MIC = 12.5 μg·mL^-1); Gu等^[14]从Valeriana laxiflora中提取得到两种黄酮类化合物2和3, 均具有一定的体外抗结核作用。此外, 发现多种黄酮类化合物呈现出较强的抗结核活性, 如化合物4和5, 相比天然产物中提取分离的化合物, 抗结核活性进一步提高(图 1)^[15]。

结核分枝杆菌细胞壁外膜的阿拉伯半乳聚糖层及阿拉伯甘露聚糖层的主要组成部分是一种以癸异戊烯磷酰基β-D-阿拉伯呋喃糖(DPA) 为重要前体的阿拉伯糖, 研究表明, DPA主要是在癸异戊烯磷酰基β-D-核糖-2′-差向异构酶(DprE1) 参与下差向异构化得到, 抑制DprE1的活性可阻碍细胞壁的合成最终达到杀灭结核分枝杆菌的目的^[16]。本课题组前期针对结核分枝杆菌细胞壁合成的关键酶DprE1开展了系统的新药发现工作, 运用骨架跃迁的药物分子设计策略, 获得了一类具有显著抗结核活性的苯并硫代吡喃酮类化合物^[17]。目前含有苯并硫代吡喃酮母核的化合物在抗结核领域的研究相对较少, 因此, 将苯并硫代吡喃酮作为优势骨架, 结合黄酮类天然产物及其衍生物的结构特征, 开展更为深入的构效关系研究, 有望获得结构新颖的具有抗结核活性的类天然产物。

本研究基于前期获得的苯并硫代吡喃酮优势骨架, 结合黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗菌等多样性生物活性, 在2位引入结构多样的苯基和杂芳基, 构建了结构新颖的2-芳基取代苯并硫代吡喃酮类化合物, 相比苯并吡喃酮母核, 硫原子比氧原子电负性更小, 亲脂性更强, 有利于通过结核分枝杆菌多层次的细胞壁, 进而发挥杀菌作用(图 2)。结构多样的芳基取代基的引入有利于调节目标化合物的活性和成药性。经过体外抗结核活性和初步成药性评价, 发现硫代黄酮类化合物8h和8q对结核分枝杆菌具有较强的抑制作用, 无明显细胞毒性和心脏毒性风险, 肝微粒体代谢稳定性良好, 对肝药酶主要亚型无明显抑制作用, 可作为抗结核先导化合物开展进一步的结构优化工作。

结果与讨论

收起

1 目标化合物的合成

目标化合物8a~8x和9a~9g采取合成路线1中所示的合成方法获得。中间体6参照课题组前期文献^[17]报道的合成方法, 即以2-氯-5-三氟甲基苯甲酸为起始原料, 经硝化、取代、水解脱羧、合环等多步反应合成乙硫醚中间体6, 然后通过氧化反应得到关键亚砜中间体7, 最后与不同类型的芳基硼酸或硼酸酯, 通过Suzuki偶联反应^[18]得到目标化合物8a~8x和9a~9g。

2 活性评价

2.1 体外抗结核活性和细胞毒性考察

本实验所有目标化合物均采用Microplate Alamar Blue Assay (MABA) 法测定体外抗结核活性, 采用MTT法考察化合物对Vero细胞的毒性。选取异烟肼(isoniazid, INH) 为阳性对照, 对所合成的目标化合物8a~8x和9a~9g进行了结核分枝杆菌标准菌株H₃₇Rv的抑制作用研究, 选取抑菌作用强的化合物进行了Vero细胞毒性评价。结果显示, 13个目标化合物呈现出明显的体外抗结核活性(MIC < 5 μg·mL^-1), 4个化合物具有较强的抗结核作用(MIC < 0.5 μg·mL^-1) 和较低的细胞毒性(IC₅₀ > 64 μg·mL^-1), 相关活性结果见表 1和2。

如表 1所示, 将苯基引入苯并硫代吡喃酮2位, 得到硫代黄酮类化合物8a, 无抗结核活性, 在苯环R₂取代基中引入甲基后, 化合物8b具有明显的抗结核活性(MIC = 1.7 μg·mL^-1)。当R₂改为体积更大的乙基时, 活性丧失(8c), 将乙基调整到苯环R₃取代基中, 化合物8d显示出明显的抗结核活性(MIC = 1.1 μg·mL^-1)。在此基础上, 进一步合成了不同体积大小的脂肪取代基化合物8e~8k。当R₂为H时, R₃分别为丙基(8e)、异丙基(8f) 和异丁基(8i) 取代的化合物能够保持活性, 丁基(8g, MIC = 0.3 μg·mL^-1) 和仲丁基(8h, MIC = 0.4 μg·mL^-1) 取代的化合物能够显著提高活性, 并且无明显细胞毒性(IC₅₀ > 64 μg·mL^-1)。当R₃为体积更大的叔丁基(8j) 和环己基(8k) 时, 活性丧失。为了进一步提高活性和改善硫代黄酮类化合物的成药性^{[19, 20]}, 通过在苯环R₂和R₃取代基中引入卤原子, 进而设计合成了卤素取代的化合物8l~8r。大部分卤代化合物具有明显的抗结核活性, 其中化合物8q (MIC = 0.2 μg·mL^-1) 和8r (MIC = 0.5 μg·mL^-1) 的活性显著提高, 且无明显细胞毒性(IC₅₀ > 64 μg·mL^-1)。进一步考察了取代基的电性对活性的影响, 研究发现苯环上带有强给电子基取代的化合物8s (R₃为羟基) 和8t (R₃为甲氧基), 或带有强吸电子基取代的化合物8u (R₃为三氟甲基) 无活性(MIC ≥ 32 μg·mL^-1), 而带有体积较大的乙酰基取代的化合物8v具有较强的活性(MIC = 0.9 μg·mL^-1)。最后通过引入体积较大的极性基团, 考察氮杂环的引入对活性的影响, 发现哌啶甲基取代的化合物8w (MIC = 0.5 μg·mL^-1) 具有良好的抗结核活性。

为进一步发现结构更加新颖、具有抗结核活性和成药性的苯并硫代吡喃酮类化合物, 在母核2位引入了不同类型的杂芳基, 设计合成了目标化合物9a~9g (表 2)。结果显示, 含五元杂芳基的化合物9a~9c具有中等到良好的抗结核活性, 其中带有大体积取代吡咯环的化合物9a具有最优的活性(MIC = 0.2 μg·mL^-1) 和较低的细胞毒性(IC₅₀ > 64 μg·mL^-1)。六元杂芳基取代的化合物9d和9e均呈现良好的抗结核作用, 但同时显示出一定的细胞毒性。带有体积更大的喹啉基团化合物9f (MIC = 0.2 μg·mL^-1) 的抗结核活性优于含有体积稍小的骈环基团化合物9g (MIC = 7.7 μg·mL^-1), 且无细胞毒性作用, 值得开展初步成药性评价。

2.2 初步成药性评价

选取具有较强抗结核活性和较低细胞毒性的化合物8g、8h、8q和9f进行了肝微粒体代谢稳定性、hERG K⁺通道抑制活性以及肝药酶CYPs 3A4/5和2C9抑制作用评价, 初步考察了优选化合物的成药性(表 3)。结果显示, 苯并硫代吡喃酮的苯环上含有仲丁基取代的化合物8h和二氯取代的化合物8q在小鼠和人源肝微粒体中均呈现出良好的稳定性, 优于正丁基取代化合物8g和苯并硫代吡喃酮的2位为喹啉基的化合物9f, 其中化合物8h在小鼠肝微粒体中最稳定(t_1/2 > 93.2 min), 而化合物8q在人源肝微粒体中最稳定(t_1/2 = 53.5 min)。以上化合物均未发现明显的hERG K⁺通道抑制作用(IC₅₀ > 10 μmol·L^-1), 预示所合成化合物的潜在心脏毒性风险较低。选择代谢稳定性更优的8h和8q开展对主要肝药酶的抑制作用评价, 结果显示这两个化合物对CYPs 3A4/5和2C9均无明显抑制作用(IC₅₀ > 50 μmol·L^-1), 提示所合成化合物发生药物-药物相互作用的风险较低, 适用于结核病的联合用药治疗。

小结

收起

综上所述, 本文基于前期发现的具有抗结核活性的苯并硫代吡喃酮优势骨架, 结合黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗菌等多样性生物活性, 设计合成了一系列结构新颖的2-芳基取代的苯并硫代吡喃酮类化合物31个, 考察了目标化合物的体外抗结核活性和初步成药性, 探索了构效关系规律。研究发现大部分化合物呈现一定的抑制结核分枝杆菌作用, 其中硫代黄酮类化合物8h和8q相比文献中报道的黄酮类化合物抗结核活性增强, 细胞毒性减弱, 无潜在心脏毒性风险, 具有良好的成药性, 值得开展进一步研究。以上结果为硫代黄酮类化合物在抗结核药物研发领域的应用奠定了基础。

实验部分

收起

熔点仪用日本Yanaco M.P-J3型熔点测定仪, 温度未校正。液质联用仪为Agilent 1100 series LC/MSD trap mass spectrometer (ESI-MS)。核磁共振仪为BRUKER-400或600型核磁共振仪。快速制备液相色谱仪为Biotage isolera one型制备色谱仪, 使用预装硅胶柱(12 g, 40~60 μm, 60 Å) 购自北京橙达仪器有限公司。硅胶板(HSGF₂₅₄型) 购自烟台化学工业研究所。紫外分析仪(ZF-5型) 254 nm显色。所有溶剂均为市售化学纯或分析纯, 无特殊说明, 一般不经纯化处理直接使用。

1 化学部分

1.1 中间体的合成

中间体6的合成参考本课题组前期的相关文献^[17]合成, 得到黄色固体, mp: 88~90 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.12 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.84 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 3.21 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.47 (t, J = 7.6 Hz, 3H)。

中间体7的合成将中间体6 (503 mg, 1.5 mmol) 溶于1.5 mL乙酸中, 加入1 mol·L^-1的双氧水/乙酸溶液(1.8 mL, 1.8 mmol), 在60 ℃下反应12 h, TLC检测(乙酸乙酯∶石油醚= 1∶4) 原料基本反应完全。加入50 mL蒸馏水后用二氯甲烷(25 mL×2) 萃取, 合并有机相, 水洗两次后, 依次用饱和硫代硫酸钠溶液, 饱和碳酸氢钠水溶液及饱和氯化钠水溶液洗涤一次, 无水硫酸钠干燥, 过滤, 浓缩, 硅胶柱色谱分离(乙酸乙酯∶石油醚= 20∶80), 得到黄色固体490 mg, 收率: 50%。mp: 133~135 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.94 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 3.32~3.22 (m, 1H), 3.11~3.01 (m, 1H), 1.39 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

1.2 目标化合物8a~8x的合成

目标化合物8a的合成将中间体7 (200 mg, 0.57 mmol) 溶于5 mL N, N-二甲基甲酰胺中, 依次加入苯硼酸(139 mg, 1.14 mmol)、Pd(OAc)₂ (14 mg, 0.057 mmol)、XPhos (28 mg, 0.057 mmol) 和Zn(OTf)₂ (44 mg, 0.114 mmol), 氩气保护下, 在80 ℃加热条件下反应6 h。TLC检测(乙酸乙酯∶石油醚= 1∶4) 大部分原料反应完全后, 将反应液倾倒入25 mL蒸馏水中, 乙酸乙酯(15 mL×2) 萃取, 合并有机相, 饱和氯化钠溶液洗涤两次, 水洗涤两次, 无水硫酸钠干燥, 过滤, 浓缩, 硅胶柱色谱分离(二氯甲烷∶石油醚= 50∶50) 得到黄色固体120 mg, 产率60%。mp: 194~195 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.89~7.85 (m, 2H), 7.69~7.64 (m, 2H), 7.64~7.60 (m, 1H), 7.43 (s, 1H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ 177.5, 153.7, 145.4, 137.5, 135.2, 133.1, 131.8, 130.7 (J_{F, C} = 3 Hz), 129.7, 127.6 (J_{F, C} = 29 Hz), 127.2, 126.5 (J_{F, C} = 3 Hz), 122.7, 122.7 (J_{F, C} = 226 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₉O₃NF₃S [M+H]⁺计算值352.024 97, 测量值352.024 87。

目标化合物8b的合成以2-甲基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率15%。mp: 145~147 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.47~7.33 (m, 4H), 7.07 (s, 1H), 2.32 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.1, 156.0, 144.9, 138.8, 136.0, 135.1, 134.2, 132.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 131.3, 130.7, 129.6 (J_{F, C} = 35 Hz), 129.2, 126.5, 126.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 126.1, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 20.0。HR-MS-ESI: m/z C₁₇H₁₁O₃NF₃S [M+H]⁺计算值366.040 63, 测量值366.040 83。

目标化合物8c的合成以2-乙基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率30%。mp: 162~163 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.24 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.51~7.45 (m, 1H), 7.41~7.39 (m, 1H), 7.33 (brs, 1H), 7.32 (brs, 1H), 7.03 (s, 1H), 2.72 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.23 (t, J = 7.6 Hz, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.0, 156.1, 144.8, 142.2, 138.8, 134.6, 134.2, 132.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 130.9, 129.6, 129.6 (J_{F, C} = 35 Hz), 129.4, 126.4, 126.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 126.1, 122.6 (J_{F, C} = 272 Hz), 26.2, 16.0。HR-MS-ESI: m/z C₁₈H₁₃O₃NF₃S [M+H]⁺计算值380.056 28, 测量值380.056 03。

目标化合物8d的合成以4-乙基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率11%。mp: 155~156 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.21 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.70~7.63 (m, 2H), 7.42~7.36 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 2.75 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.30 (t, J = 7.6 Hz, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.3, 155.3, 148.9, 145.1, 138.3, 134.2, 133.2, 132.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.5 (J_{F, C} = 36 Hz), 129.3, 127.4, 126.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.7, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 28.9, 15.4。HR-MS-ESI: m/z C₁₈H₁₃O₃NF₃S [M+H]⁺计算值380.056 28, 测量值380.056 03。

目标化合物8e的合成以4-丙基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率54%。mp: 147~148 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.20 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.68~7.63 (m, 2H), 7.39~7.34 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 2.72~2.65 (m, 2H), 1.75~1.66 (m, 2H), 0.98 (t, J = 7.4 Hz, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.3, 155.3, 147.4, 145.1, 138.3, 134.2, 133.2, 132.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.8, 129.5 (J_{F, C} = 35 Hz), 127.3, 126.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.7, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 38.0, 24.4, 13.9。HR-MS-ESI: m/z C₁₉H₁₅O₃NF₃S [M+H]⁺计算值394.071 93, 测量值394.071 63。

目标化合物8f的合成以4-异丙基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率60%。mp: 159~160 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.21 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.28 (s, 1H), 3.04~2.99 (m, 1H), 1.31 (d, J = 6.8 Hz, 6H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.3, 155.3, 153.4, 145.1, 138.3, 134.2, 133.3, 132.4 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.5 (J_{F, C} = 35 Hz), 127.9, 127.4, 126.2 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.7, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 34.3, 23.9。HR-MS-ESI: m/z C₁₉H₁₅O₃NF₃S [M+H]⁺计算值394.071 93, 测量值394.071 75。

目标化合物8g的合成以4-正丁基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率34%。mp: 143~144 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.19 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.27 (s, 1H), 2.73~2.66 (m, 2H), 1.68~1.60 (m, 2H), 1.43~1.34 (m, 2H), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.4, 155.3, 147.6, 145.1, 138.3, 134.2, 133.1, 132.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.8, 129.5 (J_{F, C} = 35 Hz), 127.3, 126.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.7, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 35.7, 33.5, 22.5, 14.1。HR-MS-ESI: m/z C₂₀H₁₇O₃NF₃S [M+H]⁺计算值408.087 58, 测量值408.086 58。

目标化合物8h的合成以4-(1-甲基丙基)苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率17%。mp: 128~129 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.83~7.79 (m, 2H), 7.49~7.44 (m, 2H), 7.43 (s, 1H), 2.72 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 1.65~1.68 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 7.4 Hz, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 177.6, 153.8, 151.6, 145.4, 137.6, 133.2, 132.8, 130.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 128.3, 127.6 (J_{F, C} = 34 Hz), 127.2, 126.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 122.1, 40.8, 30.3, 21.5, 12.1。HR-MS-ESI: m/z C₂₀H₁₇O₃NF₃S [M+H]⁺计算值408.087 58, 测量值408.087 62。

目标化合物8i的合成以4-异丁基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率73%。mp: 160~161 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.43 (s, 1H), 2.56 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.96 ~ 1.86 (m, 1H), 0.90 (d, J = 6.8 Hz, 6H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.3, 155.3, 146.4, 145.1, 138.3, 134.2, 133.2, 132.5 (J_{F, C} = 34 Hz), 130.5, 129.5 (J_{F, C} = 35 Hz), 127.2, 126.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.7, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 45.3, 30.3, 22.5。HR-MS-ESI: m/z C₂₀H₁₇O₃NF₃S [M+H]⁺计算值408.087 58, 测量值408.089 36。

目标化合物8j的合成以4-叔丁基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率45%。mp: 172~173 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.21 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.29 (s, 1H), 1.38 (s, 9H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 177.5, 154.8, 153.6, 145.4, 137.5, 133.1, 132.4, 130.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 127.5 (J_{F, C} = 34 Hz), 127.0, 126.5, 126.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.7 (J_{F, C} = 271 Hz), 122.1, 34.8, 30.8。HR-MS-ESI: m/z C₂₀H₁₇O₃NF₃S [M+H]⁺计算值408.087 58, 测量值408.088 56。

目标化合物8k的合成以4-环己基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率18%。mp: 200~201 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.20 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.72~7.63 (m, 2H), 7.43~7.36 (m, 2H), 7.27 (s, 1H), 2.67~2.54 (m, 1H), 1.98~1.83 (m, 4H), 1.52~1.39 (m, 4H), 1.36~1.20 (m, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.3, 155.3, 152.6, 145.1, 138.3, 134.2, 133.2, 132.4 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.5 (J_{F, C} = 35 Hz), 128.2, 127.3, 126.2 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.7, 122.7 (J_{F, C} = 271 Hz), 44.6, 34.3, 26.8, 26.1。HR-MS-ESI: m/z C₂₂H₁₉O₃NF₃S [M+H]⁺计算值434.103 23, 测量值434.102 75。

目标化合物8l的合成以4-氟苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率27%。mp: 192~193 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.95 (brs, 2H), 7.47 (brs, 2H), 7.44 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.2, 165.0 (J_{F, C} = 252 Hz), 154.0, 145.1, 137.9, 134.1, 132.5 (J_{F, C} = 3 Hz), 132.0 (J_{F, C} = 3 Hz), 129.6 (J_{F, C} = 9 Hz), 129.7 (J_{F, C} = 35 Hz), 126.4 (J_{F, C} = 3 Hz), 123.3, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 117.0 (J_{F, C} = 22 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₈O₃NF₄S [M+H]⁺计算值370.015 55, 测量值370.017 09。

目标化合物8m的合成以4-氯苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率46%。mp: 187~188 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.92~7.87 (m, 2H), 7.71~7.65 (m, 2H), 7.45 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.2, 153.8, 145.1, 138.3, 137.9, 134.2, 134.1, 132.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 130.0, 129.8 (J_{F, C} = 35 Hz), 128.7, 126.4 (J_{F, C} = 4 Hz), 123.5, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₈O₃NClF₃S [M+H]⁺计算值385.986 00, 测量值385.984 59。

目标化合物8n的合成以4-溴苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率21%。mp: 169~171 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.82~7.80 (m, 4H), 7.43 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 177.5, 152.3, 145.3, 137.2, 134.3, 133.0, 132.6, 130.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.2, 127.7 (J_{F, C} = 35 Hz), 126.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 125.5, 122.9, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₈O₃NBrF₃S [M+H]⁺计算值429.935 49, 测量值429.936 77。

目标化合物8o的合成以4-氟-2-甲基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率65%。mp: 141~143 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.49~7.45(m, 1H), 7.30~7.27 (m, 1H), 7.22~7.17 (m, 1H), 7.08 (s, 1H), 2.33 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.0, 163.9 (J_{F, C} = 250 Hz), 155.0, 144.9, 139.0 (J_{F, C} = 9 Hz), 138.7, 134.2, 132.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 131.2 (J_{F, C} = 9 Hz), 131.2 (J_{F, C} = 3 Hz), 129.7 (J_{F, C} = 35 Hz), 126.5, 126.4 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz). 118.2 (J_{F, C} = 22 Hz), 113.8 (J_{F, C} = 22 Hz), 20.2。HR-MS-ESI: m/z C₁₇H₁₀O₃NF₄S [M+H]⁺计算值384.031 20, 测量值384.030 21。

目标化合物8p的合成以2, 4-二氟苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率43%。mp: 186~187 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.22 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.63~7.58 (m, 1H), 7.22 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.12~7.01 (m, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.0, 164.8 (J_{F, C} = 254 Hz, J_{F, C} = 12 Hz), 160.0 (J_{F, C} = 255 Hz, J_{F, C} = 12 Hz), 148.4 (J_{F, C} = 2 Hz), 144.9, 138.2, 134.0, 132.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 131.5 (J_{F, C} = 10 Hz, J_{F, C} = 3 Hz), 129.8 (J_{F, C} = 35 Hz), 126.9 (J_{F, C} = 4 Hz), 126.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.5 (J_{F, C} = 272 Hz), 120.0 (J_{F, C} = 13 Hz, J_{F, C} = 4 Hz), 112.8 (J_{F, C} = 22 Hz, J_{F, C} = 4 Hz), 105.7 (J_{F, C} = 25 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₇O₃NF₅S [M+H]⁺计算值388.006 13, 测量值388.007 66。

目标化合物8q的合成以2, 4-二氯苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率24%。mp: 132~133 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 177.9, 151.8, 144.9, 138.4, 137.7, 134.1, 133.8, 132.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 132.7, 131.6, 130.8, 129.8 (J_{F, C} = 36 Hz), 128.0, 127.3, 126.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₇O₃NCl₂F₃S [M+H]⁺计算值419.947 03, 测量值419.947 69。

目标化合物8r的合成以2-氯-4-氟苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率42%。mp: 172~174 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79~7.73 (m, 2H), 7.48 (td, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.3, 164.1 (J_{F, C} = 254 Hz), 152.3, 145.2, 138.9, 134.6 (J_{F, C} = 11 Hz), 134.5, 133.1 (J_{F, C} = 4 Hz), 132.6 (J_{F, C} = 9 Hz), 130.8 (J_{F, C} = 4 Hz), 130.2 (J_{F, C} = 35 Hz), 127.9, 126.8 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.9 (J_{F, C} = 272 Hz), 118.8 (J_{F, C} = 25 Hz), 115.5 (J_{F, C} = 22 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₇O₃NClF₄S [M+H]⁺计算值403.976 58, 测量值403.978 30。

目标化合物8s的合成以4-羟基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率19%。mp: 254~255 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.34 (s, 1H), 8.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 177.3, 161.1, 153.6, 145.3, 137.4, 133.1, 130.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 128.9, 127.4 (J_{F, C} = 34 Hz), 126.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 125.5, 122.7 (J_{F, C} = 271 Hz), 120.3, 116.5。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₉O₄NF₃S [M+H]⁺计算值368.019 89, 测量值368.018 52。

目标化合物8t的合成以4-甲氧基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率41%。mp: 183~184 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.00 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.41 (s, 1H), 2.41 (s, 3H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ 177.5, 153.6, 145.4, 142.1, 137.5, 133.1, 132.3, 130.6 (J_{F, C} = 3 Hz), 130.3, 127.5 (J_{F, C} = 29 Hz), 127.0, 126.5 (J_{F, C} = 3 Hz), 122.7 (J_{F, C} = 226 Hz), 122.0, 20.9。HR-MS-ESI: m/z C₁₇H₁₁O₄NF₃S [M+H]⁺计算值382.035 54, 测量值382.037 20。

目标化合物8u的合成以4-三氟甲基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率30%。mp: 175~176 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.22 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.87~7.82 (m, 4H), 7.30 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.1, 153.5, 145.1, 139.2, 137.8, 134.1, 133.6 (J_{F, C} = 33 Hz), 132.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 130.0 (J_{F, C} = 35 Hz), 128.0, 126.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 126.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 124.4, 123.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 122.5 (J_{F, C} = 271 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₇H₈O₃NF₆S [M+H]⁺计算值420.012 36, 测量值420.014 13。

目标化合物8v的合成以4-乙酰基苯硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率50%。mp: 158~160 ℃, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.03 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.52 (s, 1H), 2.66 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 197.7, 197.0, 178.1, 153.8, 144.4, 139.8, 136.7, 134.1, 132.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.8 (J_{F, C} = 35 Hz), 129.1, 127.5, 126.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 124.1, 122.5 (J_{F, C} = 272 Hz), 26.8。HR-MS-ESI: m/z C₁₈H₁₁O₄NF₃S [M+H]⁺计算值394.035 54, 测量值394.036 01。

目标化合物8w的合成以4-(哌啶甲基)苯硼酸频哪醇酯为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率61%。mp: 201~202 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.11 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.47~7.45 (m, 2H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.32 (s, 1H), 3.53 (brs, 2H), 2.42 (brs, 4H), 1.56 (brs, 4H), 1.47 (brs, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 179.3, 172.3, 151.7, 144.7, 135.9, 135.4, 133.9, 132.5 (J_{F, C} = 4 Hz), 131.5, 129.5 (J_{F, C} = 35 Hz), 126.4 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 120.8, 107.3, 62.8, 54.5, 25.8, 24.2。HR-MS-ESI: m/z C₂₂H₂₀O₃N₂F₃S [M+H]⁺计算值449.114 12, 测量值449.114 87。

目标化合物8x的合成以4-(4-甲基-1-哌嗪甲基)苯硼酸频哪醇酯为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率11%。mp: 149~150 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 9.09 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.99 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.28 (s, 1H), 3.73 (s, 2H), 3.18 (brs, 4H), 2.79 (brs, 4H), 2.76 (s, 3H); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ 179.8, 156.6, 146.8, 139.3, 136.4, 135.0, 132.4 (J_{F, C} = 3 Hz), 131.4, 130.2 (J_{F, C} = 29 Hz), 128.5, 127.4 (J_{F, C} = 3 Hz), 124.2 (J_{F, C} = 225 Hz), 123.7, 122.1, 62.2, 55.1, 51.5, 44.0。HR-MS-ESI: m/z C₂₂H₂₁O₃N₃F₃S [M+H]⁺计算值464.125 02, 测量值464.125 73。

1.3 目标化合物9a~9g的合成

目标化合物9a的合成以1-Boc-吡咯-2-硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率5%。mp: 110~111 ℃。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.19 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 3.2, 1.6 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.63 (dd, J = 3.2, 1.6 Hz, 1H), 6.33 (t, J = 3.2 Hz, 1H), 1.50 (s, 9H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.1, 148.1, 147.9, 144.7, 138.7, 134.2, 132.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.3 (J_{F, C} = 35 Hz), 127.6, 126.3, 126.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 125.8, 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 119.4, 111.7, 85.8, 27.9。HR-MS-ESI: m/z C₁₉H₁₆O₅N₂F₃S [M+H]⁺计算值441.072 65, 测量值441.072 97。

目标化合物9b的合成将化合物9a (40 mg, 0.091 mmol) 溶于1 mL四氢呋喃溶液, 加入30%甲醇钠的甲醇溶液(17 μL, 0.091 mmol), 在室温下反应0.5 h, TLC监测(二氯甲烷∶甲醇= 20∶1) 底物反应完全后, 将反应液的溶剂蒸干, 加入10 mL蒸馏水后用二氯甲烷萃取(5 mL×3), 合并有机相, 饱和氯化钠溶液洗涤两次, 无水硫酸钠干燥, 过滤, 浓缩后用正己烷搅洗, 过滤干燥得到黄色固体22 mg, 产率72 %。mp: > 210 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.22 (brs, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.25~7.24 (m, 1H), 7.00 (dd, J = 3.6, 1.2 Hz, 1H), 6.32 (dd, J = 3.6, 2.4 Hz, 1H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ 176.7, 145.1, 144.6, 137.2, 133.4, 130.0 (J_{F, C} = 3 Hz), 129.6, 127.0 (J_{F, C} = 29 Hz), 126.3, 126.1 (J_{F, C} = 3 Hz), 122.7 (J_{F, C} = 226 Hz), 114.4, 113.1, 111.5。HR-MS-ESI: m/z C₁₄H₈O₃N₂F₃S [M+H]⁺计算值341.020 22, 测量值341.020 11。

目标化合物9c的合成以呋喃-2-硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率23%。mp: 186~187 ℃。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.95 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.10 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.81 (dd, J = 3.6, 2.0 Hz, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 177.8, 148.2, 146.6, 145.0, 142.4, 137.1, 134.3, 123.3 (J_{F, C} = 4 Hz), 129.5 (J_{F, C} = 35 Hz), 126.4 (J_{F, C} = 4 Hz), 122.6 (J_{F, C} = 271 Hz), 118.3, 113.7, 113.3。HR-MS-ESI: m/z C₁₄H₇O₄NF₃S [M+H]⁺计算值342.004 24, 测量值342.004 18。

目标化合物9d的合成以2-氯吡啶-3-硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率21%。mp: 140~141 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.94 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.60 (dd, J = 4.8, 2.0 Hz, 1H), 7.83 (dd, J = 7.6, 2.0 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 7.6, 4.8 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H); ¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 177.7, 151.7, 150.9, 149.4, 144.8, 139.4, 138.2, 134.0, 132.7 (J_{F, C} = 3 Hz), 131.0, 129.9 (J_{F, C} = 29 Hz), 127.4, 126.6 (J_{F, C} = 3 Hz), 122.8, 122.5 (J_{F, C} = 226 Hz); HR-MS-ESI: m/z C₁₅H₇O₃N₂ClF₃S [M+H]⁺计算值386.981 25, 测量值386.980 93。

目标化合物9e的合成以5-嘧啶硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率22%。mp: 170~171 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.38 (s, 1H), 9.24 (s, 2H), 9.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 177.6, 160.9, 155.1, 148.4, 145.0, 137.2, 133.9, 132.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 130.4 (J_{F, C} = 36 Hz), 130.3, 126.8 (J_{F, C} = 4 Hz), 125.0, 122.4 (J_{F, C} = 272 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₄H₇O₃N₃F₃S [M+H]⁺计算值354.015 47, 测量值354.015 17。

目标化合物9f的合成以喹啉-3-硼酸为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率40%。mp: 265~267 ℃, ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.27 (brs, 1H), 9.00 (brs, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.20 (brs, 1H), 8.08 (brs, 1H), 7.88 (brs, 1H), 7.72 (brs, 1H), 7.67 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 178.0, 151.9, 149.2, 147.5, 145.1, 137.8, 135.6, 134.1, 132.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 132.1, 130.0 (J_{F, C} = 35 Hz), 129.7, 128.9, 128.8, 128.5, 127.2, 126.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 124.3, 122.5 (J_{F, C} = 272 Hz)。HR-MS-ESI: m/z C₁₉H₁₀O₃N₂F₃S [M+H]⁺计算值403.035 87, 测量值403.037 72。

目标化合物9g的合成以9-氮杂吲哚-5-硼酸频哪醇酯为原料, 按照化合物8a的合成方法得黄色固体, 产率11%。mp: > 210 ℃, ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.21 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.94 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.25 (brs, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.37~7.35 (m, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 177.8, 155.4, 151.4, 150.1, 144.9, 137.2, 133.9, 132.6 (J_{F, C} = 4 Hz), 130.1 (J_{F, C} = 35 Hz), 129.6, 126.7 (J_{F, C} = 4 Hz), 124.7, 122.3 (J_{F, C} = 271 Hz), 115.9, 112.4。HR-MS-ESI: m/z C₁₆H₈O₃N₄F₃S [M+H]⁺计算值393.026 37, 测量值393.028 32。

2 抗结核活性评价^[21]

菌株为结核分枝杆菌标准株H₃₇Rv (ATCC 27294), 以异烟肼为阳性对照药, 合成的目标化合物在0.031~32 μg·mL^-1浓度范围内设置11个倍比稀释的浓度测试梯度。取用培养至对数生长期的结核分枝杆菌H₃₇Rv离心、洗涤重新悬浮于磷酸缓冲液中, 过滤后储存于-80 ℃。取96孔无菌微孔板, 于各孔中加入100 μL菌液后再加入100 μL药液, 并每板上设两个仅加入菌液的空白生长对照孔。37 ℃恒温孵育7天, 每孔加入预混显色液, 37 ℃孵育16~24 h观察颜色变化, 并应用酶标仪测定530及590 nm荧光值, 计算MIC₉₀。

3 初步成药性评价

3.1 Vero细胞毒性测定实验

制备好的Vero细胞悬液以每孔50 μL接种于96孔板中, 受试化合物最高受试浓度为64 μg·mL^-1, 用培养基在96孔板上按1∶3进行系列稀释, 目标化合物设6个浓度, 每个浓度设6个平行孔, 每孔50 μL, 同时设置不含药的细胞对照孔及培养基空白对照孔; 37 ℃、5% CO₂培养箱中培养24 h, 每孔加入MTT 10 μL, 继续培养4 h, 弃去培养基, 每孔加入100 μL DMSO, 甲臜颗粒完全溶解后, 570 nm波长处测定其光密度值(OD₅₇₀), 计算IC₅₀值。

3.2 肝微粒体代谢稳定性测定实验

将实验化合物(1 μmol·L^-1) 加入小鼠或人肝微粒体(1 mg·mL^-1) 中, 37 ℃下预孵育5 min, 然后加入60 μL NADPH溶液(1 mmol·L^-1) 启动反应, 在37 ℃下继续孵育30 min, 在0和30 min分别取出30 μL的反应混合物加入300 μL含有内标的乙腈淬灭溶液终止所有反应。再通过LC-MS/MS进行分析, 测定反应液中各化合物与内标的峰面积比, 计算t_1/2和剩余率。

3.3 肝药酶CYPs抑制作用测定实验

待测化合物(0.05~50 µmol·L^-1) 和阳性对照用人肝微粒体(0.1 mg·mL^-1) 和CYPs酶(3A4/5和2C9) 的底物混合工作溶液, 在37 ℃预孵育5 min, 然后加入NADPH (1 mmol·L^-1), 孵育10 min后, 立刻加入含有内标的控制液终止反应, 样品涡旋离心后, 用LC-MS/MS检测CYPs酶相应的底物产物与内标峰面积比, 根据结果计算IC₅₀。

3.4 hERG K⁺通道抑制作用测定实验

稳定表达hERG钾离子通道的HEK293细胞株被用于检测受试化合物对离子通道的抑制效应。待测化合物浓度为0.3~30 µmol·L^-1, 细胞按照1×10⁵的密度培养在25 cm²培养皿中, 加入1 μg·mL^-1强力霉素诱导48 h, 然后将细胞进行消化, 接种在玻片上以备后续的手动膜片钳的实验。测试尾电流的峰值为hERG电流的大小, 拟合量效曲线并计算IC₅₀值。

作者贡献: 唐霞霞和李文艺完成化合物的合成以及数据整理; 李鹏负责学术指导以及数据校对; 王彬和陆宇完成体外抑菌活性评价以及数据分析; 黄海洪和李刚负责课题规划、实验设计并撰写审核论文。

利益冲突: 无利益冲突。

基金

收起

国家自然科学基金资助项目(82373711)
中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助(2018PT35026)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

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2024年第59卷第4期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-1380

接收时间：2023-12-12
首发时间：2025-11-28
出版时间：2024-04-12

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出版历史

收稿日期：2023-12-12
修回日期：2024-01-04

基金

国家自然科学基金资助项目(82373711)

中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助(2018PT35026)

作者信息

2.北京市结核病胸部肿瘤研究所, 耐药结核病研究北京市重点实验室, 北京 101149

通讯作者:

^*黄海洪, Tel/Fax: 86-10-63165244, E-mail: joyce@imm.ac.cn;

李刚, Tel/Fax: 86-10-63165254, E-mail: ligang@imm.ac.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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8a	-H	-H	> 32	-
8b	-CH₃	-H	1.7	-
8c	-CH₂CH₃	-H	> 32	-
8d	-H	-CH₂CH₃	1.1	-
8e	-H		2.0	-
8f	-H		4.0	-
8g	-H		0.3	> 64
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8j	-H		> 32	-
8k	-H		> 32	-
8l	-H	-F	31.7	-
8m	-H	-Cl	14.2	-
8n	-H	-Br	6.8	-
8o	-CH₃	-F	1.9	-
8p	-F	-F	> 32	-
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Compd.

R₂

R₃

H₃₇Rv MIC/μg·mL^-1

Vero IC₅₀/μg·mL^-1

-H

> 32

-CH₃

-H

1.7

-CH₂CH₃

-H

> 32

-H

-CH₂CH₃

1.1

-H

2.0

-H

4.0

-H

0.3

> 64

-H

0.4

> 64

-H

1.0

-H

> 32

-H

> 32

-H

-F

31.7

-H

-Cl

14.2

-H

-Br

6.8

-CH₃

-F

1.9

-F

> 32

-Cl

0.2

> 64

-Cl

-F

0.5

> 64

-H

-OH

> 32

-H

-OCH₃

> 32

-H

-CF₃

32.0

-H

0.9

> 64

-H

0.5

-H

3.9

INH

0.07


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INH	-	0.07	-

Compd.

R₁

H₃₇Rv MIC/μg·mL^-1

Vero IC₅₀/μg·mL^-1

0.2

> 64

32.0

1.0

> 64

0.9

42.8

0.5

39.3

0.2

> 64

7.7

INH

0.07

No.	Mouse		Human		CYP inhibition IC₅₀/μmol·L^-1	hERG K⁺ IC₅₀/μmol·L^-1
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9f	< 4.5	0.1	14.2	23.1	-	-	> 10

No.

Mouse

Human

CYP inhibition
IC₅₀/μmol·L^-1

hERG K⁺
IC₅₀/μmol·L^-1

t_1/2/min

% remaining

t_1/2/min

% remaining

3A4/5

2C9

7.2

5.6

33.6

53.8

> 93.2

80.1

40.6

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> 50

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29.5

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0.1

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> 10